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1、第九章 维生素类药物分析一、定义：维生素是维持人体正常代谢功能所必需的生物活性物质，主要用于治疗维生素缺乏症和营养补充。二、分类： 脂溶性维生素：VA 、VE 、 VD 水溶性维生素：VB1 、VC 第一节 脂溶性维生素类药物的分析一、维生素A的分析【一】结构与性质1、结构：共轭多烯侧链的环己烯来源：鱼肝油有效成分：VA1 全反式活性最高，干扰成分：活性较低或无活性 VA2 去氢VA：生物效价仅为维生素A140 VA3 去水VA：活性较低 鲸醇：无生物活性2、性质（1）溶解性：易溶于氯仿、乙醚等，不溶于水。（2）易氧化变质：有多个不饱和键，性质不稳定。易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解在
2、加热和金属离子存在时更易氧化变质。生成无活性的环氧化物、VA醛及VA酸（3）能与三氯化锑呈色：产生不稳定的蓝色（4）具紫外吸收：因具有共轭多烯侧链结构在325nm328nm处有最大吸收。【二】、鉴别试验1、SbCl3反应VA SbCl3 氯仿 蓝色 紫红色2、紫外吸收光谱：VA无水乙醇液在326nm有最大吸收VA 盐酸催化 去水VA （VA3）发生红移，在340390nm间出现3个max可用于区别二者。3、TLC法：硅胶G，环己烷乙醚为流动相，喷SbCl3，比较供试品与对照品所显蓝色斑点。【三】含量测定（紫外分光光度法三点校正法）(一）原因： VA在325328nm波长之间具有最大吸收峰，可采
3、用紫外分光光度法测定含量。其max随溶剂不同而异（二）采用三点校正法目的：可消除VA原料及氧化产物VA2 、VA3 、VA环氧化物、 VA醛、 VA酸等杂质干扰；消除 VA制剂中稀释用油的干扰。（三）原理：本法是在三个波长处测定A值，据校正公式计算出A校正，再计算含量，故称“三点校正法”。其原理主要基于以下两点: A(1)杂质的吸收在310340nm波长 范围内呈一条直线，且随波长增大，吸收度变小；(2)物质对光的吸收具有加和性。（四）三点波长的选择法 2 1 31、第1点:选维生素A的最大吸收波长（即1）；2、第2点和第3点:在最大吸收波长的两侧各选一点（即2和3)(1)等波长差法 在1的左
4、右各选一点为2和3，使3 1 1 2。中国药典（2000版)测定维生素A醋酸酯时，规定1328nm, 2316nm, 3340nm.(2)等吸收度法 在1的左右各选一点为2和3，使A 2=A 3=6/7A 1。中国药典(2000版),测定维生素A醇时，规定1325nm，2310nm, 3334nm.（五）杂质吸收 对维生A的测定有影响的杂质主要有：1、维生素A2和维生素A3。2、维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛和维生素A酸。3、维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇。4、维生素A的异构体。5、合成时产生的中间体。 以上这些杂质在310340nm波长范围内有吸收，因此，在测定维生素
5、A含量时，必须考虑这些杂质的干扰，三点校正法可以消除这些杂质的影响。（六）方法： （第一法）适用： VA供试品中干扰测定的杂质较少时1、溶液配制与测定 取VA醋酸酯 加环己烷 精密称定 制成溶液（915IU/ml)在300、316、328、340、360五个波长处测定A值。2、计算各个吸收度与A 328的比值3、比较确定A值：所得吸收度比值与规定值相比 1）若最大吸收峰在326329nm之间，显各个差值不超过0.02,则用A328代入公式计算 2）若比值差值有一个超过0.02，则计算： A 328（校正） 3. 52(2 A328 A316 A340 )若 100% 所得值3以内，则不用A 3
6、28（校正），仍以未校正的吸收度值计算含量 若A328（校正）A328 100% 在-15%-3%之间 A328则用A328（校正）计算含量。若A328（校正）A328 100% -15% 或+3%之间 A328且吸收峰不在326329nm,则所含杂质太多，需用第二法测定含量。A 328（校正）A328 A328 第二法 A328(校正） A328 第二法 -15 -3% 3% 第二法(皂化法）皂化：加乙醇、50KOHVA醇 乙醚 VA醇在醚层 (异丙醇）植物油脂肪酸钾1）若max在323327nm，且A300/A3250.73则：A 325(校正）6.815A 325 4.260A 310
7、-A 334IU/g= E1830（七）计算因为本品是VA醋酸酯的植物油溶液，其含量用生物效价来表示（IU）效价：1g溶液中含有多少VA生物活性单位数。1、求 E = 注意：A值为A328或A328（校正）2、求效价效价(U/g) E 1900 式中：1900指VA醋酸酯在环己烷中测定的换算因数 A 1% C换算因数：为每1个E数值所相当的效价换算因数因为：1 IU = 0.344g维生素A醋酸酯所以1g维生素A醋酸酯相当的IU为：1106 g/ 0.344 = 2907000 IU 则换算因数 2907000/1530= 1900VA在环己烷中E328nm1530效价（IU/g) E(max
8、)3、标示量 效价 100 标示量标示量 例：测定维生素AD胶丸三氯化锑比色法测定VA含量特点：简便、迅速，但呈色不稳定A1%D1900W平W标示量习题一：（1）紫外分光光度法测定维生素A醋酸酯胶丸含量，取内容物39.1mg，加环己烷溶解并稀释至100ml，在下列波长下测得吸收度为：已知胶丸内容物平均重量为0.08736g，其标示量为每丸3000IU。试求占标示量的百分含量?（94.9%）习题二维生素A醋酸酯胶丸的含量测定，取内容物W，加环己烷溶解并稀释至10ml。摇匀，精密量取0.1ml，再加环己烷稀释至10ml，使其浓度为915IU/ml。已知内容物平均重量为80.0mg，其标示量为每丸1
9、0 000IU。试计算取样量（W）的范围是多少？二、维生素D的分析1、结构与性质溶解性：脂溶性不稳定性：烯键易氧化旋光性：显色反应：醋酐浓硫酸显色紫外吸收：二、鉴别试验醋酐浓硫酸：黄色-红色-紫色-绿色 三氯化铁橙红色-粉红色维生素D2D3的区分反应：溶于乙醇后与85%硫酸反应D2显红色，D3显黄色三、含量测定三、维生素E的分析1、结构与性质： 结构：苯丙二氢吡喃醇衍生物，又称生育酚； 性质：（1）溶解性：脂溶性（2）易被氧化（3）水解性：在酸性或碱性液中加热水解生成游离生育酚（4）具有紫外吸收：结构中含苯环2、鉴别：（1）硝酸反应：氧化显色本品+无水乙醇HNO375加热15 橙红色（2）水解
10、后氧化反应：本品KOH醇液生育酚加水乙醚 共热 稀释 提取 加2,2-联吡啶血红色 FeCl3醇液3、特殊杂质游离生育酚检查来源：制备过程中未酯化完全的生育酚方法：铈量法利用生育酚的还原性硫酸铈滴定液（0.01mol/L)滴定，以二苯胺为指示剂，消耗硫酸铈不得超过1.0ml4、含量测定（1）铈量法：利用其水解产物易氧化性质VE 酸性 水解 游离生育酚滴定剂：硫酸铈（0.01mol/l)指示剂：二苯胺，由亮黄转变为灰紫加乙醇作用：提高水解产物溶解度（2）气相色谱法（中国药典2000年版）A、色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：玻璃柱，内填硅藻土 固定液：硅酮（OV17）涂布浓度为2 柱温：为265
11、 载气：氮气；检测器：氢火焰离子化检测器FID；理论塔板数按维生素E峰计算应不低于500；维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。B、校正因子测定 内标溶液配制：取正三十二烷适量，加正乙烷溶解并稀释成每1ml中含1.0mg的溶液，摇匀，即得另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取13l注入气相色谱仪，计算校正因子f。C、样品测定方法 取本品20mg,精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解；取13l注入气相色谱仪，测定，计算，即得。D、计算法 校正因子(f) = 式中，As内标物质的峰面积和峰高；
12、 AR对照品的峰面积或峰高；ms加入内标物质的量,mg ;mR加入对照品量,mg. 含量（mx)= f式中，Ax-供试品峰面积或峰高；mx-供试品的量mg.（3）高效液相色谱法As/msAR/mR AxAs/ms第二节水溶性维生素类药物的分析一、维生素B1（一）结构与性质结构：由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵化合物，性质：（1）溶解性：水溶，水溶液呈酸性（2）硫色素反应：噻唑环可开环，再与嘧啶环上氨基缩合：在碱性中遇氧化剂，如铁氰化钾，可被氧化为具有荧光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈蓝色荧光。 （3）与生物碱沉淀试剂反应（4）具共轭结构，有紫外特征吸收（二）鉴别试验1、硫色素反应（V
13、B1专属反应）现象：醇层显强烈的蓝色荧光条件：碱性（NaOH)+铁氰化钾+正丁醇2、沉淀反应(1)维生素B1与碘生成红色沉淀(2)维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀(3)维生素B1与硅钨酸生成白色沉淀3、硝酸铅反应4、氯化物反应（三）含量测定非水滴定法：盐酸盐干扰、反应摩尔比紫外分光光度法：硫色素荧光法：二、维生素C（一）结构 VC分子结构中具有1、烯二醇结构 2、内脂环3、具二个手性碳原子（C4、C5）（二）性质1、溶解性：水溶，水溶液呈酸性。2、分子中二烯醇基具极强的还原性，易被氧化为二酮基而成为去氢VC，加H又还原为VC3、C3-OH受共轭效应的影响，酸性较强(pK1=4.17)C2-O
14、H 酸性极弱（ pK2=11.5)，故VC一般表现为一元酸。4、VC有共轭双键，稀矿酸溶液中，max = 245nm5、分子中有两个手性碳，故有四个光学异构体。6、糖的性质（三）鉴别试验1、与AgNO3反应：（1）原理：VC分子中有二烯醇基，具强还原性。（2）现象：产生黑色沉淀 2、还原二氯靛酚（1） 原理：VC分子中有二烯醇基，具强还原性。可还原2.6二氯靛酚。（2）现象：溶液由蓝色 无色3、碱性酒石酸铜反应现象：生成红色氧化亚铜沉淀4、糖类性质反应5、红外吸收光谱（四）含量测定（直接碘量法）1、原理2、方法： 本品 稀HAc 淀粉 I2（0.1mol/l)滴定 新沸冷水 溶解 指示液 呈蓝色30s不褪色3、计算：滴定度： T=b/t*Ct*Mb=8.806(mg/ml)含量百分比： C6H8O6%=VTF/W样*100%4、讨论（1）加入稀HAc:使滴定在酸性溶液中进行，在酸性介质中Vc 受空气中氧的氧化作用减慢。（2）加新沸冷水：减少水中溶解氧对测定。（3）为消除辅料对测定干扰，滴定前作前处理。片剂：溶解后滤过 取滤液测定注射液：加丙酮，消除抗氧剂Na2S2O5的干扰 Na2S2O5 + H2O 2NaHSO3NaHSO3 + (CH3)2C=O (CH3)2CSO3Na OH
