荧光定量分析仪课件

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1、荧光定量分析仪器及试剂概要p仪器p试剂荧光仪u产品特点快速:连续模式200T/小时,单步模式 3 分钟/例智能:自动模式,智能识别检测,无需手动干预报告:综合多项目输出存贮:可存贮上万例结果准确:CV5%,多重质控,检测结果准确通信:用COM,USB等可连入Lis系统轻便:2Kg,适合床边诊断u适用范围中心实验室、门/急诊化验室、体检中心产品优势u激光器,采用的是韩国激光二极管 635nm,相比同类产品所用LED灯,灵敏度高。uIC卡具有自动上电和掉电管理功能,减少带电操作而产生的烧片现象。u连续测量模式下的仪器分别计时,省去秒表计时的繁琐。u全程C-反应蛋白(hsCRP+常规CRP)正常参考

2、值:hs CRP:1 mg/L; CRP:10 mg/L 线性范围:0.5200 mg/Lu尿微量白蛋白正常参考值:20 mg/L线性范围: 5300 mg/L PCT正常参考值: 0.05 ng/mL线性范围:0.05100 ng/mLu人绒毛膜促性腺激素HCG正常参考值:10 mIU/mL线性范围:10 mIU/mL200000 mIU/mLuD-二聚体正常参考值: 0.5 mg/L线性范围:0.0510 mg/L 快速检测方法学线性分析C-反应蛋白(CRP)的发现与结构1930年由Tillet和Francis发现一种能在Ca2+存在时与肺炎链球菌的荚膜C多糖结合的蛋白质1941年, Av

3、ery等先后证实这是一种急性感染时出现的蛋白质(病情恢复后/健康人血清中没有这种物质)结构对称的盘状五聚体,归于五聚素家族由5个完全相同的非糖基化单体以非共价键联接形成每个单体每个含206个氨基酸残基(相对分子质量23017)C反应蛋白( c-reactive protein ,CRP)C-反应蛋白(CRP)的生成由肝细胞在IL6、IL2、TNF刺激下合成,炎症局部巨噬细胞也可少量产生。正常合成率1-10mg/d,急性炎症时每天合成1g。半衰期19h,不耐热,6530min破坏。不能通过胎盘,在体内分布甚广,除血液外,胸水、腹水、心包液、关节液中均可测出。C-反应蛋白(CRP)的生理作用引发对

4、侵入细胞的免疫调节和吞噬作用,与配体结合,激活补体,调理吞噬功能,促使内源性或外源性配体物质(载有配体的病理物质或病原体)的清除,表现为炎症反应在Ca2+存在下与磷酸胆碱、DNA、组蛋白等结合与凋亡坏死细胞膜脂质双层结构破坏时暴露的磷脂或外部侵入的细菌、真菌、寄生虫的细胞壁磷酸胆碱结合CRP细菌巨噬细胞CRP的生物学特点1.反应快速,增量大,随着恢复下降也快;敏感!感染、创伤、手术等情况下快速上升,610hr 明显改变48hr(2472 hr)到高峰,102103倍的变化半衰期67hr,较快反映病情的变化例图:术后CRP等变化CRP的生物学特点2.病毒感染没有标志性升高:病毒主要在细胞内进行复

5、制,一般不破坏细胞膜,暴露CRP结合点,所以病毒感染时CRP一般不超过25mg/L。在成人,革兰氏阴性菌感染时CRP可高达500mg/L,革兰氏阳性菌和寄生虫感染时通常可引起CRP中度升高,多为100mg/L左右。3.受影响因素少:不受生理活动的影响,不受化疗、放疗和激素治疗的影响(肝脏发育不全或肝功能严重受损则会影响CRP的合成)4.能关联疾病活动性:CRP 上升速度、幅度及持续时间与病情 及组织损伤的严重程度密切相关常规CRP、hsCRP 、全程CRP的区别常规炎症严重程度判断 CRP 10-20 mg/L病毒或细菌感染病毒或细菌感染一般细菌感染一般细菌感染严重细菌感染严重细菌感染CRP

6、50 mg/LCRP 20-50 mg/L常规 CRPCRP 1mg/L低危险性低危险性中度危险性中度危险性高危险性高危险性CRP 3 mg/LCRP 1-3 mg/L超敏 CRPCRP与疾病的活动性及检测的临床意义u鉴别细菌或病毒感染(首选指标)u监测病情(CRP升高的程度反映炎症组织和感染的范围.严重程度和活动性)。u监控感染(术后.产后)u抗生素疗效观察,指导和监测治疗(急性感染性疾病时抗生素治疗的最适化,避免抗生素滥用和耐药性)u心血管疾病的风险评估和指导治疗(独立于脂类之外的危险因子,广泛应用于临床)CRP优势标本面广,可适用于全血、血浆、血清样本的检测反应时间短,3分钟即可出结果先

7、进的免疫荧光系统,与美国DADEBEHRINGBN100全自动特定蛋白仪进行比对,相关性好,相关系数R=0.9992一卡双项(超敏+常规),线性范围广(0.5-200mg/L),可全面满足临床需求正常参考值:hsCRP1mg/L;CRP10mg/LD-Dimers定义D-Dimers :是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后,再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物。是一个特异性的纤溶过程标记物。凝血系统凝血系统内源性凝血外源性凝血凝血酶原凝血酶FXIIIFXIIIa纤溶酶原纤溶酶纤维蛋白单体纤维蛋白原交联纤维蛋白FDPX,Y,D,E等碎等碎片片X ,X , ,等碎片等碎片DD,DXD,DD,

8、DXD,DD/E,YXDDD/E,YXD等等复合物复合物纤溶系统纤溶系统纤溶凝固D-Dimer 的产生D-二聚体临床意义静脉血栓栓塞的排除性诊断弥漫性血管内凝血的诊断脑梗死的辅助诊断及预后判断外科手术、溶栓治疗的监测妊娠高血压综合征高凝状态的诊断及检测ACS、肝脏疾病、恶性肿瘤的辅助诊断及预后判断D-二聚体阳性结果的解释0.5ug/mL,不能排除静脉栓塞性疾病,应结合临床表现和其他检查综合评估血栓性疾病的风险,必要时进行动态观察。结合病人群建立 D-二聚体检测的医学决定水平(反映某一病种患者罹患血栓的风险程度),如:孕妇、老年人动态监测 短期内重复测定D-D不仅对诊断有益,而且可窥测病情的演变

9、。D-Dimers 局限性 局限性: 特异性在50%左右如果D-dimers实验结果为阳性, 其中50%病例为血栓症 另外50%病例为其它临床症状 - 炎症, - 癌症, - 血肿, - 术后, - 出血, - 怀孕, - 老年人 .20小结D-二聚体升高是继发性纤溶亢进的标志,但不是血栓形成的标志,二聚体升高是继发性纤溶亢进的标志,但不是血栓形成的标志,D-二聚体与二聚体与FDP同同时检测可提高可提高诊断效率断效率手术前手术前D-二聚体高不是手术禁忌指标,应综合分析二聚体高不是手术禁忌指标,应综合分析一般情况下,一般情况下,3.0ug/mL以上可作为临床干预的医学决定水平,因引起以上可作为临

10、床干预的医学决定水平,因引起D-二聚体升高的疾病较多,需结合症状、体征及其它检查综合判断二聚体升高的疾病较多,需结合症状、体征及其它检查综合判断妊娠妇女和健康老人排除静脉栓塞性疾病的妊娠妇女和健康老人排除静脉栓塞性疾病的D-二聚体二聚体cutoff值高于其它值高于其它人群人群不同试剂(检测系统)检测结果可比性低不同试剂(检测系统)检测结果可比性低标本溶血、凝固、放置时间对标本溶血、凝固、放置时间对DD的测试结果影响较大,因此测定血浆的测试结果影响较大,因此测定血浆D-二聚体应避免溶血、凝固而且需及时送检标本和测定。二聚体应避免溶血、凝固而且需及时送检标本和测定。什么是微量白蛋白尿? 微量白蛋白

11、尿是指尿液中血浆白蛋白排泌量 的轻度升高,在20 mg/min200 mg/min或20 mg/L200 mg/L之间(晨尿) 。 血浆白蛋白、尿微量白蛋白分子量均为 66000,且结构相同。 “微量”是指排泌到尿液中的白蛋白的“数 量”少,而非指泌到尿液中的白蛋白是一些 特殊类型的、“小”分子量的白蛋白。为什么要检测尿微量白蛋白 ? 微量白蛋白尿是早期肾病唯一的临床征象,尿微量白蛋白检测是提示早期肾病十分有效的手段。 微量白蛋白尿代表糖尿病肾病尚处于经过治疗可以避免发展为进展期肾病的早期阶段。 大量研究证明微量白蛋白尿是心血管疾病、原发性高血压以及1、2型糖尿病发生早期心血管死亡事件的重要、

12、独立的风险因素。 在微量白蛋白尿阶段,积极联合治疗,包括良好的血糖控制,使用ACEI 和其他抗高血压药,可防止疾病进展为显性肾病或肾衰。如何检测尿微量白蛋白? 24小时尿蛋白定量检测繁琐,没有增加预测价值和准确性,患者依从性差,尿量收集亦时有误差。 某一时点的尿微量白蛋白检测易受尿量和其他因素干扰,导致假阴性或假阳性结果。 尿肌酐与尿量有极好的相关性,且不受肾脏基底膜病变的影响,用尿肌酐做校正可消除尿量对尿白蛋白排泌量的影响,因此ACRACR(尿微量白蛋白(尿微量白蛋白/ /尿肌酐及比值)尿肌酐及比值)能更为准确地反映肾功能状态。AJKD. 2007, 49 (2 ); Suppl 2: S1

13、3-S154 Diabetes Care. 2009, 32; Supp 1: S1-S61 花费花费 80年代 2000亿美元/年 90年代 4500亿美元/年 2010年(估) 超过1万亿美元 全球1/3的尿毒症其原发病是糖尿病肾病;肾小球肾炎仍是CKD的首位病因 中国CKD 发病率约为9.7 %,上海社区CKD发病率为11.8 % 中国CKD 知晓率不到10 %,至少20%的患者就诊时已到肾病晚期慢性肾病(慢性肾病(CKD)是全球性的公共卫生事件)是全球性的公共卫生事件 “冰山一角冰山一角”未来几年全球透析人数将继续保持未来几年全球透析人数将继续保持6%左右的增长速度,预计到左右的增长速

14、度,预计到2020年将增长至年将增长至380万人左右。万人左右。 HCG定量检测临床应用动态监测hCG区分正常妊娠及异常妊娠。宫外孕的诊断。滋养层疾病的诊断与跟踪。妊娠残留物的动态检测。2626异位妊娠异位妊娠来源:美国妊娠协会注:1.上述参考范围是基于正常月经周期的孕妇,建议动态监测,以观察其递增速度。 2. 在怀孕的头4周内,hCG水平几乎每2天翻一番,到6-7周时,大约每84个小时翻一番。 3. hCG 4000-6000 mIU/mL,-超可见胚囊 PCT概述降钙素原(procalcitonin, PCT) 是无激素活性的降钙素( calcitonin, CT) 的前肽物质由116个氨

15、基酸组成的糖蛋白、分子质量为13000。半衰期为2530h,在体内、外稳定性很好。血清PCT的升高与细菌感染密切相关,在全身系统性严重感染中PCT早期即可升高,经抗生素治疗使感染控制后血中PCT会下降在病毒感染及局部细菌感染而无全身表现的患者PCT仅轻度升高PCT已被用作全身严重感染或败血症时的一个重要的观察指标。不受机体免疫抑制状态的影响。不受机体免疫抑制状态的影响。 PCT的体内过程局部/系统性细菌感染/组织创伤可诱导PCT产生,病毒感染、自身免疫性疾病则否。健康志愿者静脉注射小剂量LPS后2h血浆中可检测到PCT , 68h PCT含量快速升高, 1248h 达到并维持峰值, 23 d

16、后恢复正常 PCT的功能PCT是炎症标志物之一可能是一种次级炎症因子,不直接启动脓毒反应, 但可放大并加重脓毒血症病理过程可能是一个内源性非类固醇抗炎物质,可以抑制炎症介质的合成, 参与机体炎症反应的调控可以抑制环氧化酶的活性, 从而使人淋巴细胞产生前列腺素E2 和血栓素B2 的功能受抑, 提示在体内PCT可调节二十烷类的代谢, 其作用与阿司匹林等镇痛药相似可加速脓毒症实验动物死亡,无脓毒症者则否 引起PCT值上升的因素全身性细菌感染严重的组织创伤严重休克、SIRS 和MODS升高明显真菌、寄生虫、立克次体、结核感染、病毒感染、肿瘤、过敏、自身免疫性疾病、移植物抗宿主病及局部感染轻度升高 PCT的参考值新生儿出生后2d内PCT生理性增高,最高达21ng/ml长期血液透析患者血浆PCT值可达1.5ng/ml谢谢

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