高中生物微生物的培养

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1、1.1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。2.2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。3.3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。一一 目标导航目标导航一、培养基与无菌技术一、培养基与无菌技术1 1培养基培养基(1)(1)概念：人们按照微生物对概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制的不同需求，配制出供其出供其_的的_。(2)(2)成分：一般含有成分：一般含有_、_、_、_，此，此外还要满足微生物对外还要满足微生物

2、对_(_(即生长因子即生长因子) )、_以及氧气的需求。以及氧气的需求。营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖营养基质营养基质水水无机盐无机盐碳源碳源氮源氮源特殊营养物质特殊营养物质pHpH营养营养物质物质定义定义作用作用主要来源主要来源碳源碳源能提供所需能提供所需_的物质的物质构成生物体的构成生物体的_和和一些一些_，有些是异，有些是异养生物的养生物的_无机化合物无机化合物：CO2CO2、NaHCO3NaHCO3等；等；有机化合物有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等饼、石油等氮源氮源能提供所需能提供所需_的物质的物质合成合成蛋白质、核酸以及含蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物

3、氮的代谢产物无机化合物无机化合物：N2N2、NH3NH3、铵盐、硝酸盐等；、铵盐、硝酸盐等；有有机化合物机化合物：尿素、牛肉：尿素、牛肉膏、蛋白胨等膏、蛋白胨等生长生长因子因子生长必不可少的生长必不可少的_酶和核酸酶和核酸的组成成分的组成成分维生素、氨基酸、碱基维生素、氨基酸、碱基等等水水在生物体内含量在生物体内含量很高，在低等生很高，在低等生物体内含量更高物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的可维持生物大分子结构的稳定稳定无机无机盐盐为微生物提供除为微生物提供除碳、氮以外的各碳、氮以外的各种重要元素种重要元素细胞内的组成成分，生理细胞内的组成成分，生

4、理调节物质，某些化能自养调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂菌的能源，酶的激活剂微量有机物微量有机物碳元素碳元素细胞物质细胞物质代谢产物代谢产物能源物质能源物质氮元素氮元素(1)不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。(2)微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。的氮源是铵盐、硝酸盐。(3)对异养微生物来说，含对异养微生物来说，含 C、H、O、N 的化合物既是碳源又的化合物既是碳源又是氮源和能量来源。是氮源和能量来源。(4)微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏

5、合成微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。这些物质所需要的酶或合成能力有限。备注：备注：拓展深化拓展深化.葡萄糖、氨基酸、氨气、牛肉膏、玉米粉等物质在微生物营养中葡萄糖、氨基酸、氨气、牛肉膏、玉米粉等物质在微生物营养中的作用？的作用？葡萄糖葡萄糖提供提供C源和能源源和能源,构成生物体的细胞物质和代谢产物构成生物体的细胞物质和代谢产物.氨基酸氨基酸提供生长因子提供生长因子,N源源,C源和能源源和能源氨气氨气提供提供N源和能源（硝化细菌的化能合成作用）源和能源（硝化细菌的化能合成作用）微生物培养与植物组织培养的营养成分区别？微生物培养与植物组织培养的营养

6、成分区别？大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌等微生物营养类型。大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌等微生物营养类型。牛肉膏牛肉膏天然培养基，主要提供天然培养基，主要提供C源源、磷酸盐和维生素磷酸盐和维生素、N源。源。玉米粉玉米粉主要提供主要提供C源与能量源与能量植物组织培养植物组织培养微生物培养微生物培养培养培养基成基成分分水、矿质元素、蔗糖、维生素、水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植物激素等有机添加物和植物激素等水、无机盐、碳源、水、无机盐、碳源、氮源等氮源等大肠杆菌：异养兼性厌氧型大肠杆菌：异养兼性厌氧型硝化细菌：自养需氧型硝化细菌：自养需氧型乳酸菌：异养厌氧型乳酸菌：异养厌氧型根据不同的微生物营养

7、类型不同，选择配制不同的培养基。根据不同的微生物营养类型不同，选择配制不同的培养基。由由可以得到什么结论？可以得到什么结论？1不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B碳源物质也是该微生物的能源物质碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D水是该微生物的营养要素之一水是该微生物的营养要素之一营养型营养型

8、碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子举例举例自养型自养型微生物微生物CO2、NaHCO3N2、NH3、铵、铵盐、盐、硝酸盐等硝酸盐等一般不需一般不需要要硝化细菌硝化细菌异养型异养型微生物微生物糖类、脂肪酸等糖类、脂肪酸等铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、蛋白胨等蛋白胨等有些种类有些种类需要需要乳酸菌乳酸菌自养微生物与异养微生物的营养什么区别呢？自养微生物与异养微生物的营养什么区别呢？ (3)(3)培养基的种类培养基的种类划分划分标准标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理物理性质性质_培养基培养基加凝固剂，如加凝固剂，如_半固体培养基半固体培养基观察微生物的运动、分类、鉴定观察微生物的运动、分类、鉴

9、定_培养基培养基微生物微生物_、_、活菌计数、活菌计数、保藏菌种保藏菌种化学化学成分成分_培养基培养基含化学成分不明确的含化学成分不明确的天然物质天然物质工业生产工业生产_培养基培养基培养基成分明确培养基成分明确(用化学成分用化学成分已知的化学物质配成已知的化学物质配成)分类、鉴定分类、鉴定用用途途_培养基培养基培养基中加入某种化学物质，培养基中加入某种化学物质，以以_ _不需要的微生不需要的微生物的生长，物的生长，_ 所需要的所需要的微生物的生长微生物的生长培养、培养、_出特定微生物出特定微生物(如培养酵如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素或链霉素；培养固

10、氮菌可用无霉素或链霉素；培养固氮菌可用无氮培养基氮培养基)_培养基培养基根据微生物的代谢特点，在根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或培养基中加入某种指示剂或化学药品化学药品_不同种类的微生物，如可用伊不同种类的微生物，如可用伊红红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽深紫色，并带有金属光泽)液体液体固体固体工业生产工业生产分离分离 鉴定鉴定琼脂琼脂天然天然合成合成选择选择抑制抑制促进促进分离分离鉴别鉴别鉴别鉴别纯化大肠杆菌、分离分解尿素微生物、分离细菌与真菌混合菌的纯化大肠杆菌、分离分

11、解尿素微生物、分离细菌与真菌混合菌的培养基类型是什么？培养基类型是什么？拓展深化拓展深化病毒目前的利用人工培养基来培养方法？病毒目前的利用人工培养基来培养方法？需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。鸡胚。2 2下列说法正确的是下列说法正确的是( () )A A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C C除水以外的无机物只能提供无机盐除水以外的无机物只能提供无机盐 D D无机氮源不可能提供能量无

12、机氮源不可能提供能量选择培养基选择培养基植物组织培养技术、微生物培植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术的比较养技术和无土栽培技术的比较植物组织培养植物组织培养微生物培养微生物培养无土栽培无土栽培含义含义培养培养基成基成分分特殊特殊操作操作要求要求在在无菌条件无菌条件下，将下，将离体离体的植物体器官或组织的植物体器官或组织接接种在适当的培养基上进种在适当的培养基上进行培养，最终发育成完行培养，最终发育成完整整植物体植物体在在无菌条件无菌条件下，下，在适宜的营养和在适宜的营养和环境条件下环境条件下对微对微生物的培养生物的培养将植物生长发育过程将植物生长发育过程中所需中所需各种矿质元素各种

13、矿质元素按一定比例配成营养按一定比例配成营养液液，并利用这种营养，并利用这种营养液液栽培植物栽培植物水水、矿质元素矿质元素、蔗糖蔗糖、维生素维生素、有机添加物有机添加物和和植物激素植物激素等等水水、无机盐无机盐、碳碳源源、氮源氮源（异养（异养微生物还加生长微生物还加生长因子）因子）等等水水、必需矿质元素必需矿质元素严格控制无菌操作严格控制无菌操作，在培，在培养过程中要养过程中要更换培养基更换培养基，调节调节细胞分裂素和生长素细胞分裂素和生长素的比例的比例和和添加顺序添加顺序。严格控制无菌操严格控制无菌操作作，整个培养过，整个培养过程程无需更换培养无需更换培养基基适宜的环境条件，基质适宜的环境条

14、件，基质垫底并固定幼苗，垫底并固定幼苗，不需不需要保证无菌条件，要保证无菌条件，注意注意溶氧和矿质元素的浓度溶氧和矿质元素的浓度。3.3.下列关于植物组织培养、微生物培养和无土栽培技术的比较的下列关于植物组织培养、微生物培养和无土栽培技术的比较的有关说法中，不正确的是有关说法中，不正确的是（ ）A A 微生物培养和无土栽培技无需更换培养基，植物组织培养需微生物培养和无土栽培技无需更换培养基，植物组织培养需更换培养基更换培养基B B 植物组织培养、微生物培养需要严格控制无菌操作，植植物组织培养、微生物培养需要严格控制无菌操作，植物组织培养不需要物组织培养不需要C C 三者都需要加入水、矿质元素和

15、一些必要的有机物三者都需要加入水、矿质元素和一些必要的有机物D D 三者培养的目的和原理各不相同三者培养的目的和原理各不相同1.加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌 2.加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌3.不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌分离固氮菌4.不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物分离自养型微生物5.如何鉴定饮用水和奶制品中含有大肠杆菌？如何鉴定饮用水和奶制品中含有大肠杆菌？加入伊红加入伊红-美蓝试剂，如果菌落出现深紫美蓝试剂，如果菌

16、落出现深紫色并伴有金属光泽，就证明有大肠杆菌。色并伴有金属光泽，就证明有大肠杆菌。【配对练习 2】关于配制培养基的叙述中，正确的是()A制作固体培养基必须加入琼脂B加入青霉素可得到放线菌C培养自生固氮菌不需氮源D发酵工程一般用半固体培养基解析：固体培养基需加入凝固剂，琼脂是常用的，但不是唯一的；青霉素可抑制细菌和放线菌的生长；发酵工程一般用液体培养基；自生固氮菌能够将空气中的氮还原成氨，故培养基配制时不需加氮源。答案：C(1)概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。方法，称为无菌技术

17、。注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是_，_。(2)无菌技术的具体内容无菌技术的具体内容对实验操作的对实验操作的_、操作者的、操作者的_进行清洁和消毒。进行清洁和消毒。将用于微生物培养的将用于微生物培养的_、接种用具和培养基等进行、接种用具和培养基等进行_。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_进行。进行。实验操作时应避免已实验操作时应避免已_处理的材料用具与周围的物品相接触。处理的材料用具与周围的物品相接触。(3)消毒和灭菌的概念消毒和灭菌的概念消毒：消毒是指使用消毒：消毒是指使用_的物理或化

18、学方法杀死物体表面或内部的的物理或化学方法杀死物体表面或内部的_(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)。灭菌：灭菌是指使用灭菌：灭菌是指使用_的理化因素杀死物体内外的理化因素杀死物体内外_，包括包括_。消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是_。2无菌技术无菌技术防止杂菌污染防止杂菌污染保证培养的纯度保证培养的纯度空间空间衣着和手衣着和手器皿器皿灭菌灭菌酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近灭菌灭菌较温和较温和部分微生物部分微生物强烈强烈所有的微生物所有的微生物芽孢和孢子芽孢和孢子芽孢和孢子是否存活芽孢和孢子是否存活拓展深化拓展深化某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆

19、形的抗逆性休眠体，称为芽某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。十年的生活力。孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新

20、的营养体，能通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。直接发育成新个体。(4)消毒与灭菌的常用方法消毒与灭菌的常用方法方法方法条件条件作用作用对对象象消消毒毒100，煮沸，煮沸56 min杀杀死微生物的死微生物的营营养养细细胞和一胞和一部分芽部分芽孢孢7075煮煮30 min或或80煮煮15 min不耐高温的液体不耐高温的液体（如牛奶如牛奶）70%的酒精的酒精对对双手消毒双手消毒50%的石炭酸、来的石炭酸、来苏苏水水对对空气消毒空气消毒一定一定浓浓度的乳酸、食醋度的乳酸、食醋通通过过熏蒸熏蒸对对空气空气进进行消毒行消毒紫外紫外线线法法紫外紫外线线照

21、射照射30 min物体表面或空气中的微生物物体表面或空气中的微生物煮沸法煮沸法巴氏消巴氏消毒法毒法化学药化学药剂法剂法灭灭菌菌在酒精灯火焰的充分燃在酒精灯火焰的充分燃烧层烧层灼灼烧烧对对接种接种环环、接种、接种针针或其他金属或其他金属工具工具灭灭菌，也可以菌，也可以对试对试管口、管口、瓶口瓶口灭灭菌菌在干在干热灭热灭菌箱内，菌箱内，160170条条件下，加件下，加热热12 h耐高温且需保持干燥的物品，耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等如玻璃器皿和金属用具等在高在高压压蒸汽蒸汽灭灭菌菌锅锅内，内，121，100 kPa，灭灭菌菌1530 min30 W照射照射30 min小型接种室

22、、接种箱等小型接种室、接种箱等紫外线紫外线灭菌灭菌灼烧灼烧灭菌灭菌干热干热灭菌灭菌高压蒸高压蒸汽灭菌汽灭菌(一一)配制培养基配制培养基1配制原则配制原则(1)_(根据微生物的种类、培养目的等根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无，如培养基可由简单的无机物组成；生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用机物组成；生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。培养基内必须加入已知化学成分的物质。(2)_，注意各种营养物质的浓度和比例。，注意各种营养物质的浓度和比例。(3)_，各种微生物适宜生长的，各种微生物适宜生长的pH

23、范围不同，细菌范围不同，细菌6.57.5、放线、放线菌菌7.58.5、真菌、真菌5.06.0。二、实验操作二、实验操作目的要明确目的要明确营养要协调营养要协调pH要适宜要适宜判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。选择合适方法。（1 1）豆浆）豆浆 （2 2）游泳池）游泳池 （3 3）超净工作台超净工作台 （4 4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 （5 5）培养细菌用的培养皿）培养细菌用的培养皿 （6 6）无菌水）无菌水 （7 7）牛肉膏蛋白胨培养基）牛肉膏蛋白胨培养基（8 8）接种针和接种环接种针和接种环 （9 9）实

24、验操作者的双手）实验操作者的双手灭菌灭菌（灼烧）（灼烧）消毒消毒（巴氏）（巴氏）消毒消毒（化学）（化学）消毒消毒（先化学后紫外线）（先化学后紫外线）消毒消毒（化学）（化学）消毒消毒（化学）（化学）灭菌灭菌（干热）（干热）灭菌灭菌（高压蒸汽）（高压蒸汽）灭菌灭菌（高压蒸汽）（高压蒸汽）)【例 3】下列操作与灭菌无关的是(A接种前用火焰灼烧接种环B接种前用酒精擦拭双手C接种在酒精灯火焰旁完成D将平板倒置，放入培养箱中培养无菌操作是微生物培养的必要前提，学生必须树立“无菌概念”。前三项都是无菌操作的规范要求，第四项将平板倒置(为了防止皿盖上的冷凝水落入培养基中，造成污染)，放入培养箱中培养与灭菌无关

25、。【答案】：D注意注意不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。的培养基。营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比氮比(C/N)的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为的影响较大。例如，在谷氨酸

26、生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为4 1时，时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为3 1时，菌体繁殖受抑制，但谷时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。氨酸合成量大增。2配制方法配制方法(以制以制备备牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨胨固体培养基固体培养基为为例例)培养基培养基组组分分提供的主要提供的主要营营养物养物质质牛肉膏牛肉膏5.0 g碳源、磷酸碳源、磷酸盐盐和和维维生素生素蛋白蛋白胨胨10.0 g氮源和氮源和维维生素生素NaCl 5.0 g无机无机盐盐H2O定容至定容至1 000 mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素琼脂琼脂 (1)培

27、养异养菌的牛肉膏蛋白培养异养菌的牛肉膏蛋白胨胨固体培养基的固体培养基的营营养构成养构成(2)实验流程实验流程倒平板倒平板计算计算称量称量溶化溶化调节调节pH分装分装灭菌灭菌先加牛肉膏少量水，加热，溶化取出称量先加牛肉膏少量水，加热，溶化取出称量纸；再加蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解；纸；再加蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解；加琼脂，玻棒搅拌，完全熔化，补加蒸馏加琼脂，玻棒搅拌，完全熔化，补加蒸馏水至水至100100毫升。毫升。合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中保温保温12 d，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。，

28、若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。提醒提醒4下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是的是()A培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至100 mLB培养基配制完毕可直接使用培养基配制完毕可直接使用C加压至加压至100 kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气之前，要彻底排出锅内的冷空气D将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少量菌种量菌种纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌

29、落，这需在培养时，尽量使菌落中纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。(二二)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌1微生物接种的方法微生物接种的方法微生物接种的方法最常用的是微生物接种的方法最常用的是_和和_两种。两种。(1)_通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。作

30、，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。将将_放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_。将试管口通过酒精灯的将试管口通过酒精灯的_。将已冷却的接种环伸入菌液中，将已冷却的接种环伸入菌液中，_一环菌液。一环菌液。将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。_将培养皿皿盖打开一条缝隙，将培养皿皿盖打开一条缝隙，_将沾有菌种的将沾有菌种的接种环迅速伸入接种环迅速伸入_，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不

31、要划破培养基。要划破培养基。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将_的划线与的划线与_相连。相连。将将_，放入培养箱中培养。，放入培养箱中培养。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法接种环接种环棉塞棉塞火焰火焰沾取沾取左手左手右手右手平板内平板内最后一区最后一区第一区第一区平板倒置平板倒置(2)_则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀

32、释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。系列稀释操作系列稀释操作a取盛有取盛有9 mL水的水的6支试管灭菌，并按支试管灭菌，并按101106的顺序编号。的顺序编号。b用用_吸取吸取1 mL培养的菌液，注入培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。c从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入稀释液，注入102倍稀释的试管倍稀释的试管内吹吸均匀，获得内吹吸均匀，获得102倍液。依

33、此类推。倍液。依此类推。涂布平板操作涂布平板操作a将将_浸在盛有酒精的烧杯中。浸在盛有酒精的烧杯中。b取不超过取不超过0.1 mL的的_，滴加到培养基表面。，滴加到培养基表面。c将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810 s。d用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。皿，使菌液分布均匀。稀释涂布平板法稀释涂布平板法移液管移液管涂布器涂布器菌液菌液2注意事项注意事项(1)平板划线法平板划线法操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行操

34、作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行_，划，划线操作结束时，仍需灼烧线操作结束时，仍需灼烧_。从第二次以后的划线操作总是从从第二次以后的划线操作总是从_开始，能使细菌的数目随开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落 (2)稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“_”，应特，应特别注意：别注意：酒精灯与培养皿的距离要合适。酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。吸管头不要接触任何其他物体。吸管要

35、在酒精灯火焰周围使用。吸管要在酒精灯火焰周围使用。3微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价(1)培养未接种培养基的作用是对照培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。(2)在肉汤培养基上，在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。(3)培养培养12 h和和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落

36、数增多。菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。(4)频繁使用的菌种利用频繁使用的菌种利用临时保藏法临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中，第冰箱中，第36个月转种培养一次，个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘油等缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在量混合后保存在20的冷冻箱中。的冷冻箱中。火焰灼烧灭菌火焰灼烧灭菌接种环接种环上一次划线末端上一次划线末

37、端无菌无菌4菌种的保存菌种的保存为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用我们可以采用_法；对于需要长期保存的菌种，可法；对于需要长期保存的菌种，可以采用以采用_法。将菌种放在低温环境中保藏的目的是法。将菌种放在低温环境中保藏的目的是_，但时间长了菌种还是要老化的，因此，但时间长了菌种还是要老化的，因此对临时保存的菌种对临时保存的菌种_个月后需重新接种。个月后需重新接种。4有关平板划线操作的叙述，不正确的是有关平板划线操作的叙述，不正确的是()A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染第一步灼烧

38、接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上的菌种上的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者细菌污染环境和感染操作者临时保藏临时保藏甘油管藏甘油管藏降低微生物的新陈代谢速率降低微生物的新陈代谢速率36一、选择题一、选择题1关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是关于制备牛肉

39、膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是()A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至待培养基冷却至50左右时进行倒平板左右时进行倒平板D待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约510 min后，将平板倒过来放置后，将平板倒过来放置2金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是()A对接种环进行灼烧处理对接种环进行灼烧处理B带菌培养基必须经

40、高压蒸汽灭菌锅带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉灭菌后才能倒掉C带菌培养基必须经加热后才能倒掉带菌培养基必须经加热后才能倒掉D接种后双手必须经肥皂洗净，再用接种后双手必须经肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭的酒精棉球擦拭3防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是提。下列叙述错误的是()A实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒B接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌烧灭菌C在实验室中，切

41、不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染以防止被微生物感染D使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境4下列叙述错误的是下列叙述错误的是()A右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近在酒精灯火焰附近B倒平板整个过程应在火焰旁进行倒平板整个过程应在火焰旁进行C打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿

42、的皿盖即盖上培养皿的皿盖D为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置5有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是()A用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀B移液管需经过灭菌移液管需经过灭菌C试管口与移液管应在离火焰试管口与移液管应在离火焰12 cm处处D涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀6以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的

43、操作顺序正确的是以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是A计算计算称量称量倒平板倒平板溶化溶化灭菌灭菌B计算计算称量称量溶化溶化倒平板倒平板灭菌灭菌C计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板D计算计算称量称量灭菌灭菌溶化溶化倒平板倒平板7为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是正确的是()A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏的菌种容易被污染或产生变异临时保

44、藏的菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法保藏的方法8有关平板划线操作的叙述，正确的是有关平板划线操作的叙述，正确的是()A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞塞C把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可条平行线即可D最后将平板倒置，放入培养箱中培养最后将平板倒置，放入培养箱中培

45、养二、简答题二、简答题9某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：胨固体培养基所需的原料：_、_、_、_、_。其

46、中提供氮源的是。其中提供氮源的是_；提供碳源的主要物质是；提供碳源的主要物质是_。(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合适的适的_。在烧杯中加入琼脂后要不停地。在烧杯中加入琼脂后要不停地_，防止，防止_。(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力中灭菌，压力_kPa，温度，温度_，时间，时间_。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力

47、自然降到0时，将试管取出。时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管如果棉塞上沾有培养基，此试管_。(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入_，把锅内水加热煮沸并，把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。(5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_(“内内”或或“外外”)焰灭菌，并且待接种环焰灭菌，并且待接种环_后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放入附近，将接种的试管放入_冰箱中保藏

48、。冰箱中保藏。牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨水水无机盐无机盐琼脂琼脂蛋白胨蛋白胨琼脂糊底引起烧杯破裂琼脂糊底引起烧杯破裂比例比例搅拌搅拌废弃废弃高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅1001211530 min适量水适量水外外冷却冷却410下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答：试剂试剂用量用量牛肉膏牛肉膏5.0 g蛋白蛋白胨胨10.0 gNaCl5.0 g琼琼脂脂20.0 g水水1 000 mL(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基的类型很多，但培养基中一般都

49、含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是培养基配方中能充当碳源的成分是_和和_。培养基配制完成以后，。培养基配制完成以后，一般还要调节一般还要调节pH并对培养基进行并对培养基进行_处理。处理。(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和和_两种。两种。在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是_。(3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？。假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？。菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种针划线时，划下一个区域菌液

50、浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种针划线时，划下一个区域前没有对接种针进行灭菌处理前没有对接种针进行灭菌处理牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨灭菌灭菌平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法蘸取酒精；引燃灭菌蘸取酒精；引燃灭菌目标导航目标导航1.研究培养基对微生物的选择作用。研究培养基对微生物的选择作用。 2.进行微生物数量的测定。进行微生物数量的测定。第第2课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数一、研究思路一、研究思路1筛选菌株筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于人为提供有利于_生长的条件生长的条件(包括营养、温度、包

51、括营养、温度、pH等等)，同时，同时_或或_其他微生物生长。其他微生物生长。(2)选择培养基选择培养基在微生物学中，将允许在微生物学中，将允许_种类的微生物生长，同时种类的微生物生长，同时_或或_其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。基。目的菌株目的菌株抑制抑制阻止阻止特定特定抑制抑制阻止阻止(3)分离分解尿素的细菌的选择培养基分离分解尿素的细菌的选择培养基在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是_，提供氮源的是，提供氮源的是_，琼脂的作用是凝固剂。，琼脂的作用是凝固剂。该培养基对微生物具有选择作用。

52、其选择机制是该培养基对微生物具有选择作用。其选择机制是_才能在该培养基上生长。才能在该培养基上生长。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成_，将尿素分解的反应式是，将尿素分解的反应式是_。Taq细菌能忍受细菌能忍受93左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据_。2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法稀释涂布平板法(也叫活菌计数法也叫活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长

53、的一个菌落，原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的来源于样品稀释液中的_，通过统计平板上的，通过统计平板上的_，就能推测出样品中大约含有多少活菌。，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作操作葡萄糖葡萄糖尿素尿素只有能够以尿素作为氮源的微生物只有能够以尿素作为氮源的微生物脲酶脲酶CO(NH2)2H2O CO22NH3脲酶脲酶它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找一个活菌一个活菌菌落数菌落数第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列系列10倍

54、稀释，然后选择倍稀释，然后选择_稀释度的菌液，分别取稀释度的菌液，分别取0.1 mL接接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出_。第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在_的平板进行的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新计数

55、，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。实验。计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数C/VM，其中，其中C代表代表_ _ ，V代表代表_ _(mL)，M代表代表_。(2)显微镜直接计数法显微镜直接计数法原理：此法利用特定的原理：此法利用特定的_或或_，在显微，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高和高0.1 mm的计数室，在的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成的

56、面积里又被划分成25个个(或或16个个)中格，中格，每个中格进一步划分成每个中格进一步划分成16个个(或或25个个)小格，计数室由小格，计数室由_个小格个小格组成。组成。三个三个菌落平均数菌落平均数30300某一稀释度下平板上生长的平均菌落数某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积稀释倍数稀释倍数细菌计数板细菌计数板血细胞计数板血细胞计数板400操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数下计数45个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，个中格中的细菌数，并求出

57、每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。计数公式：计数公式：每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数40010 000稀释倍数。稀释倍数。(3)设置重复和对照设置重复和对照设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布_个平板，才能个平板，才能增强实验的说服力与准确性。增强实验的说服力与准确性。设置对照：实验中应设置对照，主要目的是设置对照：实验中应设置对照，主要目的是_对实验结果的影响，提高实验结果的可对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

58、如信度。如_对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；设置对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；设置_培养基，观察选择培养基是否具有培养基，观察选择培养基是否具有_作用。作用。二、实验设计二、实验设计实验步骤实验步骤1土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土3 cm左右，迅速取土壤并装入左右，迅速取土壤并装入_密封或事先准备好的密封或事先准备好的_中。中。至少至少3排除实验组中非测试因素排除实验组中非测试因素空白空白完全完全筛选筛选无菌信封无菌信封烧杯烧杯2制备培养基：制备培养基：制备制备_培养基作为对照组，尿培养基作为对照组，尿素为

59、唯一氮源的培养基作为素为唯一氮源的培养基作为_，用来判断选择培养基是否具，用来判断选择培养基是否具有有_。放宽稀释范围，如稀释倍数为放宽稀释范围，如稀释倍数为103107范围内的要分别涂布，而范围内的要分别涂布，而每个稀释度下需要每个稀释度下需要_个选择培养基、个选择培养基、_个牛肉膏蛋白胨个牛肉膏蛋白胨培养基，因此需要培养基，因此需要15个选择培养基和个选择培养基和5个牛肉膏蛋白胨培养基。个牛肉膏蛋白胨培养基。两种培养基应各有一个作为两种培养基应各有一个作为_对照，此外还需准备对照，此外还需准备8个灭个灭菌的试管和菌的试管和1个灭菌的移液管。个灭菌的移液管。3样品的稀释与涂布平板：参考下面的

60、实验流程示意图，将样品的稀释与涂布平板：参考下面的实验流程示意图，将10 g土样加入盛有土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中无菌生理盐水的锥形瓶中(锥形瓶体积为锥形瓶体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有，转移至盛有_ mL生理生理盐水的无菌大试管依次等比稀释至盐水的无菌大试管依次等比稀释至107稀释度，并按照由稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别吸取_mL进行平板涂布操作。按照浓度从低进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨实

61、验组实验组选择作用选择作用31空白空白90.1说明：图中的说明：图中的1、2、3平板是平板是_，4为为_作对照，判断选择培养基是否具筛选作用，作对照，判断选择培养基是否具筛选作用，还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，验证培养基中是否白胨培养基，验证培养基中是否_。4将涂布好的培养皿放在将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察和记录。温度下培养，及时观察和记录。5挑选选择培养基上不同形态的菌落接入含挑选选择培养基上不同形态的菌落接入含_培养基培养基的斜面中，观察能否产生颜色反应。的斜面中，观察能否产生

62、颜色反应。选择培养基选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基含有杂菌含有杂菌酚红指示剂酚红指示剂6细菌的计数细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在当菌落数目稳定时，选取菌落数在_的平板进行计数。在同的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出个平板进行重复计数，然后求出_，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。同时仔细观察所分离到的菌落，并记录菌落特征。目。同时仔细观察所分离到的菌落，并记录菌落特征。7统计表格统计表格表一平板上的菌落数记录表表一平板上的菌落数记录表稀稀释释倍数倍数1031

63、0410510610712341234123412341234123 30300平均值平均值表二菌落特征记录表表二菌落特征记录表 菌落菌落种种类类形状形状大小大小隆起程隆起程度度颜颜色色123 注：一般来说，在一定的培养条件下注：一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养相同的培养基、温度及培养时间时间)，_表现出表现出_的菌落特征。的菌落特征。三、操作提示三、操作提示1取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要_。2应在应在_旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入_中，塞好棉塞。中，塞好棉塞。3在稀释

64、土壤溶液的过程中，每一步都要在在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在_旁操作。旁操作。4实验时要对实验时要对_做好标记。注明做好标记。注明_等。等。5为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当_。同种微生物同种微生物稳定稳定.灭菌灭菌火焰火焰锥形瓶锥形瓶火焰火焰培养皿培养皿培养基类型、培养时间、稀释度、培养物培养基类型、培养时间、稀释度、培养物事先规划时间事先规划时间内容内容 结论分析结论分析 有无杂菌污染的有无杂菌污染的判断判断 对照的培养皿中对照的培养皿中_菌落生长菌落生长未被杂菌未被杂菌;污染培养污染培养物中菌落数物中菌落数_被杂菌污染菌落形态多样，菌

65、落数被杂菌污染菌落形态多样，菌落数偏高偏高培养物中混入培养物中混入_ 选择培养基的筛选择培养基的筛选作用选作用 牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目_选择培养基的数选择培养基的数目目选择培养基具筛选作用，已筛选出一些菌落选择培养基具筛选作用，已筛选出一些菌落 样品的稀释操作样品的稀释操作 得到得到2个或个或2个以上菌落数目在个以上菌落数目在_的平板的平板操作成功，操作成功，能进行菌落的计数能进行菌落的计数 重复组的结果重复组的结果 若选取同一种土样，统计结果应若选取同一种土样，统计结果应_；如果结果相差；如果结果相差太远，说明实验操作过程中出现操作失误，需要找出产生太远，说

66、明实验操作过程中出现操作失误，需要找出产生差异的原因差异的原因 四、结果分析与评价四、结果分析与评价无无偏高偏高其他氮源其他氮源大于大于30300接近接近菌落计数规则：菌落计数规则：选择平均菌落数在选择平均菌落数在30300间的平板间的平板1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告；稀释倍数报告；2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值）落数除以低稀释度的菌落数的值） 1）若）若0.5比值比值2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所，以两稀释度的菌

67、落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。得的值的均值报告。 2）若）若2比值或比值比值或比值 0.5，则取其中较少的菌落总数进，则取其中较少的菌落总数进行报告。行报告。3、若所有稀释度的菌落平均数均大于、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；4、若所有稀释度的菌落平均数均小于、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；所有菌落数均不在所有菌落数均不在30300间，以最接近间，以最接近30或或300的平均菌的平均菌落数乘稀

68、释倍数。落数乘稀释倍数。例例次次不同稀释度的平均菌不同稀释度的平均菌落数落数两个稀两个稀释度释度菌落数菌落数之比之比菌落总数（个菌落总数（个/ /mlml）备注备注1010-1-11010-2-21010-3-31 11365136516416420201640016400或或1.61.610104 4两位以后两位以后的数字采的数字采取四舍五取四舍五入的方法入的方法去掉去掉2 22760276029529546461.61.63775037750或或3.83.810104 43 32890289027127160602.22.22710027100或或2.72.710104 44 4无法无法计

69、数计数16501650513513513000513000或或5.15.110105 55 5272711115 5270270或或2.72.710102 26 6无法无法计数计数30530512123050030500或或3.13.110104 4特别注意特别注意:测定真菌放线菌与细菌数测定真菌放线菌与细菌数量时量时,稀释度的选择稀释度的选择2.放线菌一般选择放线菌一般选择10-3,10-4,10-51.真菌一般选择真菌一般选择10-2,10-3,10-43.细菌一般选择细菌一般选择10-4,10-5,10-6五、课题延伸五、课题延伸在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的在细菌分解尿素的化学

70、反应中，细菌合成的_将尿素分解成将尿素分解成了了_。氨会使培养基的碱性增强，。氨会使培养基的碱性增强，_升高。因此，我升高。因此，我们可以通过检测培养基们可以通过检测培养基_来判断该化学反应是否发生。来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂，培养某种细指示剂，培养某种细菌后，如果菌后，如果pH升高，指示剂将升高，指示剂将_，这样，我们就可以准确地，这样，我们就可以准确地鉴定该种细菌能够分解尿素。鉴定该种细菌能够分解尿素。脲酶脲酶氨氨pHpH的变化的变化酚红酚红变红变红知识点一研究思路知识点一研究思路1下表为本课题使用的培养基，分析培养基

71、配方，回答下面的问题。下表为本课题使用的培养基，分析培养基配方，回答下面的问题。KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 g葡萄糖葡萄糖10.0 g尿素尿素1.0 g琼琼脂脂15.0 g用蒸用蒸馏馏水定容到水定容到1 000 mL(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是_。(2)按物理性质划分该培养基属于按物理性质划分该培养基属于_培养基，理由是培养基培养基，理由是培养基中含有中含有_；该类培养基常用于微生物的；该类培养基常用于微生物的_等。等。葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素固体固体琼脂琼脂纯

72、化、分离、计数纯化、分离、计数(3)由于由于_，所以该培养基只能用于能够合成所以该培养基只能用于能够合成_的微生物的培养。用此的微生物的培养。用此培养基培养土壤浸出液能够从土壤中筛选出培养基培养土壤浸出液能够从土壤中筛选出_的细菌。的细菌。(4)在微生物学中，将在微生物学中，将_的培养的培养基，称作选择培养基。基，称作选择培养基。2广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一

73、般工艺流程料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗为：甘蔗榨汁榨汁(蔗糖蔗糖)酵母发酵酵母发酵蒸馏蒸馏成品成品(燃料酒精燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：变及筛选过程如下：步骤步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意：制备选择培养

74、基。在基本培养基的基础上，注意 和和_，加琼脂后灭菌，加琼脂后灭菌，制成固体平板。制成固体平板。步骤步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。培养基中只有尿素一种氮源培养基中只有尿素一种氮源脲酶脲酶分解尿素分解尿素允许特定种类的微生物生长，并能抑制或阻止其他种类微生物生长允许特定种类的微生物生长，并能抑制或阻止其他种类微生物生长添加高浓度蔗糖添加高浓度蔗糖(葡萄糖葡萄糖)调低调低pH步骤步骤4：根：根_，筛选，筛选出突变菌。出突变菌。(2)上述步骤上述步骤2、3和和4的依据分别是的依据分别是_是否能在选择培养基上生长是否能在选择培养基上生长提供高糖和酸性的筛

75、选环境；提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性知识点二实验设计知识点二实验设计3用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A涂布了涂布了1个平板，统计的菌落数是个平板，统计的菌落数是230B涂布了涂布了2个平板，统计的菌落数是个平板，统计的菌落数是215和和260，取平均值，取平均值238C涂布了涂布了3个平板，统计的菌落数分别是个平板，统计的菌

76、落数分别是21、212和和256，取平均，取平均值值163D涂布了涂布了3个平板，统计的菌落数分别是个平板，统计的菌落数分别是210、240和和250，取平均，取平均值值2334在本实验操作中对使用的平板和试管要进行标记，以下说法正在本实验操作中对使用的平板和试管要进行标记，以下说法正确的是确的是()A对培养皿仅需注明培养基的种类即可对培养皿仅需注明培养基的种类即可B一般在使用之后进行标记一般在使用之后进行标记C由于试管用的较多，只需对试管进行标记即可由于试管用的较多，只需对试管进行标记即可D标记的目的主要是为了防止实验中平板、试管等的混淆标记的目的主要是为了防止实验中平板、试管等的混淆一、选

77、择题一、选择题1在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出混杂的微生物群体中分离出()A乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌B固氮细菌、大肠杆菌、放线菌固氮细菌、大肠杆菌、放线菌C固氮细菌、霉菌、放线菌固氮细菌、霉菌、放线菌D固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌固氮细

78、菌、金黄色葡萄球菌、放线菌2请选出下列正确的操作步骤请选出下列正确的操作步骤()土壤取样土壤取样称取称取10 g土壤，取出加入盛有土壤，取出加入盛有90 mL无菌水的锥形无菌水的锥形瓶中瓶中吸取吸取0.1 mL土壤溶液进行平板涂布土壤溶液进行平板涂布依次稀释至依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度稀释度ABCD3在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()A筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌B对分离的菌种作进一步鉴定对分离的菌种作进一步鉴定C作细菌的营养成分作细菌的营养成分D如指示剂变蓝就能准

79、确地认定该菌能分解尿素如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素4下面对下面对“从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌”的理解，的理解，不正确的是不正确的是()A防止杂菌污染防止杂菌污染 B消灭全部微生物消灭全部微生物C稀释土壤溶液的过程中必须在火焰旁操作稀释土壤溶液的过程中必须在火焰旁操作D灭菌必须在接种前进行灭菌必须在接种前进行5下列不属于菌种记数方法的是下列不属于菌种记数方法的是()A平板划线法平板划线法 B稀释涂布平板法稀释涂布平板法C显微镜检法显微镜检法 D滤膜法滤膜法6下列有关配制培养基的叙述中，正确的是下列有关配制培养基的叙述中，正确的是()A制作

80、固体培养基必须加入琼脂制作固体培养基必须加入琼脂B加入青霉素可得到乳酸菌加入青霉素可得到乳酸菌C培养自生固氮菌不需要氮源培养自生固氮菌不需要氮源D发酵工程一般用固体培养基发酵工程一般用固体培养基7用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是体数真实值的是()A菌落数最多的平板菌落数最多的平板B菌落数量最少的平板菌落数量最少的平板C菌落数量适中的平板菌落数量适中的平板D取若干个平板菌落数量的平均值取若干个

81、平板菌落数量的平均值8土壤中分解尿素的微生物所需氮源为土壤中分解尿素的微生物所需氮源为()A硝酸硝酸 B氨氨 C尿素尿素 D蛋白胨蛋白胨二、简答题二、简答题9在现代农业中，常在饲料中加入一定量的尿素去饲养牛等牲畜。在现代农业中，常在饲料中加入一定量的尿素去饲养牛等牲畜。因其有特殊的器官因其有特殊的器官瘤胃，在瘤胃中生活着多种微生物，其中许瘤胃，在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物以尿素作唯一氮源。某一同学设计了如下实验，对能分解多微生物以尿素作唯一氮源。某一同学设计了如下实验，对能分解尿素的细菌进行分离和计数。尿素的细菌进行分离和计数。.取样：到屠宰场，在刚宰杀的牛的瘤胃中取样，将样品装入

82、事先取样：到屠宰场，在刚宰杀的牛的瘤胃中取样，将样品装入事先准备好的信封中密封。准备好的信封中密封。.制备培养基：制备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。将菌液稀制备培养基：制备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数应明显多于释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数应明显多于选择培养基上的数目。由于初次实验，选择了一个较宽的稀释范围，选择培养基上的数目。由于初次实验，选择了一个较宽的稀释范围，并且每个稀释度下需要并且每个稀释度下需要3个选择培养基，个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。个牛肉膏蛋白胨培养基。.微生物的培养与观察：按稀释度的顺

83、序分别吸取微生物的培养与观察：按稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平进行平板涂布操作。将涂布好的培养皿放在板涂布操作。将涂布好的培养皿放在30下培养，并且需要无氧条下培养，并且需要无氧条件。比较两种培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。挑选选件。比较两种培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红指示剂的培养基中，观察是择培养基中不同形态的菌落接入含酚红指示剂的培养基中，观察是否产生颜色反应。否产生颜色反应。.细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取平板计数。细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取平板计数。请回答下列问题：请回答下列问题：(1)制备牛肉膏蛋白胨培养

84、基的目的是什么？制备牛肉膏蛋白胨培养基的目的是什么？_。(2)为什么每个稀释度下需要为什么每个稀释度下需要3个选择培养基？个选择培养基？_。(3)上述培养时，为什么需要无氧条件？上述培养时，为什么需要无氧条件？_。(5)选择菌落在30300的平板进行计数。根据平板所对应的稀释度，对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，以此估算样品中细菌的数目作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用每个稀释度下涂布每个稀释度下涂布3个平板，是作为重复组，以增强实验结果的个平板，是作为重复组，以增强实验结果的由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气会死亡由于瘤胃中

85、的微生物多为厌氧菌，接触空气会死亡(4)应应用含酚用含酚红红指示指示剂剂的培养基的目的是什么？的培养基的目的是什么？结结果会呈果会呈现现出什出什么么样样的的颜颜色反色反应应？原理是什么？原理是什么？鉴别培养基，看是否有分解尿素的细菌存在。结果会变红。原理是鉴别培养基，看是否有分解尿素的细菌存在。结果会变红。原理是分解尿素的细菌产生并催化下列反应分解尿素的细菌产生并催化下列反应CO(NH2)2H2O CO22NH3，因产生，因产生NH3，培养基，培养基pH升高，酚红指示剂呈红色反应升高，酚红指示剂呈红色反应说服力与准确性说服力与准确性脲酶脲酶(5)计数时应选什么样的平板进行计数？怎样计算出样品中

86、的细计数时应选什么样的平板进行计数？怎样计算出样品中的细菌数目？菌数目？选择菌落在选择菌落在30300的平板进行计数。根据平板所对应的稀释度，的平板进行计数。根据平板所对应的稀释度，对对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，以此估算样品中细菌个平板进行重复计数，然后求出平均值，以此估算样品中细菌的数目的数目10有人送来一支芽孢杆菌菌种，其中一部分芽孢杆菌有抗青霉素有人送来一支芽孢杆菌菌种，其中一部分芽孢杆菌有抗青霉素的能力，另一部分没有抗性。请你把对青霉素有抗性的芽孢杆菌分的能力，另一部分没有抗性。请你把对青霉素有抗性的芽孢杆菌分离出来。离出来。(1)现有条件：无菌牛肉膏培养基两个、无菌接种台

87、、接种工具齐现有条件：无菌牛肉膏培养基两个、无菌接种台、接种工具齐备、医用青霉素两支。备、医用青霉素两支。(2)实验过程实验过程取两个培养基，分别标号为取两个培养基，分别标号为A、B，向，向A、B两个培养基中分别加两个培养基中分别加入入_，加入过程一定要进行，加入过程一定要进行_操作。操作。青霉素青霉素无菌无菌向向A培养基中接种培养基中接种_。接种后，将接种后，将A培养基放入恒温箱培养两天。培养基放入恒温箱培养两天。从从_中挑取生长良好的芽孢杆菌，接种到中挑取生长良好的芽孢杆菌，接种到B培养培养基中。基中。适量芽孢杆菌菌种适量芽孢杆菌菌种A培养基的菌落培养基的菌落接种后，将接种后，将B培养基放入恒温箱内培养两天，即可获得较多抗青培养基放入恒温箱内培养两天，即可获得较多抗青霉素芽孢杆菌。霉素芽孢杆菌。第第两个步骤的目的是两个步骤的目的是 获得纯度高的抗青霉素芽孢杆菌获得纯度高的抗青霉素芽孢杆菌(分离出对青霉素有抗性的芽孢杆菌分离出对青霉素有抗性的芽孢杆菌)