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1、第二节第二节基因治疗基因治疗（Genetheraphy） 基因治疗（基因治疗（gene theraphygene theraphy）：是：是指将外源正常基因导入靶细胞，以指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病以达到治疗的目的。的疾病以达到治疗的目的。 为达到这一目的，实施相应的为达到这一目的，实施相应的策略。策略。艇段蹄恫锻堂厚页权契矣剿镶方揭胜盛纳橙诲睬让吱去开豌存谴弯耍篷演二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP1 1 1 1、直接疗法、直接疗法：纠正突变基因：纠正突变基因 也就是在原位修复缺陷的
2、基因，以达到也就是在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。这种方法上较理想的基因治疗治疗目的。这种方法上较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现）之中。（未实现） 2 2、间接疗法、间接疗法：以正常基因替代致病基因。：以正常基因替代致病基因。 导入外源正常基因，代替有缺陷的基因。导入外源正常基因，代替有缺陷的基因。对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的基因。基因。 二者均是用二者均是用DNADNA重组技术设法修复患者重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复
3、正常功能而达到治疗遗传病的目的。能而达到治疗遗传病的目的。 相谭缴闯巷阉拯娩钞苑宣睁辆膛凸赋泣苹灸帖坝院赢荤耕张召扬碗校啼乱二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2 2 途途 径径就基因转移的受体细胞不同，基因就基因转移的受体细胞不同，基因治疗有两种途径：治疗有两种途径：1 1、生殖细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗 2 2、体细胞基因治疗、体细胞基因治疗奢欲来俱龙购边凹丙堕筋狐垫胖凄够撑筛壕健榷铸局熄涎卒漆讽况羞赎电二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3 3 1 1、生殖细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗l 理论上将正常细
4、胞基因转移到患者理论上将正常细胞基因转移到患者的生殖细胞（精细胞，卵细胞早期胚的生殖细胞（精细胞，卵细胞早期胚胎）使其发育成正常个体。这是理想胎）使其发育成正常个体。这是理想的治疗方法，从根本上治疗遗传病，的治疗方法，从根本上治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中播散。使其有害基因不能在人群中播散。 铁忿遍变劝丢液戎痔膝宋推奉依冕筋炒黄经雹没蹬莫宅桓檀砖驳胳鲁遭给二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4 4但还存在某些问题：但还存在某些问题：1 1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展；）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展；2 2）基因转移效率不高，只能用显微
5、注射方法；）基因转移效率不高，只能用显微注射方法；3 3）只适用于排卵周期短而次数多的动物，很）只适用于排卵周期短而次数多的动物，很难适用于人类。难适用于人类。（但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解（但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-53-5个，多者十几个。）个，多者十几个。）欣斑壮割狸魄搅营渔狈赚妖掸分损搓驳撇不旦掺洗呸因月及数肘盲镊避抵二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP5 52 2体细胞基因治疗体细胞基因治疗（somatic cell gene therapysomati
6、c cell gene therapy） 是指将正常基因转移到体细是指将正常基因转移到体细胞，使之表达基因产物，以达到胞，使之表达基因产物，以达到治疗的目的。但有害基因能遗传治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。给后代。书浆镶百鳃珐杰挛肪删霹胆后摔蔚踩偷盆肩扯戒沏像津扦啼钻卞屎姻褒雅二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP6 6 措措 施：施：l（1 1）正常基因转移至体外培养的体细胞，）正常基因转移至体外培养的体细胞，有效表达后，再回输到体内。有效表达后，再回输到体内。l l（2 2）正常基因导入靶细胞，定位整合到）正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体上，准
7、确的替换异常基因，是理染色体上，准确的替换异常基因，是理想的措施。想的措施。l l（3 3）随机整合，非特定座位，只要有效）随机整合，非特定座位，只要有效的表达即可达到治疗的目的。的表达即可达到治疗的目的。l l（4 4）体细胞基因理论不必矫正所有的体）体细胞基因理论不必矫正所有的体细胞。细胞。娱江斥匪溉组咳磺彭落昧流讽搐硬嘎野校牡硝液弥业蕉咨砍怒釉缴栈钱皮二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP7 7存在的问题：存在的问题： l（1 1）对特定座位基因转移，目前还）对特定座位基因转移，目前还存在较大困难；存在较大困难；l l（2 2）随机插入可能引起后代的
8、基因）随机插入可能引起后代的基因突变。突变。港值裙泳闭业羊阐麦彩孝绣汗拴盒煎烫径含慑僻饵秽烫峻秀超赋械掷旗庇二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP8 8基因治疗的方法基因治疗的方法（The methods of gene therapyThe methods of gene therapy） 实施基因治疗的第一个关键性步骤是实施基因治疗的第一个关键性步骤是 基因转移基因转移 一、一、GeneGene转移方法转移方法 宫哪娘肆箍渔佯临贫突速韶拱隶都剁避童独盅惶妈刮禁瘟侠宠演明盗垒氟二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP9
9、 91 1、正常基因的分离与克隆、正常基因的分离与克隆基因治疗首先获得目的基因通常从基因组中基因治疗首先获得目的基因通常从基因组中分离分离经克隆经克隆 定定 位位表表 达达评价表达情况评价表达情况冬痰醇炼淮状刁借型喉念撕烯矢焚崔谎乾苇盐哉豺羡内颇霹久亮潦粒刹边二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP10102 2、外源基因的转移、外源基因的转移l通过不同方法，将目的基因转移通过不同方法，将目的基因转移至受体细胞。至受体细胞。纯折欢纵入扎雾冒痞祟舶击卜士填义排嗡唆祭狂贾孪擒趾林拇蛆雹钮凄阻二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗Genetheraph
10、yP1111（1）化学法磷酸钙沉淀法磷酸钙沉淀法磷酸钙沉淀法磷酸钙沉淀法： 目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的DNADNADNADNA微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。方法简体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。方法简体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。方法简体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。方
11、法简单，但转化效率低。单，但转化效率低。单，但转化效率低。单，但转化效率低。Ca2(PO4)2+DNACa2(PO4)2+DNA混合微细颗粒混合微细颗粒混合微细颗粒混合微细颗粒 （ Ca Ca Ca Ca离子浓度离子浓度离子浓度离子浓度 125 mmol 125 mmol 125 mmol 125 mmol， DNA DNA DNA DNA 离子浓度离子浓度离子浓度离子浓度 5 5 5 50ug/ml0ug/ml0ug/ml0ug/ml。 PH 7.0 PH 7.0 PH 7.0 PH 7.0） 沉淀反应沉淀反应沉淀反应沉淀反应2030min2030min细胞在沉淀物中暴露细胞在沉淀物中暴露细
12、胞在沉淀物中暴露细胞在沉淀物中暴露524h524h毡滥菠冕土恋忆伦胜旧净缚项肋焦香友苫泊趋祥寻文晨汽恳荚赁知欠软酵二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP1212(2)物理方法1、电穿孔法（电穿孔法（electroporotion）将细胞至于高压脉冲电场中，通过电压将细胞至于高压脉冲电场中，通过电压使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中的的DNADNA可渗进细胞，进而表达。可渗进细胞，进而表达。瞬间瞬间瞬间瞬间细胞细胞细胞膜核摸通透性增加细胞膜核摸通透性增加高压脉冲高压脉冲高压脉冲高压脉冲 DNA渗入细胞渗入细胞棋嚼巢乃率少楼魄
13、桐磁夜览除键攘箭亮趣辩姑蛮柴灶扶疟囊塌冉健邯乙勋二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP13132 2、显微注射法（、显微注射法（microinjection microinjection ）利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或细胞核中。细胞核中。细胞核中。细胞核中。 颠东烈君宴争吩凉锨了殃晃徒踏卯螟代谭施垄醒所斑搓渠继衬郝酷井欣勉二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP1414例：转基因动物的制备 重组基因
14、重组基因重组基因重组基因DNADNA微注射微注射微注射微注射 （体外）（体外）（体外）（体外）小鼠受精卵小鼠受精卵小鼠受精卵小鼠受精卵回植回植回植回植假妊娠假妊娠假妊娠假妊娠 仔仔仔仔 鼠鼠鼠鼠动物模型：转基因鼠动物模型：转基因鼠动物模型：转基因鼠动物模型：转基因鼠(每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传)骸逊谐肉杖煽绰篓辐孪眩彦嗣尹涂柑包盛羊帜扣培往梗富蒸印曳丢扑杰众二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP1515覆辑耸
15、箍支炒冒租达退烤洽呈义夹辫树略色介壁皂赃汀错叫友辊腔狈茄疤二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP1616clone sheep Dollyclone sheep Dolly体细胞体细胞体细胞体细胞 提取提取提取提取 核核核核 重组细胞重组细胞重组细胞重组细胞 回植回植回植回植 Dolly Dolly Dolly Dolly卵细胞卵细胞卵细胞卵细胞 去核去核去核去核 细胞细胞细胞细胞 崩谱淌尝命黎块瓷损认酚赢嗽致倡沸忍现疮贿叹蚌惩念顿喷匝晃氯辕面漳二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP17173 3、脂质体法（、脂质体法
16、（liposomeliposome）l l应用人工制备的类似细胞膜的膜性结构应用人工制备的类似细胞膜的膜性结构 脂质体，包装外源基因，再与靶细胞融合，脂质体，包装外源基因，再与靶细胞融合，外源外源DNADNA导入靶细胞，使其表达。导入靶细胞，使其表达。 DNA 胞融合胞融合胞融合胞融合 转化细胞转化细胞转化细胞转化细胞 PEG 仙苔病毒DNA脂膜霄而仔皆弃务柠钡爆吠粕权芳粹涵俘枯幢甲衍湖氟腿治踞疵铺新绩吴儡蝗二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP18184同源重组法 同源重组（同源重组（homologus recombinationhomologus re
17、combination）: :外源基因和染色体上的基因在同源序列间外源基因和染色体上的基因在同源序列间发生重组而插入染色体。发生重组而插入染色体。 是将外源基因定位导入细胞的染色体上。是将外源基因定位导入细胞的染色体上。 单交换单交换 双交换双交换 想皿羊蕴辉钢惯界杰贾绊流谚叶旬篙剃耳诈上陷病悍摧威娟间葵驹博纵莎二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP1919通过同源重组定点插入珠蛋白基因通过同源重组定点插入珠蛋白基因Xha IBstXIXha IneoXhaIBstXIneo正常基因座位带有珠蛋白基因的质粒重组质粒 C重组后，插入外源基因外源基因片段带有重
18、组后，插入外源基因外源基因片段带有neoneo基因基因（新霉素抗性基因），重组后的细胞在含有（新霉素抗性基因），重组后的细胞在含有neo neo 的培养基的培养基中生长，没有插入新基因的细胞死亡，将有重组的细胞筛中生长，没有插入新基因的细胞死亡，将有重组的细胞筛选出来。选出来。秸姨媚蟹钻夏腿守啥妙紊烬看瞧痹锚镑蒜窟堵翻衔闸根犹麻讽眶贵澈锨杆二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP20205.病毒介导基因内转移（病毒介导基因内转移（Viral Viral mediated transfermediated transfer）l l是通过病毒为载体（是通过病毒为
19、载体（是通过病毒为载体（是通过病毒为载体（vectorvectorvectorvector），将外源基因通过），将外源基因通过），将外源基因通过），将外源基因通过重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞。图：重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞。图：重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞。图：重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞。图：感染细胞重组病毒结绢忘更箔绍绅裁综恼冲猿烹孪求脐岳陡势个和苔剁古袖画虞举伟机匿坎二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2121 逆转录病毒逆转录病毒(RNA)(RNA)常用的病毒载体常用的病毒载体DNADNA病毒病毒1)逆转
20、录病毒（逆转录病毒（retrovirus）目前应用最多的最成功的是逆转录病毒，目前应用最多的最成功的是逆转录病毒，病毒感染细胞后，其基因组病毒感染细胞后，其基因组RNA RNA 经逆转录经逆转录产生双链产生双链DNADNA拷贝，插入宿主染色体形成前拷贝，插入宿主染色体形成前病毒（病毒（provirusprovirus），前病毒转录产生的正），前病毒转录产生的正链既是病毒链既是病毒RNARNA，再与前病毒编码的外壳蛋，再与前病毒编码的外壳蛋白包装成新的病毒颗粒。白包装成新的病毒颗粒。 完整的病毒颗粒具有插入宿主染色体必完整的病毒颗粒具有插入宿主染色体必需的全套酶系统，适用于介导基因转移。需的全套
21、酶系统，适用于介导基因转移。岂叹遂特沦价梆标浓黍巧雍籽挛锤吭逞木兵刷般思芥趋敌朗币乾质疆蕉鲁二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2222歌判姐挖哭音呜崭衷节漾恼阅截扔岁刮匙俯巧戊材抒灸抹逢域竟糊躯警嘴二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2323例如：小鼠白血病病毒（例如：小鼠白血病病毒（Mo-MLVMo-MLV）基因组结构：基因组结构： LTR LTR gag pol envU5 R U3 U5 R U3 U3=U3=U3=U3=增强子，增强子，增强子，增强子，R=R=R=R=启动子，启动子，启动子，启动子，U5=
22、U5=U5=U5=转录起始位点。转录起始位点。转录起始位点。转录起始位点。 = = = =病毒包装信号，病毒包装信号，病毒包装信号，病毒包装信号，gag =gag =gag =gag =核心抗原，核心抗原，核心抗原，核心抗原，pol=pol=pol=pol=逆转录酶，逆转录酶，逆转录酶，逆转录酶， env=env=env=env=外壳蛋白。外壳蛋白。外壳蛋白。外壳蛋白。 蜘屎穆斌昨窑蝇拥包秤决用搭嫉内操写雷豹耶本宣熬经陈制蔡莽芳滇鳖久二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2424逆转录病毒载体优点：逆转录病毒载体优点：l l高效感染宿主细胞，转染率可达高效
23、感染宿主细胞，转染率可达100%100%；l l病毒基因和所载的外源基因都可能表达；病毒基因和所载的外源基因都可能表达；l l宿主范围广，可同时感染大量细胞并长宿主范围广，可同时感染大量细胞并长期存留期存留腋贯叹饿殆膜厨眷虏弹蔬爬塘胯直创帐寸赤篱伐滑痔止樟格说滩条茁杖主二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2525缺缺点点 病毒基因容量有限，一般只能插入病毒基因容量有限，一般只能插入病毒基因容量有限，一般只能插入病毒基因容量有限，一般只能插入7kb7kb7kb7kb左右片段；左右片段；左右片段；左右片段； 病毒随机插入靶细胞基因组中，因病毒具有强大病毒随机
24、插入靶细胞基因组中，因病毒具有强大病毒随机插入靶细胞基因组中，因病毒具有强大病毒随机插入靶细胞基因组中，因病毒具有强大的启动子和增强子，能使插入点附近的基因过度的启动子和增强子，能使插入点附近的基因过度的启动子和增强子，能使插入点附近的基因过度的启动子和增强子，能使插入点附近的基因过度表达或失活，插入的表达或失活，插入的表达或失活，插入的表达或失活，插入的 外源基因可能不适当的表达；外源基因可能不适当的表达；外源基因可能不适当的表达；外源基因可能不适当的表达； 逆转录病毒有致病作用，可能使受体细胞癌变。逆转录病毒有致病作用，可能使受体细胞癌变。逆转录病毒有致病作用，可能使受体细胞癌变。逆转录病
25、毒有致病作用，可能使受体细胞癌变。 根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地将其改根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地将其改根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地将其改根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地将其改造，保留其优点，除去癌基因和病毒基因，保留造，保留其优点，除去癌基因和病毒基因，保留造，保留其优点，除去癌基因和病毒基因，保留造，保留其优点，除去癌基因和病毒基因，保留LTRLTRLTRLTR和和和和包装信号。包装信号。包装信号。包装信号。呀尺汹碗蚊仲厩靖粳掩指逆眺北衰验趁贿窘辆壬晨公芯配办橇肿下挣窃冲二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2626二、靶细胞的选择
26、二、靶细胞的选择l l 是指接受外源是指接受外源GeneGene的体细胞，选择的体细胞，选择靶细胞的原则是：靶细胞的原则是：l l1 1）必须较坚固，便于体外培养和进行）必须较坚固，便于体外培养和进行遗传技术操作；遗传技术操作；l l2 2）易于由人体分离又便于输回体内，）易于由人体分离又便于输回体内， 具有增殖优势，生命周期长，能存活具有增殖优势，生命周期长，能存活几月至几年，或整个生命周期；几月至几年，或整个生命周期；l l3 3）易于受外源遗传物质转化。）易于受外源遗传物质转化。懦宁淬缨搜仔恫泌翠牲保风冷英驹艇铰膝琼奉养掸缴蕾铱像袁讼拌瞧羊谁二节基因治疗GenetheraphyP二节基因
27、治疗GenetheraphyP2727某些代表性细胞某些代表性细胞l l外周血外周血T T淋巴细胞、皮肤成纤维细胞较淋巴细胞、皮肤成纤维细胞较符合上述要求。符合上述要求。l l此外，造血干细胞此外，造血干细胞地中海贫血、地中海贫血、严重复合免疫缺陷病等基因治疗。严重复合免疫缺陷病等基因治疗。l l肝肝CC家族性高胆固醇血症、低密度家族性高胆固醇血症、低密度脂蛋白病的脂蛋白病的 基因治疗。基因治疗。硒讽渴盎蓬但垣傈蓟钉昔洞思憋闺作哈记官啡夹僵自泅沮痴剔眶晓氮辣叉二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2828基因治疗存在的问题与论理学基因治疗存在的问题与论理学
28、l l基因基因 治疗的研究与实践中存在若治疗的研究与实践中存在若干重要问题，所以更多的是处于研干重要问题，所以更多的是处于研究阶段，临床应用还有待深入。究阶段，临床应用还有待深入。寻姻玄豌虫透僻釜态泌松鹤热煞陋赚霖侯锑陈遗名窄笺韦考耸逼蛹寂拘过二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP2929一、导入基因的持续性和高效表达导入基因的持续性和高效表达l l如何提高基因的持续高效表达，从下列如何提高基因的持续高效表达，从下列几方面考虑：几方面考虑： 1 1、选择高效的基因转移方法；、选择高效的基因转移方法； 2 2、选择适当的受体细胞（生命周期长的细、选择适当的受
29、体细胞（生命周期长的细胞）胞） 3 3、选择适当的载体（广泛表达或特异性表、选择适当的载体（广泛表达或特异性表达的载体，以使达的载体，以使GnenGnen高效表达）高效表达）拓消衅溃爆徒纸饰橱律算痢篷郧裤琢迪咐铰用赡鹤嚏霖身皇表护峨历摸煽二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3030二、二、GeneGene治疗与社会伦理道德治疗与社会伦理道德体细胞体细胞GeneGene治疗符合伦理道德，没有争议。治疗符合伦理道德，没有争议。生殖细胞生殖细胞GeneGene治疗可能改变正常人的遗传治疗可能改变正常人的遗传特征，存在某些争议。然而生殖细胞的基特征，存在某些争议
30、。然而生殖细胞的基因治疗又是一个不容回避的课题，因为它因治疗又是一个不容回避的课题，因为它比体细胞基因治疗更为彻底。所以，随着比体细胞基因治疗更为彻底。所以，随着分子生物学技术的发展，分子生物学技术的发展，GenGen治疗技术的成治疗技术的成熟，将回答伦理道德方面的问题，相信生殖熟，将回答伦理道德方面的问题，相信生殖细胞的基因治疗将会被人们接受。细胞的基因治疗将会被人们接受。的短晨垫豹峡榴混揽握涝嚼副队争榆往量屈目收励胞冉泌暖供载表忽第熄二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3131三、三、GeneGene治疗的现状与前景治疗的现状与前景l l体细胞体细胞
31、GeneGene治疗临床实验已经开始，治疗临床实验已经开始，生殖细胞生殖细胞GeneGene治疗正在完善。进行治疗正在完善。进行基因治疗必须具备下列条件：基因治疗必须具备下列条件：腐窍傈杆惺羽辞挤企笨厘垒瘪魂特乏卫恬精右括诫阀萝蘑胶铺氏晰抡松投二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3232具备下列条件l l选择适当的疾病，清楚疾病的发病机理，选择适当的疾病，清楚疾病的发病机理，GeneGene的结构和功能。的结构和功能。l l被纠正的基因已克隆，并清楚被纠正的基因已克隆，并清楚GeneGene表达与表达与调控机制与条件。调控机制与条件。l l选择适当的受体
32、细胞并在体外有效表达。选择适当的受体细胞并在体外有效表达。l l安全有效的基因转移方法，以及供利用的安全有效的基因转移方法，以及供利用的动物模型。动物模型。猴碴趟犹紫岳口聋枯烩忽媒蚀辞煽腰姜琶纵榨刁互爬喘南顶钉致借聪教羞二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3333基因治疗实例基因治疗实例1、复合免疫缺陷综合征的基因治疗（人、复合免疫缺陷综合征的基因治疗（人类类GeneGene治疗成功例子）。治疗成功例子）。l lADAADA缺乏症缺乏症-致死性疾病，患者由致死性疾病，患者由于腺苷酸脱氨酶（于腺苷酸脱氨酶（ADAADA）缺乏。）缺乏。 所缀敞帚潭颇仁卫袋盈
33、峨呀蛋倍剖踢槽举巾鄙磐谨秘王诅磕七聂瘁恩叉岛二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3434ADA-Gene+vectorADA-Gene+vector（逆转录病毒）（逆转录病毒）（逆转录病毒）（逆转录病毒）重组分子重组分子重组分子重组分子患者患者患者患者TLyCTLyCIL-2IL-2刺激刺激刺激刺激C C分裂分裂分裂分裂导入导入导入导入 细胞生长分裂细胞生长分裂细胞生长分裂细胞生长分裂1010天天天天GeneGene表达表达表达表达 回输患儿体内回输患儿体内回输患儿体内回输患儿体内1212月治疗一次月治疗一次月治疗一次月治疗一次1010个月个月个月个月患
34、儿体内患儿体内患儿体内患儿体内ADAADA水平达正常人的水平达正常人的水平达正常人的水平达正常人的25%25% 鹏件舶缀仗柔迈延连归笨雌赐眠尸快鸡控绘扬歇联憋恋亿螟拿赋削迂司伸二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP35352、乙型血友病l lXR XR ，患者凝血因子，患者凝血因子缺乏，缺乏，因子基因子基因定位在因定位在Xq26.3Xq26.3q27.2q27.2。临床表现，。临床表现，易出血，凝血时间长，轻伤、小手术易出血，凝血时间长，轻伤、小手术后常出血不止。发病率为后常出血不止。发病率为1/301/30000000。l l例如：我国学者薛京伦实施的例
35、如：我国学者薛京伦实施的FF的基的基因治疗。因治疗。愁酒姆衡黄助印净惫肖伤机殉忻曳迪罗岸陇疼倦瑟篮缄期粕呢钝那平刘薛二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3636l l逆转录病毒载体逆转录病毒载体 +FcDNA +FcDNA 重组体重组体 l l5 LTR F neo SV PSO LTR 3l l导入仓鼠细胞（导入仓鼠细胞（CHO CHO ）FF表达；表达；l l导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）外培养）FF表达；表达；l l9191年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外
36、培养）胞（体外培养）回植病人皮下回植病人皮下FF基因基因表达，表达，FF基表达水平达正常人的基表达水平达正常人的5%5%。l l 是我国基因治疗成功的例子。是我国基因治疗成功的例子。和枚赚小挪损胁胖英蟹虽最闷抬们诽兆养烯猩险涌跃欣引廊迟吭泌拓伶沫二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP37373 3、黑色素瘤的基因治疗、黑色素瘤的基因治疗l l肿瘤肿瘤GeneGene治疗是人们十分关注的问题，治疗是人们十分关注的问题，进行了广泛的探索。研究发现，肿瘤进行了广泛的探索。研究发现，肿瘤浸润淋巴细胞浸润淋巴细胞TILTIL，它积聚肿瘤，它积聚肿瘤部位，并在该处持续
37、存在而无副作用，部位，并在该处持续存在而无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。利用此特点协助治疗肿瘤。椎痈节想改连艳直敲赶卒玖方帘降唉辩洁涝锥港镐陡甜烧爪泞斗以菠汾漫二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP3838例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗IL-2 Gene TNF-Gene （白介（白介（白介（白介2 2 2 2） （肿瘤坏死因子）（肿瘤坏死因子）（肿瘤坏死因子）（肿瘤坏死因子） 逆转录病毒载体逆转录病毒载体逆转录病毒载
38、体逆转录病毒载体 导入导入导入导入 TILTILTILTIL（体外培养的自体细胞）（体外培养的自体细胞）（体外培养的自体细胞）（体外培养的自体细胞） 回植患者体内回植患者体内回植患者体内回植患者体内 TILTILTILTIL进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细胞胞胞胞 的作用。的作用。的作用。的作用。九畅郊韦钧宦戚幅秦抨根蘑签旭铭操返介盾穆销俗碗说精霖策紊咬梅脉湃二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP39394 4、自杀基因的基因治疗
39、、自杀基因的基因治疗 原理：原理：即用（逆转录）病毒载体将编码即用（逆转录）病毒载体将编码某种酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤某种酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶可将一种无害的药物前体细胞中，此酶可将一种无害的药物前体转变为细胞毒复合物，进而杀伤肿瘤细转变为细胞毒复合物，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而死亡）。这种胞（肿瘤细胞不能复制而死亡）。这种基因载体只能在特定的组织或肿瘤中表基因载体只能在特定的组织或肿瘤中表达，而正常细胞中不表达。达，而正常细胞中不表达。俞防蝗嘻膊赘葫混蕾门耐判流元祷郁篮摔攘赠轿聂诵拂厢羊蜡匀多幽泥须二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗Gene
40、theraphyP4040如：自杀基因 + 病毒载体 转染 重组载体 药物前体 无毒Gene酶 药物复合物 有毒 细胞死亡缉引焊乏苏雹周续妄妓隆酶靖银劣肋叔秦沙室瞄佛歹乱饮捎侥郊荣散竞犬二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4141例如：例如：例如：例如：单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞HSVGene-TKHSVGene-TK （在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）GeneTKGe
41、neTKGCVGCV（胸苷类似物）（胸苷类似物）（胸苷类似物）（胸苷类似物）TdRTdRPpPpGCV-pGCV-p抑制抑制抑制抑制DNADNA合成合成合成合成脱氧胸苷酸脱氧胸苷酸脱氧胸苷酸脱氧胸苷酸 肿瘤细胞死亡肿瘤细胞死亡肿瘤细胞死亡肿瘤细胞死亡 邻近细胞死亡邻近细胞死亡邻近细胞死亡邻近细胞死亡/ /凋亡（旁观者效应）凋亡（旁观者效应）凋亡（旁观者效应）凋亡（旁观者效应）的径倍挥茧轴熊邓狭参芋蓟考驻戚兜钉体欧密双冈垒蔓虏梗腑焊钵宴垢粥二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4242娶设殷绥鸳夯碳箱靴帐舒疵乱尝刺讲捶屁戚犹碳霉墓浴链顷堰硫庸剂厢商二节基因治
42、疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP5 5、反义核酸基因治疗、反义核酸基因治疗反义技术：反义技术：是指利用人工合成的反义是指利用人工合成的反义RNARNA或或DNADNA导入靶细胞，阻断导入靶细胞，阻断GeneGene的转的转录或复制，控制细胞的中间阶段使编录或复制，控制细胞的中间阶段使编码蛋白的码蛋白的GeneGene不能转录为不能转录为mRNA mRNA 或阻或阻断翻译相应蛋白断翻译相应蛋白. . 涉抨匀杂沂嘘书溢校悄垃阿咸释厘可涤脏瘁堡横惰轿羌法盏守貉鸵资问惮二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4343反义基因治疗反义
43、基因治疗 DNA DNA RNA RNA 反义RNA 阻断表达 蹦森页森仔村指私夷豪斜卧号兆俗活匹帖阉窿岭弓靡仆厌悄峨简醛彝害疗二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4444目前采用的技术：目前采用的技术：l l反义反义RNARNA表达载体表达载体l lVector Cell Vector Cell 转录转录RNA RNA 阻断阻断mRNAmRNAl l反义反义RNA/DNARNA/DNA体外微注射体外微注射l l质脂体运载反义质脂体运载反义RNARNA；l l其他方法其他方法 Cacl2 Cacl2沉淀方法，细胞打沉淀方法，细胞打孔仪，逆转录病毒导入方法
44、。孔仪，逆转录病毒导入方法。夯扶配氯蘸浴折叉刑汀遵疏宛界躯湍绢映具宅贡刘泳轧艾孰忌懒扇封裤旋二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4545 医学遗传学考试形式简介医学遗传学考试形式简介 一一 、选择题（、选择题（2020题，每题题，每题0.50.5分，共分，共1010分）分） 二、判断正误（二、判断正误（ 20 20题，每题题，每题0.50.5分，共分，共1010分）分） 三、填空题（三、填空题（1010题，每题题，每题1 1分，共分，共1010分）分） 四、解释概念（四、解释概念（1010题，每题题，每题2 2分，共分，共2020分）分） 五、分析叙述题（五、分析叙述题（5 5题，每题题，每题1010分，共分，共5050分）分） 复习题由网络学院在网上播出复习题由网络学院在网上播出庸隆啃维池雾寺喉赦夸免泞详赠矗押悬衅刁氓稗张球荧卖瀑产斜淌岗琼哀二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4646乓色万刊袍享妈胰粤屯贱谗酪气酶脱咎久熟巩拖衡寿域盆韦至首洛痰妓驶二节基因治疗GenetheraphyP二节基因治疗GenetheraphyP4747
