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1、生化分析相关概念准确度准确度为一次测量结果与被测量的为一次测量结果与被测量的真值真值之间的之间的一致程度。一致程度。准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如谈准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如谈准确度高、低，是否合格。准确度高、低，是否合格。测量误差测量误差:是测量结果减真值之差是测量结果减真值之差。误差和准确度属于不同概念，两者之误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。间不能划等号。不准确度的数字表达是不确定度不准确度的数字表达是不确定度 (标准标准差和置信区间的半宽度表示差和置信区间的半宽度表示)。可以理解为测量结果与约定真值之差测量结果与约定真值之差的范围。的范围。生化分析相
2、关概念 正确度正确度 大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),生化分析相关概念精密度精密度：表示测量结果中的随机误差大小的程度，即指在一定条件下进行多次测定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。生化分析相关概念实验方法分类 决定性方法（决定性方法（definitive method） 参考方法（reference method）常规方法（routine method）决定性方法（决定性方法（决定性方法（决定性方法（definitive methoddefinitive method）是指准确度最）是指准确度最）是指准确度最）是指准
3、确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为测定结果为测定结果为测定结果为“ “确定值确定值确定值确定值” ”，与，与，与，与“ “真值真值真值真值” ”最接近。由最接近。由最接近。由最接近。由于技术要求太高，费用昂贵，于技术要求太高，费用昂贵，于技术要求太高，费用昂贵，于技术要求太高，费用
4、昂贵，用途：一级标准品定值；参考方法评价用途：一级标准品定值；参考方法评价用途：一级标准品定值；参考方法评价用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( ( 一般不用一般不用一般不用一般不用于常规工作于常规工作于常规工作于常规工作 ) ) 参考方法（参考方法（reference methodreference method）是指准确度与精密度已经）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方
5、法在条度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。以被接受。用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂盒等。盒等。 ( ( 有条件实验室可用于常规工作有条件实验室可用于常规工作 ) ) 常规方法（routine method）有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。 用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。 例如： TG
6、 定量 决定性方法同位素稀释/质谱（ID/GC/MS）参考方法酶法 常规方法酶法 实验方法选择原则实验方法选择原则 实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。 可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。 血清血清三酰三酰甘油测定甘油测定实验四实验四实验目的实验目的:1.掌握酶法测定血清中三酰掌握酶法测定血清中三酰甘油甘油的原理的原理和意义和意义2.了解三酰了解三酰甘油甘油的正常值范围的正常值范围. 一一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视 。TG的
7、生物化学TG的生物化学二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒中，TG含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋白（RLP） TG的代谢n外源性途径外源性途径n内源性途径内源性途径外源性途径：外源性途径：指食物中的指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞，油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞，再
8、合成再合成TG并与其他脂质形成并与其他脂质形成CM，通过，通过淋巴系统入血。淋巴系统入血。CM中的中的TG在脂蛋白脂在脂蛋白脂肪酶（肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离）作用下水解为甘油和游离脂肪酸（脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。），被细胞利用或贮存。 内源性途径：内源性途径：CM水解产物水解产物CM残粒以受体介导的残粒以受体介导的形式被肝脏吸收，其衍生物和一些形式被肝脏吸收，其衍生物和一些新组分合成新组分合成VLDL。 TG测定的方法学化学法色谱法酶法化学法化学法用有机溶剂氯仿化学法用有机溶剂氯仿抽提抽提标本中的标本中的TGTG，去除抽，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（提液中磷脂
9、等干扰物后，用碱水解（皂化皂化）TGTG，以过碘酸，以过碘酸氧化氧化甘油生成甲醛，然后用甘油生成甲醛，然后用显色显色反反应测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、应测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不能自动化，而不适于常规工作应用。不能自动化，而不适于常规工作应用。 化学法1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-变色酸法） 比较准确2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色色谱法核素稀释核素稀释/气相色谱气相色谱/质谱技术（质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的建立及主要用作参考系统中决定性方法的建立
10、及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应用。样品处理复杂，难以推广应用。 酶法1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用 酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定3.甘油氧化酶法磷酸甘油氧化酶法实验原理实验原理:TG + H2O甘油甘油+FFA甘甘油油-3-磷酸磷酸+ADPLPLGK甘油甘油+ATP甘油甘油-3-磷酸磷酸+O2GPO磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮+H2O2H2O2+4-AAP+DHBSPOD醌亚胺醌亚胺+ H2O实验操作实验操作(手工分析）手工分析）:加入物 空白管 标准管 样本管蒸馏水（
11、ul） 20 标准液 （ul） 20 样本 （ul） 20酶工作液（ml) 1.5 1.5 1.5 混匀，混匀，混匀，混匀，3737孵育孵育孵育孵育15min15min，以空白管调零，以空白管调零，以空白管调零，以空白管调零，520nm520nm波波波波长处测定各管吸光度值长处测定各管吸光度值长处测定各管吸光度值长处测定各管吸光度值(A)(A)。酶工作液试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二氯-2-羟基苯 磺酸盐 Mg2+计算计算TG的含量的含量甘油三酯浓度甘油三酯浓度（mmol/L)
12、=A样/A标标准液浓度 (2.26mmol/L) 单位换算： 甘油三酯甘油三酯mmol/L88.5=甘油三酯甘油三酯mg/dL实验操作实验操作(自动分析）自动分析） 空白管空白管 校准管校准管 质控管质控管 样本管样本管试剂试剂1 1 （ulul） 240 240 240 240240 240 240 240蒸馏水（蒸馏水（ulul） 3 3 标准液标准液 （ulul） 3 3 质控液质控液 （ulul） 3 3 样本（样本（ulul） 3 3混匀，混匀，混匀，混匀，3737孵育孵育孵育孵育5min5min试剂试剂2 2（ulul） 60 60 60 6060 60 60 60混匀，混匀，混匀
13、，混匀，3737孵育孵育孵育孵育5min5min，以空白管调零，以空白管调零，以空白管调零，以空白管调零，520nm520nm波长处测定各管波长处测定各管波长处测定各管波长处测定各管吸光度值吸光度值吸光度值吸光度值(A)(A)。注意要点：注意要点：1 1酶试剂发红时，不可再用。酶试剂发红时，不可再用。酶试剂发红时，不可再用。酶试剂发红时，不可再用。2 2加入显色剂要准确，加入后立即混匀。加入显色剂要准确，加入后立即混匀。加入显色剂要准确，加入后立即混匀。加入显色剂要准确，加入后立即混匀。3. 3. 3. 3. 线性范围上限为线性范围上限为线性范围上限为线性范围上限为11.4 11.4 11.4
14、 11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水，若超过用生理盐水，若超过用生理盐水，若超过用生理盐水稀释。稀释。稀释。稀释。血清TG参考范围： 成人 0.451.69mmol/L(40150mg/dL)临床意义TG一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。原发性高TG血症多有遗传因素，包括家族性高TG血症与家族性高脂（蛋白）血症等。继发性高TG血症见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能减退、肾病综合症、妊娠、口服避孕药、酗酒等。临床意义n n富含TG的脂蛋白是CHD的独立危险因子，TG增加表明患者存在代谢综合症，需进行治疗。n nTG降低比较少见，甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可见。
