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1、温故而知新温故而知新目的基因目的基因启动子启动子标记基因标记基因基基因因表表达达载载体体基因工程的基本操作程序(4)受体生物受体生物 植物植物 动物动物 微生物微生物受体细胞受体细胞导入方法导入方法受精卵受精卵或体细胞或体细胞受精卵受精卵农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注显微注射法射法将目的基因导入不同细胞的方法将目的基因导入不同细胞的方法基因工程的基本操作程序(4)常用法常用法：CaCa2+2+处理法处理法常用菌常用菌：大肠杆菌大肠杆菌微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程
2、：CaCa2+2+处理大处理大肠杆菌肠杆菌感受态感受态细胞细胞表达载体表达载体与感受态与感受态细胞混合细胞混合感受态感受态细胞吸细胞吸收收DNADNA3.3.将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞基因工程的基本操作程序(4)四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序(4)1 1、检测转基因生物染色体的、检测转基因生物染色体的DNADNA上是否插入上是否插入了目的基因了目的基因 首先取出转基因生物的基因组首先取出转基因生物的基因组DNADNA；（1 1）方法）方法: : DNADNA分子杂交分子杂交（2 2）过程）过程: : 将将含目的基因的含目的基因的DN
3、ADNA片段片段用放射性同位素等用放射性同位素等作标记作标记, ,以此做以此做探针探针； 使探针和转基因生物的基因组杂交使探针和转基因生物的基因组杂交, ,若显示若显示出杂交带出杂交带, ,表明染色体已插入染色体表明染色体已插入染色体DNADNA中中。（一）检测（一）检测基因工程的基本操作程序(4)基因探针基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，是一段带有检测标记，且序列已知的，是一段带有检测标记，且序列已知的，是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列与目的基因互补的核酸序列与目的基因互补的核酸序列与目的基因互补的核酸序列。基因工程的基本操作程序(4)2 2、检测目的基因
4、是否转录出了、检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA3 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质、检测目的基因是否翻译成蛋白质方法方法: :分分 子子 杂杂 交交方法方法: : 抗原抗原- -抗体杂交抗体杂交过程过程: :用上述探针和转基因生物的用上述探针和转基因生物的mRNAmRNA杂交杂交, ,若出现杂交带若出现杂交带, ,表明目的基因转录出了表明目的基因转录出了mRNAmRNA。基因工程的基本操作程序(4)提提取取抗原抗原-抗体杂交抗体杂交苏云金杆菌苏云金杆菌Bt毒素蛋白毒素蛋白将将Bt毒蛋白注毒蛋白注射小鼠体内射小鼠体内从小鼠血管抽出从小鼠血管抽出血液分离出抗血液分离出抗Bt毒素的抗体毒素的
5、抗体抗体抗体蛋白质蛋白质 出现出现杂交带杂交带脱脱分分化化组组织织培培养养基因工程的基本操作程序(4)个体生物学水个体生物学水平的鉴定平的鉴定 有没有更直观的方法？有没有更直观的方法？没有抗虫基因没有抗虫基因的棉植株的棉植株有抗虫基因的有抗虫基因的棉植株棉植株棉铃虫棉铃虫虫没有死虫没有死虫被杀死虫被杀死没有表达没有表达目的基目的基因表达因表达基因工程的基本操作程序(4)类类型型步骤步骤 检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示 分分子子检检测测第一第一步步目的基因目的基因是否进是否进入受体细胞入受体细胞DNADNA分子杂交分子杂交是否成功显示是否成功显示出杂交带出杂交带第二第二步步目的基因目的
6、基因是否转是否转录出录出mRNAmRNA分子杂交技术分子杂交技术是否成功显示是否成功显示出杂交带出杂交带第三第三步步目的基因目的基因是否翻是否翻译出蛋白质译出蛋白质抗原抗原抗体杂交抗体杂交是否成功显示是否成功显示出杂交带出杂交带 个个体体水水平平鉴鉴定定 包括抗虫、抗病的包括抗虫、抗病的接种实验接种实验，以确定是否有抗性以及，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等。定功能是否相同等。v目的基因的表达和检测基因工程的基本操作程序(4)归纳归纳: 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1.获取目
7、的基因获取目的基因u从基因文库从基因文库u利用利用PCRu化学方法人工合成化学方法人工合成2.构建基因表达载体构建基因表达载体u目的基因、启动子、终止子、标记基因目的基因、启动子、终止子、标记基因3.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞u转化法（微生物）、农杆菌转化法（植物）、显微注转化法（微生物）、农杆菌转化法（植物）、显微注射法（动物）射法（动物）4.目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定u检测：是否插入、转录、翻译检测：是否插入、转录、翻译基因工程的基本操作程序(4)12（2008山东）为扩大可耕地面积，增加粮食产量，山东）为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开
8、发利用备受关注。我国科学家应黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。（1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的_处，DNA连接酶作用于_处。（填“a”或“b”）（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和_法。（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用_技术，该技术的核心是_和_。（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的要用放射性同位素标记的_做探针做探针进行分子杂交检测，又要用进行分子杂交检测，又要用_ 方法方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。目的基因目的基因移栽到盐碱地移栽到盐碱地基因工程的基本操作程序(4)基因工程的基本操作程序(4)
