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1、非发酵菌及检验非发酵菌及检验华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科曾 吉非发酵菌非发酵菌( (nonfermentersnonfermenters) )是指一群不利用或仅以氧是指一群不利用或仅以氧化形式利用糖类的革兰阴性无芽胞杆菌化形式利用糖类的革兰阴性无芽胞杆菌, , 需氧或兼性需氧或兼性厌氧厌氧. .基本特点:1. 大多数为机会致病菌;2. 存在于自然环境;3. 多为正常菌群的一部分;4. 对很多抗生素有天然的抗药性。一. 概论近几年，从临床标本中分离的非发酵菌的比例逐年上升，目前已经约占分离的阴性菌的40%。非发酵菌的耐药性一般情况下都比肠杆菌科细菌明显，常常表现为多重耐药性，并且耐药
2、性发展很快。非发酵菌菌病原学分类假单胞菌属：代表菌为铜绿假单胞菌；不动杆菌属：代表菌为鲍曼不动杆菌；窄食单胞菌属：嗜麦芽窄食单胞菌；伯克霍尔德菌属：洋葱伯克霍尔德菌；产碱杆菌属：木榶氧化其他菌属等非发酵菌与其他细菌的区别1. 与其他阴性杆菌的区别: 肠杆菌，弧菌科等2. 与易脱色的革兰阳性菌区别.辨认非发酵菌的基本方法1. 在克氏铁琼脂（KIA)上为K/K；2. 大多数氧化酶阳性；3. 细菌多不能在麦康凯平板上生长或生长不良.非发酵菌的初步分群1. 葡萄糖的利用;2. 麦康凯平板上生长能力;3. 氧化酶;4. 动力.非发酵菌各菌属间的鉴别O-FO-F葡萄糖葡萄糖 OXOX H H2 2OO2
3、2尿素尿素 鞭毛鞭毛其其 它它 特特 征征假单胞菌属假单胞菌属 O/-O/-+/-+/-+ +-/+-/+极生极生不动杆菌属不动杆菌属O/-O/- -+ +- -无无无色杆菌属无色杆菌属OO+ + +-/+-/+周生周生土壤杆菌属土壤杆菌属OO+ + + +周生周生产碱杆菌属产碱杆菌属- -+ + +- -周生周生黄杆菌属黄杆菌属( (F)F)+ + +-/+-/+无无产黄色素产黄色素莫拉菌属莫拉菌属- -+ + +- -无无对营养要求高对营养要求高金氏杆菌属金氏杆菌属( (F)F)+ +- - -无无艾肯氏菌属艾肯氏菌属- -+ +- - -无无菌落小菌落小 非发酵菌非发酵菌嗜麦芽窄食单胞菌
4、嗜麦芽窄食单胞菌葡萄糖产酸葡萄糖产酸无色杆菌属无色杆菌属土壤杆菌属土壤杆菌属假单胞菌属假单胞菌属动力动力+OXOX不动杆菌属不动杆菌属+葡萄糖产酸葡萄糖产酸黄色素黄色素摩拉氏菌属摩拉氏菌属黄杆菌属黄杆菌属+端鞭毛端鞭毛+产碱杆菌属产碱杆菌属尿素尿素+常见不发酵菌的鉴定双岐索引常见不发酵菌的鉴定双岐索引 第第 一节一节 假单胞菌属假单胞菌属 (Pseudomonas) 一、一、一、一、 概述概述概述概述1. 1. 分类分类分类分类2. 2. 临床意义临床意义临床意义临床意义3. 3. 微生物特性微生物特性微生物特性微生物特性 4.4.微生物检验微生物检验微生物检验微生物检验 (1)(1)检验程序
5、检验程序检验程序检验程序 (2)(2)鉴定鉴定鉴定鉴定 (3)(3)药物敏感性试验药物敏感性试验药物敏感性试验药物敏感性试验( (Antibacterial Susceptibility TestAntibacterial Susceptibility Test) ) 1.分类分类假单菌属按假单菌属按假单菌属按假单菌属按rRNArRNA同源性分为同源性分为同源性分为同源性分为5 5群及未确定群及未确定群及未确定群及未确定rRNArRNA同源群有关的种同源群有关的种同源群有关的种同源群有关的种一群需氧、不发酵葡萄糖一群需氧、不发酵葡萄糖一群需氧、不发酵葡萄糖一群需氧、不发酵葡萄糖无芽胞，有鞭毛无
6、芽胞，有鞭毛无芽胞，有鞭毛无芽胞，有鞭毛氧化酶阳性的革兰阴性杆菌氧化酶阳性的革兰阴性杆菌氧化酶阳性的革兰阴性杆菌氧化酶阳性的革兰阴性杆菌多为条件致病菌多为条件致病菌多为条件致病菌多为条件致病菌2.临床意义临床意义假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌超过中，假单胞菌超过50，其中主要为，其中主要为铜绿铜绿假单胞菌假单胞菌.3.微生物特性微生物特性革兰阴性、无芽胞、专性需氧革兰阴性、无芽胞、专性需氧革兰阴性、无芽胞、专性需氧革兰阴性、无芽胞、专性需氧有端鞭毛或丛鞭毛有端鞭毛或丛鞭毛有端鞭毛或丛鞭毛有端鞭毛或丛鞭毛生长温度范围广，最适生长温度为生长温度
7、范围广，最适生长温度为生长温度范围广，最适生长温度为生长温度范围广，最适生长温度为3535产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素素、脓褐素素、脓褐素素、脓褐素对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药 二. 铜绿假单胞菌生物学特征：1：形态和染色;革兰阴性，长短不一单鞭毛生长温度2542菌落形态：菌落形态：菌落形态：菌落形态：常见有常见有常见有常见
8、有5 5种菌落形态：种菌落形态：种菌落形态：种菌落形态： 典型菌落：菌落呈灰绿色，扁平湿润，边缘不典型菌落：菌落呈灰绿色，扁平湿润，边缘不典型菌落：菌落呈灰绿色，扁平湿润，边缘不典型菌落：菌落呈灰绿色，扁平湿润，边缘不规则，表面常可见规则，表面常可见规则，表面常可见规则，表面常可见金属光泽；金属光泽；金属光泽；金属光泽； 大肠菌样型：圆形凸起，灰白色半透明；大肠菌样型：圆形凸起，灰白色半透明；大肠菌样型：圆形凸起，灰白色半透明；大肠菌样型：圆形凸起，灰白色半透明； 粘液型：菌落光滑呈粘液状粘液型：菌落光滑呈粘液状粘液型：菌落光滑呈粘液状粘液型：菌落光滑呈粘液状 侏儒型：细小，无光泽的半透明状菌
9、落；侏儒型：细小，无光泽的半透明状菌落；侏儒型：细小，无光泽的半透明状菌落；侏儒型：细小，无光泽的半透明状菌落； 粗糙型：中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。粗糙型：中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。粗糙型：中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。粗糙型：中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。有生姜味有生姜味有生姜味有生姜味可产生多种色素：可产生多种色素：可产生多种色素：可产生多种色素： 荧光素与绿脓素荧光素与绿脓素荧光素与绿脓素荧光素与绿脓素毒力因子毒力因子毒力因子毒力因子致病机制致病机制结构成分结构成分结构成分结构成分粘附素：粘附粘附素：粘附粘附素：粘附粘附素：粘附荚膜多糖：抗呑噬荚膜多糖：抗呑噬荚膜多糖：抗呑噬荚膜
10、多糖：抗呑噬毒素毒素毒素毒素内毒素：内毒素：内毒素：内毒素：LPSLPS外毒素：外毒素：外毒素：外毒素：A A 阻止真核细胞蛋白质合成阻止真核细胞蛋白质合成阻止真核细胞蛋白质合成阻止真核细胞蛋白质合成 S S 干扰吞噬杀菌作用干扰吞噬杀菌作用干扰吞噬杀菌作用干扰吞噬杀菌作用绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和化物和化物和化物和 过氧化氢产生有毒基团过氧化氢产生有毒基团过氧化氢产生有毒基团过氧化氢产生有毒基团酶类酶类酶类酶类弹性蛋白酶弹性蛋白酶弹性蛋白酶弹性蛋白酶: :丝氨酸蛋白酶（丝氨酸蛋
11、白酶（丝氨酸蛋白酶（丝氨酸蛋白酶（Las-ALas-A） 降解降解降解降解 弹性锌金属蛋白酶（弹性锌金属蛋白酶（弹性锌金属蛋白酶（弹性锌金属蛋白酶（Las-BLas-B）蛋白）蛋白）蛋白）蛋白磷脂酶磷脂酶磷脂酶磷脂酶C: C: 分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞（1 ）分离培养与鉴定：）分离培养与鉴定： 标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基养基 鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等3.微生物检验微生物检验铜绿假单胞菌的最低鉴定
12、特征 单端鞭毛（三根以下）单端鞭毛（三根以下）9797 动动 力力9797 氧化分解（氧化分解（O-FO-F培养基）培养基） 葡萄糖葡萄糖9898 乳糖、蔗糖乳糖、蔗糖0 0 木木 糖糖/ /8585 氧化酶氧化酶100100 赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶0 0 精氨酸双水解酶精氨酸双水解酶9999 鸟氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶0 0 H H2 2S S产生产生0 0 在在4242 生长生长100100（2）抗原检测：抗原检测：血清学分型、噬菌体分型（3）核酸检测：）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、P
13、CR技术、16SrDNA分型鉴定技术铜绿假单胞菌的耐药性铜绿假单胞菌的耐药性耐药机制：耐药机制：产酶：金属酶，产酶：金属酶，OXA酶酶外膜蛋白的改变（外膜蛋白的改变（Outer membrane proteins，OMP）主动泵出机制：对喹诺酮类，主动泵出机制：对喹诺酮类，MexA-MexB-OprM及及MecC-MexD-Oprj整合子：整合子：1类，类，3类类 其他假单胞菌1.荧光假单胞菌： 特点：4生长2.恶臭假单胞菌： 特点：产荧光素，4和42不生长， 不产绿脓素 3.斯氏假单胞： 特点：42生长，精氨酸双水解酶阴性 不动杆菌属共同特征: 氧化酶阴性, 不发酵糖类, 无动力.生物学性状
14、: 1. 形态; 2. 培养特性; 3. 生化反应. 不动杆菌属主要菌种系列生化特征不动杆菌属主要菌种系列生化特征醋酸钙醋酸钙鲍曼鲍曼溶血溶血琼氏琼氏约翰逊约翰逊洛菲洛菲葡萄糖氧化葡萄糖氧化+ + +/+/木糖氧化木糖氧化+/+/乳糖氧化乳糖氧化精氨酸双水解酶精氨酸双水解酶/ /鸟氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶苯丙氨酸脱氨酶苯丙氨酸脱氨酶丙二酸盐利用丙二酸盐利用/ / 枸椽酸盐利用枸椽酸盐利用/ /明胶液化明胶液化生长温度生长温度:37:37 41 41 42 42 嗜麦芽窄食单胞菌生物学性状: 1. 形态; 2. 培养特征; 3. 生化反应。洋葱伯克霍尔德菌一般不引起人致病，但易从纤维囊肿病人中分离，在一些免疫力低下的患者中也可能分离到。生物学特性：氧化酶90%阳性，赖氨酸阳性，多鞭毛。
