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1、维生素类药物的分析The Analysis of Vitamines1维维生生素素是是维维持持人人体体正正常常生生理理机机能能所所必需的生物活性物质。必需的生物活性物质。如如果果人人体体缺缺少少某某种种维维生生素素，就就会会引引起起维维生生素素缺缺乏乏症症，而而影影响响人人体体的的正正常生理机能。常生理机能。 例如例如: : VA VA 缺乏缺乏夜盲症夜盲症 VB VB1 1缺乏缺乏脚气病脚气病概概 述述2按溶解性分类按溶解性分类VAVA、VDVD、VEVE、VKVK等等B B族（族（VBVB1 1、VBVB2 2等）、等）、VC VC 、烟酸、叶酸、泛酸等烟酸、叶酸、泛酸等脂溶性维生素：脂溶
2、性维生素：水溶性维生素：水溶性维生素：3第一节第一节 维生素维生素A A的分析的分析一结构与性质一结构与性质1 1 化学结构化学结构R=H VAR=H VA醇醇 VA1VA1R= R= COCHCOCH3 3 VAVA醋酸酯醋酸酯R= R= COCCOC1515H H3131 VAVA棕榈酸酯棕榈酸酯4（1 1）环己烯）环己烯+ +共轭多烯侧链；共轭多烯侧链；（2 2）天然）天然VAVA侧链为全反式；侧链为全反式；（3 3）天天然然来来源源主主要要是是鱼鱼肝肝油油，为为醋醋酸酸酯酯，棕棕榈榈酸酸酯酯等等, ,目目前前多多由由人人工工合合成。成。 结构特点：结构特点：5a.a.紫外吸收紫外吸收具
3、有共轭多烯侧链具有共轭多烯侧链紫外吸收。紫外吸收。最最大大吸吸收收波波长长在在325328325328nmnm，随随VAVA存存在在状状态态以以及及所所用用的的溶溶剂剂，最最大大吸吸收波长的位置有所不同。收波长的位置有所不同。2 2 . .性质性质 不溶于水，不溶于水， 溶于乙醚，氯仿，溶于乙醚，氯仿，异丙醇异丙醇，环己烷环己烷，脂肪和油。，脂肪和油。b.b.溶解性：溶解性：6共轭多烯侧链共轭多烯侧链性质非常活泼性质非常活泼. .c.c.不稳定不稳定性性7C C H H2 2O O H HO OC C H H2 2O O H HO OCH OCOOH维生素维生素A A的氧化产物（无生物活性）：
4、的氧化产物（无生物活性）：环氧化物环氧化物维生素维生素A A醛醛维生素维生素A A酸酸or8d.d.与与SbClSbCl3 3作用作用 （Carr-PriceCarr-Price反应）反应） 维维生生素素A A在在氯氯仿仿中中与与SbClSbCl3 3试剂作用，产生不稳定的蓝色。试剂作用，产生不稳定的蓝色。 鉴别鉴别 含量测定含量测定91.1.三氯化锑反应三氯化锑反应二二. . 鉴别试验鉴别试验 维生素维生素A A在饱和在饱和无水无水三氯化锑的三氯化锑的无无醇醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。氯仿溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。2.2.紫外吸收光谱紫外吸收光谱 VA VA的无水乙醇溶液在的无水
5、乙醇溶液在326326nmnm有最大有最大吸收。吸收。10确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：例：VAVA和其标准品用环己烷溶解和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚（乙醚（8080：2020） 板：硅胶板：硅胶G G 显色：显色：SbClSbCl3 3T.S.T.S. Rf Rf： VA VA 醇醇 0.080.08 VA VA 醋酸酯醋酸酯 0.410.41 VA VA棕榈酸酯棕榈酸酯 0.750.753 3、TLCTLC11三含量测定三含量测定1 1、概述、概述共共轭轭多多烯烯的的结结构构具具有有特特征征的的紫紫外外吸吸收。收。相相关关物
6、物质质结结构构相相似似, ,维维生生素素A A最最大大吸吸收波长附近也有吸收，对测定有影响。收波长附近也有吸收，对测定有影响。 MortonMorton和和StubbsStubbs等等人人提提出出了了三三点点校校正正法。法。紫外分光光度法三点校正法紫外分光光度法三点校正法12三点校正法三点校正法: : 在三个波长处测得吸收度，根据校在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算含量，故称为正公式计算含量，故称为“三点校三点校正法正法”。132.2.原理（根据、假定）原理（根据、假定）1 1、物质对光的吸收具有加和性，即、物质对光的吸收具有加和性，即2 2、维生素、维生素A A中的无关吸收在中的无关吸
7、收在310340310340nmnm范围内近似一条直线。范围内近似一条直线。14效价为维生素效价为维生素A A1 1的的40%40%， maxmax345350nm345350nm3.3. 相关物质的吸相关物质的吸收收a.a.维维生生素素A A的的衍衍生物生物维生素维生素A A2 2去氢维生素去氢维生素A A15效价低于维生素效价低于维生素A A1 1， maxmax385390nm385390nmb.b.维生素维生素A A的氧化产物的氧化产物维生素维生素A A3 3去水维生素去水维生素A A16c.c.合成时的中间合成时的中间体体 侧连有侧连有4 4个双键个双键应有应有2 24 4 （161
8、6）种异构）种异构体。目前，包括维生素体。目前，包括维生素A A在内，共发现有在内，共发现有6 6种种异构体。它们是：异构体。它们是：e.e.维生素维生素A A异构体异构体d.d.鲸醇鲸醇维生素维生素A A醇的二聚体，没有生物活性醇的二聚体，没有生物活性17名名称称顺反异构顺反异构 max(nm)相对效价相对效价新维生素新维生素Aa2-顺式顺式32875%新维生素新维生素Ab4-顺顺31924%新维生素新维生素Ac2,4-二顺二顺31115%异维生素异维生素Aa6-顺顺32321%异维生素异维生素Ab2,6-二顺二顺32424%维生素维生素A全反式全反式325328100%18新维生素新维生素
9、A Aa a新维生素新维生素A Ab b19新维生素新维生素A Ac c异维生素异维生素Aa20异维生素异维生素A Ab b维生素维生素A A21 1 1：维生素：维生素A A的的 maxmax 2 2、 3 3：分别在分别在 1 1两侧两侧 4、 三个波长的选择方法三个波长的选择方法 等等波波长长差差法法：两两个个波波长长分分别别在在 1 1两两侧侧1212nmnm处，即处，即1=328nm;2=316nm;3=340nm22 VAVA在在这这两两个个波波长长下下的的吸吸光光度度应应该该等等于于 1 1下的吸光度的下的吸光度的 ，即，即 1=325nm;2=310nm;3=334nm等吸光度
10、法：等吸光度法：235. 5. 方方法法Ch.pCh.p收载有收载有2 2种方法。种方法。第一法（适用于酯式维生素第一法（适用于酯式维生素A A的测定的测定）a.a.操作方操作方法法规定波长：规定波长：300300、316316、328328、340340和和36036024 maxmax不在不在326329326329nmnm，第二法测定。，第二法测定。b.b.计算方计算方法法（1 1）最大吸收波长确认）最大吸收波长确认 max max 在在326329326329nmnm，第一法测定。，第一法测定。25测定波测定波长长吸光吸光度度吸光度比值吸光度比值吸光度比吸光度比值差值差计算值计算值规定
11、值规定值3000.5553160.907(326)328A3281.000(329)3400.8113600.29926（2 2）计算吸收度比及比值差）计算吸收度比及比值差首先要计算吸收度比值。首先要计算吸收度比值。然后计算吸收度的比值差。然后计算吸收度的比值差。27测定波测定波长长吸光吸光度度吸光度比值吸光度比值吸光度比吸光度比值差值差计算值计算值规定值规定值3000.5553160.907(326)328A3281.000(329)3400.8113600.2992829（3 3）计算校正吸收度）计算校正吸收度吸收度校正公式：吸收度校正公式：30（4 4）换算因数）换算因数定定义义：每每一
12、一个个 数数值值所所相相当当的的效效价。价。1 1IU=0.344IU=0.344 g g全反式维生素全反式维生素A A醋酸酯，醋酸酯，1 1g g的维生素的维生素A A醋酸酯就相当于醋酸酯就相当于31维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯：15301530（环己烷、（环己烷、 328328 ）32 消除植物油干扰：适合消除植物油干扰：适合VAVA醇醇第二法（皂化法）：第二法（皂化法）： 在波长在波长300300、310310、325325、334334nmnm处测定吸处测定吸收度，收度，找出找出max max 。1 1g g维生素维生素A A醇所含醇所含V VA A的国
13、际单位数的国际单位数= =18301830b.b.计算计算33c.c.校正公式校正公式A A325325（校）（校）=6.815A=6.815A325325-2.555A-2.555A310310- 4.260A- 4.260A334334d. d. 判断判断 maxmax不在不在323327323327nmnm或或A A300300/A/A325325大于大于0.730.73，先纯化后再测定。，先纯化后再测定。 maxmax在在323327323327nmnm之间且之间且A A300300/A/A325325小于或小于或等于等于0.730.73 ，则：，则：3435（1 1）V VA A遇光
14、易氧化变质，操作应半暗室中快速进遇光易氧化变质，操作应半暗室中快速进行，所用试剂不得含氧化性物质，以防行，所用试剂不得含氧化性物质，以防V VA A 受紫外线或氧化性物质破坏。受紫外线或氧化性物质破坏。注意事项（2 2）用三校正法测定时，一点在）用三校正法测定时，一点在maxmax处，处，其余两点均为吸收曲线的上升和下降陡坡处。其余两点均为吸收曲线的上升和下降陡坡处。对波长的正确性要求严格。对波长的正确性要求严格。340nm340nm处，若波处，若波长误差长误差0.5nm0.5nm，可影响结果，可影响结果-3.12.07%-3.12.07%。所以测定时所用仪器的波长读数应注意，必所以测定时所用
15、仪器的波长读数应注意，必要时应作标准对照。要时应作标准对照。 36第二节维生素第二节维生素B B1 1的分析的分析一、化学结构与性质一、化学结构与性质1.1.结构：结构：氯化氯化4-4-甲基甲基-3-3（ 2-2-甲基甲基- -4-4-氨基氨基-5-5-嘧啶基）甲嘧啶基）甲基基-5-5-（2-2-羟乙基）噻唑嗡离子盐酸盐羟乙基）噻唑嗡离子盐酸盐 37a.a.氨基嘧啶氨基嘧啶次甲基次甲基噻唑环季铵化合物噻唑环季铵化合物b.b.碱性基团：碱性基团： 嘧啶环上的氨基嘧啶环上的氨基 噻唑环上的季铵噻唑环上的季铵 与酸成盐与酸成盐2. 2. 结构特点：结构特点：38 硫色素反应硫色素反应 V VB1B1
16、噻噻唑唑环环在在碱碱性性条条件件下下可可被被铁铁氰氰化化钾钾K K3 3Fe(CN)Fe(CN)6 6等等一一些些氧氧化化剂剂氧氧化化后后，与与嘧嘧啶啶环环上上的的氨基缩合成具有荧光的硫色素。氨基缩合成具有荧光的硫色素。 3. 3. 性质：性质：加碱分解后与醋酸铅反应加碱分解后与醋酸铅反应 V VB B1 1与与NaOHNaOH试液一起加热，分解产试液一起加热，分解产生生NaSNaS，可与可与PbAcPbAc2 2反应生成反应生成PbSPbS的黑色的黑色沉淀。沉淀。39沉淀反应沉淀反应V VB B1 1的的含含氮氮杂杂环环，能能和和生生物物碱碱沉沉淀淀试试剂剂反反应产生沉淀。应产生沉淀。如如：
17、 V VB B1 1与与硅硅钨钨酸酸反反应应可可生生成成组组成成一一定定的的沉沉淀淀。重量法测定重量法测定V VB B1 1含量。含量。硫胺显碱性硫胺显碱性 具有两个碱性基团具有两个碱性基团: :嘧啶环上的氨基、嘧啶环上的氨基、噻唑环上的季铵可以和酸成盐。如：盐噻唑环上的季铵可以和酸成盐。如：盐酸硫胺、硝酸硫胺酸硫胺、硝酸硫胺40 维生素维生素B B1 1的水溶液显氯化物的特征的水溶液显氯化物的特征反应。反应。紫外吸收特性紫外吸收特性41二二. . 鉴鉴别别试试验验1. 1. 硫色素荧光反应硫色素荧光反应42 可与某些生物碱沉淀试剂生成组成可与某些生物碱沉淀试剂生成组成恒定的沉淀恒定的沉淀如：
18、与碘化汞钾产生淡黄色沉淀如：与碘化汞钾产生淡黄色沉淀 与碘生成红色沉淀与碘生成红色沉淀 与硅钨酸生成白色沉淀与硅钨酸生成白色沉淀 与苦味酸生成扇形白色结晶与苦味酸生成扇形白色结晶2 2、沉淀反应：沉淀反应：3、加碱分解后与醋酸铅反应加碱分解后与醋酸铅反应43非水滴定法（非水滴定法（Ch.PCh.P所用方法）所用方法）硅钨酸重量法硅钨酸重量法银量法银量法硫色素荧光法硫色素荧光法紫外分光光度法紫外分光光度法比色法比色法络合滴定法络合滴定法三三. . 含量测定含量测定441 1、原理：、原理： V VB1B1分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中，在醋酸汞存
19、在下，均可在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。被高氯酸滴定。2 2、方法：、方法： 溶剂：冰醋酸（醋酸汞）溶剂：冰醋酸（醋酸汞）指示剂：喹哪定红指示剂：喹哪定红- - 亚甲蓝混合指示液亚甲蓝混合指示液滴定剂：高氯酸滴定剂：高氯酸终点：天蓝色终点：天蓝色 T=16.86mg/mlT=16.86mg/ml（一）非水溶液滴定法（一）非水溶液滴定法（ Ch.P VCh.P VB1B1原料药）原料药）45 V VB1B1分子中具有共轭双键结构。分子中具有共轭双键结构。（二）紫外分光光度法（二）紫外分光光度法（ Ch.P VCh.P VB1B1制剂）制剂）（三）硫色素荧光法（三）硫色素荧光法
20、硫色素反应所形成的硫色素与硫色素反应所形成的硫色素与V VB1B1的浓度成正比，可用于含量测定。的浓度成正比，可用于含量测定。46第三节第三节 维生素维生素C C的分析的分析一一. . 化学结构化学结构二稀醇二稀醇内酯内酯手性碳手性碳47维维生生素素C C分分子子中中具具有有2 2个个手手性性C C原原子子，具具有有4 4种光学异构体。种光学异构体。 其中生理活性最强的是其中生理活性最强的是L L（+ +）- -抗坏血酸抗坏血酸结构特点：结构特点： 具有内酯结构。具有内酯结构。 碱性下可水碱性下可水解。解。 具有烯二醇基。具有烯二醇基。 还原性，能够被氧化成去氢抗坏血酸。还原性，能够被氧化成去
21、氢抗坏血酸。 酸性酸性, ,能与碱成盐。能与碱成盐。48D(-)-异抗坏血酸异抗坏血酸L(+)-异抗坏血酸异抗坏血酸L(+)-抗坏血酸抗坏血酸D(-)-抗坏血酸抗坏血酸49 1. 1. 酸性酸性 烯二醇结构烯二醇结构酸性。酸性。 C C3 3-OH-OH， pKa=4.17(pKa=4.17(共轭效应共轭效应) )酸性强，酸性强， C C2 2-OH-OH，pKpKa a=11.57(=11.57(邻位羰基邻位羰基) )酸性极弱，酸性极弱，表现为一元酸。能与表现为一元酸。能与NaHCONaHCO3 3作用生成钠盐。作用生成钠盐。二二性质与鉴别试验性质与鉴别试验502.2.还原性还原性（烯二醇基
22、）（烯二醇基）去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸513 3、糖类的反应、糖类的反应V VC CHClHCl- -COCO2 2水解水解- -H H2 2O O戊糖戊糖糠醛糠醛吡咯吡咯蓝色蓝色4.4.荧光反应荧光反应5.5.URURBPBP52三、杂质检查三、杂质检查1 1、溶液的澄清度与颜色检查、溶液的澄清度与颜色检查内酯结构内酯结构水解水解- -COCO2 2糠醛糠醛有色聚合物有色聚合物Ch.PCh.P（20052005） V VC C 原料、片剂、注射液原料、片剂、注射液2 2、铁、铜离子的检查、铁、铜离子的检查Ch.PCh.P（20052005） V VC C 原料原料53四、四、含量测定含量测定
23、 1. 1. 碘碘量法量法 原理原理54操作操作 终点颜色：无色终点颜色：无色蓝色蓝色 1 1mlml 0.1 0.1mol/Lmol/L碘液碘液1 1mlml相当于相当于8.8068.806mgmg C C6 6H H8 8O O6 655反应条件：反应条件： 酸性（使酸性（使VCVC在空气中氧化速度减慢在空气中氧化速度减慢 ）溶剂：溶剂： 新沸放冷的水（减少水中溶解氧的新沸放冷的水（减少水中溶解氧的影响影响 ）。）。 讨论讨论还原性物质的影响及排除还原性物质的影响及排除 VC VC注射液中常加有亚硫酸盐如注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSONaHSO3 3作作为抗氧剂。为抗氧剂。 排除：加入
24、丙酮或甲醛排除：加入丙酮或甲醛56+57原理：原理： 在酸性下在酸性下2,6-2,6-二氯吲哚酚二氯吲哚酚 氧化型是红色的氧化型是红色的; ;还原型是无色的还原型是无色的 酸酸性性下下直直接接用用2,6-2,6-二二氯氯吲吲哚哚酚酚滴滴定定，用用滴滴定定剂剂自自身身的的颜颜色色变变化化指指示示终终点点，不不需需要要另另外外的的指示剂。指示剂。2 2、 2,6- 2,6-二氯吲哚酚滴定法二氯吲哚酚滴定法58终点的颜色是溶液由无色变为红色。终点的颜色是溶液由无色变为红色。氧化型（红色）氧化型（红色）还原型（无色）还原型（无色）+59一一化学化学结构与性构与性质第五节第五节 维生素维生素E E的分析
25、的分析601 1、硝酸反、硝酸反应本品，无水乙醇溶解，加硝酸，本品，无水乙醇溶解，加硝酸，75加加热约15分分钟，显橙橙红色。色。2、水解后氧化反水解后氧化反应本品，在碱性条件下水解，得本品，在碱性条件下水解，得-生育酚，在生育酚，在联吡吡啶和三和三氯化化铁试液的作用下液的作用下，反，反应产生血生血红色配离子。色配离子。二、鉴别试验613、UV吸收吸收VE的0.01%无水乙醇液：max=284nm； min=254nm4 4、三氯化铁反应、三氯化铁反应62检查游离生育酚游离生育酚: : 取取0.1g0.1g样品，按品，按铈量法用量法用Ce(SOCe(SO4 4) )2 2(0.01mol/L)
26、(0.01mol/L)滴定，以二苯胺滴定，以二苯胺为指示指示剂，消耗，消耗Ce(SOCe(SO4 4) )2 2液不得超液不得超过1.0ml1.0ml。三、杂质检查631、色色谱条件及系条件及系统适适应性性试验色色谱柱：柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱，硼硅玻璃柱，内装硅藻土（内装硅藻土（80100目）目）固定相：硅固定相：硅酮（OV-17）载气：气：N2，四、含量测定气相色谱法64柱温：柱温：265内内标：正三十二：正三十二烷检测器：器：FID（氢火焰离子化火焰离子化检测器）器）性能要求性能要求：理理论塔板数按塔板数按VE峰峰计算算应不低于不低于500，VE峰与内峰与内标物物质峰的分离度峰的分离度应大于大于2。652、溶液配制：溶液配制：内内标溶液：正三十二溶液：正三十二烷的的环己己烷溶液（溶液（1.0mg/ml）对照溶液：照溶液：对照品溶解于内照品溶解于内标溶液中溶液中 (1mg/ml)供供试品溶液：供品溶液：供试品品约50mg，用内，用内标溶液，溶溶液，溶解并稀解并稀释至至50ml 66日本日本药局方（局方（JP14）色色谱条件：条件：柱：柱：ODS 流流动相：甲醇相：甲醇水水(49:1)检测波波长：292nm高效液相色谱法高效液相色谱法67
