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1、第八章第八章 杂环类药物的分析杂环类药物的分析第一节第一节 吡啶类药物吡啶类药物第二节第二节 喹啉类药物喹啉类药物第三节第三节 托烷类药物托烷类药物第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物 第五节第五节 苯并二氮杂卓苯并二氮杂卓类药物类药物第六节第六节 含量测定含量测定返回主目录基本要求基本要求练习与思考练习与思考药物分析杂环类药物的分析基本要求基本要求一一、掌掌握握吡吡啶啶类类、喹喹啉啉类类、托托烷烷类类、吩吩噻噻嗪嗪类类苯苯并并二二氮氮杂杂卓卓类类药药物物的的鉴鉴别别和和含含量量测测定定的的基基本原理与方法。本原理与方法。 二二、熟熟悉悉本本类类药药物物中中典典型型药药物物国国外外药药典典收
2、收载载的鉴别和含量测定方法。的鉴别和含量测定方法。 三、了解本类药物的体内分析方法。三、了解本类药物的体内分析方法。返 回药物分析杂环类药物的分析第一节第一节 吡啶类药物吡啶类药物一、典型药物的结构与主要化学性质一、典型药物的结构与主要化学性质 （一）典型药物的结构（一）典型药物的结构 吡啶（吡啶（pyridinepyridine）异烟肼（异烟肼（isoniazidisoniazid）药物分析杂环类药物的分析尼可刹米（尼可刹米（nikethamidenikethamide）药物分析杂环类药物的分析硝苯地平（硝苯地平（nifedipine)药物分析杂环类药物的分析 （二）主要化学性质（二）主要化
3、学性质 1. 1. 弱碱性弱碱性 吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的pKpKb b 值为值为8.88.8（水中）。尼可刹米除了吡啶环（水中）。尼可刹米除了吡啶环 上氮外，上氮外，位上被酰氨基取代。酰氨基化位上被酰氨基取代。酰氨基化 学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具 有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。 药物分析杂环类药物的分析 2 2还原性还原性 异烟肼的吡啶环异烟肼的吡啶环位上被具有还原性位上被具有还原性 酰肼取代，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合酰肼取代，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合
4、物发生缩合反应。物发生缩合反应。 3 3吡啶环的特性吡啶环的特性 异烟肼和尼可刹米的吡啶环异烟肼和尼可刹米的吡啶环 、位未取代，而位未取代，而或或位被羧基衍生物所位被羧基衍生物所 取代；硝苯地平的吡啶环取代；硝苯地平的吡啶环、位被甲酸甲酯位被甲酸甲酯 所取代，其吡啶环可发生开环反应所取代，其吡啶环可发生开环反应。 药物分析杂环类药物的分析二、鉴别试验二、鉴别试验（一）吡啶环的开环反应（一）吡啶环的开环反应 本反应适用于吡啶环的本反应适用于吡啶环的、位无取代基的位无取代基的异异 烟肼和尼可刹米。烟肼和尼可刹米。1. 1. 戊烯二醛反应（戊烯二醛反应（kning kning 反应）反应）尼可刹米尼
5、可刹米 + + 溴化氰溴化氰H2O戊烯二醛衍生物戊烯二醛衍生物苯胺苯胺黄色黄色药物分析杂环类药物的分析药物分析杂环类药物的分析（黄色（黄色黄棕色）黄棕色）药物分析杂环类药物的分析2 2二硝基氯苯反应（二硝基氯苯反应（VongerichtenVongerichten反应）反应）吡啶及其衍生物吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯二硝基氯苯至熔融或混合醇制KOH紫红色紫红色无水条无水条件件药物分析杂环类药物的分析 采用本法鉴别采用本法鉴别异烟肼异烟肼、尼可刹米尼可刹米时，需适当处理，时，需适当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。如异烟肼
6、鉴别：如异烟肼鉴别：药物分析杂环类药物的分析异烟肼不经处理的反应：异烟肼不经处理的反应：异烟肼异烟肼 + 2 + 2，4-4-二硝基氯苯二硝基氯苯乙醇乙醇OH-紫红色紫红色药物分析杂环类药物的分析（二）酰肼基团的反应（二）酰肼基团的反应1 1还原反应还原反应异烟肼异烟肼+ +AgNOAgNO3 3异烟酸银异烟酸银+N2+ Ag( ( 白色）白色）银镜银镜异烟肼异烟肼+亚硒酸亚硒酸硒硒（红色红色）药物分析杂环类药物的分析2 2缩合反应缩合反应 异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔点，可熔点，可用以鉴别。用以鉴别。ChPChP和和BPBP均采用本法
7、鉴别均采用本法鉴别. . 黄色结晶黄色结晶 mpmp为为228228231231 药物分析杂环类药物的分析 - -NHNH2 2活性活性- -CHCH2 2- -+1+1，2-2-萘醌萘醌-4-4-磺酸磺酸OHOH- -红色红色药物分析杂环类药物的分析（三（三）形成沉淀的反应形成沉淀的反应 具有吡啶环的结构，可与具有吡啶环的结构，可与重金属盐类重金属盐类及及苦味酸苦味酸等试剂形等试剂形成沉淀。成沉淀。 如如尼可刹米尼可刹米+ +CuSOCuSO4 4+ +硫氰酸铵硫氰酸铵草绿色草绿色尼可刹米尼可刹米异烟肼异烟肼+ + HgClHgCl2 2白色白色药物分析杂环类药物的分析（四）分解产物的反应四
8、）分解产物的反应使湿润的红色石蕊试纸变蓝使湿润的红色石蕊试纸变蓝尼可刹米尼可刹米异烟肼异烟肼+无水无水NaNa2 2COCO3 3Ca(OH)Ca(OH)2 2吡啶臭吡啶臭尼可刹米尼可刹米+ +NaOHNaOH二乙胺二乙胺药物分析杂环类药物的分析 （五）（五）紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 本类药物的分子结构中均含有芳杂环，在紫外光区有特征本类药物的分子结构中均含有芳杂环，在紫外光区有特征吸收，其最大、最小吸收波长及百分吸收系数可供鉴别。本吸收，其最大、最小吸收波长及百分吸收系数可供鉴别。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表。 本类药物的紫外特征吸收鉴别方法
9、本类药物的紫外特征吸收鉴别方法 药药 物物 溶溶 剂剂 maxmax（nmnm） min min（nmnm） E E1cm1cm1%1% 异烟肼异烟肼 HClHCl（0.01mol/L0.01mol/L） 265 265 约约420420 水水 266 234 378 266 234 378 尼可刹米尼可刹米 HClHCl（0.01mol/L0.01mol/L） 263 285 263 285 NaOH NaOH（0.1mol/L0.1mol/L） 255 840 255 840 260 860 260 860 硝苯地平硝苯地平 无水乙醇无水乙醇 333 140 333 140药物分析杂环类药
10、物的分析 （一）异烟肼中游离肼的检查（一）异烟肼中游离肼的检查 1. 1. TLCTLC法法 Ch.PCh.P中异烟肼及其注射中异烟肼及其注射, ,采用采用TLCTLC法中杂质对照法法中杂质对照法。 对照品：对照品：硫酸肼硫酸肼0.200.20mg/mlmg/ml（相当于游离肼相当于游离肼5050gg） 薄层板：薄层板：硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备）硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备） 展开剂：展开剂：异丙醇异丙醇- -丙酮（丙酮（3 3 ：2 2） 显色剂：显色剂：乙醇制对乙醇制对- -二甲氨基苯甲醛试液二甲氨基苯甲醛试液 检测结果：检测结果：供试品主斑点前方，不得显黄色斑点供试品主斑点前方，
11、不得显黄色斑点 三、有关物质检查三、有关物质检查药物分析杂环类药物的分析 BPBP的检查方法：的检查方法： 供试品溶液制备供试品溶液制备: : 取异烟肼取异烟肼1.01.0g g，加丙酮加丙酮- -水水(1:1)(1:1)制成制成1010ml.ml. 对照溶液制备对照溶液制备: : 取硫酸肼取硫酸肼5050mgmg，加水加水5050mlml使溶解后，加丙酮稀使溶解后，加丙酮稀 释至释至100100mlml；量取量取1010mlml，加供试品溶液加供试品溶液0.20.2mlml， 加丙酮加丙酮- -水水(1:1)(1:1)稀释至稀释至100100mlml。 薄层板：薄层板：硅胶硅胶GFGF254
12、254薄层板薄层板 展开剂：展开剂：醋酸乙酯醋酸乙酯- -丙酮甲醇水丙酮甲醇水(50:20:20:10)(50:20:20:10) 显色剂：显色剂：乙醇制对乙醇制对- -二甲氨基苯甲醛试液二甲氨基苯甲醛试液药物分析杂环类药物的分析 检测结果：检测结果： 于于254254nmnm紫外光下检测，供试品中的杂质斑点强度应紫外光下检测，供试品中的杂质斑点强度应小于对照溶液中小于对照溶液中异烟肼异烟肼色谱斑点；再喷以对色谱斑点；再喷以对- -二甲氨基苯二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下检视，对照溶液中甲醛溶液，并在日光下检视，对照溶液中硫酸肼硫酸肼斑点的斑点的强度大于供试液中的强度大于供试液中的杂质杂质斑点
13、。斑点。药物分析杂环类药物的分析 2 2比浊法比浊法 JPJP（1414）采用样品中加水杨醛的乙醇溶液观察混浊采用样品中加水杨醛的乙醇溶液观察混浊的方法来控制游离肼的限量。的方法来控制游离肼的限量。 此法专属性差，因异烟肼此法专属性差，因异烟肼( (慢慢) )和硫酸肼均生成腙而和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。析出沉淀。药物分析杂环类药物的分析3. 3. 差示分光光度法差示分光光度法 肼肼异烟肼异烟肼+ + 对对- -二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛黄色缩合物黄色缩合物对对- -二甲氨基苯甲醛连氮二甲氨基苯甲醛连氮 ( (maxmax = 456nm = 456nm 有最大吸收有最大吸收) )形成的缩合
14、产物对形成的缩合产物对- -二甲氨基苄叉二甲氨基苄叉 ( (于于maxmax = =456456nmnm波长处无吸收波长处无吸收) ) 可在可在456456nmnm波长处测定并计算二者的差示吸收度波长处测定并计算二者的差示吸收度AA456456，同时以同时以 对照品比较法计算游离肼含量。对照品比较法计算游离肼含量。药物分析杂环类药物的分析 具体测定法：具体测定法： 对照品溶液：对照品溶液：硫酸肼硫酸肼C CR R1g/ml1g/ml 5 ml + 5 ml + 丙酮丙酮 maxmax=456nm =456nm 测测A A1 1 + + 对对- -二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛 ( (AA4564
15、56A A2 2A A1 1) )AAR R 5 5 ml ml maxmax=456nm =456nm 测测A A2 2 供试品溶液：供试品溶液：异烟肼异烟肼C C2mg/ml2mg/ml 游离肼游离肼 C CX X= =AAs s/A/AR RCCR R 1 1份份+ + 丙酮丙酮 maxmax=456nm =456nm 测测A A1 1 + + 对对- -二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛 ( (AA456456A A2 2A A1 1) ) AAs s 2 2份份 maxmax=456nm =456nm 测测A A2 2药物分析杂环类药物的分析(二二) 尼可刹米中有关杂质检查尼可刹米中有关杂
16、质检查 因有关杂质的化学结构不明，故因有关杂质的化学结构不明，故Ch.pCh.p采用采用TLCTLC法中的法中的高低浓度对比法高低浓度对比法进行检查。进行检查。 药物分析杂环类药物的分析( (三三)硝苯地平中有关物质检查硝苯地平中有关物质检查 硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为4-4-（2-2-硝硝基苯基）基苯基）-2, 6-2, 6-二甲基吡啶二甲基吡啶-3, 5-3, 5-二羧酸二甲酯（二羧酸二甲酯（A A）和和4-4-（2-2-亚亚硝基苯基）硝基苯基）-2, 6-2, 6-二甲基吡啶二甲基吡啶-3, 5-3, 5-二羧酸二甲酯（二
17、羧酸二甲酯（B B）。）。其化学其化学结构如下结构如下: :药物分析杂环类药物的分析 具体方法具体方法 1 1。供试液。供试液和和的制备的制备 2 2。有关杂质对照品液。有关杂质对照品液和和的制备的制备 3. 3. 色谱条件与灵敏度调节色谱条件与灵敏度调节 填充剂：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：流动相：甲醇甲醇- -水（水（3 3 ：2 2）；）；检测波长：检测波长：235235nmnm。 取对照品溶液取对照品溶液2020ll注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使杂质杂质A A和和B B组分色谱峰的峰高为满量程的组分色谱峰的峰高为满量程
18、的20%20%；杂质；杂质A A和和B B组分之间，组分之间，杂质杂质B B与硝苯地平之间的分离度均符合规定。与硝苯地平之间的分离度均符合规定。 药物分析杂环类药物的分析 4. 4. 有关物质检测有关物质检测 取供试液取供试液和对照液和对照液各各2020ll，分别进样记录色谱图至主成分分别进样记录色谱图至主成分峰保留时间的峰保留时间的2 2倍。供试液倍。供试液如出现与对照液如出现与对照液中杂质中杂质A A和和B B相对应相对应的峰，其峰面积不得大于对照液的峰，其峰面积不得大于对照液中杂质中杂质A A和和B B的峰面积；如出现除的峰面积；如出现除杂质杂质A A和和B B以外的其他杂质峰，其峰面积
19、不得大于对照液以外的其他杂质峰，其峰面积不得大于对照液中硝苯地中硝苯地平的峰面积；各杂质总量不得大于平的峰面积；各杂质总量不得大于0.5%0.5%。供试液。供试液中小于对照液中小于对照液中硝苯地平峰面积的中硝苯地平峰面积的10%10%以下的杂质峰忽略不计。以下的杂质峰忽略不计。 返 回药物分析杂环类药物的分析一、基本结构与化学性质一、基本结构与化学性质（一）典型药物的结构（一）典型药物的结构 硫酸奎宁硫酸奎宁 硫酸奎尼丁硫酸奎尼丁 （quinine sulfatequinine sulfate） (quinidine sulfate) (quinidine sulfate)第二节第二节 喹啉类
20、药物喹啉类药物药物分析杂环类药物的分析 盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星( (ciprofloxacin hydrochloride)药物分析杂环类药物的分析（二）主要化学性质二）主要化学性质 1. 1. 碱性碱性 喹啉环上的氮原子具有碱性，与强酸形成稳定的盐。喹啉环上的氮原子具有碱性，与强酸形成稳定的盐。 环丙沙星与盐酸成盐，奎宁和奎尼丁可与二元酸成盐，结环丙沙星与盐酸成盐，奎宁和奎尼丁可与二元酸成盐，结 构中喹核碱含脂环氮，碱性强，可与硫酸成盐；而喹啉环系构中喹核碱含脂环氮，碱性强，可与硫酸成盐；而喹啉环系 芳环氮，碱性较弱，不与硫酸成盐。奎宁芳环氮，碱性较弱，不与硫酸成盐。奎宁pKpKb1b1为
21、为5.075.07，pKpKb2b2 为为9.79.7，饱和溶液的，饱和溶液的pHpH值为值为8.88.8。奎尼丁。奎尼丁pKpKb1b1为为5.45.4，pKpKb2b2为为1010。 药物分析杂环类药物的分析2. 2. 旋光性旋光性 硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-237-237o o至至-244-244o o； 硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为+275+275o o至至+290+290o o；而盐酸环而盐酸环 丙沙星无旋光性。丙沙星无旋光性。3. 3. 荧光特性荧光特性 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀
22、硫酸溶液中均显蓝 色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。药物分析杂环类药物的分析 （一）绿奎宁反应一）绿奎宁反应（Thalleioquin） 绿奎宁反应是绿奎宁反应是奎宁奎宁和和奎尼丁奎尼丁的特殊鉴别反应。其反应如下：的特殊鉴别反应。其反应如下： Ch.P Ch.P收载方法收载方法二、鉴别试验二、鉴别试验药物分析杂环类药物的分析（二）光谱特征二）光谱特征1. 1. UVUV Ch.P Ch.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星。采用本法鉴别盐酸环丙沙星。2. 2. 荧光光谱特征荧光光谱特征 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H H2 2SOSO4 4中均显中均
23、显 蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。3. 3. IRIR Ch.P Ch.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方 法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。药物分析杂环类药物的分析（三）无机酸盐（三）无机酸盐 利用硫酸奎宁和硫酸奎尼丁显硫酸盐的反应；盐酸环丙利用硫酸奎宁和硫酸奎尼丁显硫酸盐的反应；盐酸环丙沙星显氯化物的反应，可用无机盐的鉴别方法进行鉴别。沙星显氯化物的反应，可用无机盐的鉴别方法进行鉴别。药物分析杂环类药物的分析 （一）硫酸奎宁
24、中特殊杂质检查（一）硫酸奎宁中特殊杂质检查 1. 1. 酸度酸度 主要控制药物中酸性杂质。用主要控制药物中酸性杂质。用pHpH计测定计测定, ,pHpH为为5.75.76.66.6。 2. 2. 氯仿氯仿- -乙醇中不溶物乙醇中不溶物 主要控制药物中不溶性杂质或无机盐类主要控制药物中不溶性杂质或无机盐类. . 3. 3. 其他金鸡纳碱其他金鸡纳碱 主要控制硫酸奎宁中其他生物碱，因没有合主要控制硫酸奎宁中其他生物碱，因没有合 适的对照品，因此采用薄层色谱中的高低浓度对比法进行检查。适的对照品，因此采用薄层色谱中的高低浓度对比法进行检查。三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查药物分析杂环类药物的分析（二
25、）盐酸环丙沙星中特殊杂质的检查二）盐酸环丙沙星中特殊杂质的检查1 1。酸度。酸度 主要控制药物中酸性杂质。用主要控制药物中酸性杂质。用pHpH计测定计测定, ,pHpH为为3.03.04.54.5。2. 2. 溶液的澄清度与颜色溶液的澄清度与颜色 主要控制本品中不溶性物质和有色杂质。主要控制本品中不溶性物质和有色杂质。 3. 3. 有关物质有关物质 主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质，主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质， 采用采用HPLCHPLC法中归一化法进行检查，其检查方法如下：法中归一化法进行检查，其检查方法如下：药物分析杂环类药物的分析色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系
26、统适用性试验：色谱柱色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱流动相：流动相：0.050.05mol/Lmol/L枸橼酸枸橼酸- -乙腈乙腈(82:18)(82:18)用三乙胺调节用三乙胺调节pHpH值值3.3.检测器：检测器：UVUV检测波长为检测波长为277277nmnm；按盐酸环丙沙星峰计算按盐酸环丙沙星峰计算n n2000;2000; 盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度R R 1.5.1.5.测定方法：测定方法：取本品适量，加水制成每取本品适量，加水制成每1 1mlml中含中含0.40.4mgmg的溶液，取的溶液，取 20 20
27、ll注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰 减，使主成分的峰高为记录仪满量程的减，使主成分的峰高为记录仪满量程的2-42-4倍，记录倍，记录 时间应为主成分峰保留时间的时间应为主成分峰保留时间的2 2倍。按倍。按面积归一化法面积归一化法 计算，杂质总量不得超过计算，杂质总量不得超过1.5%1.5%。 返 回药物分析杂环类药物的分析 一、基本结构与化学性质一、基本结构与化学性质（一）典型药物的结构（一）典型药物的结构 硫酸阿托品硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱（atropine sulfate） ( copolamine hydrobromide
28、）第三节第三节 托烷类药物托烷类药物药物分析杂环类药物的分析（二）主要化学性质二）主要化学性质1 1。水解性。水解性 本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。 以阿托品为例，水解生成莨菪醇以阿托品为例，水解生成莨菪醇()()和莨菪和莨菪 酸酸()()。2. 2. 碱性碱性 阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有 叔胺氮原子叔胺氮原子, ,具有较强的碱性具有较强的碱性, ,易与酸成盐。如易与酸成盐。如 阿托品的阿托品的pKpKb1b1为为4.354.35。药物分析杂环类药物的分析 3. 3. 旋光性旋光性 氢氢溴溴
29、酸酸东东莨莨菪菪碱碱结结构构中中含含有有不不对对称称碳碳原原子子，呈呈左左旋旋体体，比比旋旋度度为为-24-24至至-27-27，而而阿阿托托品品结结构构中中虽虽然然也也含含有有不不对对称称碳碳原原子子，但但因因外外消消旋旋化化而而为为消消旋旋体体，无无旋旋光光性性。利利用用此此性质可区别阿托品与东莨菪碱。性质可区别阿托品与东莨菪碱。 药物分析杂环类药物的分析（一）托烷生物碱一般鉴别试验（一）托烷生物碱一般鉴别试验二、鉴别试验二、鉴别试验生物碱生物碱水解水解莨菪酸莨菪酸发烟硝酸发烟硝酸 三硝基衍生物三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固体固体KOH有色的醌型产物有色的醌型产物药物分析杂环类药物的
30、分析（二）氧化反应（二）氧化反应本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重铬铬 酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。其反应式为：而逸出类似苦杏仁的臭味。其反应式为：药物分析杂环类药物的分析( (三三) )沉淀反应沉淀反应 本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。 如如：阿托品：阿托品+氯化汞醇试液氯化汞醇试液 黄色沉淀黄色沉淀 东莨菪碱东莨菪碱+氯化汞醇试液氯化汞醇试液 白色沉淀白色沉淀（四）硫酸盐与溴化物反应（四）硫酸盐与溴
31、化物反应药物分析杂环类药物的分析 1. 1. 酸度酸度 东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。 氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱形成的盐，通过其氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱形成的盐，通过其5%5%水溶水溶 液的液的pHpH值为值为4.04.05.55.5，来控制本品中的酸性杂质。，来控制本品中的酸性杂质。 2. 2. 其他生物碱其他生物碱三、氢溴酸东莨菪中特殊杂质检查三、氢溴酸东莨菪中特殊杂质检查本品水溶液本品水溶液+ +氨试液氨试液不混浊不混浊合格合格混浊混浊存在其他生物碱存在其他生物碱+KOH试液试液混浊（东莨菪碱）混浊（东莨菪碱）药物分析杂环类药
32、物的分析 3. 3. 易氧化物易氧化物 主主要要是是检检查查本本品品在在生生产产中中可可能能引引入入的的阿阿扑扑阿阿托托品品及及其它含有双键的有机物质，可使其它含有双键的有机物质，可使KMnOKMnO4 4溶液褪色。溶液褪色。返 回药物分析杂环类药物的分析第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物一、基本结构与化学性质一、基本结构与化学性质（一）结构特点与典型药物（一）结构特点与典型药物药物分析杂环类药物的分析药物分析杂环类药物的分析药物分析杂环类药物的分析奋乃静奋乃静药物分析杂环类药物的分析癸氟奋乃静癸氟奋乃静药物分析杂环类药物的分析盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静药物分析杂环类药物的分析盐酸三氟拉嗪盐
33、酸三氟拉嗪药物分析杂环类药物的分析（二）主要化学性质（二）主要化学性质 1. 1.紫外和红外吸收光谱特征紫外和红外吸收光谱特征 硫氮杂蒽母核为共轭三环硫氮杂蒽母核为共轭三环系统系统 三个最大吸收峰别在：三个最大吸收峰别在：205205nmnm、254nm254nm、300nm300nm 由于由于2 2位、位、1010位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 硫氮杂蒽母核的硫氮杂蒽母核的硫硫为为二价二价，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸 收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。 另外，另外，取代基取
34、代基R R和和RR的不同，则可产生不同的红外光谱的不同，则可产生不同的红外光谱药物分析杂环类药物的分析2.2.易氧化呈色易氧化呈色 二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、 三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同 的颜色。的颜色。 3.3.与金属离子络合呈色与金属离子络合呈色 本类药物中未被氧化的硫，可与钯离本类药物中未被氧化的硫，可与钯离 子形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于子形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于 鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物
35、的干扰。鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。药物分析杂环类药物的分析（一）紫外特征吸收和红外吸收光谱一）紫外特征吸收和红外吸收光谱本类药物可用本类药物可用UV和和IR鉴别，鉴别，Ch.P中中UV鉴别实例如下：鉴别实例如下： 药物名称药物名称 溶溶 剂剂 浓度（浓度（g/mlg/ml） maxmax（nmnm） A E A E1%1%1cm1cm盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 盐酸（盐酸（9 10009 1000） 5 254 0.46 915 5 254 0.46 915 306 306 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 盐酸（盐酸（0.010.01mol/Lmol/L） 6 249 883937
36、6 249 883937奋乃静奋乃静 无水乙醇无水乙醇 7 258 0.65 7 258 0.65 癸氟奋乃静癸氟奋乃静 乙醇乙醇 10 260 10 260 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 盐酸（盐酸（9 10009 1000） 10 255 553593 10 255 553593 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 盐酸（盐酸（1 201 20） 10 256 630 10 256 630盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 乙醇乙醇 8 264 8 264与与315 315 二、鉴别试验二、鉴别试验药物分析杂环类药物的分析 （二）显色反应二）显色反应1.1.与氧化剂的显色反应与氧化剂的显色反应药物名称药物名称 硫
37、硫 酸酸 硝硝 酸酸 过氧化氢过氧化氢 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 显红色显红色, , 渐变淡黄色渐变淡黄色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 显樱桃红色显樱桃红色, ,放置放置 生成红色沉淀生成红色沉淀, ,加热即溶解加热即溶解, , 后颜色渐变深后颜色渐变深 溶液由红色转变为橙黄色溶液由红色转变为橙黄色 奋乃静奋乃静 显深红色显深红色; ;放置后放置后 红色渐褪去红色渐褪去 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 显淡红色显淡红色, , 温热温热 后变成红褐色后变成红褐色 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀生成微带红色的白色沉淀; ; 放放 置后置后, , 红色变深红色变深, , 加热后变黄色加热后变黄色
38、盐盐酸硫利达嗪酸硫利达嗪 显蓝色显蓝色 药物分析杂环类药物的分析 2. 与钯离子络合显色反应与钯离子络合显色反应 利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络 合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。药物分析杂环类药物的分析药物分析杂环类药物的分析（三）分解产物的反应三）分解产物的反应 癸氟奋乃静癸氟奋乃静 碳酸钠及碳酸钾碳酸钠及碳酸钾 F F- - + + 酸性茜素锆试液酸性茜素锆试液 ZrFZrF6 6 2-2-配位离子，茜素游离使溶液由配位离子，茜素游离使溶液由红红色变为色变为黄黄色。色。6006
39、00炽灼炽灼药物分析杂环类药物的分析( (一一) )盐酸异丙嗪中特殊杂质检查盐酸异丙嗪中特殊杂质检查 主要有：主要有：2-2-二甲氨基二甲氨基-1-1-丙醇；丙醇；N,N,-N,N,-三甲基三甲基-10-10H-H-吩噻嗪吩噻嗪- - 10- 10-乙胺异构体和结构不清的分解产物乙胺异构体和结构不清的分解产物 。因此采用。因此采用TLCTLC法中的法中的 高低浓度对比法高低浓度对比法控制上述这些杂质的限量。控制上述这些杂质的限量。( (二二) )盐酸硫利达嗪中有关物质检查盐酸硫利达嗪中有关物质检查 本品遇光不稳定，在生产和贮藏过程中易引入有关物质，因本品遇光不稳定，在生产和贮藏过程中易引入有关
40、物质，因 其结构不清，因此也采用其结构不清，因此也采用TLCTLC法中的法中的高低浓度对比法高低浓度对比法控制杂控制杂 质的限量。质的限量。 三、三、特殊杂质检查特殊杂质检查返 回药物分析杂环类药物的分析第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物一、结构特征与典型药物一、结构特征与典型药物NNClH3CO地西泮地西泮药物分析杂环类药物的分析阿普唑仑阿普唑仑药物分析杂环类药物的分析奥沙西泮奥沙西泮药物分析杂环类药物的分析氯氮卓氯氮卓NNNCH3OClH药物分析杂环类药物的分析 ( (一一)化学鉴别试验化学鉴别试验 1 1。沉淀反应。沉淀反应 氯氮卓氯氮卓 橙红色橙红色沉淀沉淀 阿普唑仑阿
41、普唑仑 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 KBiIKBiI4 4 也生成也生成橙红色橙红色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，放置后，沉淀颜色变深， 因此可以相互区别。因此可以相互区别。二、鉴别试验二、鉴别试验阿普唑仑阿普唑仑 + + 遇硅钨酸遇硅钨酸 白色沉淀，药典中也用于鉴别。白色沉淀，药典中也用于鉴别。药物分析杂环类药物的分析2.2.水解后呈芳伯胺反应水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：药物分析杂环类药物的分析3. 3. 硫酸硫酸- -荧光反应荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365365nmnm）下，显下
42、，显不同颜色的荧光。例如：不同颜色的荧光。例如： 地西泮地西泮 黄绿色黄绿色 黄色黄色 氯氮卓氯氮卓 黄色黄色 紫色紫色 艾司唑仑艾司唑仑 + + H H2 2SOSO4 4 亮绿色亮绿色 + + 稀硫酸稀硫酸 天蓝色天蓝色 硝西泮硝西泮 淡蓝色淡蓝色 蓝绿色蓝绿色 奥沙西泮奥沙西泮 淡黄绿色淡黄绿色药物分析杂环类药物的分析4.4.分解产物的反应分解产物的反应 本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。显氯化物反应。Ch.PCh.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。5. 5. 氯化铜焰色反应氯化铜焰色反应 分
43、子结构中含有氯元素的药物，分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧在铜网上燃烧 发发出出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。药物分析杂环类药物的分析（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱药物名称药物名称 溶溶 剂剂 浓度（浓度（g/mlg/ml） maxmax（nmnm） A A 地西泮地西泮 0.5% 0.5%硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液 5 242 5 242 约约0.510.51 282 282 约约0.230.23 366 366 氯氮卓氯氮卓 盐酸溶液盐酸溶液(91000) 7 245,308 (91000)
44、 7 245,308 阿普唑仑阿普唑仑 盐酸溶液盐酸溶液(91000) 12 264 (91000) 12 264 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 硫酸甲醇硫酸甲醇(136) 10 2392,2842 (136) 10 2392,2842 比值比值1.951.952.502.50 3622 3622 氯硝西泮氯硝西泮 0.5% 0.5%硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液 10 2392,3072 10 2392,3072 奥沙西泮奥沙西泮 乙醇乙醇 10 229, 3152( 10 229, 3152(较弱较弱) ) 红外吸收光谱红外吸收光谱: :已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西已用于地西泮、阿普唑仑、
45、艾司唑仑、盐酸氟西 泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。 药物分析杂环类药物的分析（三）（三）TLC法法 1.1.常用的五种苯并二氮杂卓类药物的常用的五种苯并二氮杂卓类药物的TLCTLC法法 按按常常规规法法点点样样1010ll于于硅硅胶胶G G薄薄层层板板上上，以以苯苯- -丙丙酮酮（3 3 ： 2 2）为展开剂）为展开剂, ,饱和饱和1515minmin，用上行法展开用上行法展开1515cmcm，挥发溶剂，挥发溶剂， 用稀硫酸喷雾，于用稀硫酸喷雾，于105105干燥干燥3030minmin，置紫外灯下检视荧光置紫外灯下检视荧光 斑点，结果见表斑点，结果见表8-68-
46、6。 药物分析杂环类药物的分析2.2.酸水解产物的酸水解产物的TLCTLC法法 利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会物进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的专属性较差专属性较差。 药物分析杂环类药物的分析 （一）有关物质检查（一）有关物质检查 Ch.P Ch.P 收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余均作此项检查。其检查方法除了均作此项检查。其检查方法除了三唑仑三唑仑
47、采用采用GCGC法法外，外，其余均用其余均用TLCTLC法法进行检查。进行检查。USP(24)USP(24)和和BP(2000)BP(2000)中对中对氯氯氮卓氮卓都规定了此项检查，而且均用都规定了此项检查，而且均用TLCTLC法法进行检查。进行检查。三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查药物分析杂环类药物的分析 1.1.地西泮中有关物质的检查地西泮中有关物质的检查 地西泮在合成过程中因其副反应，地西泮在合成过程中因其副反应， 可能引入可能引入N-N-去甲基苯甲二氮卓去甲基苯甲二氮卓及及化学结构不清的有关物质化学结构不清的有关物质，可，可 采用采用TLCTLC法中的高低浓度对比法进行检查。法中的高低
48、浓度对比法进行检查。 2.2.氯氮卓中有关物质的检查氯氮卓中有关物质的检查 USP(24)USP(24)用用TLCTLC法检查氯氮卓中的法检查氯氮卓中的 有关物质，并规定其分解产物有关物质，并规定其分解产物2-2-氨基氨基-5-5-氯氯-2-2-苯甲酮苯甲酮含量不得含量不得 过过0.01%0.01%；中间体；中间体7-7-氯氯-1-1，3-3-二氢二氢-5-5-苯基苯基-2-2H-1H-1，4-4-苯并二氮杂苯并二氮杂卓卓-2-2-酮酮-4-4-氧化物氧化物含量不得过含量不得过0.1%0.1%。 药物分析杂环类药物的分析 3. 3.氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法氯氮卓中有关物质的反相高效
49、液相色谱法 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为250250mm2.6mmmm2.6mm（i.d.i.d.）Nucleosil10CNucleosil10C1818柱；柱； n=3000n=3000；流动相为甲醇流动相为甲醇- -磷酸液磷酸液(0.05(0.05mol/L)(60:40),mol/L)(60:40), 40% 40%氢氧化钠溶液调氢氧化钠溶液调pHpH为为6.06.0；流速为；流速为1 1ml/min;ml/min;紫外检测紫外检测 器波长为器波长为254254nmnm。 检测结果：检测结果：氨基物（氨基物（）的）的t tR R为为12.012.0minmin、氧化物（氧化物（
50、）的）的t tR R 为为4.34.3minmin，痕量杂质（痕量杂质（、）的）的t tR R为为13.813.8、 3.6 3.6、4.74.7minmin。 药物分析杂环类药物的分析 (二二) 降解产物的检查降解产物的检查 地地西西泮泮注注射射液液列列入入此此项项检检查查，因因本本品品在在贮贮藏藏过过程程中中有有可可能能分分解解成成2-2-甲甲氨氨基基-5-5-氯氯- -二二苯苯甲甲酮酮等等杂杂质质。采用采用HPLCHPLC法进行检查法进行检查。返 回药物分析杂环类药物的分析一、非水溶液滴定法一、非水溶液滴定法( (一一) ) 基本原理基本原理第六节第六节 含量测定含量测定当当HAHA酸性
51、较强时，反应不能定量酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低完成，必须除去或降低HAHA的酸性，的酸性，使反应顺利地完成。使反应顺利地完成。BH+ A-+HClO4BH+ ClO4+HA游离碱类盐游离碱类盐被置换出的弱酸被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。因此，要根据不同情况采用相应测定条件。药物分析杂环类药物的分析( (二二) ) 一般方法一般方法供供试试品品+ +冰冰醋醋酸酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再若供试品为氢卤酸盐再加加5%5%醋酸汞的冰醋酸液醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结结果果高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定以空白以空白试验校试验校正正药物分析杂环类药物
52、的分析 ( (三三) ) 问题讨论问题讨论1.1.适用范围适用范围 主要用于主要用于K Kb b1010-8-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱 的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法， 可使可使pKpKb b为为8 81313的弱碱性药物采用本法滴定。的弱碱性药物采用本法滴定。 一般来说：一般来说： K Kb b为为1010-8-81010-10-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；时，宜选冰醋酸作为溶剂；药物的药物的 K Kb b为为1010-10-101010-12-12时，宜选冰醋酸与醋
53、酐的混合溶液；时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液； K Kb b1010-12-12时，应用醋酐作为溶剂。时，应用醋酐作为溶剂。 另外，另外，在冰醋酸中加入不同量的在冰醋酸中加入不同量的甲酸甲酸，也能使滴定突跃显著增，也能使滴定突跃显著增 大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。 药物分析杂环类药物的分析 2.2.酸根的影响：酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减： 高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸 消除消除HXHX干扰的方法：干扰的方法：加加Hg(Ac)Hg(Ac)2
54、 2 量不足终点不明显，结果偏低。量不足终点不明显，结果偏低。 2 2BHX + Hg(Ac)BHX + Hg(Ac)2 2 2BHAc + HgX 2BHAc + HgX2 2 过量过量(1(13 3倍倍) )不影响测定结果不影响测定结果药物分析杂环类药物的分析3.3.滴定剂的稳定性滴定剂的稳定性 非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品与标定若滴定样品与标定HClOHClO4 4溶液时的温度不一致，温差未超过溶液时的温度不一致，温差未超过
55、1010时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正： 4.4.终点指示方法终点指示方法 常用电位法和指示剂法。常用电位法和指示剂法。Ch.PCh.P收载的本类药收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。药物分析杂环类药物的分析( (四四) ) 应用实例应用实例 1.1.游离弱碱性药物测定游离弱碱性药物测定 异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。构
56、中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。点的方法也不尽相同。 药物名称药物名称 取样量取样量( (g) g) 溶溶 剂剂 指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 尼可刹米尼可刹米 0.15 0.15 冰醋酸冰醋酸1010ml ml 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 地西泮地西泮 0.2 0.2 冰醋酸、酸酐冰醋酸、酸酐1010ml ml 结晶紫结晶紫 绿色绿色 氯氮卓氯氮卓 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸1010ml ml 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色药物分析杂
57、环类药物的分析 2.2.氢卤酸盐类药物测定氢卤酸盐类药物测定 当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，对测定有干扰，必须先加入过量的对测定有干扰，必须先加入过量的醋酸汞冰醋酸汞冰醋酸醋酸溶液，使其形成难溶液，使其形成难以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下：后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下： 药物名称药物名称 取样量取样量( (g) g) 溶溶 剂剂 加入醋酸汞试液加入醋
58、酸汞试液( (ml) ml) 指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 0.2 0.2 醋酐醋酐1010ml 5 ml 5 橙黄橙黄 玫瑰红色玫瑰红色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸1010ml 4 ml 4 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸2020ml 5 ml 5 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星 0.2 0.2 冰醋酸冰醋酸2525ml 5 ml 5 橙黄橙黄 粉红色粉红色 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸2020ml 5 ml 5 结晶紫结晶紫 纯蓝色纯蓝色 盐酸
59、硫利达嗪盐酸硫利达嗪 0.3 0.3 丙酮丙酮100100ml 5 ml 5 电位滴定法电位滴定法 药物分析杂环类药物的分析3.3.硫酸盐类药物测定硫酸盐类药物测定 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成成SOSO4 42-2-，但在但在非水介质中非水介质中，只显示一元酸解离为，只显示一元酸解离为HSOHSO4 4- -，即只供给一个即只供给一个H H+ +，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。定。药物分析杂环类药物的分析（1
60、1）硫酸阿托品测定：）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的阿托品为碱性较强的 一元碱一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以 简写为简写为( (BHBH+ +) )2 2SOSO4 42 -2 -，用高氯酸直接滴定时的反用高氯酸直接滴定时的反 应式为：应式为：( (BHBH+ +) )2 2SOSO4 42-2- + HClO + HClO4 4 (BH (BH+ +)ClO)ClO4 4- - + (BH + (BH+ +)HSO)HSO4 4- - 可根据可根据1 1molmol的硫酸阿托品消耗的硫酸阿托品消耗1 1molmol高氯酸的高氯酸的关系计算其
61、含量关系计算其含量。药物分析杂环类药物的分析（2 2）硫酸奎宁测定：）硫酸奎宁测定：奎宁为奎宁为二元碱二元碱，其中喹核碱的碱性较强，其中喹核碱的碱性较强， 可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而 保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1 1molmol的硫酸的硫酸 奎宁消耗奎宁消耗3 3molmol的高氯酸的高氯酸。其反应式如下：。其反应式如下： ( (C C2020H H2424N N2 2 H H+ +) )2 2SOSO4 4 + 3HClO + 3HClO4 4 (C
62、 (C2020H H2424N N2 2 2H 2H+ +)2ClO)2ClO4 4- - + (C + (C2020H H2424N N2 2 2H 2H+ +)HSO)HSO4 4- -ClOClO4 4- - Ch.PCh.P和和USP(24)USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。药物分析杂环类药物的分析(3) (3) 硫酸奎宁片的测定：硫酸奎宁片的测定： 硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高氯酸标准溶液直接滴定。此时氯酸标准溶液直接滴定。此时1 1摩尔的硫酸奎宁摩尔的
63、硫酸奎宁可可消耗消耗4 4摩尔摩尔的的高氯酸高氯酸，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不同。同。 药物分析杂环类药物的分析4.4.硝酸盐的测定硝酸盐的测定 硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而不用指示剂法而用电位法指示终点用电位法指示终点。药物分析杂环类药物的分析
64、5.5.磷酸盐与有机酸盐磷酸盐与有机酸盐 磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接滴定滴定。药物分析杂环类药物的分析（一）硝苯地平的测定（一）硝苯地平的测定 基本原理基本原理 硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示：硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示： 终点时终点时: :微过量的微过量的CeCe4+4+将指示剂中的将指示剂中的FeFe2+2+氧化成氧化成FeFe3+3+，使使 橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终 点的到达。点的
65、到达。二、铈量法二、铈量法药物分析杂环类药物的分析（二）吩噻嗪类药物的测定（二）吩噻嗪类药物的测定药物药物Ce(SO4), -e红色红色Ce(SO4), -2e红色消退红色消退自身指示终点或电位法、永停法指示终点自身指示终点或电位法、永停法指示终点药物分析杂环类药物的分析( (一）酸性染料比色法一）酸性染料比色法 1.1.基本原理基本原理 三、比色法三、比色法药物分析杂环类药物的分析2. 2. 影响因素影响因素 (1) (1) 水相最佳水相最佳pHpH值的选择：值的选择：本法中水相的本法中水相的pHpH应使有机碱性药应使有机碱性药物均成阳离子物均成阳离子( (BHBH+)+)，而酸性染料应电离
66、足够的阴离子而酸性染料应电离足够的阴离子( (InIn - -),),阴阳阴阳离子才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料离子才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料完全保留在水相中，才能保证定量的测定。完全保留在水相中，才能保证定量的测定。 (2) (2) 酸性染料及其浓度：酸性染料及其浓度：常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即可。可。 药物分析杂环类药物的分析(3) (3) 有机溶剂的选择有机溶剂的选择 有机碱药物应对离子对
67、提取率高，不与有机碱药物应对离子对提取率高，不与 水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶 剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)(4)水分的影响：水分的影响：严防水分混入有机溶剂中，水相中过量有色严防水分混入有机溶剂中，水相中过量有色 酸性染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影酸性染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影 响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混 入的水分。入的
68、水分。 药物分析杂环类药物的分析3. 3. 应用示例应用示例 Ch.PCh.P中硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪中硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片和氢溴酸山莨菪碱片等，采用本法测碱片和氢溴酸山莨菪碱片等，采用本法测定含量测定。定含量测定。药物分析杂环类药物的分析（二）钯离子比色法（二）钯离子比色法优点：优点：钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定。吩噻嗪类药物的测定。 max500nm吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物 + + PdPd2+2+pH20.1红色络合物红色络合物在在 max处测定处测定A A，以对照法定量以对照法定量药物分析杂环类药物的分析（一）
69、直接分光光度法（一）直接分光光度法供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。 1.1.奥沙西泮原料的测定奥沙西泮原料的测定 在在229229nmnm，采用标准对照法测定。采用标准对照法测定。 2.2.盐酸异丙嗪片的测定盐酸异丙嗪片的测定 在在249249nmnm，采用采用E E1cm1cm1%1%910910测定。测定。 3.3.盐酸异丙嗪注射液的测定盐酸异丙嗪注射液的测定 测定波长的选择：测定波长的选择：注射液处方加注射液处方加V VC C作抗氧剂，可还原异丙嗪红作抗氧剂，可还原异丙嗪红 色氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。色
70、氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。V VC C在盐酸异丙嗪最大在盐酸异丙嗪最大 吸收波长吸收波长249249nmnm处有吸收，干扰注测定。因此选用处有吸收，干扰注测定。因此选用299299nmnm波长测波长测 定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素C C在此波长处则不产生干在此波长处则不产生干 扰扰, ,但但E E1cm1cm1%1% 108108 。四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法药物分析杂环类药物的分析( (二二) )萃取后分光光度法萃取后分光光度法盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪氨水碱化氨水碱化氯丙嗪氯丙嗪乙醚提取乙醚提取乙醚层乙醚层
71、盐酸提取盐酸提取盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 maxmax2541nm2541nm处测定处测定A A， E E1cm1cm1%1% 915915药物分析杂环类药物的分析（三）萃取（三）萃取- -双波长分光光度法双波长分光光度法 本法是本法是USPUSP（2424）收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。测定原理测定原理 利用氯丙嗪的最利用氯丙嗪的最maxmax为为254254nmnm，其氧化物在此波长也其氧化物在此波长也有吸收，同时在有吸收，同时在277277nmnm氧化物也有吸
72、收，且其氧化物也有吸收，且其A A254254=A=A277277. .而氯丙嗪而氯丙嗪在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得A A计算氯丙嗪含量。计算氯丙嗪含量。药物分析杂环类药物的分析药物分析杂环类药物的分析（四）二阶导数分光光度法（四）二阶导数分光光度法盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪注射液 抗抗氧氧剂剂维维生生素素C的的二二阶阶导导数数光光谱谱近近似似为为接接近近基基线线的的一一条条直直线线，不不干干扰扰盐盐酸酸氯氯丙丙嗪嗪的的测测定定。因因此此盐盐酸酸氯氯丙丙嗪嗪可可从从其其二二阶阶导导数数光光谱谱量量取取峰峰266266nm谷谷254254nm距距离
73、离，标标准准曲曲线线法法定定量量其测定方法如下：其测定方法如下： 药物分析杂环类药物的分析1.1.光谱绘制光谱绘制 测绘条件：测绘条件： 波长范围为波长范围为200200nmnm320nm320nm；狭缝为狭缝为1212nmnm；纸速为纸速为120120mm/minmm/min。2.2.线性关系线性关系 精取盐酸氯丙嗪对照液精取盐酸氯丙嗪对照液(50(50g/ml)g/ml)制得标准系列，以制得标准系列，以 HCI(0.1mol/L) HCI(0.1mol/L)为空白，按光谱绘制项下分别测定。用尺量取不为空白，按光谱绘制项下分别测定。用尺量取不 同浓度系列溶液光谱同浓度系列溶液光谱266266
74、nmnm- -谷谷254254nmnm距离（距离（D DL L），），并以峰谷距离为纵并以峰谷距离为纵 坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3.3.供试品测定供试品测定 精密量取盐酸氯丙嗪注射液精密量取盐酸氯丙嗪注射液2.02.0mlml，按光谱绘制项按光谱绘制项 下的方法，测得二阶导数光谱，量取光谱峰下的方法，测得二阶导数光谱，量取光谱峰- -谷谷(266(266nmnm254nm)254nm) 距离，从标准曲线上求出浓度，计算百分含量。距离，从标准曲线上求出浓度，计算百分含量。药物分析杂环类药物的分析五、气相色谱法五、气相色谱法（一）硫酸阿托品片的含量测定（
75、一）硫酸阿托品片的含量测定 USP(24)USP(24)采用的方法。采用的方法。以后马托品作为内标以后马托品作为内标, 采用标准对照采用标准对照法。法。 测定方法测定方法 (1)(1)内标溶液的制备：内标溶液的制备： (2) (2)供试品溶液与对照品溶液的制备：供试品溶液与对照品溶液的制备： (3) (3)色谱系统：色谱系统：色谱柱为色谱柱为1.81.8m2mmm2mm的玻璃柱；担体为与碳酸的玻璃柱；担体为与碳酸 钠混合于钠混合于900900熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定 相为相为3%3%的的OV-17OV-17（即即50%50%甲基，甲基，50%
76、50%苯基的聚硅氧烷）；载气苯基的聚硅氧烷）；载气 为氮气，流速为为氮气，流速为2525ml/minml/min；检测器为氢火焰离子化检测器。检测器为氢火焰离子化检测器。药物分析杂环类药物的分析 (4)(4)系统适用性试验：系统适用性试验：取对照品溶液取对照品溶液1 1ll，进样进样6 6次，所得的对次，所得的对 照品和内标峰面积之比的照品和内标峰面积之比的RSDRSD不大于不大于2.0%2.0%；对照品峰和内标峰的；对照品峰和内标峰的 分辨率分辨率R Rs s4.04.0；T T2.02.0。 (5)(5)测定方法：测定方法：取供试液和对照液各进样取供试液和对照液各进样1l1l，记录各峰面积
77、，记录各峰面积， 用下式计算所取片粉中硫酸阿托品用下式计算所取片粉中硫酸阿托品(C C1717H H2323NONO3 3) )2 2HH2 2SOSO4 4HH2 2OO的的 重量重量: :(C C1717H H2323NONO3 3) )2 2HH2 2SOSO4 4HH2 2OO的重的重( (mg)=(694.85/676.83)(mg)=(694.85/676.83)(W W/10)(/10)(R Ru u/ /R Rs s) )（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力学研究学研究药物分析杂环类药物的分析 ( (一一)反相高效液相
78、色谱法反相高效液相色谱法 1.1.地西泮注射液的反相地西泮注射液的反相HPLCHPLC法法 地西泮注射液曾用萃取后分光光地西泮注射液曾用萃取后分光光 度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测 定有干扰，故中国药典自定有干扰，故中国药典自19951995版改用版改用HPLCHPLC法。此法操作简便，法。此法操作简便， 可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为99.4%99.4%，相对标，相对标 准偏差为准偏差为0.8%0.8%。(1)(1)色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验
79、：ODSCODSC1818；流动相为甲醇流动相为甲醇- -水水(70:30) (70:30) ；检测波长为；检测波长为254254nm nm 。n n15001500，R R1.51.5。 (2)(2)内标溶液的制备：内标溶液的制备：取萘取萘5050mgmg，置置2525mlml量瓶中，加甲醇溶解量瓶中，加甲醇溶解 并稀释至刻度，摇匀，即得。并稀释至刻度，摇匀，即得。六、高效液相色谱法六、高效液相色谱法药物分析杂环类药物的分析 (3)(3)测定方法：测定方法：取地西泮对照品约取地西泮对照品约2525mgmg，精密称定，置精密称定，置2525mlml量量 瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密
80、量取该溶液与瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液与 内标溶液各内标溶液各5 5mlml，置置2525mlml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。 吸取吸取5 5ll10l10l进样，记录色谱图；另取本品适量进样，记录色谱图；另取本品适量( (约相当约相当 于地西泮于地西泮5 5mgmg），），同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。药物分析杂环类药物的分析2.2.高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量 色谱条件色谱条件: :色谱柱为色谱柱为SpherisorbCSpherisorbC
81、1818 5m 5m 流动相为流动相为0.0250.025mol/Lmol/L 磷酸磷酸( (三乙胺调三乙胺调pHpH为为3.0)-3.0)-乙腈乙腈(80:20)(80:20)；柱温为；柱温为3030；检测波；检测波 长为长为215215nmnm；n=n=58805880。 线性关系：线性关系：精取硫酸阿托品适量，用流动相制备成精取硫酸阿托品适量，用流动相制备成22.422.4、44.844.8、 67.2 67.2、89.689.6、112112g/mlg/ml溶液，进样溶液，进样3 3次，每次次，每次2020ll，所得峰所得峰 面积与浓度绘制标准曲线，呈良好的线性关系，其相关系数面积与浓
82、度绘制标准曲线，呈良好的线性关系，其相关系数 r=0.9995 r=0.9995，其线性范围为其线性范围为22.422.4g/mlg/ml112g/ml112g/ml。 回收率试验回收率试验： 样品测定：样品测定： 药物分析杂环类药物的分析3.3.高效液相色谱法测定血浆中地西泮浓度高效液相色谱法测定血浆中地西泮浓度 本法以艾司唑仑为内本法以艾司唑仑为内 标，用氯仿标，用氯仿- -异丙醇混合溶剂提取，氮气流吹干，用甲醇溶解异丙醇混合溶剂提取，氮气流吹干，用甲醇溶解 后进样，测定了剖腹产产妇及胎儿血浆中地西泮浓度。其回收后进样，测定了剖腹产产妇及胎儿血浆中地西泮浓度。其回收 率在率在92.86%9
83、2.86%98.77%98.77%之间；日内与日间精密度（之间；日内与日间精密度（RSDRSD）分别为分别为 1.61% 1.61%3.00%3.00%和和2.18%2.18%5.18%5.18%。该法具有回收率高，专一性强、。该法具有回收率高，专一性强、 灵敏度高和重现性好等特点，并用此法对灵敏度高和重现性好等特点，并用此法对1010名剖腹产产妇进行名剖腹产产妇进行 了血药浓度测定，为临床安全用药提供了科学依据。了血药浓度测定，为临床安全用药提供了科学依据。药物分析杂环类药物的分析（二）离子对高效液相色谱法（二）离子对高效液相色谱法 1.1.反相离子对高效液相色谱法测定人血清中异烟肼浓度反相
84、离子对高效液相色谱法测定人血清中异烟肼浓度 2. 2.高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星血药浓度及其药动学研究高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星血药浓度及其药动学研究 返 回药物分析杂环类药物的分析练习与思考练习与思考 A A型题型题 1. 1. 异烟肼中国药典的鉴别方法是异烟肼中国药典的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B. B. 水解反应水解反应 C.C.沉淀反应沉淀反应 D.D.重氮化重氮化- -偶合反应偶合反应 E. E. 与硝酸银试液反应与硝酸银试液反应2. 2. 异烟肼中国药典规定的含量测定方法为异烟肼中国药典规定的含量测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.溴酸
85、钾法溴酸钾法 C.C.碘量法碘量法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.E.亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法药物分析杂环类药物的分析 B B型题型题 1.1.A A。与硝酸银试液反应与硝酸银试液反应 B.B.亚硝酸钠亚硝酸钠- -硫酸反应硫酸反应 2.2.C. C. 戊烯二醛反应戊烯二醛反应 D. D. 水解后重氮化水解后重氮化- -偶合反应偶合反应 3.3.E. E. 重氮化重氮化- -偶合反应偶合反应 1. 1. 异烟肼异烟肼 2. 2. 苯巴比妥苯巴比妥 3. 3. 尼可刹米尼可刹米 4. 4. 氯氮卓氯氮卓ABCD药物分析杂环类药物的分析1.1. A A。溴酸钾法溴酸钾法 B. B. 紫外分
86、光光紫外分光光度法度法 C. C. 非水滴定法非水滴定法 D. HPLCD. HPLC法法 E. E. 双相滴定法双相滴定法5. 5. 异烟肼异烟肼6. 6. 尼可沙米注射剂尼可沙米注射剂7. 7. 苯甲酸钠苯甲酸钠8. 8. 地西泮注射剂地西泮注射剂ABED药物分析杂环类药物的分析 X X型题型题 1. 1. 中国药典规定用紫外分光光度法测定中国药典规定用紫外分光光度法测定的药物有的药物有1.1.A A。苯巴比妥苯巴比妥 B. B. 盐酸氯丙嗪片盐酸氯丙嗪片 2.2.C. C. 地西泮片地西泮片 D. D. 盐酸氯丙嗪注射剂盐酸氯丙嗪注射剂 3.3.E. E. 氯氮卓片氯氮卓片4.4.2. 2. 可用非水溶液滴定法测定含量的药物有可用非水溶液滴定法测定含量的药物有5.5.A A。尼可刹米尼可刹米 B. B. 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 6.6.C. C. 奋乃静奋乃静 D. D. 地西泮地西泮 E. E. 氯氮卓氯氮卓返 回药物分析杂环类药物的分析药物分析杂环类药物的分析
