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1、生理学实验概论生理学实验概论一、生理学实验课的目的n n在实验过程中使学生初步掌握生理学实验的基本操作技术n n验证和巩固生理学的基本理论。n n通过实验培养学生具有科学的思维方法和科学的工作态度。生理学实验的特点 n n1.实验对象实验对象n n生理学实验一般以活体为对象，包括其正常功能、整体的动物和离体的器官或组织均在具有活性的前提下用于实验。故应小心、规范地操作注意保护动物或标本于最佳活性状态。n n2.影响因素影响因素n n动物的机能状态、实验操作及条件、药物及试剂等均可影响实验结果，故需仔细观察、祥实记录，并分析实验结果以推断实验结论。n n3.规范操作规范操作n n使用的仪器及器材
2、多，性能复杂，应严格按有关规程进行操作。实验室守则 n n 1.实验前，应充分预习本实验的实验指导。 n n 2.遵守学习纪律，准时到达实验室，穿好白大衣。实验时因故外出或早退应向教师请假。n n 3.必须严肃认真地进行实验；实验期间不得进行任何与实验无关的活动。n n 4.保持实验室安静。讲话要低声，以免影响别人实验。n n 5按照实验步骤，认真操作，注意保护实验动物和标本，节省实验器材和药品。 n n n n6. 6.实验室内各组仪器和器材由各组自己使用实验室内各组仪器和器材由各组自己使用，不得，不得与别组调换，以免混乱。如遇仪器损坏或机件不与别组调换，以免混乱。如遇仪器损坏或机件不灵，应
3、报告负责教师或实验准备室技术人员，以灵，应报告负责教师或实验准备室技术人员，以便修理或更换，不要自行乱修。便修理或更换，不要自行乱修。实验用的动物按实验用的动物按组发给，组发给，如需要补充使用，须经教师同意才能补如需要补充使用，须经教师同意才能补领。领。n n 7. 7.爱惜公共财物，注意节约各种实验器材和用品。爱惜公共财物，注意节约各种实验器材和用品。n n8 8注意安全，严防触电、火灾、注意安全，严防触电、火灾、被动物咬伤被动物咬伤及中及中毒事故的发生。毒事故的发生。 n n仔细、耐心地观察实验过程中出现的现象，真实仔细、耐心地观察实验过程中出现的现象，真实客观地记录实验结果，并加上必要的
4、文字注释，客观地记录实验结果，并加上必要的文字注释，有时还需要绘制图形或曲线进行分析。实验中的有时还需要绘制图形或曲线进行分析。实验中的每项结果都应随时记录，必要时可进行描记、照每项结果都应随时记录，必要时可进行描记、照相等，不可单凭记忆，以免发生错误或遗漏，更相等，不可单凭记忆，以免发生错误或遗漏，更不可随意修改。实验报告中应使用原始结果。不可随意修改。实验报告中应使用原始结果。n n保持实验室清洁整齐，不必要的物品不要带进实保持实验室清洁整齐，不必要的物品不要带进实验室。实验完毕后，应将实验器材、用品和实验验室。实验完毕后，应将实验器材、用品和实验桌收拾干净，数点清楚，不可零乱。桌收拾干净
5、，数点清楚，不可零乱。动物尸体、动物尸体、纸片及废品应放到指定地点，不要随地乱丢纸片及废品应放到指定地点，不要随地乱丢。n n对实验中取得的结果作如下思考：（l）取得了什么结果? （2）为什么出现这种结果? （3）这种结果有什么意义? （4）出现非预期结果的原因是什么等。 n n认真整理实验结果并撰写实验报告，按时交负责教师评阅。 实验报告的书写n n 每次实验，均要求写出实验报告。实验报告应注意文字简练，通顺，规范书面语书写，整洁，正确使用标点符号。 报告书写要求（模版见书报告书写要求（模版见书)n n（1）姓名、班次、组别（此项可写在实验报告本的封面）。n n （2）实验序号和题目。注明日
6、期.n n （3）实验目的实验对象（要求尽可能简洁、清楚）。n n （4）实验方法（详细写出）。n n （5）实验结果。把经过处理的结果写上并附上原始资料（包括记录的曲线图）。n n n n（6 6）讨论）讨论 对实验结果进行科学的分析，分析推对实验结果进行科学的分析，分析推理要有根据，实事求是，符合逻辑。理要有根据，实事求是，符合逻辑。并在分析实并在分析实验结果的基础上推导出恰如其分的结论，而不是验结果的基础上推导出恰如其分的结论，而不是用现成的理论对实验结果作一般性的解释。用现成的理论对实验结果作一般性的解释。如果如果本实验未能揭示实验结果产生的原因，则可用已本实验未能揭示实验结果产生的原
7、因，则可用已知的理论知识加以必要的解释。知的理论知识加以必要的解释。如需参考课外读如需参考课外读物，应注明出处。物，应注明出处。n n（7 7）小结）小结 小结是对实验结果进行分析后所得到小结是对实验结果进行分析后所得到的概念或论点。的概念或论点。小结应源于本实验的讨论分析并小结应源于本实验的讨论分析并与本实验的目的相呼应，与本实验的目的相呼应，本实验未能验证的内容本实验未能验证的内容不要写到小结中。不要写到小结中。BioLab-420生物机能实验系统n n它是配置在微机上的4通道生物信号采集、放大、显示、记录与处理系统。 BL-410生物机能实验系统软件应用的说明 n n本系统软件有9个 W
8、indows风格的顶级菜单选项(见图2-17)，它们分别是：文件、设置、输入信号、实验项目、数据处理、工具、网络、窗口及帮助。 打开界面打开界面开始实验开始实验区间测量区间测量n n1、文件菜单、文件菜单n n文件菜单中包含有打开、另存为、打开配文件菜单中包含有打开、另存为、打开配置、保存配置、打开上一次实验配置、高置、保存配置、打开上一次实验配置、高效记录方式、删除文件、打印、打印预览、效记录方式、删除文件、打印、打印预览、打印设置、定制打印对话框、最近文件和打印设置、定制打印对话框、最近文件和退出等退出等13个命令。软件的菜单命令配合操作个命令。软件的菜单命令配合操作界面中的控制区按钮可完
9、成所有实验操作。界面中的控制区按钮可完成所有实验操作。 n n2、设置菜单、设置菜单n n设置菜单中包括工具条、状态栏、实验标设置菜单中包括工具条、状态栏、实验标题、实验人员、实验相关数据、记滴时间、题、实验人员、实验相关数据、记滴时间、光标类型、通用标记时间显示开关、特殊光标类型、通用标记时间显示开关、特殊标记时间显示开关、设置记录时间、扫描标记时间显示开关、设置记录时间、扫描显示方式、显示方向和定标等显示方式、显示方向和定标等13个菜单选项，个菜单选项，其中工具条、显示方向和定标三个菜单选其中工具条、显示方向和定标三个菜单选项还有二级子菜单。项还有二级子菜单。 n n3、输入信号菜单、输入
10、信号菜单n n输入信号菜单中包含输入信号菜单中包含14通道的四个子菜单通道的四个子菜单的命令。在每个通道子菜单中有的命令。在每个通道子菜单中有“动作电动作电位、神经放电、压力、张力位、神经放电、压力、张力”等药理指标等药理指标的记录命令，且每个通道的输入信号选择的记录命令，且每个通道的输入信号选择都是一样的。都是一样的。 n n4、实验项目菜单、实验项目菜单n n实验项目下拉式菜单中包含有实验项目下拉式菜单中包含有8个菜单项，个菜单项，它们分别是肌肉神经实验、循环实验、呼它们分别是肌肉神经实验、循环实验、呼吸实验、消化实验、感觉器官实验、中枢吸实验、消化实验、感觉器官实验、中枢神经实验、泌尿实
11、验以及其它实验。神经实验、泌尿实验以及其它实验。n n5、.数据处理菜单数据处理菜单n n数据处理菜单中包括有微分、积分、频率数据处理菜单中包括有微分、积分、频率直方图、序列密度直方图、非序列密度直直方图、序列密度直方图、非序列密度直方图、频谱分析，计算直线回归方程，计方图、频谱分析，计算直线回归方程，计算算PA2、PD2、LD50、ED50，计算半衰期，计算半衰期，两点测量、区间测量、细胞放电数测量、两点测量、区间测量、细胞放电数测量、心肌细胞动作电位测量等心肌细胞动作电位测量等14个命令。个命令。这里只这里只介绍一下较常用的两点测量和区间测量。介绍一下较常用的两点测量和区间测量。n n6、
12、工具菜单、工具菜单n n工具菜单的作用是集成工具菜单的作用是集成Windows操作系统中操作系统中的工具软件和其它的工具软件和其它Windows应用软件，如记应用软件，如记事本、画图、事本、画图、Windows资源管理器，计算器、资源管理器，计算器、 Excel、Word等。选择工具菜单上的某一个等。选择工具菜单上的某一个命令，将直接从命令，将直接从BL-NewCentury软件中启软件中启动选择的动选择的Windows应用程序。应用程序。 n n8、窗口菜单、窗口菜单n n用鼠标单击顶级菜单条上的“窗口”菜单项时，“窗口”下拉式菜单将被弹出 （二）工具条n n工具条和命令菜单的含义相似，它也
13、是一些命令的集合。但是它和命令菜单又有些差异，具体来讲，它是把一些常用的命令以方便、直观（图形形式）的方式直接呈现在使用者面前， n n工具条上的每一个图形按钮被称为工具条按钮，每一个工具条按钮对应一条命令， n n1.系统复位按钮系统复位按钮 选择系统复位命令将对BL-410生物机能实验系统的所有硬件及软件参数进行复位，即将这些参数设置为默认值。n n2. 零速采样零速采样 该命令用于实现BL-410系统中的零速采样功能。所谓零速采样是指：在扫描速度为零的情况下，仍然进行数据采样，并且将最新采样的数据显示在显示窗口的数据出现端，此时，我们可以观察到最新数据的变化规律，但是整个波形并不向前移动
14、。零速采样功能适用于变化非常缓慢的生物信号。n n3. 打开打开 该命令与“文件”菜单中的“打开”命令功能相同n n4. 4.上一次实验配置上一次实验配置上一次实验配置上一次实验配置 打开上一次实验设置是指：当打开上一次实验设置是指：当一次实验结束之时，一次实验结束之时， 本次实验所设置的各项参数本次实验所设置的各项参数均被存贮到了计算机的磁盘配置文件均被存贮到了计算机的磁盘配置文件config.lasconfig.las中，中，如果现在想要重复做上一次的实验而不想进行繁如果现在想要重复做上一次的实验而不想进行繁琐的设置，那么，只需选择琐的设置，那么，只需选择“ “打开上一次实验设打开上一次实
15、验设置置” ”命令，计算机将自动把实验参数设置成与上命令，计算机将自动把实验参数设置成与上一次实验时完全相同，并自动启动数据采集与波一次实验时完全相同，并自动启动数据采集与波形显示，这样，就减少了设置实验参数的工作量。形显示，这样，就减少了设置实验参数的工作量。此外，若实验意外中断，继续实验须恢复相同的此外，若实验意外中断，继续实验须恢复相同的实验参数，此时只需使用该功能，即可恢复刚才实验参数，此时只需使用该功能，即可恢复刚才的实验。的实验。n n5.数据记录数据记录 “记录”命令是一个双态命令，所谓双态命令是指每选择该命令一次，其所代表的状态就改变一次，这就好像是一盏电灯的开关，这种命令通过
16、按钮标记的按下和弹起表示两种不同的状态。 n n5.开始开始 选择该命令，将启动数据采集。n n6.暂停暂停 择该命令后，将暂停数据采集与波形动态显示n n7.停止停止 选择该命令，将结束当前实验，并弹出存盘对话框。n n8. 8.切换背景颜色切换背景颜色切换背景颜色切换背景颜色 选择该命令，显示通道的背景颜选择该命令，显示通道的背景颜色将在黑色和白色这两种颜色中进行切换。色将在黑色和白色这两种颜色中进行切换。n n9. 9.格线显示格线显示格线显示格线显示 当波形显示背景没有标尺格线时，单当波形显示背景没有标尺格线时，单击此按钮可以添加背景标尺格线；当波形显示背击此按钮可以添加背景标尺格线；
17、当波形显示背景有标尺格线时，单击此按钮可以删除背景标尺景有标尺格线时，单击此按钮可以删除背景标尺格线。格线。n n10.10.通用标记通用标记通用标记通用标记 在实时实验过程中，当单击该命令，在实时实验过程中，当单击该命令，将在波形显示窗口的顶部添加一个通用实验标记，将在波形显示窗口的顶部添加一个通用实验标记，其形状为向下的箭头，箭头前面是该标记的数值其形状为向下的箭头，箭头前面是该标记的数值编号，编号从编号，编号从1 1开始顺序进行，如开始顺序进行，如 20 20 ，箭头后面，箭头后面则显示添加该标记的时间，可以打开或关闭通用则显示添加该标记的时间，可以打开或关闭通用标记的时间显示。标记的时
18、间显示。n n11.两点测量两点测量 该命令与“数据处理”菜单中的“两点测量”命令功能相同。n n12.区间测量区间测量 该命令与“数据处理”菜单中的“区间测量”命令功能相同。n n13.图形剪辑图形剪辑 该命令代表图形剪辑功能。n n14.数据剪辑数据剪辑 该命令代表数据剪辑功能。n n各实验例子n n打开-C盘-progrom files-BL-420生物机能实验系统-data-demo-选择各种实验的图例动物实验概论动物实验概论n常用手术器械n常用试验仪器动物实验的基本知识动物实验的基本知识n n实验动物是指人工饲养，对其携带的微生物实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的动物。n n这些个
19、体具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和较好的重复性。 实验动物分级实验动物分级n n根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级： n n 一级普通动物（Conventional animals ,CV）:系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和少数的实验动物烈性传染病的病原体。 n n二级清洁动物（Clean animals ,CL）:要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。 n n三级无特殊病原体动物（三级无特殊病原体动物（Specific pathogen free Specific pathogen free animals ,SPFanimals
20、,SPF），），要求到二级外，还要排除一些规要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。定的病原体。 n n四级无菌动物（四级无菌动物（Germ free animals ,GFGerm free animals ,GF）或悉生动）或悉生动物（物（Gnotobiotes animals ,GNGnotobiotes animals ,GN）。）。无菌动物要求不无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。带有任何用现有方法可检出的微生物。悉生动物悉生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。物。生物安全生物安全n生物安全是指对基因修饰生物、病原微
21、生物、外来有害生物等生物体可能产生的潜在风险或现实危害的防范和控制。n生物安全是指人们对于由动物、植物、微生物等生物体对人类健康、社会稳定和赖以生存的自然环境可能造成危害的防范。n由实验动物造成的各种风险和危害包括：n生产和使用实验动物中的各个环节，如实验动物的引种、保种、繁育、运输、进出口n使用实验动物(包括感染和非感染实验动物)进行动物实验、从事科研活动等过程中实验动物造成的各种危害我国主要实验动物管理法规n1、实验动物管理条例n2、实验动物质量管理办法n3、实验动物许可证管理办法（试行）4、实验动物种子中心管理办法n5、省级实验动物质量检测机构技术审查准则我国主要实验动物标准n1实验动物
22、微生物等级及监测n2实验动物寄生虫等级及监测n3实验动物环境及设施n4哺乳类实验动物的遗传质量控制n5实验动物配合饲料通用质量标准n6实验动物配合饲料卫生标准实验动物使用（动物实验）的生物安全n实验操作因素：n实验人员实验操作过程中做好防护，穿戴好工作衣、帽、口罩、手套，严格按操作规程进行。n大多数情况下，用普通的肥皂和水彻底冲洗对于清除手部污染就足够了。n但在高度危险的情况下，建议使用杀菌肥皂。手要完全抹上肥皂，搓洗至少10 秒钟，用干净水冲洗后再用干净的纸巾或毛巾擦干（如果有条件，可以使用暖风干手器）。n推荐使用脚控或肘控的水龙头。如果没有安装，应使用纸巾或毛巾来关上水龙头，以防止再度污染
23、洗净的手。实验动物操作n为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态n工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。n操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物实验动物咬伤救治n伤口处理：及时(最佳时机是在咬伤后几分钟内)对伤口进行清洗消毒。可用20肥皂水或0.1新洁尔灭充分洗涤5-10分钟，再用清水彻底冲洗。n较深伤口冲洗时，用注射器深入伤口深部进行灌注清洗，做到全面彻底。再用75酒精消毒，然后用3-5碘酒涂搽。n伤口不宜包扎、缝合，伤口应尽可能暴露。n建议接种疫苗：24h内到当地疾病预
24、防控制中心接种疫苗：狂犬病疫苗、流行性出血热疫苗、破伤风等。由同学自行决定是否注射，费用由学院处理。n被严重咬伤者伤口周围及底部需注射抗狂犬病血清，或使用狂犬病免疫球蛋白动物实验与福利伦理的理解动物实验与福利伦理的理解n据统计, 每年我国用于科研的实验动物约为2000万只，全球约为数十亿只动物n其中大部份用于医学研究,因此实验动物为人类健康作出了具大的牺牲。n作为一种生命形式,与人类一样,具有感觉和情感,能感知疼痛,也恐惧死亡,而实验中不可避免对动物造成伤害和痛苦。n动物福利常见两种表达：well-being（康乐）、welfare（福利）n-动物福利之父：Charles Humenwell-
25、being（康乐）-偏强调动物的内在感受。nwelfare（福利）-强调人们对动物康乐所采取的态度以及实施的有效措施一、动物实验与福利伦理的理解一、动物实验与福利伦理的理解n动物福利（-英国防止虐待动物协会（RSPCA）1、享有不受饥渴的自由n（生理需求：提供饮水和食物，满足动物的生命需要）n2、享有生活舒适的自由n（环境需求：提供足够的空间、远离猎食动物的庇护所）n3、享有不受痛苦、伤害和疾病的自由（健康需求：不受额外疼痛，疾病的预防与治疗）n4、享有生活无恐惧和悲伤的自由（心理需求：避免受到各种不良刺激和精神痛苦）n5、享有表达天性的自由（社会性需求：独居或群居、求偶）实验动物福利主要强调
26、两点实验动物福利主要强调两点: n1、有利于科学实验：满足动物康乐，最大限度发挥实验动物的作用n2、免受不必要的痛苦：改进动物实验中那些不利于动物康乐的方式n善待实验动物，是指在饲养管理和使用实验动物过程中，要采取有效措施，使实验动物免遭不必要的伤害、饥饿、不适、惊恐、折磨、疾病和疼痛（心理、健康），保证动物能够实现自然行为（社会性），n受到良好的管理与照料，为其提供清洁、舒适的生活环境（环境），提供充足的、保证健康的食物、饮水（生理），避免或减轻疼痛和痛苦等中山大学实验动物中心中山大学实验动物中心常用实验动物常用实验动物n n1 1青蛙与蟾蜍青蛙与蟾蜍n n2 2小白鼠小白鼠n n3 3大白
27、鼠大白鼠n n4 4豚鼠：性情温顺，胆小怕惊吓，对组胺敏感。豚鼠：性情温顺，胆小怕惊吓，对组胺敏感。常用于免疫学研究和过敏性疾病模型常用于免疫学研究和过敏性疾病模型n n5 5家兔：耳大，血管清晰，便于静脉注射和取血。家兔：耳大，血管清晰，便于静脉注射和取血。眼大易观察，眼大易观察，常用于眼科研究常用于眼科研究。因其体温变化较。因其体温变化较敏感，也敏感，也常用于体温实验及热原检查。常用于体温实验及热原检查。1青蛙与蟾蜍青蛙与蟾蜍2小白鼠小白鼠3大白鼠大白鼠4豚鼠：豚鼠：n n性情温顺，胆小怕惊吓，对组胺敏感。常用于免疫学研究和过敏性疾病模型5家兔：家兔：n n耳大，血管清晰，便于静脉注射和取
28、血。眼大易观耳大，血管清晰，便于静脉注射和取血。眼大易观察，察，常用于眼科研究常用于眼科研究。因其体温变化较敏感，也。因其体温变化较敏感，也常常用于体温实验及热原检查。用于体温实验及热原检查。n n6 6猫：猫：猫的血压比较稳定，较大鼠、家兔等小动猫的血压比较稳定，较大鼠、家兔等小动物更接近于人体，物更接近于人体，且与人相似，故可用于循环药且与人相似，故可用于循环药理研究。理研究。 n n7 7狗：狗：是医学实验中最常用的大动物是医学实验中最常用的大动物。血液、循。血液、循环、消化和神经系统均很发达、与人类较接近。环、消化和神经系统均很发达、与人类较接近。适用于药理学、毒理学和药物代谢、营养学
29、和药适用于药理学、毒理学和药物代谢、营养学和药理学研究。理学研究。 n n8 8、小型猪：毛发、皮肤厚薄，形态学和增殖动力、小型猪：毛发、皮肤厚薄，形态学和增殖动力学与人非常相似。学与人非常相似。理想的烧伤模型理想的烧伤模型n n9 9、猴：最相似的生物学和行为学特征、猴：最相似的生物学和行为学特征实验动物的编号、捉拿与固定n n1染料标记法n n常用染料：n n红色染料：5中性红或品红液；n n黄色染料：3%5苦味酸溶液；n n咖啡色染料：2硝酸银溶液；n n黑色染料：煤焦油的酒精溶液。n n（2 2）标记规则：根据实验动物被毛颜色的不同选择不同）标记规则：根据实验动物被毛颜色的不同选择不同
30、化学药品涂染动物。化学药品涂染动物。n nA A、兔、猫、狗等动物的标记方法：用毛笔蘸取不同颜色、兔、猫、狗等动物的标记方法：用毛笔蘸取不同颜色的染料溶液直接在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂的染料溶液直接在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂写，则需在日光下暴露写，则需在日光下暴露1 1分钟。分钟。n nB B、大鼠、小鼠的标记：、大鼠、小鼠的标记：通常在动物不同部位涂上有色斑通常在动物不同部位涂上有色斑点来表示不同的号码。点来表示不同的号码。常规的涂染顺序是从左到右、从上常规的涂染顺序是从左到右、从上到下。左前肢为到下。左前肢为1 1号、左侧腹部号、左侧腹部2 2号、左后肢号、左后肢3 3
31、号、头部号、头部4 4号、号、背部背部5 5号、尾根部号、尾根部6 6号、右前肢为号、右前肢为7 7、右侧腹部、右侧腹部8 8号、右后肢号、右后肢9 9号、不作染色标记为号、不作染色标记为1010号。号。n n在每组实验动物不超过在每组实验动物不超过1010只的情况下适用。只的情况下适用。n n双色涂染法是采用两种颜色同时进行染色标记的双色涂染法是采用两种颜色同时进行染色标记的方法。方法。双色法色法可标记双色法色法可标记100100位以内的号码。位以内的号码。 n n例如用苦味酸（黄色）染色标记作为个位数，用例如用苦味酸（黄色）染色标记作为个位数，用品红（红色）染色标记作为十位数。个位数的染品
32、红（红色）染色标记作为十位数。个位数的染色标记方法同单色涂染法；十位数的染色标记方色标记方法同单色涂染法；十位数的染色标记方法参照单色涂染法，法参照单色涂染法，n n即左前肢为即左前肢为1010号、左侧腹部号、左侧腹部2020号、左后肢号、左后肢3030号、号、头部头部4 04 0号、背部号、背部5050号、尾根部号、尾根部6060号、右前肢号、右前肢7070号、号、右侧腹部右侧腹部8080号、右后肢号、右后肢9090号，第号，第100100号不作染色标号不作染色标记。记。n n比如标记第比如标记第1212号实验动物，在其左前肢涂染品红号实验动物，在其左前肢涂染品红（红色），在其左侧腹部涂上苦
33、味酸（黄色）即（红色），在其左侧腹部涂上苦味酸（黄色）即可。可。n n2穿耳打孔法：用专门的打孔器在动物耳朵的不同部位打孔或缺口来表示一定号码。此法是小鼠常用的标记方法之一。 n n3挂牌编号法：常用于狗、猴、猫等大动物的编号。实验前将之固定于动物的颈圈或耳上 n n4人工针刺号码法：先将动物被毛去除，用针在动物皮肤上刺出号码，再用酒精墨汁涂染即可实验动物的给药方法实验动物的给药方法 n n经消化道给药经消化道给药1小鼠灌胃法灌胃法小鼠灌胃法灌胃法 1216号注射针头，尖端部磨钝，针头长45cm进针23cm后。灌药量一般为0.10.3ml/10g体重 n n大鼠灌胃法 n n长约68cm，直径
34、约为1.2mm ，n n一次灌胃量一般在1ml/100g体重。 n n豚鼠灌胃法 豚鼠体重200g以上时，应用木制开口器和导尿管灌胃。 n n插管完毕后，先回抽注射器针栓，无空气抽出时，再慢慢推注药液。如回抽出空气，说明可能插入气管，应拔出重插。n n药物注完后应再注入生理盐水2ml，将管内残存药物冲入 n n兔灌胃法：兔灌胃法： 用兔固定箱，可一人操作。右手将开用兔固定箱，可一人操作。右手将开口器固定于兔口中，舌压在开口器下面，口器固定于兔口中，舌压在开口器下面， n n慢慢沿兔口腔上腭壁插入食道约慢慢沿兔口腔上腭壁插入食道约151518cm18cm。插管插管完毕将胃管的外口端放入水杯中，切
35、忌伸入水过完毕将胃管的外口端放入水杯中，切忌伸入水过深。如有气泡从胃管逸出，说明不在食道内而是深。如有气泡从胃管逸出，说明不在食道内而是在气管内，应拔出来重插。在气管内，应拔出来重插。如无气泡逸出，则可如无气泡逸出，则可将药推入将药推入n n并以少量清水冲洗导尿管保证管内药液全部进入并以少量清水冲洗导尿管保证管内药液全部进入胃内。胃内。 二、注射给药法n n小鼠皮下注射 n n通常在背部皮下注射。注射时以左手拇指和中指将小鼠颈背部皮肤轻轻提起，食指轻按其皮肤，使其形成一个三角形小窝，右手持注射器从三角窝下部刺入皮下，轻轻摆动针头，如易摆动时则表明针尖在皮下，此时可将药液注入，针头拔出后，以左手
36、在针刺部位轻轻捏住皮肤片刻，以防药液流出。 n n药量一般为0.1ml0.3ml/10g体重。n n大鼠皮下注射 n n注射部位可在背部或后肢外侧皮下，操作时轻轻提起注射部位皮肤，将注射针头刺入皮下后推注药液。n n一次注射量不超过1ml/100g体重。n n豚鼠皮下注射 n n通常在大腿部内侧面注射。固定豚鼠后，左手固定注射侧的后肢并充分提起皮肤，右手持注射器，针头与皮肤呈45度角的方向刺入，确定针头在皮下后推入药液。注射完毕后应指压刺入部位并轻轻揉之。n n兔皮下注射法 可在背部或颈部注射，方法参照小鼠皮下注射法。 n n给药量一般为0.51.0ml/kg体重。 2腹腔注射法腹腔注射法n
37、n（1）小鼠腹腔注射 n n左手固定动物，使腹部向上，头呈低位。右手持注射器，在小鼠下腹部腹白线稍向左或右的位置，从下腹部朝头方向刺入皮肤，针头到达皮下后， 沿皮下向前推进35mm，然后使注射器针头与皮肤呈45角刺入腹膜。 针头刺入腹膜后感抵抗力消失，此时在保持针头不动的状态下回抽针栓，如无回血或尿液，则可推入药液。n n一次可注射量为0.10.2ml/10g体重。 n n大鼠、豚鼠、兔、猫等的腹腔注射皆可参照小鼠腹腔注射法。但应注意家兔与猫在腹白线两侧注射（应在离腹白线约1cm处进针）。 n n3肌肉注射法 n n小鼠、大鼠、豚鼠肌肉注射 一般因肌肉少，不作肌肉注射，如需要时，可将动物固定后
38、，一手拉直动物左或右侧后肢，将针头刺入后肢大腿外侧肌肉内，n n小鼠一侧药液注射少于0.4ml，针头选用57号。n n兔肌肉注射 可选两臂或股部。静脉注射法静脉注射法 n n小鼠大鼠一般采用尾静脉注射。小鼠大鼠一般采用尾静脉注射。n n注射前先将动物固定于固定器内（可采用铁丝笼、注射前先将动物固定于固定器内（可采用铁丝笼、金属筒或底部有小孔的玻璃筒），使其整个尾部金属筒或底部有小孔的玻璃筒），使其整个尾部外露，外露，n n以右手食指轻弹尾尖部，必要时可用以右手食指轻弹尾尖部，必要时可用45455050的的温水浸泡尾部温水浸泡尾部1 12 2分钟或用分钟或用7575乙醇擦拭尾部，乙醇擦拭尾部，或
39、者将小鼠先放在或者将小鼠先放在40504050左右的加热板上做运动，左右的加热板上做运动，使其全部血管扩张充血。使其全部血管扩张充血。n n以拇指与食指捏住尾根部两侧，无名指和小指夹以拇指与食指捏住尾根部两侧，无名指和小指夹持尾尖部，中指从下托起尾巴固定之。持尾尖部，中指从下托起尾巴固定之。n n选择一根最为充盈的血管，右手持选择一根最为充盈的血管，右手持4 4号针头使其与号针头使其与尾部呈尾部呈3030度角刺入静脉，针头在静脉内平行推进度角刺入静脉，针头在静脉内平行推进少许，左手三指连针头和鼠尾一起捏住固定，以少许，左手三指连针头和鼠尾一起捏住固定，以防动物活动时针头脱出。回抽见血，且推动药
40、液防动物活动时针头脱出。回抽见血，且推动药液无阻力、并可见沿静脉血管出现一条白线说明针无阻力、并可见沿静脉血管出现一条白线说明针头在血管内，可注药头在血管内，可注药n n。如遇到阻力较大，局部发白变硬时，说明针头。如遇到阻力较大，局部发白变硬时，说明针头不在静脉内，需拔出针头重新穿刺。注射完毕后不在静脉内，需拔出针头重新穿刺。注射完毕后拔出针头，轻按注射部止血。一般选择尾两侧静拔出针头，轻按注射部止血。一般选择尾两侧静脉，针刺宜从尾尖端开始，渐向尾根部移动，以脉，针刺宜从尾尖端开始，渐向尾根部移动，以备反复应用。备反复应用。n n一般一次注射量为一般一次注射量为0.050.050.2ml/10
41、g0.2ml/10g体重。体重。n n大鼠亦可舌下静脉注射或待其麻醉后，切开其大腿内侧皮肤进行股静脉注射，也可颈外静脉注射。n n豚鼠：可选用前肢皮下头静脉、耳壳静脉、外颈静脉、或脚背中足静脉等多部位进行注射。偶还可心内注射。 n n家兔：家兔静脉注射一般采用耳缘静脉家兔：家兔静脉注射一般采用耳缘静脉。n n注射前先剪除其表面皮肤上的毛并用水湿润局部，注射前先剪除其表面皮肤上的毛并用水湿润局部，血管即显现出来。可先轻弹或用酒精棉球揉擦耳血管即显现出来。可先轻弹或用酒精棉球揉擦耳尖部并用左手食指和中指轻压耳根部，拇指小指尖部并用左手食指和中指轻压耳根部，拇指小指夹住耳边缘部分，以左手无名指放在其
42、下作垫，夹住耳边缘部分，以左手无名指放在其下作垫，待静脉显著充盈后，右手持带有待静脉显著充盈后，右手持带有6868号针头的注射号针头的注射器刺入静脉器刺入静脉（第一次进针点要尽可能靠远心端，（第一次进针点要尽可能靠远心端，以备反复应用），以备反复应用），顺着血管平行方向深入顺着血管平行方向深入1 1厘米后，厘米后，放松对耳根处血管的压迫，左手拇指和食指移至放松对耳根处血管的压迫，左手拇指和食指移至针头刺入部位，将针头与兔耳固定针头刺入部位，将针头与兔耳固定 针头刺入血管针头刺入血管后再稍向前推进，轻轻推动针栓，若无阻力和局后再稍向前推进，轻轻推动针栓，若无阻力和局部皮肤发白、隆起现象，即可进行
43、药物注射，部皮肤发白、隆起现象，即可进行药物注射， 实验动物的麻醉实验动物的麻醉 n n1. 1.局部麻醉局部麻醉 浸润麻醉、阻滞麻醉、和椎管麻醉常浸润麻醉、阻滞麻醉、和椎管麻醉常用用0.50.51 1普鲁卡因，表面麻醉宜选用普鲁卡因，表面麻醉宜选用2%2%丁卡因丁卡因溶液。溶液。n n2. 2.全身麻醉全身麻醉 n n（1 1）吸入麻醉）吸入麻醉 小鼠、大鼠和兔常用小鼠、大鼠和兔常用乙醚吸入麻乙醚吸入麻醉。醉。将浸过乙醚的脱脂棉花铺在麻醉用的玻璃容将浸过乙醚的脱脂棉花铺在麻醉用的玻璃容器底部，实验动物置于容器内，容器加盖。乙醚器底部，实验动物置于容器内，容器加盖。乙醚具挥发性，经呼吸道进入肺
44、泡后对动物进行麻醉，具挥发性，经呼吸道进入肺泡后对动物进行麻醉，吸入后约吸入后约15152020分钟开始发挥作用，适用于时间分钟开始发挥作用，适用于时间短的手术过程或实验。内放置乙醚棉球可追加麻短的手术过程或实验。内放置乙醚棉球可追加麻醉时间。但在麻醉初期，动物常出现强烈兴奋的醉时间。但在麻醉初期，动物常出现强烈兴奋的现象，现象，因其对呼吸道有较强的刺激作用因其对呼吸道有较强的刺激作用，可使粘，可使粘液分泌增多以致堵塞呼吸道。另外，液分泌增多以致堵塞呼吸道。另外，乙醚易燃、乙醚易燃、易爆，故需要专人管理。使用时应避火、通风、易爆，故需要专人管理。使用时应避火、通风、注意安全。注意安全。n n（
45、2）注射麻醉 n n适用于多种动物，注射方法不一。不同动物对注射麻醉药的反应不尽相同，故需根据实验的目的针对不同的实验动物选用合适的麻醉药种类和剂量。 麻醉药的剂量与用法（麻醉药的剂量与用法（麻醉药的剂量与用法（麻醉药的剂量与用法（p176-177)p176-177) n n在麻醉过程中，除参照上述一般药物用量标准外，在麻醉过程中，除参照上述一般药物用量标准外，还必须密切注意动物的状态，以决定麻醉药的用还必须密切注意动物的状态，以决定麻醉药的用量。麻醉的深浅，量。麻醉的深浅，可根据呼吸的深度和快慢、角可根据呼吸的深度和快慢、角膜反射的灵敏度、四肢及腹壁肌肉的紧张性以及膜反射的灵敏度、四肢及腹壁
46、肌肉的紧张性以及皮肤夹捏反应等进行判断。皮肤夹捏反应等进行判断。当呼吸突然变深变慢、当呼吸突然变深变慢、角膜反射的灵敏度明显下降或消失，四肢和腹壁角膜反射的灵敏度明显下降或消失，四肢和腹壁肌肉松弛，皮肤夹捏无明显疼痛反应时，应立即肌肉松弛，皮肤夹捏无明显疼痛反应时，应立即停止给药。静脉注药时应坚持先快后慢的原则，停止给药。静脉注药时应坚持先快后慢的原则，避免动物因麻醉过深而死亡。避免动物因麻醉过深而死亡。实验动物的处死方法实验动物的处死方法 n n1.颈椎脱臼法：n n本法最常用于小鼠。用拇指和食指压住小鼠头的后部，另一手捏住小鼠尾巴，用力向后上方牵拉，使之颈椎脱臼，延脑与脊髓离断而死亡。处死
47、大鼠也可用此法，但需较大力气。n n2.空气栓塞法：n n主要用于大动物的处死。用注射器将空气快速注入静脉或心脏，使动物发生静脉空气栓塞，特别是肺动脉栓塞而致死。n n兔一般选用耳缘静脉，狗由前肢或后肢皮下静脉注射。n n一般兔与猫可注入空气1020ml；狗需注入70150ml空气。n n3.心脏取血法：n n用粗针头一次针刺心脏大量抽取血液，可致动物死亡。此法常用于豚鼠、猴等 n n4.大量放血法：n n大鼠可采取摘除眼球，由眼眶动脉放血致死。断头、切开股动脉亦可使其大量失血而死。家兔可在麻醉情况下，由颈动脉放血，并轻轻挤压胸部，尽可能使之大量放血致死。n n此法对内脏器官无损伤，是采集病理切片标本同时采集血液的一种较好办法。n n注射或吸入麻醉剂法等。 n n蛙或蟾蜍类可断头，也可用探针经枕骨大孔破坏脑和脊髓处死。 n本次实验无需写实验报告
