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1、细细 菌菌 感感 染染 的的 检检 测测 方方 法法 与与 防防 治治 原原 则则第一节第一节 细菌感染的实验室诊断细菌感染的实验室诊断vv标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。vv根据疾病的种类采取不同标本。根据疾病的种类采取不同标本。根据疾病的种类采取不同标本。根据疾病的种类采取不同标本。vv应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加应在使用抗菌药物前采集标本，否则
2、在培养时应加入拮抗剂。入拮抗剂。入拮抗剂。入拮抗剂。vv标本采集后尽快送检并采取适当的保存方式。标本采集后尽快送检并采取适当的保存方式。标本采集后尽快送检并采取适当的保存方式。标本采集后尽快送检并采取适当的保存方式。一、标本采集与送检原则一、标本采集与送检原则（一）（一）供检出细菌及成分（抗原、核酸）的标本：供检出细菌及成分（抗原、核酸）的标本：（二）（二）供检测特异性抗体的标本：供检测特异性抗体的标本：应在发病初期和恢应在发病初期和恢复期各取复期各取 1 份血清。份血清。二、二、细菌及成分的菌及成分的检测标标本本本本直接涂片染色直接涂片染色镜检初步初步诊断断分分离离培培养养生化生化试验血清学
3、血清学鉴定定毒力毒力试验药物敏感物敏感试验明明明明确确确确诊诊断断断断细菌抗原的菌抗原的检测细菌核酸的菌核酸的检测 （一）（一）细菌形态与结构检查细菌形态与结构检查 1. 显微镜放大法显微镜放大法 2. 染色法染色法n n普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜（light microscopelight microscope） n n电子显微镜（电子显微镜（电子显微镜（电子显微镜（electron microscopeelectron microscope） n n暗视野显微镜（暗视野显微镜（暗视野显微镜（暗视野显微镜（darkfielddarkfield microscop
4、e microscope）n n相差显微镜（相差显微镜（相差显微镜（相差显微镜（phase contrast microscopephase contrast microscope）n n荧光显微镜（荧光显微镜（荧光显微镜（荧光显微镜（fluorescence microscopefluorescence microscope）n n激光共聚焦显微镜（激光共聚焦显微镜（激光共聚焦显微镜（激光共聚焦显微镜（cofocalcofocal microscope microscope） 1.普通光学显微镜 自然光为光源；自然光为光源；最大分辨率为最大分辨率为0.2m0.2m；可放大可放大1000100
5、0倍。倍。 2.电子显微镜：以电子流代替光源；以电子流代替光源；分辨率分辨率1nm 1nm ；放大倍数可达放大倍数可达1010万万100100万倍。万倍。 电镜标本制作复杂，且必须在真空干燥状电镜标本制作复杂，且必须在真空干燥状态下观察，因此不能观察活的微生物。态下观察，因此不能观察活的微生物。 肉眼：肉眼：肉眼：肉眼：0.10.10.10.10.2 0.2 0.2 0.2 mmmm 光镜：光镜：光镜：光镜：0.10.10.10.10.2 0.2 0.2 0.2 mm 电镜：电镜：电镜：电镜：0.10.10.10.10.2 0.2 0.2 0.2 nmnm最小分辨率最小分辨率流感病毒流感病毒H
6、BVHBVHIVHIV 3.暗视野显微镜 常用于活的微生物的动力检测常用于活的微生物的动力检测4.相差显微镜 观察未染色标本的显微观察未染色标本的显微镜，应用于活细胞的形态及镜，应用于活细胞的形态及某些内部结构的观察。某些内部结构的观察。细胞细胞酵母菌酵母菌链球菌链球菌5.荧光显微镜 以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通光学显微镜要高。自然光短，故分辨率比普通光学显微镜要高。6. 激光共聚焦扫描显微镜激光共聚焦扫描显微镜 是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描
7、装是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组置，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组置，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组置，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，也可以用于细胞内生织内部微细结构的荧光图像，也可以用于细胞内生织内部微细结构的荧光图像，也可以用于细胞内生织内部微细结构的荧光图像，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计等。化成分的定量分析、光密度统计等。化成分的定量分析、光密度统计等。化成分的定量分析、光密度统计等。蓝色为细胞核，绿色为微管。蓝色为细胞核，绿色为微管。n n简单染色法：只用一种
8、染料染色，只能观察细菌简单染色法：只用一种染料染色，只能观察细菌简单染色法：只用一种染料染色，只能观察细菌简单染色法：只用一种染料染色，只能观察细菌的形态，但不能鉴别细菌。的形态，但不能鉴别细菌。的形态，但不能鉴别细菌。的形态，但不能鉴别细菌。n n复合染色法（鉴别染色法）：复合染色法（鉴别染色法）：复合染色法（鉴别染色法）：复合染色法（鉴别染色法）：采用两种或两种以采用两种或两种以采用两种或两种以采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细
9、菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便能够鉴别细菌和观察细菌的特殊构造，如革兰便能够鉴别细菌和观察细菌的特殊构造，如革兰便能够鉴别细菌和观察细菌的特殊构造，如革兰便能够鉴别细菌和观察细菌的特殊构造，如革兰染色法、抗酸染色法、特殊染色法。染色法、抗酸染色法、特殊染色法。染色法、抗酸染色法、特殊染色法。染色法、抗酸染色法、特殊染色法。染色方法的种类染色方法的种类 结晶紫晶紫 碘液碘液 95%乙醇乙醇 稀稀释复复红 （初染）（初染） （媒染）（媒染） （脱色）（脱色） （复染
10、）（复染） 革革兰阳性菌阳性菌 革革兰阴性菌阴性菌 （菌体（菌体为紫色紫色 ） （菌体（菌体为红色）色）革革兰染色法染色法 革兰阳性菌革兰阳性菌 革兰阴性菌革兰阴性菌（菌体为紫色（菌体为紫色 ） （ 菌体为红色）菌体为红色） （G+菌）菌） （ G-菌）菌）结结 核核 杆杆 菌（抗酸染色法）菌（抗酸染色法）鞭毛染色法（二）细菌分离培养和鉴定（二）细菌分离培养和鉴定 分离培养是微生物学诊断的分离培养是微生物学诊断的金标准，金标准，是最可是最可靠的传统诊断技术。靠的传统诊断技术。 普通琼脂平板普通琼脂平板 标本接种标本接种 血琼脂平板血琼脂平板 菌落菌落 纯培养纯培养 选择培养基平板选择培养基平板
11、 （1）观察观察菌落特征、溶血环特征等菌落特征、溶血环特征等 （2）生化反应：生化反应：如肠道杆菌的乳糖发酵试验如肠道杆菌的乳糖发酵试验 （3）血清学鉴定：血清学鉴定：用已知的抗体检查未知抗原用已知的抗体检查未知抗原 （4）毒力鉴定：毒力鉴定：内、外毒素检测或动物试验内、外毒素检测或动物试验 （5）药敏试验药敏试验涂片、染色、镜检。涂片、染色、镜检。分离培养与鉴定：分离培养与鉴定：纯种纯种A A A AB B B BA.A.白色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征白色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征白色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征白色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征 B.B.金黄色葡萄
12、球菌在普通琼脂平板上的菌落特征金黄色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征金黄色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征金黄色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征 菌落特征观察菌落特征观察菌落特征观察菌落特征观察A.A.A.A.表皮葡萄球菌在血表皮葡萄球菌在血表皮葡萄球菌在血表皮葡萄球菌在血琼琼脂平板上的菌落特征脂平板上的菌落特征脂平板上的菌落特征脂平板上的菌落特征 B.B.B.B.金黄色葡萄球菌在血金黄色葡萄球菌在血金黄色葡萄球菌在血金黄色葡萄球菌在血琼琼脂平板上的菌落特征脂平板上的菌落特征脂平板上的菌落特征脂平板上的菌落特征A A A AB B B B溶血环特征观察溶血环特征观察溶血环特征观察溶血环特
13、征观察肠道杆菌的乳糖发酵试验肠道杆菌的乳糖发酵试验分解乳糖细菌分解乳糖细菌分解乳糖细菌分解乳糖细菌 菌落变菌落变菌落变菌落变黑，有金属光泽。黑，有金属光泽。黑，有金属光泽。黑，有金属光泽。不分解乳糖细菌不分解乳糖细菌不分解乳糖细菌不分解乳糖细菌 菌落菌落菌落菌落无色、半透明（粉色）。无色、半透明（粉色）。无色、半透明（粉色）。无色、半透明（粉色）。血清学鉴定血清学鉴定已知抗体已知抗体 未知抗原未知抗原鉴定细菌的种、型。鉴定细菌的种、型。白喉杆菌菌苔白喉杆菌菌苔ElekElek平板毒力试验平板毒力试验沉淀线（阳性）沉淀线（阳性）含含白喉抗毒素滤纸片白喉抗毒素滤纸片药敏试验药敏试验耐药株，抑菌圈耐
14、药株，抑菌圈10mm敏感株，抑菌圈敏感株，抑菌圈15mm细菌生长细菌生长（三）细菌抗原的检测（三）细菌抗原的检测优点：优点： 不受抗生素使用的限制；不受抗生素使用的限制； 敏感性高。敏感性高。 免疫学技术：免疫学技术：ELISAELISA、免疫荧光、协同凝集、免疫荧光、协同凝集试验、对流免疫电泳、免疫印迹技术等。试验、对流免疫电泳、免疫印迹技术等。原理原理 用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可可作为某些传染病的辅助诊断。作为某些传染病的辅助诊断。 （已知抗原已知抗原未知抗体
15、）未知抗体）二、血清学诊断二、血清学诊断 由于是用已知病毒抗原来检测病人血清中有由于是用已知病毒抗原来检测病人血清中有由于是用已知病毒抗原来检测病人血清中有由于是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，无相应抗体，无相应抗体，无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时故须待病人感染后体内产生抗体时故须待病人感染后体内产生抗体时故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。才能检出。才能检出。才能检出。 标本：应在发病初期和恢复期各取标本：应在发病初期和恢复期各取标本：应在发病初期和恢复期各取标本：应在发病初期和恢复期各取1 1份血清，份血清，份血清，份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。恢
16、复期以便对比双份血清抗体效价的动态变化。恢复期以便对比双份血清抗体效价的动态变化。恢复期以便对比双份血清抗体效价的动态变化。恢复期比发病初期血清抗体效价升高比发病初期血清抗体效价升高比发病初期血清抗体效价升高比发病初期血清抗体效价升高 4 4倍者方有意义。倍者方有意义。倍者方有意义。倍者方有意义。 方法：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补方法：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补方法：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补方法：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合试验等。体结合试验等。体结合试验等。体结合试验等。第二节第二节 免疫预防免疫预防 免疫预防是根据特异性免疫原理，采用人免疫预防是根据特异性免疫
17、原理，采用人工方法将工方法将抗原（疫苗）或抗体（动物免疫血清、抗原（疫苗）或抗体（动物免疫血清、人免疫球蛋白等）人免疫球蛋白等）制成各种制剂，接种于人体，制成各种制剂，接种于人体，使其获得特异性免疫能力，达到预防某些疾病。使其获得特异性免疫能力，达到预防某些疾病。前者称人工主动免疫，前者称人工主动免疫，主要用于预防；主要用于预防；后者称人后者称人工被动免疫，主要用于治疗和紧急预防。工被动免疫，主要用于治疗和紧急预防。免疫免疫天然免疫天然免疫获得性免疫获得性免疫被动免疫被动免疫主动免疫主动免疫人工被动免疫人工被动免疫 （抗毒素）（抗毒素） 自然被动免疫自然被动免疫（胎盘、乳汁）（胎盘、乳汁）人工
18、主动免疫人工主动免疫 （疫苗）（疫苗）自然主动免疫自然主动免疫 （感染）（感染）第三节第三节 细菌感染的治疗原则细菌感染的治疗原则一、主要采用抗菌药物一、主要采用抗菌药物一、主要采用抗菌药物一、主要采用抗菌药物二、合理使用抗菌药物二、合理使用抗菌药物二、合理使用抗菌药物二、合理使用抗菌药物1. 1.诊断为细菌感染者，对于未明确致病菌的危急病诊断为细菌感染者，对于未明确致病菌的危急病诊断为细菌感染者，对于未明确致病菌的危急病诊断为细菌感染者，对于未明确致病菌的危急病例，可给予抗菌经验性治疗。获知细菌培养及药敏例，可给予抗菌经验性治疗。获知细菌培养及药敏例，可给予抗菌经验性治疗。获知细菌培养及药敏例，可给予抗菌经验性治疗。获知细菌培养及药敏结果后，对疗效不佳的患者调整给药方案。结果后，对疗效不佳的患者调整给药方案。结果后，对疗效不佳的患者调整给药方案。结果后，对疗效不佳的患者调整给药方案。2. 2.抗菌药物的联合应用要有明确指征：单一药物科抗菌药物的联合应用要有明确指征：单一药物科抗菌药物的联合应用要有明确指征：单一药物科抗菌药物的联合应用要有明确指征：单一药物科有效治疗的感染，不需要联合用药。有效治疗的感染，不需要联合用药。有效治疗的感染，不需要联合用药。有效治疗的感染，不需要联合用药。
