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1、高效液相色谱仪高效液相色谱仪使用与操作规程使用与操作规程Agilent 1100 HPLC 第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步准准备备开开机机 注意注意事项事项 清洁清洁 关机关机 步步 骤 Agilent1100系系统组成成本系本系统由溶由溶剂输送送泵（四元（四元泵，标配真空脱气机）配真空脱气机）Rheodyne 7725i手手动进样阀柱温箱柱温箱VWD紫外紫外-可可见检测器器Agilent1100色色谱数据数据工作站工作站和和电脑等等组成，另外成，另外还包括打印机、包括打印机、不不间断断电源等源等辅助助设备。 第一步、第一步、准准 备1 、准准备所需的流所需的流动相，用合适的
2、相，用合适的0.45m滤膜膜过滤，超声脱气，超声脱气20min。2 、根据待根据待检样品的需要更品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定合适的洗脱柱（注意方向）和定量量环。3、 配制配制样品和品和标准溶液（也可在平衡系准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适配制），用合适的的0.45m滤膜膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4 、检查仪器各部件的器各部件的电源源线、数据、数据线和和输液管道是否液管道是否连接正接正常。常。 接通接通电源，依次开启不源，依次开启不间断断电源源、真真空脱气机空脱气机、四元四元泵、检测器器，待，待泵和和检测器自器自检结束后，打开束后，打开
3、电脑显示器、主机，示器、主机，最后打开色最后打开色谱工作站工作站。第二步、第二步、开开 机机 一）一）参数参数设定定1、 波波长设定定：2 、流速流速设定：定：3 、流流动相比例相比例设定：定：4、 梯度梯度设定定： 二）二）更更换流流动相并排气泡相并排气泡1： 将吸将吸滤器放入装有准器放入装有准备好的流好的流动相的相的储液瓶液瓶中；中；2 ：顺时针转动泵的排液的排液阀180，打开排液，打开排液阀；3 ：运行运行泵，泵以以3ml/min的流速冲洗的流速冲洗5min（可（可设定）后定）后泵流速流速设为0ml/min；4 ：将排液将排液阀逆逆时针旋旋转适度适度拧紧，关，关闭排液排液阀。5 ：如管路
4、中仍有气泡，如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至重复以上操作直至气泡排尽。气泡排尽。 三）平衡系三）平衡系统用用检验方法方法规定的定的流流动相冲洗系相冲洗系统，一般最少需，一般最少需6倍柱体倍柱体积的流的流动相。相。检查各管路各管路连接接处是否漏液是否漏液，如漏液，如漏液应予以排除。予以排除。观察察泵控制屏幕上的控制屏幕上的压力力值，压力波力波动应不超不超过1MPa。如。如超超过则可初步判断可初步判断为柱前管路仍有气泡，按柱前管路仍有气泡，按检查管路后再检查管路后再操操作。作。观察察基基线变化化。如果冲洗至基。如果冲洗至基线漂移漂移0.01mV/min，噪声，噪声为25mmol/L的缓冲液的缓
5、冲液4.每天冲洗柱每天冲洗柱5.稳定进样条件稳定进样条件,调节流动相调节流动相6.采用保护柱采用保护柱 二、保留时间缩短保留时间缩短 1.流速增加流速增加2.样品超载样品超载3.键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度增加温度增加1.检查泵检查泵,重新设定流速重新设定流速2.降低样品量降低样品量3.流流动动相相PH值值保保持持在在37.5检检查柱的方向查柱的方向4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.柱恒温柱恒温 三、保留时间延长保留时间延长 1.流速下降流速下降2.硅胶柱上活性点变化硅胶柱上活性点变化3.键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度
6、降低温度降低1.1.管路泄漏, ,更换泵密封圈, ,排排除除泵泵内内气泡气泡2.2.用用流流动动相相改改性性剂剂, ,如如加加三三乙乙胺胺, ,或或采采用碱至钝化柱用碱至钝化柱3.3.流流动动相相PHPH值值保保持持在在3 37.57.5检检查查柱柱的的方向方向4.4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.5.柱恒温柱恒温 四、出现肩峰或分叉四、出现肩峰或分叉 1.1.样品体积过大2.2.样品溶剂过强样品溶剂过强3.3.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道4.4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.5.进样器损坏进样器损坏1.1.用流动相配样, ,总的样品体积小于第一峰的15%1
7、5%2.2.采用较弱的样品溶剂采用较弱的样品溶剂3.3.更换色谱柱更换色谱柱, ,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件4.4.更更换换烧烧结结不不锈锈钢钢, ,加加在在线线过过滤滤器器, ,过过滤滤样样品品5.5.更换进样器转子更换进样器转子 五、鬼峰鬼峰 1.进样阀残余峰进样阀残余峰2.样品中未知物样品中未知物3.柱未平衡柱未平衡4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)氧化氧化(肽谱肽谱)5.水污染水污染(反相反相)1.每每次次用用后后用用强强溶溶剂剂清清洗洗阀阀,改改进进阀阀和和样样品品的清洗的清洗2.处理样品处理样品3.重重新新平平衡衡柱柱,用用流流动动相相作作样样品品溶溶剂剂(尤尤其其是是离子对
8、色谱离子对色谱)4.每天新配每天新配,用抗氧化剂用抗氧化剂5.通通过过变变化化平平衡衡时时间间检检查查水水质质量量，用用HPLC级的水级的水 六、六、 基线噪声基线噪声 1.气泡气泡(尖锐峰尖锐峰)2.污染污染(随机噪声随机噪声)3.检测器灯连续噪声检测器灯连续噪声4.电干扰电干扰(偶然噪声偶然噪声)5.检测器中有气泡检测器中有气泡1.1.流动相脱气, ,加柱后背压2.2.清洗柱清洗柱, ,净化样品净化样品, ,用用HPLCHPLC级试剂级试剂3.3.更换氘灯更换氘灯4.4.采用稳压电源采用稳压电源, ,检查干扰的来源检查干扰的来源( (如水浴等如水浴等) )5.5.流动相脱气流动相脱气, ,
9、加柱后背压加柱后背压 七、峰拖尾峰拖尾 1.柱超载柱超载2.峰干扰峰干扰3.硅羟基作用硅羟基作用4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道6.死体积或柱外体积过大死体积或柱外体积过大7.柱效下降柱效下降1.降低样品量降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相增加柱直径采用较高容量的固定相2.清洁样品清洁样品,调整流动相调整流动相3.加加三三乙乙胺胺,用用碱碱致致钝钝化化柱柱增增加加缓缓冲冲液液或或盐盐的的浓浓度度降低流动相降低流动相PH值值,钝化样品钝化样品4.更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢,加在线过滤器加在线过滤器,过滤样品过滤样品5.更换色谱柱更换色
10、谱柱,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件6.连连接接点点降降至至最最低低,对对所所有有连连接接点点作作合合适适调调整整,尽尽可可能采用细内径的连接管能采用细内径的连接管7.用较低腐蚀条件用较低腐蚀条件,更换柱更换柱,采用保护柱采用保护柱 八、峰展宽峰展宽 1.进样体积过大进样体积过大2.在进样阀中造成峰扩展在进样阀中造成峰扩展3.数据系统采样速率太慢数据系统采样速率太慢4.检测器时间常数过大检测器时间常数过大1. 1. 用流动相配样, ,总总的的样样品品体体积积小小于第一峰的于第一峰的15%15%2.2.进样前后排出气泡以降低扩散进样前后排出气泡以降低扩散3.3.设定速率应是每峰大于设定速率
11、应是每峰大于1010点点4.4.设设定定时时间间常常数数为为感感兴兴趣趣第第一一峰峰半半宽的宽的10%10% 八、峰展宽峰展宽5.流动相粘度过高流动相粘度过高6.检测池体积过大检测池体积过大7.保留时间过长保留时间过长8.柱外体积过大柱外体积过大9.样品过载样品过载5.5.增加柱温, ,采用低粘度流动相采用低粘度流动相6.6.用小体积池用小体积池, ,卸下热交换器卸下热交换器7.7.等等度度洗洗脱脱时时增增加加溶溶剂剂含含量量也也可可用用梯梯度度洗脱洗脱8.8.将连接管径和连接管长度降至最小将连接管径和连接管长度降至最小9.9.进小浓度小体积样品进小浓度小体积样品 E-mail：Tel： 0791-7118657（Office) 0791-7118659 (Lab.)
