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1、实验课题:观察DNA和RNA在细胞中的分布一、实验原理1.碱性染料能使核酸着色,甲基绿和吡罗红均为碱性染料;DNA甲基绿绿色,RNA吡罗红红色。甲基绿与吡罗红作为混合染料使用可显示细胞中DNA和RNA在细胞中的分布。2.盐酸能够改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞,同时使染色体中的DNA与蛋白质分离,有利于DNA与染色剂结合。补:高温补:高温酸酸碱等条件能改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞。碱等条件能改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞。我们观察到细胞核中的DNA被染成绿色而细胞质中的RNA被染成红色。操作步骤注意问题解释取口腔上皮细胞制片载玻片要洁净,滴一滴质量分数为0.9%的NaC
2、l溶液用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞将载玻片在酒精灯下烘干防止污迹干扰观察效果保持细胞原有形态消毒为防止感染,漱口避免取材失败固定装片水解将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中,用300C水浴保温5min改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞,促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色冲冼涂片用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片洗去残留在外的盐酸染色滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色5min观察先低倍镜观察,选择染色均匀、色泽浅的区域,移至视野中央,调节清晰后才换用高倍物镜观察使观察效果最佳步骤总结步骤总结 斐林试剂斐林试剂苏丹苏丹橘黄色橘黄色红色红色砖红色沉淀砖红色沉淀紫色紫色苏
3、丹苏丹 双缩脲试剂双缩脲试剂鉴定物质鉴定物质试剂试剂实验现象实验现象还原性糖还原性糖脂肪脂肪蛋白质蛋白质淀粉淀粉 碘碘 蓝色蓝色 生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质和生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质和DNA的鉴定的鉴定还原性糖还原性糖+斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀还原性糖:葡萄糖、麦芽糖、果糖还原性糖:葡萄糖、麦芽糖、果糖非还原性糖:蔗糖、淀粉等非还原性糖:蔗糖、淀粉等+水浴加热水浴加热脂肪脂肪+苏丹苏丹橘黄色橘黄色脂肪脂肪+苏丹苏丹红色红色取少量脂肪样液,加入苏取少量脂肪样液,加入苏丹丹,震荡,可看到溶液,震荡,可看到溶液呈了橘黄色,本实验我们呈了橘黄色,本实验我们用苏丹用苏丹做染液。
4、做染液。蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂紫色络合物紫色络合物豆浆、蛋清、牛奶都是很豆浆、蛋清、牛奶都是很好的实验材料。好的实验材料。本实验我们用蛋清做实验材料,在本实验我们用蛋清做实验材料,在用蛋清做实验材料时,要注意将蛋用蛋清做实验材料时,要注意将蛋清稀释,如果稀释不够,反应后的清稀释,如果稀释不够,反应后的产物会粘固在试管内壁上,使反应产物会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底。不容易彻底。问题探讨问题探讨:1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时,为什么要留出、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时,为什么要留出一部分样液?一部分样液?作对照作对照2、使用双缩脲试剂时为什么、使用双缩脲试剂时为什么B液
5、只能加液只能加34滴而不能滴而不能过量?过量? 过量的双缩脲试剂过量的双缩脲试剂B B会与试剂会与试剂A A反应,使溶液呈蓝反应,使溶液呈蓝色,而掩盖生成的紫色。色,而掩盖生成的紫色。3、为什么斐林试剂要现配现用,不能放置太久?为什么斐林试剂要现配现用,不能放置太久? 时间太长,时间太长,Cu(OH)Cu(OH)2 2悬浊液就沉淀在试管底部而悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。无法参与反应。l深化深化比较项目比较项目斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂不不同同点点使用方使用方法法甲液和乙液混合均匀后甲液和乙液混合均匀后方可使用,且现配现用方可使用,且现配现用使用时先加使用时先加A液再加液再加
6、B液液呈色反呈色反应条件应条件需水浴加热需水浴加热不需加热即可反应不需加热即可反应反应原反应原理理还原糖中的醛基被还原糖中的醛基被Cu(OH)2氧化,氧化,Cu(OH)2被还原为被还原为Cu2O具有两个以上肽键的化具有两个以上肽键的化合物在碱性条件下与合物在碱性条件下与Cu2反应生成络合物反应生成络合物颜色颜色砖红色砖红色紫色紫色浓度浓度乙液乙液CuSO4溶液浓度为溶液浓度为0.05g/mLB液液CuSO4溶液浓度为溶液浓度为0.01g/mL相同点相同点都含有都含有NaOH溶液、溶液、CuSO4溶液两种成分,且所溶液两种成分,且所用用NaOH溶液浓度都是溶液浓度都是0.1g/mL实验实验绿叶中
7、色素的提取和分离绿叶中色素的提取和分离实验原理:实验原理:色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中实验关键点实验关键点:1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶等。选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶等。2.画滤液细线时,应以细、直、颜色浓绿为标准,重复画线时必须等画滤液细线时,应以细、直、颜色浓绿为标准,重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行,重复上次画线干燥衙再进行,重复2-3次。次。3.层析时不要让滤液细线触及层析时不要让滤液细线触及层析液。层析液。绿叶中的色素不止一种,他们都能溶解在层析液中。然而,它们在层析液中的溶解度不同;溶解度
8、高的随层析液在滤纸上扩散的快;反之则慢。这样,几分钟之后绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。且溶解度最高的是胡萝卜素,它随层析液在滤纸上扩散的最快;叶黄素和叶绿素a的溶解度次之,叶绿素b的溶解度最低,扩散的最慢。实验总结(1)在研磨绿叶时,加入少许SiO2是为了研磨得充分,加入少许的CaCO3是为了防止研磨过程中色素受到破坏,加入10ml无水乙醇是使色素溶解在其中,便于提取;(2)因无水乙醇和层析液都是易挥发且层析液是有一定毒性的有机溶剂,所以研磨要快,收集的滤液要用棉塞塞住,层析时要加盖,尽量减少有机溶剂的挥发。(3)用毛细吸管画滤液细线时,线条越细越直效果越好,重复划几次的目的是使滤液细线中含有较多的色素(4)如果层析液浸没了滤纸条上的滤液细线,滤纸条上就不会出现色素带,其原因是滤液细线中的色素溶解在了烧杯中的层析液中,会导致色素带不清晰,影响整个实验的效果。