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1、实验实验4 4肝糖原的提取鉴定肝糖原的提取鉴定与定量与定量pptppt课件课件实验目的实验目的1. 1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。2. 2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。糖原含量的原
2、理和注意事项，掌握其操作方法。3. 3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。4. 4. 熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。适的混匀方法）。适的混匀方法）。适的混匀方法）。5. 5. 正确掌握溶液转移的操作。正确掌握溶液转移的操作。正确掌握溶液转移的操作。正确掌握溶液转移的操作。6. 6. 正确操作使用分光光度计。正
3、确操作使用分光光度计。正确操作使用分光光度计。正确操作使用分光光度计。操作步骤操作步骤（一）肝糖原的提取（一）肝糖原的提取（一）肝糖原的提取（一）肝糖原的提取 操作步骤操作步骤注意事项注意事项注意事项注意事项1 1 肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的9595乙醇后，务必注意乙醇后，务必注意乙醇后，务必注意乙醇后，务必注意混匀。由于上清液为水溶液，比重大于混匀。由于上清液为水溶液，比重大于混匀。由于上清液为水溶液，比重大于混匀。由于上清液为水溶液，比重大于9595乙醇，溶液分成两层。加乙
4、醇，溶液分成两层。加乙醇，溶液分成两层。加乙醇，溶液分成两层。加之上清液已之上清液已之上清液已之上清液已4mL4mL多，加上等量乙醇，总量接近多，加上等量乙醇，总量接近多，加上等量乙醇，总量接近多，加上等量乙醇，总量接近9mL9mL，混匀操作比较困，混匀操作比较困，混匀操作比较困，混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。2 2 糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘
5、产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。葡萄糖残基在关。葡萄糖残基在关。葡萄糖残基在关。葡萄糖残基在2020个以下的会使碘呈现红色，个以下的会使碘呈现红色，个以下的会使碘呈现红色，个以下的会使碘呈现红色，2020 3030个之间使碘呈个之间使碘呈个之间使碘呈个之间使碘呈现紫色，现紫色，现紫色，现紫色，6060个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在而
6、肝糖原分枝中的葡萄糖残基在而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在2020个以下（通常个以下（通常个以下（通常个以下（通常8 8 1212个葡萄糖残基）个葡萄糖残基）个葡萄糖残基）个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。，吸附碘后呈现红棕色。，吸附碘后呈现红棕色。，吸附碘后呈现红棕色。3 3 糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。操作步骤操作步骤（二）肝糖原定量测定（二）肝糖原定量测定（二）肝糖原定量测定（二）肝糖原定量测定 操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤
