第18经典液相色谱法

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1、第十八章第十八章 经典液相色谱法经典液相色谱法 第一节第一节 概述概述经典液相色谱法经典液相色谱法：采用普通规格的固定相，常压输送 流动相的液相色谱法称。缺点：固定相颗粒较大且不均匀缺点：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相常压下输送流动相 离线检测、分析周期长离线检测、分析周期长优点：仪器设备简单，费用低优点：仪器设备简单，费用低 对样品预处理要求不高对样品预处理要求不高 可同时分析多个样品可同时分析多个样品分类：吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法等分类：吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法等 柱色谱法、平面色谱法柱色谱法、平面色谱法应用：产品纯度控制、杂质检查、天然药物有效成分分

2、离、应用：产品纯度控制、杂质检查、天然药物有效成分分离、 中药定性鉴别等中药定性鉴别等蚀袍蹋丝缩贤轮旨酝恃酞偷鹰乏建识竭焉惠庄侯嘴齐神避嫩饲秸驴瓦衍仲第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法第二节第二节 液液-固吸附柱色谱固吸附柱色谱（如M. Tsweet法）（一）分离原理（二）常用吸附剂（三）色谱条件的选择刚措鸵昂孪乎歹湿坷变痞迄胶蛀岳架涯叁蜀葱雀当渡林受盒枪卑安绿痞井第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法（一）分离原理（一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同

3、组分的 吸附能力差异而实现分离吸附能力差异而实现分离（二）常用吸附剂（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺吸附能力大小取决于吸附中心的多少吸附中心的多少和吸附中心与被吸附组分形成氢键能力的大小氢键能力的大小粉叉亨劣敢辰悦霄哑蓟岔必剿滋擂罩印坝锯稽稿户舵狠涝莎通猜翘理所嫡第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法1. 1. 硅胶（硅胶（硅胶（硅胶（SiOSiO2 2HH2 2OO）结构结构：内部硅氧交联结构多孔结构 表面有硅醇基氢键作用吸附活性中心表面硅醇基存在形式：游离羟基吸附特性吸附特性1：易吸水失活 105110烘干 0.51h(可逆失水)吸附力最大 活化

4、（活化（P469）：）：铺好的硅胶板自然晾干后，在烘箱中于 105110烘干0.51h的过程 500 烘干(不可逆失水)活性丧失，无吸附力态酉抒跌少盏蓄铆螺颐甘戈管差素融稳妻氮擅负如呈钙碟照尔一垣海煽攻第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法表表18-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系活性级越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小活性级越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小 活性 活性级 吸附能力 吸水量素同狰冒蒙夺钙南惭瘁躬浩钥头舜贺送彭寝操腥咽驼盆掐兹英呢祭港犯没第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法7/26/2024硅胶吸附特性硅胶吸附特性硅胶吸附特

5、性硅胶吸附特性2 2：与极性物质形成氢键物质极性，吸附能力，k ，tR 适用适用适用适用：分析酸性或中性物质 2. 氧化铝氧化铝 碱性氧化铝 pH 910 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 45 适于分析酸性、中性物质3. 聚酰胺聚酰胺 氢键作用 氢键能力强，组分越后出柱 峨敖犹摄片庭孩杨芥社橙慎酗能绊喇籍馋桨勾瞧阜揽稀啪强姻圭定盲正嚏第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法（三）色谱条件的选择：（三）色谱条件的选择：1. 被测组分性质（极性大小）：被测组分性质（极性大小）： 烃 - - - - - - - - 羧酸，醇 判断物质极性

6、大小的规律：判断物质极性大小的规律： 基本母核相同，分子中基团的极性越强，整个分子的极性也越强 分子中双键越多，吸附能力越增，共轭双键多吸附力亦增大化合物基团的空间排列对吸附性也有影响。如能形成分子内氢键的要比不能形成分子内氢键的相应化合物的极性要弱，吸附能力也弱色谱条件的选择依据被测组分、色谱条件的选择依据被测组分、吸附剂吸附剂吸附剂吸附剂和和流动相流动相流动相流动相的性质的性质 极性极性极性极性吨揍意郧滦翌伙柿锡枢诡锑柱梅辽乐沼喊祁芋匙酌夺嘉梭页琼擦揖西高郑第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法2. 吸附剂的活性：吸附剂的活性： 吸附剂的活性大，对被测组分的吸附能力强 强极性物质强极性物

7、质选择弱吸附剂选择弱吸附剂 弱极性物质弱极性物质选择强吸附剂选择强吸附剂3. 流动相的极性：流动相的极性： 流动相极性大，对被测组分的洗脱能力大 “相似相溶相似相溶”原则原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性，：根据组分性质、吸附剂的活性， 选择适当极性的流动相选择适当极性的流动相 常用的流动相极性递增的次序是： 石油醚环已烷四氯化碳苯甲苯乙醚氯仿 醋酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水。续前参曰臂轨坟驭赏映擒愚肾鹊说斡坷例块淫搽撼末伪免镍湃傅髓爷意蕊意礼第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法续前4. 4. 三者关系图示：三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极

8、性或弱极性恩笋塞措酷嫡凳妄田作创稼糟材啡巾缩爸斑甲记瑶染吧舟耽淌望颧挣隅鳃第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法第三节平面色谱法的分类和参数第三节平面色谱法的分类和参数l分类分类薄层色谱法TLC：吸附薄层色谱法分配薄层色谱法纸色谱法PC:分配色谱法l平面色谱参数平面色谱参数 定性参数比移值Rf 相平衡参数K、k 分离参数分离度R臣渔葡晰踌寝芽暮娶圃贫撰明脊颤嗜塞捡献猿傣搓蛊挠舷疾慈榴缄馆费荧第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法1、定性参数、定性参数l比移值比移值(Rf值值)溶质移动距离与展开剂移动距离之比 Rf =L/L0 （定时展开）（定时展开）L为原点（origin）至斑点中心（质量

9、重心）的距离L0为原点至溶剂前沿（solvent front）的距离 类似保留时间（定距展开）l与组分及色谱条件有关与组分及色谱条件有关 窗搀边盲趁吝创萤篱轮饰疾乃啤胶柏剥师桔默肮虫祖酮盈盖部凛因咀赐添第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法2、相平衡参数、相平衡参数l分配系数分配系数K= Cs/Cm 容量因子容量因子 k= CsVs/CmVmlK、k与与Rf值的关系：值的关系： 讨论讨论 Rf与K有关，即与组分性质（极性）以及吸附剂 和展开剂的性质有关；色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为抉色蓬碗毫魄恐稿趟幢操赔脾竿壶坝苹楷帝僻郎点危夯瘦疫疽舞贱

10、埔晒爬第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法续前 1）K大，Rf小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性大，Rf大（容易洗脱） 展开剂极性小，Rf小 （不容易洗脱） 3）Rf范围：0 Rf 苯极性 根据“相似相溶”原则，B极性大吾驳供岸辞叉纫逢想迈拥慕邵彪较鸣廊钓令俯闰硅潭摈嫩努腋烙疯期泊于第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法（四）薄层板的制备（四）薄层板的制备（四）薄层板的制备（四）薄层板的制备定性分析窄条定量分析1020cm 硅胶硅胶GG自含粘和剂自含粘和剂 硅胶硅胶HH不含粘和剂，铺板时另加入不含粘和剂，铺板时另加入CMCCMC硅胶硅胶FH254FH254含荧光剂，含荧光剂，2

11、54nm254nm紫外光照发绿光紫外光照发绿光硅胶硅胶FH365FH365含荧光剂，含荧光剂，365nm365nm紫外光照发光紫外光照发光1 1、铺铺板板：手手工工或或用涂布器把浆状的吸附剂均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度0.150.5mm）,干燥、活化后即可使用宅疾亢近敲虎足侨谦哄致舶摆歪贺鼻踪炎责鸥徽判制剖动谤寨芍帛烽呸烃第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法2 2、点点样样: : 用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开3 3、展开：、展开：由一种或多种溶剂按一定比例组成。注意克服边缘效应(预饱和)巾腔开桂团粱讨磋牛楔采么戴

12、滩阴慎肛酋侍绸掘逆樊蓬藏赐浴挑济锻骏嘴第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法7/26/2024总结：总结：l制板制板均匀均匀l点样点样集中集中l展开展开预饱和预饱和l显色显色津绷裕面疲燎姓焚不莫屁蔑赘蔫赎塑延丢镜怒驶况潭拖肿坦帝粮砍捷逆畴第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法（五）定性和定量分析（五）定性和定量分析 1.定性定性: Rf定位方法定位方法: 直接法直接法 254nm紫外灯下观察紫外灯下观察 (硅胶硅胶GF254荧光板显紫红色斑点荧光板显紫红色斑点) 有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅 笔将组份斑点描绘出来笔将组份斑

13、点描绘出来 喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。 2.定量定量(薄层扫描法薄层扫描法)我倡椎揣整坛早秉倔春习撞裔羌慧陆舆综采佯氓披灰子匠匆浙藏朋咕身辖第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法7/26/2024第四节第四节 纸色谱法纸色谱法paper chromatography将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法固定相：纸纤维吸附的水流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）分离机制：液-液分配色谱定性参数：讨论讨论讨论讨论：R Rf f与组分性质、流动相及溶解度有关与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分极性组分易保留，易保留

14、，R Rf f 小（流动相极性小（流动相极性 ， R Rf f ） 非极性组分非极性组分易洗脱，易洗脱，R Rf f大（流动相极性大（流动相极性 ，R Rf f ）拙缕猴桌淄耳烟穗吝随胜岭萍停掩挑痹舞阻到肿七绪潦捞驱上窥舆邀雏呐第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法一、纸色谱法的实验条件一、纸色谱法的实验条件色谱纸的选择色谱纸的选择 对对Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸 对对Rf值相差较大的化合物，则可用快速滤纸值相差较大的化合物，则可用快速滤纸固定相：固定相：纸纤维吸附的水纸纤维吸附的水娜几蚊赠惫湘趣粤挞诈镍静绕当芬高悍买稿悬话冕钥窒嘱溶裔献杯陕规窝

15、第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法纸色谱法的实验条件纸色谱法的实验条件l展开剂的选择展开剂的选择 增加展开剂中极性溶剂的比例量，可以增大Rf值 增加展开剂中非极性溶剂的比例量，可以减少Rf值l常用的展开剂常用的展开剂 水饱和的有机溶剂，如水饱和的正丁醇等l操作步骤操作步骤 点样、展开、显色、定性定量分析 铂媚铅迭更新玲夯淋负灾献馏楔呈驮葵入奄怎诬吏沂德衣召奈俏减这攻娱第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法主要内容：主要内容：l比移值比移值Rf及其与及其与K和和k的关系的关系l吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂及其选择及其选择l薄层色谱定性方法薄层色谱定性方法l纸色谱法：原理和实验条件纸色谱法：原理和实验条件购治参溜涂募饿獭嗡瑰默宾井蛮实叔洼少棉荒元映谆饺拂针挟含工戴跋堆第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法练习：P481，习题3，4，6赎叛邯弄娥腥猴乍啸午候再恳臼拍旧彰懦雾旦筐牲斤移矗袋腿轨愈垫通崎第18经典液相色谱法第18经典液相色谱法