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1、原理：原理：蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，分解同加热消化，使蛋白质分解，碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的量。硫酸或盐酸标准滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的量。1.有机物中的胺根在强热和有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓，浓H2SO4作用下，硝化生成作用下，硝化
2、生成（NH4）2SO4。（其中（其中CuSO4做催化剂）做催化剂）2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于，收集于H3BO3溶液中溶液中。3.用已知浓度的用已知浓度的H2SO4（或（或HCI）标准溶液滴定，根据）标准溶液滴定，根据HCI消耗的消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。1、硫酸钾、硫酸钾作为增温剂，提高溶液沸点，纯硫酸沸点作为增温剂，提高溶液沸点，纯硫酸沸点340，加入硫酸钾之后可以提高至加入硫酸钾之后可以提高至400以上。也可加入硫酸钠，氯化以
3、上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。沸点提高加速了反应过程。钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。沸点提高加速了反应过程。2、硫酸铜、硫酸铜作为催化剂。还可以作消化终点指示剂（做蒸馏时作为催化剂。还可以作消化终点指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。碱性指示剂）。3、盐酸（、盐酸（mol/L）4、2硼酸溶液硼酸溶液5、40氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液6、混合指示剂：把溶解于、混合指示剂：把溶解于95乙醇的乙醇的0.l溴甲酚绿溶液溴甲酚绿溶液10毫升毫升和溶于和溶于95乙醇的乙醇的0.l甲基红溶液甲基红溶液2毫升混合而成毫升混合而成7、0.05NHCl标准溶液或标准溶液或005N硫酸标准溶液硫
4、酸标准溶液1、凯氏微量定氮仪一套。、凯氏微量定氮仪一套。2、消化炉、消化炉3、定氮瓶、定氮瓶盐酸标准滴定溶液的配制盐酸标准滴定溶液的配制一、实验步骤一、实验步骤：1、配制0.5mol/L的盐酸标准滴定溶液：量取45mL盐酸，加水定容至1000mL，摇匀备用。2、标定盐酸标准滴定溶液：准确称取0.8g在270300摄氏度下干燥至恒重的的基准无水碳酸钠，加50mL水使之溶解，再加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂。用本溶液滴定0.05mol/L的盐酸标准滴定溶液，至其由绿色转变成紫红色，煮沸2min，冷却至室温，继续滴定至溶液有绿色变为暗紫色。做3个平行样品，同时做试剂空白实验校正结果。二、计算公式
5、：二、计算公式：式中：c-盐酸标准滴定溶液的实际浓度，mol/L m-基准无水碳酸钠的质量，mg 0.0530-的毫摩质量，g/mmol转变成紫转变成紫红色红色煮沸煮沸2min,冷却后冷却后滴定至暗滴定至暗紫色紫色0.5mol/L盐酸标定数据记录表盐酸标定数据记录表 无水碳酸钠标定盐酸标准滴定溶液为无水碳酸钠标定盐酸标准滴定溶液为0.5786mol/L。将此溶液稀释。将此溶液稀释10倍，得出结果为倍，得出结果为0.05786mol/L。因此，实验所需盐酸标准滴定液的浓度为。因此，实验所需盐酸标准滴定液的浓度为0.05786mol/L.编编号号检测检测项目项目样品的质样品的质量量/mg空白消空白
6、消耗的盐耗的盐酸体积酸体积/mL样品消样品消耗盐酸耗盐酸的体积的体积/mL盐酸的浓盐酸的浓度度/mol/L盐酸浓度的盐酸浓度的平均值平均值/mol/LCV1标定标定盐酸盐酸标准标准滴定滴定液液0.80160.8826.940.58040.57860.0062.8%20807427.060.574330.860320527.400.5811注意事项！注意事项！ 本实验要求的盐酸标准滴定溶液为本实验要求的盐酸标准滴定溶液为0.05mol/L，由，由于标准滴定溶液的浓度太小，如果直接配制会导致误于标准滴定溶液的浓度太小，如果直接配制会导致误差过大，最终影响实验的结果。因此，我们在配制标差过大，最终影
7、响实验的结果。因此，我们在配制标准滴定溶液时选用了稀释法。首先配制准滴定溶液时选用了稀释法。首先配制0.5mo/L的盐的盐酸标准滴定溶液，然后用无水碳酸钠标定此溶液，最酸标准滴定溶液，然后用无水碳酸钠标定此溶液，最后将标定得出的数据除以后将标定得出的数据除以10，得出的最终结果为实验，得出的最终结果为实验所需盐酸标准滴定溶液的浓度。所需盐酸标准滴定溶液的浓度。 本实验所用的盐酸标准滴定溶液，是用我们配制本实验所用的盐酸标准滴定溶液，是用我们配制的的0.5mol/L的盐酸标准滴定液稀释的盐酸标准滴定液稀释10倍所配成的。倍所配成的。蛋白质测定的分析步骤：蛋白质测定的分析步骤：1、样品处理：样品处
8、理：精密称取精密称取55.5g样品移入干燥的样品移入干燥的500ml定氮瓶中，加入定氮瓶中，加入0.2g硫酸硫酸铜，铜，6g硫酸钾及硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后放入消化炉中消化，至液体呈蓝绿色澄清毫升硫酸，稍摇匀后放入消化炉中消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入水，放冷后，移入100ml容容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验。
9、与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验。2、安装好定氮装置、安装好定氮装置：于水蒸气发生器内装水：于水蒸气发生器内装水约约2/3处加甲基红指示剂数滴及数处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，毫升硫酸，以保持水呈酸性以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。热煮沸水蒸气发生瓶内的水。3、蒸馏：、蒸馏：想接收瓶内加入想接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指示剂硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，
10、并以样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。然后。然后移动接收瓶，使移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏冷凝管下端离
11、开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取取下接收瓶，以下接收瓶，以0.05mol/L盐酸标准溶液定至盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色灰色或蓝紫色为终点。为终点。同时吸取同时吸取10.0ml试剂空白消化液按试剂空白消化液按3操作。操作。样品消化样品消化蒸馏蒸馏滴定滴定滴定后滴定后滴定前滴定前定容定容滴定滴定结果计算式中：式中：X：样品中蛋白质的含量，：样品中蛋白质的含量，g；V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml；N：硫酸
12、或盐酸标准溶液的当量浓度；：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；相当于氮克数；m：样品的质量（体积），：样品的质量（体积），g（ml）；）；F：氮换算为蛋白质的系数。：氮换算为蛋白质的系数。冰淇淋中蛋白质含量测定数据冰淇淋中蛋白质含量测定数据备注：标准要求：备注：标准要求：检验标准：QB/T 2132-2008 计算公式：计算公式：编编号号样品名样品名称称检检测测项项目目样品的样品的质量质量/ml空白空白消耗消耗盐酸盐酸的体的体积积/mL样品样品消耗消耗盐酸盐酸的体的体积积/mL盐酸的盐酸的浓度浓度/mol/L氮换算氮换算为蛋白
13、为蛋白质的系质的系数数F蛋白蛋白质的质的含量含量g/100ml蛋白蛋白质的质的平均平均含量含量g/100gCV1调制豆调制豆奶奶蛋蛋白白质质的的测测定定150.215.860.057865.712.032.090.051.6%155.892.062156.262.13156.142.15蛋白质结果分析蛋白质结果分析（1）QB/T2132-2008规定植物蛋白饮规定植物蛋白饮料豆奶（豆浆）和豆奶饮料中蛋白质的料豆奶（豆浆）和豆奶饮料中蛋白质的含量应大于或等于含量应大于或等于2.0/100ml，而我们，而我们测得的结果为测得的结果为2.09g/100ml。符合标准。符合标准要求，为合格品。要求，为
14、合格品。（2）本次实验的只有两个样品消化成）本次实验的只有两个样品消化成功，为了减少误差，我们用两个成功样功，为了减少误差，我们用两个成功样品做了品做了4次平行实验。次平行实验。注意事项注意事项（1）硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入入30%过氧化氢（过氧化氢（H2O2）2-3ml，促使氧化。，促使氧化。（2）在整个消化过程中，不要用强火在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使
15、氮有损失。况下，使氮有损失。消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，促进其消化完全冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，促进其消化完全。（3）如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用。因此，当硫酸过多的被消耗或样品中硫酸氢钾，而不与氨作用。因此，当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。（4）向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀物，这是由于向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀物，这是由于分解促
16、进碱与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分分解促进碱与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分解生成氧化铜的沉淀。有时铜离子与氨作用，生成深解生成氧化铜的沉淀。有时铜离子与氨作用，生成深l蓝色的结合蓝色的结合物物Cu(NH3)42+.（5）蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管口，再蒸）蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管口，再蒸1分钟后关掉热源否则可能造成吸收液倒吸。分钟后关掉热源否则可能造成吸收液倒吸。（6）这种测算方法本质是测出氮的含量，再作蛋白质含量的估这种测算方法本质是测出氮的含量，再作蛋白质含量的估算。只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质算。只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量。含量。回目录
