动物细胞融合和单克隆抗体用学习教案

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1、会计学1动物动物(dngw)细胞融合和单克隆抗体用细胞融合和单克隆抗体用第一页，共27页。2010-3-262010-3-262 2n n复习(fx)巩固：1.植物体细胞杂交n n 2.植物组织培养第1页/共26页第二页，共27页。2010-3-263植物体细胞植物体细胞(xbo)(xbo)杂交杂交植物细胞植物细胞A A植物细胞植物细胞B B原生质体原生质体A A原生质体原生质体B B原生质原生质体融合体融合(rngh)(rngh)杂种杂种(zzhng)(zzhng)细胞细胞组织培养组织培养杂种植株杂种植株去细胞壁去细胞壁纤维素酶、纤维素酶、果胶酶果胶酶化学法化学法物理法物理法诱导诱导第2页/

2、共26页第三页，共27页。2010-3-2641.概念：动物细胞融合（概念：动物细胞融合（cell fusion)，又称体细胞，又称体细胞杂交（杂交（somatic hybridiazation），是指两个或更），是指两个或更多个相同或不同细胞结合形成一个多个相同或不同细胞结合形成一个(y )细胞的过细胞的过程。程。一、动物一、动物(dngw)细胞细胞融合融合融合后形成的具有(jyu)原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。第3页/共26页第四页，共27页。2010-3-2652 2、动物、动物(dngw)(dngw)细胞融合基本原理：细胞融合基本原理：与植物与植物(zhw)原生质

3、体融合的基本原理相原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性同，即细胞膜的流动性3、诱导、诱导(yudo)方式方式物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒电激、振动、离心电激、振动、离心电激、振动、离心电激、振动、离心聚乙二醇（聚乙二醇（聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）例如：仙台病毒例如：仙台病毒第4页/共26页第五页，共27页。2010-3-266灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿细胞膜被病毒颗粒穿通通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）生物

4、生物(shngw)法：法：灭活的病毒灭活的病毒(bngd)（丧失（丧失(sngsh)感染性、保留抗原结感染性、保留抗原结构）构）第5页/共26页第六页，共27页。2010-3-267病毒促使病毒促使(csh)细胞融合的主要步骤如下：细胞融合的主要步骤如下：1.1.两个原生质体或细胞在病毒黏结两个原生质体或细胞在病毒黏结(ninji)(ninji)作用下彼此靠近；作用下彼此靠近；2.2.通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，3.3. 胞质互相渗透；胞质互相渗透；4.4.两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；两个原

5、生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；5.5.进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。第6页/共26页第七页，共27页。2010-3-2684、过程(guchng)：动物细胞A 动物细胞B诱导(yudo)，融合2个完整的杂交(zjio)细胞AB有丝分裂（膜融合、诱导方法质融合、 核融合）单核细胞第7页/共26页第八页，共27页。2010-3-2695、动物细胞融合技术的发展简史告诉我、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么现动物细胞融合有

6、什么(shn me)意义呢意义呢？打破生殖隔离，使远缘打破生殖隔离，使远缘(yun yun)杂交成为杂交成为可能；可能；广泛应用多个学科领域；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。重要用途：制备单克隆抗体。第8页/共26页第九页，共27页。2010-3-26106 6、植物体细胞杂交、植物体细胞杂交、植物体细胞杂交、植物体细胞杂交(zjio)(zjio)和动物细胞融合的比和动物细胞融合的比和动物细胞融合的比和动物细胞融合的比较较较较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途制备单克隆

7、抗体制备单克隆抗体获得杂种获得杂种(zzhng)植株植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞细胞(xbo)膜的流动膜的流动性性细胞细胞(xbo)的全能性的全能性去除细胞壁去除细胞壁后诱导原后诱导原生质体融合生质体融合使细胞分散后诱导细使细胞分散后诱导细胞融合胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）物理、化学方法（同左）灭活的病毒灭活的病毒第9页/共26页第十页，共27页。2010-3-26112 2 2 2、什么、什么、什么、什么(shn me)(shn me)(shn me)(shn me)是抗体？是抗体？是抗体？是抗体？二

8、、单克隆抗体二、单克隆抗体(kngt)(kngt)回顾回顾(hug)(hug)3 3 3 3、抗体的分布？、抗体的分布？、抗体的分布？、抗体的分布？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。主要分布在血清中。1 1 1 1、什么是克隆、什么是克隆、什么是克隆、什么是克隆？“克隆克隆”从英文从英文“clone”clone”音译而来，是指从一个共同祖音译而来，是指从一个共同祖先，通过先，通过无性繁殖无性繁殖的方法产生出来的一群的方法产生出来的一群遗传特性相同遗传特

9、性相同的的DNADNA分子，细胞或个体。在细胞水平指分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培动物细胞培养养. .第10页/共26页第十一页，共27页。2010-3-2612 由单个由单个B B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一的化学性质单一(dny)(dny)、特异性强的抗体。、特异性强的抗体。 1 1、单克隆抗体、单克隆抗体(kngt)(kngt)概念概念: :第11页/共26页第十二页，共27页。2010-3-2613该法制备抗体的特点该法制备抗体的特点该法制备抗体的特点该法

10、制备抗体的特点(tdin)(tdin)(tdin)(tdin)： 产量低、纯度低，产量低、纯度低，产量低、纯度低，产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。且抗体的特异性差、灵敏度低。且抗体的特异性差、灵敏度低。且抗体的特异性差、灵敏度低。自主自主(zzh)(zzh)阅读阅读P52P52：抗体的传统生：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？产方法及缺陷是什么？思思思思 考：如何大量获取考：如何大量获取考：如何大量获取考：如何大量获取(huq)(huq)(huq)(huq)某种特定抗体某种特定抗体某种特定抗体某种特定抗体？第12页/共26页第十三页，共27页。2010-3-2614B B B B淋

11、巴细胞特点淋巴细胞特点淋巴细胞特点淋巴细胞特点(tdin)(tdin)(tdin)(tdin)：. .每一个每一个B B淋巴细胞只能产生淋巴细胞只能产生(chnshng)(chnshng)一种一种抗体。抗体。.B.B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生(chnshng)(chnshng)抗抗体。体。. .动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百万种以上的淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。第13页/共26页第十四页，共27页。2010-3-2615怎样才能大量怎样才能大量(dling

12、)生产单克隆抗体？生产单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术：仅用细胞培养技术(jsh)(jsh)可行吗？可行吗？提示提示2 2：我们：我们(w men)(w men)所学的哪种细胞是可以无限增殖的所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B细胞产生抗体的能细胞产生抗体的能 力力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？第14页/共26页第十五页，共27页。2010-3-26162 2、单克隆抗体、单克隆抗体(kngt)(kngt)的制的制备过程备过程 自学与思考：自学与思考：自学与思考：自学与思考：1 1）在从小鼠体内取

13、）在从小鼠体内取）在从小鼠体内取）在从小鼠体内取B B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？ 为什么要这样为什么要这样为什么要这样为什么要这样(zhyng)(zhyng)处理？处理？处理？处理？2 2）从小鼠何处获取）从小鼠何处获取）从小鼠何处获取）从小鼠何处获取B B淋巴细胞？淋巴细胞？淋巴细胞？淋巴细胞？3 3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？4 4）是否所有杂

14、交瘤细胞都能产生某一特定抗体？）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？5 5）由特定的）由特定的）由特定的）由特定的B B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交 瘤细胞具有什么特点？瘤细胞具有什么特点？瘤细胞具有什么特点？瘤细胞具有什么特点？6 6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？第15页/共26

15、页第十六页，共27页。2010-3-2617B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原抗原(kngyun(kngyun) )蛋白蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo(xbo) )培养培养(piyng)(piyng)骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞融合融合（只考虑两两融（只考虑两两融合）培养液中细合）培养液中细胞有几种类型？胞有几种类型？融合细胞几种融合细胞几种类型类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞- B- B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细胞杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验

16、阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养第第第第1 1 1 1次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。第第第第2 2 2 2次筛选目的：在杂交次筛选目的：在杂交次筛选目的：在杂交次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所瘤细胞中筛选出能产生所瘤细胞中筛选出能产生所瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。需抗体的杂交瘤细胞。需抗体的杂交瘤细胞。需抗

17、体的杂交瘤细胞。 该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗的遗传特性，既能传特性，既能产生专一抗体产生专一抗体又又能能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高第16页/共26页第十七页，共27页。2010-3-2618比较项目比较项目第一次筛选第一次筛选第二次筛选第二次筛选原理原理在选择性培养基中添在选择性培养基中添加某种药物，未融合加某种药物，未融合的亲本细胞和融合的的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长杂种细胞才能生长抗原抗原抗体的抗体的特异性结合特异性结合目标目标杂交

18、瘤细胞杂交瘤细胞既能无限增殖，既能无限增殖，又能产生特异又能产生特异性抗体的杂交性抗体的杂交瘤细胞瘤细胞第17页/共26页第十八页，共27页。2010-3-26193. 3.单克隆抗体单克隆抗体(kngt(kngt) )的应用：的应用：作为诊断试剂：准确识别各种作为诊断试剂：准确识别各种( zhn)( zhn)抗原物质，抗原物质，并与并与 一定抗原特异性结合。一定抗原特异性结合。 优点：准确、高效、简易、快速优点：准确、高效、简易、快速用于用于运载运载(ynzi)药物：制成药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗第18页/共26页第十九页，共27页。2

19、010-3-2620第19页/共26页第二十页，共27页。2010-3-2621两个两个(lin (lin )过程过程动物动物(dngw)(dngw)细胞融合细胞融合过程过程单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)制备过程制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个新细胞一个优势一个优势课堂课堂小结小结灭活的病毒灭活的病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体特异性单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势第20页/共26页第二十一页，共27页。2010-3-2622形成杂种形成杂种(zzhng)(zzhng)细胞细胞获得获得(hud)(hud

20、)杂种植株杂种植株结果结果(ji (ji gu)gu)物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原原 理理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目1 1、植物、动物细胞融合的比较、植物、动物细胞融合的比较课堂课堂小结小结融合前处理融合前处理用纤维素酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散第21页/共26页第二十二页，共27页

21、。2010-3-26232 2、单克隆抗体、单克隆抗体(kngt(kngt) )制备过程制备过程B B淋巴细胞淋巴细胞(xbo)(xbo)骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)(xbo)诱导诱导(yud(yudo)o)融合融合B-BB-B细胞细胞B-B-瘤细胞瘤细胞瘤瘤- -瘤细胞瘤细胞选择培养选择培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞（ B-B-瘤细胞）瘤细胞）克隆化培养克隆化培养抗体检测抗体检测产生所需产生所需抗体的杂抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体第22页/共26页第二十三页，共27页。2010-3-2624B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交

22、瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 1.1.右图为某同学根据杂交瘤技术的方右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产法，设计的生产(shngchn)(shngchn)破伤风杆破伤风杆菌抗体的实验方案菌抗体的实验方案制备制备(zhbi)(zhbi)单克单克隆抗体隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一产生单一(dny)(dny)抗体的抗体的B B淋巴细胞。淋巴细胞。(1).(1).该实验方案的目的是：该实验方案的目的是： _(2).(2).该方案能达到预期效果该方案能达到预期效果吗？为什么？

23、吗？为什么？第23页/共26页第二十四页，共27页。2010-3-2625B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C (3)A(3)A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_ _ 该细胞该细胞(xbo)(xbo)能够产生能够产生_ _ 。(4)(4)图中图中B B为为_过程过程(guchng)(guchng)，常用，常用_作为作为诱导剂，该细胞继承诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，的遗传特性，既能既能_ ,_ ,又能又能_。B B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体(kngt)(kngt)细胞融合细胞融合灭活的病毒

24、灭活的病毒双亲细胞双亲细胞产生专一抗体产生专一抗体无限增殖无限增殖第24页/共26页第二十五页，共27页。2010-3-2626B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C （5 5）_ _ 技术技术(jsh)(jsh)是单克隆抗是单克隆抗体的技术体的技术(jsh)(jsh)支持。支持。动物动物(dngw)(dngw)细细胞培养胞培养（6 6）单克隆抗体的特点）单克隆抗体的特点(tdin) (tdin) _，并，并可大量制备。可大量制备。特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高第25页/共26页第二十六页，共27页。内容(nirng)总结会计学。2010-3-26。通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，。两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体。产量低、纯度低，。1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理。3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞。（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型。该细胞继承双亲(shungqn)细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。既能无限增殖，又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。灭活的病毒。课堂练习第二十七页，共27页。