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1、实验十二实验十二 维生素维生素C含量的测定含量的测定 提出问题：提出问题：什么是维生素什么是维生素C？是性质的检测还是量的检测？是性质的检测还是量的检测？What is Vitamin C?Vitamin C (also called ascorbic acid 抗坏血酸) is a water soluble vitamin found abundantly in many plants. Vitamin C is essential to growth in the human body because it is required for making collagen胶原. Howev
2、er, human cannot make Vitamin C. It has to be provided through diet. The disease that results from a severe deficiency in vitamin C is called scurvy坏血病. People with scurvy get bruises瘀伤 easily. Their skin and teeth also become very unhealthy. 维维生生素素C，又又称称抗抗坏坏血血酸酸，在在植植物物的的绿绿色色部部分分及及许许多多水水果果、蔬蔬菜菜中中含含量
3、量丰丰富富，是是一一类类对对物物质质代代谢谢具具有有重重要要的的作作用用的的水水溶溶性性维维生素。生素。 参与氧化还原反应。（递氢体）参与氧化还原反应。（递氢体） 参与体内羟化反应，参与体内羟化反应，VcVc是羟化酶的辅酶。是羟化酶的辅酶。 解毒作用解毒作用 维生素维生素C是具有是具有L系糖构型的系糖构型的不饱和多羟化合物不饱和多羟化合物，可分为，可分为还原型和氧化型两种形式。根据它具有的还原型和氧化型两种形式。根据它具有的还原性质还原性质可测定其可测定其含量。含量。什么是什么是维生素维生素C C？生理特性：生理特性：1.参与体内羟化反应，2.参与氧化还原反应，3.促进铁吸收防止贫血，4.解毒
4、作用，5.改善变态反应，提高免疫力，6.人体不能自己生产。物理特性：物理特性：水溶性化学特性化学特性:强还原性维生素维生素C的生物特性的生物特性水溶性水溶性强还原性强还原性l提取提取维生素维生素C C的的水溶液水溶液l通过通过氧化还原滴定法氧化还原滴定法来测定维生素来测定维生素C C。测定的思路测定的思路DCPIP The principle of this method is a titration with dichlorophenolindophenol (or phenol-indo-2:6-dichlorophenol, also known as DCPIP). Ascorbic
5、acid reacts with DCPIP, changing the color from blue to pink to colorless. They react in a 1:1 fashion, so if a known quantity of DCPIP solution reacts with the plant tissue extract, the quantity of DCPIP used gives a direct measure of the quantity of ascorbic acid present. 2, 6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚2, 6-二氯酚靛酚
6、二氯酚靛酚23当溶液当溶液从无色转变成微红色从无色转变成微红色时时即表示溶液中的抗坏血酸刚刚即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被全部氧化，此时即为滴定终被全部氧化，此时即为滴定终点。点。 粉红粉红色色蓝色蓝色无色无色DCPIP是性质的检测还是量的检测？是性质的检测还是量的检测？1.蛋白质的性质实验2.蛋白质的两性反应及等电点的测定 3.溶菌酶的提取4.蛋白质含量的测定5.蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 6.细菌DNA的提取 7.UV测定DNA含量和纯度8.PCR9.DNA琼脂糖凝胶电泳 10.酶的动力学测定11.血清SGPT酶活性的测定 用标准品来测定样品1. 学习定量测定维生素学习定量测定维生素C的原理和
7、方法。的原理和方法。2. 进一步掌握滴定法的基本操作技术。进一步掌握滴定法的基本操作技术。3. 了解水果及蔬菜中维生素了解水果及蔬菜中维生素C的含量情况。的含量情况。【目的和要求目的和要求】（一）提取（一）提取 称取松针称取松针2.0克克(或其他水果或其他水果210克克)，剪碎，放在研钵中；，剪碎，放在研钵中；【实验方法实验方法】加加 2%草酸草酸 5-10毫升，研磨成浆状；毫升，研磨成浆状；滤纸过滤，滤饼可用少量滤纸过滤，滤饼可用少量 2%草酸草酸 洗洗2-3次；次；置滤液于置滤液于50mL容量瓶中容量瓶中, 用用2%草酸草酸溶液定容并混匀。溶液定容并混匀。 2mL 标标 准准 Vc 溶溶
8、液液 （ 0.1mg /mL） 8ml 2%草酸草酸（二）标准抗坏血酸的滴定（二）标准抗坏血酸的滴定根据所用染料的体积，计算出根据所用染料的体积，计算出1ml染料相当于多少毫克染料相当于多少毫克(T)抗坏血酸。抗坏血酸。分别以分别以0.1% 2,6- 二氯酚靛酚钠溶液滴定至淡红色，二氯酚靛酚钠溶液滴定至淡红色，并保持并保持15秒不褪色，即达终点。秒不褪色，即达终点。10ml 2%草酸草酸（空白对照）（空白对照）2份份2份份（三）样品的滴定（三）样品的滴定 滤液滤液2份份，每份，每份10mL滴定方法同前。滴定方法同前。消耗消耗DCPIP的量的量(ml)12均值均值标准标准Vc (0.1 mg/m
9、l)样品滤液样品滤液 (D )(VA)2%草酸草酸(VB)ml 染料相当于染料相当于 T mg Vc（四）计算（四）计算VA: 滴定样品提取液所用染料的平均毫升数滴定样品提取液所用染料的平均毫升数VB: 滴定空白对照所用染料的平均毫升数滴定空白对照所用染料的平均毫升数C: 样品提取液总的毫升数样品提取液总的毫升数D: 滴定时所取样品提取液的毫升数滴定时所取样品提取液的毫升数W: 待测样品的重量（待测样品的重量（g）T: 为为1ml染料能氧化抗坏血酸的毫克数染料能氧化抗坏血酸的毫克数Vc含量（含量（mg/100g样品）样品）（VAVB） T DC100 W1. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏
10、血酸被氧化。整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。2. 滴滴定定所所用用2，6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚的的量量应应在在1-4毫毫升升之之间间，超超出出或或低低于于此此范范围围，应应增增减减样样品品液液用用量量或或改改变变提提取取液稀释度。液稀释度。【注意事项注意事项】 3. 微量滴定管要小心操作。微量滴定管要小心操作。【实验报告实验报告】实验标题实验标题姓名，班级，学号实验原理实验原理DCPIP (蓝色) + H+ DCPIPH+ (粉红色)DCPIPH+ (粉红色) + Vc DCPIPH2+ (无色)实验方法及简单步骤实验方法及简单步骤实验结果及计算实验结果及计算实验报告消耗消耗DCPIPDCPIP的量的量(ml)(ml)12均值标准Vc (X mg)样品滤液(D D ml)VA2%草酸VBml 染料相当于 T mg Vc实际测得每100g 松针 中的维生素C含量为 mg选材： 松针 样品量: g讨论讨论1.为了测得准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？为什么？2.试简述维生素C的生理意义。3.实验设计中有什么可以改进的地方？实验报告
