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1、蛇毒酶类止血药蛇毒酶类止血药苏灵苏灵Contents背景介绍背景介绍“苏灵苏灵”研究历程研究历程制备方法制备方法分子结构与作用机制分子结构与作用机制临床应用与相关展望临床应用与相关展望背景介绍血液血液：流动在心脏和血管内的不透明红色液体。人体血液有5000-6000ml；失血超过800-1000ml，就会引起休克或死亡。出血出血主要分为三种：动脉出血 静脉出血 微血管出血外科手术外科手术中，无一例外都涉及到出血与止血。尤其大创面出血难以控制，导致失血量过大，甚至危及生命。止血止血是外科手术必须重视的问题之一。背景介绍v止血措施:(1)压迫、缝合、结扎或电凝等；v (2)给予止血药v我国每年使用
2、止血药的患者：约1000万人v止血药的销售金额/血液系统用药总金额 =91.08%v用药人群：手术患者 外伤患者 出血性疾病背景介绍药物类别药物类别代表药物代表药物促进凝血系统功能止血药促进凝血系统功能止血药蛇毒血凝酶、维生素蛇毒血凝酶、维生素K、止血敏、止血敏凝血因子制剂凝血因子制剂冻干人凝血因子冻干人凝血因子、凝血酶原复合物、凝血酶、凝血酶原复合物、凝血酶抑制纤维蛋白溶解系统止血药抑制纤维蛋白溶解系统止血药氨甲苯酸、氨甲环酸、抑肽酶、氨基己酸氨甲苯酸、氨甲环酸、抑肽酶、氨基己酸作用于血管的止血药作用于血管的止血药安络血、垂体后叶素安络血、垂体后叶素局部止血药局部止血药氧化纤维素、吸收性明胶
3、海绵、醛基纤维素氧化纤维素、吸收性明胶海绵、醛基纤维素蛇毒酶类蛇毒酶类巴曲酶、苏灵巴曲酶、苏灵表表1.常用的止血药物常用的止血药物背景介绍v蛇毒类蛇毒类止血药销售金额在众多止血药中稳居首位v蛇毒类血凝酶新兴的生物技术类止血药 优点优点：原料药来源广、生产成本低、作用机制明 确、不良反应少、毒性低、起效快、药效持久且不引起血管内栓塞.v我国自主研制的一类新药尖吻蝮蛇血凝酶尖吻蝮蛇血凝酶,商品名“苏灵苏灵”就是其中的典型代表药物“苏灵”研究历程蛇毒类血凝酶研究历程1936年，奥地利年，奥地利著名毒蛇学家著名毒蛇学家Klobusitzky 和和Konig 首次从巴首次从巴西矛头蝮蛇毒液西矛头蝮蛇毒液
4、中获得部分纯化中获得部分纯化的的巴曲酶巴曲酶，商品，商品名为名为“立止血立止血”。迄今为止，已发迄今为止，已发现现40余种蛇毒类余种蛇毒类血凝酶血凝酶，并有，并有20余种先后得到分余种先后得到分离和纯化。离和纯化。“苏灵”研究历程1998年年2001年年2002年年8月月尖吻蝮蛇血凝尖吻蝮蛇血凝酶酶由由北京康辰北京康辰医药股份有限医药股份有限公司公司研发，研发，1998年开始立年开始立项并进行临床项并进行临床前研究。前研究。完成全部临床前完成全部临床前研究。研究。获得获得CFDA颁颁发的发的药物药物临床研究批临床研究批件件并进入并进入临床试验。临床试验。“苏灵”研究历程2008年年9月月200
5、9年年2009年年3月底月底获得新药证书获得新药证书和生产批件。和生产批件。完成国家完成国家GMP的现场的现场检查。检查。作为国家一作为国家一类创新药物类创新药物申报上市销申报上市销售，商品名售，商品名“苏灵苏灵”，代号为代号为Saculin.“苏灵苏灵”是迄今为止我国上市产品中是迄今为止我国上市产品中唯一完成全部氨基酸测序唯一完成全部氨基酸测序的单一组分的蛇毒血凝酶类药物，的单一组分的蛇毒血凝酶类药物，单体纯度高达单体纯度高达99%。制备方法蛇毒的蛇毒的获取获取蛇毒的蛇毒的粗制粗制蛇毒的蛇毒的提纯提纯取蛇毒前取蛇毒前3天起令蛇天起令蛇饮足量水，以饮足量水，以提高提高蛇体液量。蛇体液量。待蛇全
6、部处于待蛇全部处于静息静息睡眠睡眠时，开始时，开始分批分批取毒取毒。固定量杯，用蛇钩固定量杯，用蛇钩将蛇钩起，后撬开将蛇钩起，后撬开蛇嘴，将毒牙按于蛇嘴，将毒牙按于量杯，量杯，小心将蛇的小心将蛇的毒腺两边挤压，使毒腺两边挤压，使其毒液被压出。其毒液被压出。第一步：第一步：粗滤粗滤除去除去难溶性杂质，得到难溶性杂质，得到澄清溶液，再澄清溶液，再低温低温冷冻冷冻，待溶液凝固，待溶液凝固后再干燥。后再干燥。第二步：将冷冻的第二步：将冷冻的蛇毒凝块进行蛇毒凝块进行真空真空干燥干燥约约6小时，干小时，干燥后的蛇毒即成粉燥后的蛇毒即成粉末状或块状。末状或块状。将上述蛇毒粉末溶解，将上述蛇毒粉末溶解，再采用
7、再采用滤膜过滤滤膜过滤，除，除去溶液中细菌、颗粒去溶液中细菌、颗粒及大分子的致敏物质，及大分子的致敏物质，然后采用然后采用离子交换离子交换的的方法洗脱神经毒素等方法洗脱神经毒素等毒蛋白；最后采用毒蛋白；最后采用丙丙酮直接沉淀蛇毒血凝酮直接沉淀蛇毒血凝酶酶，需保证酶的活性，需保证酶的活性不丢失。不丢失。分子结构分子结构v丝氨酸蛋白酶丝氨酸蛋白酶，酶蛋白含，酶蛋白含252个氨基酸，分子量为个氨基酸，分子量为29.5kDv由由a a、b b两个亚基两个亚基构成，其中构成，其中a a亚基含亚基含129个氨基酸，分子量个氨基酸，分子量为为15kD， b b亚基含亚基含123个氨基酸，分子量为个氨基酸，分
8、子量为14.5kD， a a、b b两个亚基链间由两个亚基链间由七个二硫键七个二硫键连接。连接。计算机辅助（CAD）拟合尖吻蝮蛇毒类凝血酶的结构Ca2+（其其本本身身即即为为凝凝血血因因子子IV）使使得得凝凝血血作作用用大大幅幅度度提提高。高。作用机制作用机制 途径途径 内源性内源性 外源性外源性“凝血瀑布学说凝血瀑布学说” 步骤步骤v启动启动v血液凝血活酶形成血液凝血活酶形成v凝血酶形成凝血酶形成v形成稳定的纤维蛋白形成稳定的纤维蛋白外源性凝血途径外源性凝血途径组织因子（组织因子（TF）暴露于血液）暴露于血液中而启动，因子中而启动，因子X被激活，进被激活，进入共同止血途径入共同止血途径v内源
9、性凝血途径：凝血过程由于血管内膜损伤，血液与带内源性凝血途径：凝血过程由于血管内膜损伤，血液与带负电荷的异物表面（如玻璃、白陶土、硫酸酷、胶原等）负电荷的异物表面（如玻璃、白陶土、硫酸酷、胶原等）接触而启动，参与凝血的因子全部来自血浆中接触而启动，参与凝血的因子全部来自血浆中作用机制作用机制 在出血局部激活纤维蛋白原释放在出血局部激活纤维蛋白原释放 FpA，形成纤维蛋白单体，纤维蛋白单体聚集形成，形成纤维蛋白单体，纤维蛋白单体聚集形成多聚体多聚体，利用出血局部凝血酶产生的，利用出血局部凝血酶产生的 FXIIIa 通过共价交联形成稳定的纤维蛋白凝通过共价交联形成稳定的纤维蛋白凝块而加速止血；同时
10、缓慢释放块而加速止血；同时缓慢释放 FpB 以加强其止血作用。而在血管内，苏灵以加强其止血作用。而在血管内，苏灵不激活不激活 FXIII，同时苏灵作为单一成分，同时苏灵作为单一成分，不含不含FX 和凝血酶原激活剂，和凝血酶原激活剂，不会不会导致凝血瀑布的导致凝血瀑布的激发放大，从而其在体内激发放大，从而其在体内不会引起血管内栓塞、弥散性血管内凝血不会引起血管内栓塞、弥散性血管内凝血等并发症。等并发症。Thrombin（凝血酶）（凝血酶）Zymogens（酶原）（酶原）coagulation factorsFibrinogenFibABFibrin（纤维蛋白）（纤维蛋白）Platelets（血小
11、板）（血小板）AGGREGATEBlood ClotSVTLE-A or B蛇毒类凝血酶蛇毒类凝血酶Zymogens （酶原）（酶原）coagulation factorsFibrinogenFibAOrFibBAbnormal Fibrin polymersplateletsAGGREGATEDefibrinogenation主主要要途途径径凝血酶机制凝血酶机制蛇毒类凝血酶机制蛇毒类凝血酶机制“苏灵苏灵”的优势的优势1止血靶点明确止血靶点明确，不含不含凝凝血酶原激活物、血酶原激活物、不激活不激活凝血凝血XIIIXIII因子，避免了因子，避免了使用血凝酶类药物有可使用血凝酶类药物有可能出现血液
12、高凝状态和能出现血液高凝状态和正常血管内壁血栓形成正常血管内壁血栓形成的潜在隐患，而对于手的潜在隐患，而对于手术切口出血具有良好的术切口出血具有良好的止血效果止血效果2能明显缩短手术切口能明显缩短手术切口止血时间，其止血效止血时间，其止血效果果略优于略优于同类进口产同类进口产品品. .3半衰期约为半衰期约为2.5小时小时（远超远超过一般的生物过一般的生物制品）且无代谢产物。制品）且无代谢产物。非常适合时间宝贵的非常适合时间宝贵的围手术期用药，同时围手术期用药，同时对人体正常的脏器功对人体正常的脏器功能不产生负面影响。能不产生负面影响。4研究中未见与药物研究中未见与药物相关的不良事件发相关的不良
13、事件发生，安全性研究结生，安全性研究结果显示其临床应用果显示其临床应用是是安全安全的。的。 临床应用情况临床应用情况“ “苏灵苏灵苏灵苏灵” ”全膝关节置换术中全膝关节置换术中全膝关节置换术中全膝关节置换术中的应用的应用的应用的应用鼻内镜手术鼻内镜手术鼻内镜手术鼻内镜手术老年急性上消化老年急性上消化老年急性上消化老年急性上消化道出血道出血道出血道出血妇科手术妇科手术妇科手术妇科手术甲状腺切除手甲状腺切除手甲状腺切除手甲状腺切除手术中的止血术中的止血术中的止血术中的止血减少术后微小减少术后微小血栓形成风险血栓形成风险对全身凝血功对全身凝血功能无明显影响能无明显影响口服奥美拉唑口服奥美拉唑注射苏灵
14、注射苏灵联合应用苏灵联合应用苏灵和控制性降压和控制性降压麻醉能明显减麻醉能明显减少鼻内镜下围少鼻内镜下围术期出血量术期出血量“是药三分毒是药三分毒”广州中医药大学第一附属医广州中医药大学第一附属医院就报道了院就报道了7 7例因使用苏灵例因使用苏灵而产生较为严重的而产生较为严重的不良反应不良反应病例病例展望展望随着现代生物技术手段的快速发展，蛇毒类凝血酶的研究已经由蛋白质水平向基因水平转变。而未来的研究主要课题集中在以下两个方面：u关天然蛇毒的来源问题，很多蛇种都是国家保护品种，要充分利用关天然蛇毒的来源问题，很多蛇种都是国家保护品种，要充分利用基因工基因工程程的方法生产尖吻蝮蛇毒类凝血酶，这将
15、使的方法生产尖吻蝮蛇毒类凝血酶，这将使天然蛇毒资源天然蛇毒资源和和产品纯度产品纯度的问题的问题得到解决，并且要在以后的蛇毒研究中改进表达系统解决产物蛋白复性、后得到解决，并且要在以后的蛇毒研究中改进表达系统解决产物蛋白复性、后修饰及对宿主的毒性问题，这将对提高表达量和生物活性有重要意义。修饰及对宿主的毒性问题，这将对提高表达量和生物活性有重要意义。相信在广大药学工作者的共同努力下，会有更多的蛇毒血凝酶类药物被研究相信在广大药学工作者的共同努力下，会有更多的蛇毒血凝酶类药物被研究开发而成功应用于临床，造福广大人民！开发而成功应用于临床，造福广大人民！u目前对于尖吻蝮蛇毒类凝血酶的结构研究主要集中
16、在一级结构和二级结目前对于尖吻蝮蛇毒类凝血酶的结构研究主要集中在一级结构和二级结构的研究，构的研究， 对于对于高级结构的研究高级结构的研究还很欠缺，对其高级结构进行解析将成为还很欠缺，对其高级结构进行解析将成为未来研究重点。未来研究重点。参考文献参考文献1石光石光, 庞建新庞建新, 孔焕育孔焕育, 等等. 尖吻蝮蛇血凝酶药效评价及其作用机制尖吻蝮蛇血凝酶药效评价及其作用机制J. 中国新药杂志中国新药杂志, 2010 (18): 1706-1709.2吕慧敏吕慧敏, 李长龄李长龄, 董金婵董金婵, 等等. 尖吻蝮蛇凝血酶的止血作用及其作用机制尖吻蝮蛇凝血酶的止血作用及其作用机制的研究的研究J.
17、中国实验血液学杂志中国实验血液学杂志, 2008, 16(4): 883-885.3孔勇刚孔勇刚, 王燕王燕, 陶泽璋陶泽璋, 等等. 尖吻蝮蛇血凝酶在慢性鼻窦炎鼻内镜术中的尖吻蝮蛇血凝酶在慢性鼻窦炎鼻内镜术中的止血效果观察止血效果观察J. 中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志, 2012, 20(1): 39-41.4米鹏程米鹏程, 黄莹黄莹, 孔焕育孔焕育, 等等. 尖吻蝮蛇血凝酶止血作用的机制尖吻蝮蛇血凝酶止血作用的机制J. 中国新中国新药杂志药杂志, 2013, 22(011): 1315-1319.5余昌中余昌中, 张维一张维一, 巨邦律巨邦律. 注射用尖吻蝮蛇血
18、凝酶在腹部手术中应用的注射用尖吻蝮蛇血凝酶在腹部手术中应用的安全性及有效性观察安全性及有效性观察J. 中国药房中国药房, 2013, 24(11): 1033-1034.6白雪白雪, 杜峻峰杜峻峰, 苑树俊苑树俊, 等等. 手术后应用尖吻蝮蛇血凝酶止血的安全性评手术后应用尖吻蝮蛇血凝酶止血的安全性评价价J. 中国临床药理学杂志中国临床药理学杂志, 2011, 27(4): 255-258.7周玉梅周玉梅, 周舰周舰, 张景宇张景宇. 尖吻蝮蛇血凝酶在泌尿外科手术中止血的疗效尖吻蝮蛇血凝酶在泌尿外科手术中止血的疗效观察观察J. 中国医院用药评价与分析中国医院用药评价与分析, 2014 (001): 60-62.8张广防张广防, 曾朝坤曾朝坤, 洪庆雄洪庆雄, 等等. 尖吻蝮蛇血凝酶在全膝关节置换术中的应尖吻蝮蛇血凝酶在全膝关节置换术中的应用用J. 中外医学研究中外医学研究, 2012, 10(22): 16-17.LOGO
