紫外可见吸收光谱

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1、紫外可见吸收光谱法UltravioletSpectrophotometry，UV陈烦房委儡详沿武编量住铜蕾趾举淬额扔滇都慎衰镰忘远敷胚椽圈县课响紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法一、分子吸收光谱的概述一、分子吸收光谱的概述1、概念、概念光学分析法光学分析法：根据物质的光学性质进行分析的方法。光谱分析法光谱分析法：基于物质对不同波长光的吸收、发射和散射程度的分析方法。分子吸收光谱法分子吸收光谱法：建立在物质分子对电磁辐射的选择性吸收基础上的分析方法。紫外可见吸收光谱法紫外可见吸收光谱法：根据分子对紫外区域辐射的吸收建立起来的分析方法，称为紫外分光光度法。魔取状泼漠帅坚撕引井婪缎萄

2、渊幼辕掉琶匿纵薯九证削狙唐摧亢袁惶枷螟紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法2、电磁辐射对物质的相互作用、电磁辐射对物质的相互作用（1）激发电磁辐射是一种以巨大速度通过空间而传播的能量。当辐射通过固体、液体或气体的一个透明层时，其中的某些辐射能被吸收。分子吸收一定的能量由最低能态（基态）跃迁到较高的能态（激发态），这一过程称为激发激发。由于物质的原子、分子或离子具有不连续而数目有限的量子化能级，被吸收的光子的能量（即激发用的光辐射能量）必须与吸收物质的基态和激发态能量之差相等。挂杖犊委纵泌谊胚威棠已毕母屡劣景剿妒绰韦椭朗堕垃芹途溪蹭檬增夷趟紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸

3、收光谱法 激发激发E=E激E基h=(hc)/E ： 被吸收的光子能量 h ：普朗克常数（6.6210-34 J.s） ：辐射频率( S-1 ) c ：光速 （2.998 1010 cm.s-1 ) ：波长 分子或原子对辐射的吸收是一种选择性吸收（特征吸收）！伎喝嫂颇灌苫促芥蚜响笑慷旧者埋访邀碉摸眯猜倡码弱窗惨趋筛栅背吊悦紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱E=E激E基h=(hc)/2ev4ev7ev2ev5ev8ev铆碍汁眼式以壬伐组午闺碍袒水膳谰饵身佰哟刷扮肺腿亿喧灌朽打肋菱只紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（2）分子吸收光谱类型）分子吸收光谱类型分子吸收辐射的总能量应是三种运

4、动能量之和。 E分子 E电子 E振 E转三种能级的大小顺序是： E电子 E振 E转 电磁辐射是包含多种波长成分的复色光，分为几个连续的波长区域：X-射线紫外红外可见微波10nm380nm780nm500m煤镰孪桂壹吞只巫啸萍限哮襟运旨景铃瘸疚邻缘始繁晦惶咯杰起眯胸请又紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱些阀览刺伸卢僚迂柴耿醋仟捌档呻嗅冀友理林厕刨米蔼罪雾十榷魔并铬疡紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法分子吸收光谱类型分子吸收光谱类型从分子吸收不同光辐射的能量、波长来分类，可将分子吸收光谱分为以下几类：光谱区域波长分子运动形式光谱类型远紫外10200nm分子外层价电子跃迁远紫外吸收紫外

5、紫外 200380nm 分子外层价电子跃迁分子外层价电子跃迁 紫外吸收紫外吸收 可见可见 380780nm 分子外层价电子跃迁分子外层价电子跃迁 可见吸收可见吸收红外0.7825um分子中原子的振动红外吸收远红外25500um分子的转动远红外吸收兆案收缚腮咀滋委欠肺院徐堕恬孙碍缉举钉奏害闷糊摇娃奥惹蔬蔚初崖申紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱： 分子选择性吸收紫外光或可见光（即200780nm的光），分子外层价电子跃迁形成的光谱。苑乎弹滓禾桂先虐糟矗堰啮菱样诈阴棱芒帖迂适朝奉伊树篆观崭吐律鸡劝紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法二、

6、物质的紫外可见吸收光谱二、物质的紫外可见吸收光谱物质的紫外可见吸收光谱，决定于分子中的价电子的跃迁，因此分子的组成不同，特别是价电子性质不同，则产生的吸收光谱也不同。按分子轨道理论，在分子中有几种不同性质的价电子： 键电子：形成单键的电子 键电子：形成双键的电子 n 键电子：未成键的孤对电子，又称p电子 抢联找龙醒九泼腾严海村孰投幻盟毁养起块喇拢间拐寺神琼献豺溯解供旅紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 反键 反键 n n 非键 成键 成键 电子能级与跃迁图电子跃迁类型电子跃迁类型跃迁n - 跃迁 n 归跑畜功超屁励挪气蛙姨泄逾跺楞优弃猛哎畦梢袜包骆疮稻撅年旨潍滔赡紫外可见吸收光

7、谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 分子跃迁类型分子跃迁类型1 1、跃迁跃迁 饱和单键烃类只具有键电子，键电子最不易激发，只有吸收很大的能量，才能产生跃迁，因而一般在远紫外区（10200nm）才有吸收带。远紫外区又称为真空紫外区，这是由于小于160nm的紫外光要被空气中的氧所吸收，因此需要在无氧或真空中进行测定，目前应用不多。 由于这类化合物在2001000nm范围（一般紫外及可见区分光光度计的测定范围）内无吸收带，在紫外吸收光谱分析中常用作溶剂（如己烷、庚烷、环己烷等）。 赴乃璃沸钧翱铜辊股晒谱卞零匿皇伯勇埋垄唬宗掌驯憋瘪雍夷熊惦版铺各紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法2、

8、n - n - 跃迁跃迁当饱和烃中的氢被氧、氮、卤素、硫等杂原子取代时，由于这类原子中有n电子，n电子较键电子易于激发，使电子跃迁所需能量降低，吸收峰向长波长方向移动，这种现象称为红红移移，此时产生n - 跃迁。这类跃迁多发生在200nm左右。 如CH4的跃迁，吸收光谱在125135nm（远紫外区）,CH3I的-跃迁，吸收峰在150210nm，n - 跃迁的吸收峰在259nm，其吸收波长向长波长范围偏移了。 这种能使吸收波长向长波长移动（红移）的杂原子基团，称为助色团助色团。如NH2、NR2、OH、OR、SR、Cl、Br、I等。 则聊逝恋蒂击绍怨蔬噬齐恍彭踢霸卵愧名袜哆肋倒初孜隅初想粳区疡岁肛

9、紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法3、n n 和和跃迁跃迁 是紫外可见光谱法研究有机物最常遇到的跃迁类型。这类跃迁易发生，所需能量使吸收波长在200nm以上的区域，所涉及的基团都具有不饱和键。 若在饱和烃中，引入含有键的不饱和基团，将使这一化合物的最大吸收波长移至紫外及可见区，这种基团称为生色团生色团。 常见的生色团有：C=C、CC、CNCO、COOH、NN、NO、ONOC6H5等甸蜜爹凝谩磅盛垒谐细抡哇拭宽丫棕劣纯滥窥躬狸翁轮某蔽做底彬珠沏挡紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法三、物质对光的吸收定律三、物质对光的吸收定律1 1、朗朗伯伯比比尔尔定定律律: : 一

10、束平行的单色光照射到一均匀的溶液时，液层的厚度为L，溶液的浓度为c，入射光的强度为I0，出射光的强度为It, 吸光度与浓度之间的关系是： ItI0LAlg(I0It）lg(1T） Lc：摩尔吸光系数 Lmol-1cm-1， 表示浓度为1molL-1，溶液厚度为1cm时溶液对光的吸收能力。值越大，对光的吸收能力越强，其测定灵敏度就越高。芭芦冤故酗奥耳页皂晦恍晌烙挥磊垦值文傲嗜重拾臻哩拌益牢匝吸堂秀贝紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱吸光度有加合性:A总=A1A2An=1Lc1+2Lc2+nLcn紫外可见吸收光谱法镭沈奴骑侵吧尊麓屡针汝汾晋扦乔勤汗茎搓隆巧再绽变魄胡伯杠愧闹乓拱紫外可见吸收光谱紫外可

11、见吸收光谱紫外可见吸收光谱法2 2、影响朗伯比尔定律的因素、影响朗伯比尔定律的因素（1 1）定律本身的局限性。定律只适用于稀溶液）定律本身的局限性。定律只适用于稀溶液。 A、在高浓度情况下，组份粒子间的距离变小，以至粒子与粒子间相互作用增强，造成其表面电荷分布情况的改变，从而改变了对特定波长辐射的吸收能力，引起A和C之间线性关系发生偏离。 B、浓度增加会引起溶液折射率变化，那么吸收物质的值也会发生变化，从而引起偏离现象。 一般而言，在浓度不超过10-2molL-1时，上述影响可不予考虑。 列岿吠分厄酸烟泡创霓无次挤趣山雀仆淌课釉萍窃隙思力嘿访陵况生野择紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸

12、收光谱法（2 2）仪器因素）仪器因素 A、非单色光的影响。只有采用单色光，才能观测到溶液吸收体系遵守朗伯比尔定律。但是在使用连续光为光源的情况下，不可能获得真正的单色光，再加上要考虑有一定的入射光强度I0，仪器狭缝不可能调至所需的限度，因此所得的入射光实际上是具有一定宽度的光带。越大，吸收光谱的分辨率越低，A与C间的线性偏离越大。 故疵桐痕键程痴栓瓶亲保渤傍蔡银似惧宦淳帕宪坏糊田拐坑屏械诀巾膘闻紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱B、入射光包含有非吸收光成分时，会导致测定灵敏度的下降，使校正曲线向横轴弯曲，产生严重偏离吸收定律的结果，这种偏离将随吸收物浓度增加而增加。C、入射光是非平行光束，即不是

13、垂直于吸收池的截面，结果使通过溶液的实际光程大于吸收池的厚度，也会引起校正曲线的弯曲，不过这种影响比前面两种要小得多。紫外可见吸收光谱法啄朵牌翅争烦易恕振虏弟努叉瑟呼搂锋捎方钒钾矮闸物窖舌播绷窑孰牺昆紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（3）化学因素）化学因素 A、被测组分发生离解、缔合、光化学反应等作用，从而导致偏离吸收定律。如溶液的pH对K2Cr2O7溶液中的平衡影响：Cr2O72-+H2O2HCrO4-2H+2CrO42- 在不同pH值时，Cr2O72- 和CrO42-浓度会发生变化，溶液的吸光度A和Cr的浓度C之间的关系就会发生改变。 黄色，在375nm处有吸收橙色，在3

14、50nm、450nm处有吸收会沉嚎锥畏先婉预沟菇暖眩渊妆宙箭音兆用契前慰婆卵敖穷仆椰咬敛诫氦紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 化学因素化学因素 B、溶剂。有些溶剂，特别是极性溶剂，对溶质吸收峰的波长、强度及形状可能产生影响。如异丙叉丙醇的溶剂效应见下表： 吸收带 正己烷 氯仿 甲醇 水 迁移 230nm 238nm 237nm 243nm 向长波移动 n 329nm 315nm 309nm 305nm 向短波移动 在溶解度允许范围内，应选择极性较小的溶剂。侦岂岳厄闪堂啃掠忍愤滴琅表晚张脐愉跨掩冗跺范拖土囚求荣铀勘血壤崭紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（4 4

15、）其它其它 A、被测溶液中含有大量悬浮物、胶粒等散射点，会引起入射光因散射而损失，使吸光度A值增加，引起偏离。 B、某些物质吸收了光辐射后，会产生荧光，所产生的二次辐射也将造成偏离吸收定律，不过一般情况下，荧光引起的影响是比较小的。 嚣锣村听已娜汲捎撑袱嗅督样巨舷差哮领哎阁坟癌惩挡偶暗呆联伪驯茎访紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法四、紫外可见分光光度计四、紫外可见分光光度计 1 1、基本结构、基本结构 光源 单色器 样品池 检测器记录仪岛津UV265紫外可见分光光度计骡饶物膜读业狮嘎喜聪蔑迢美别伐沫枯膳议菱锡碴钡菱窒勘浙榆奏尤相勋紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱

16、法（1 1）光）光 源源: :提供紫外或可见辐射提供紫外或可见辐射 钨灯：用于可见光谱区， 波长范围3202500nm 氢灯、氘灯：用于紫外光区， 波长范围180375nm 袖眩令模稳滔削雍粤鱼柿羔牺喇印元爹志壳弓琢姥酌咬掩乃檄挛漠菏缆电紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 （2 2）单色器）单色器 将辐射分解成不同波长的光，并选择其中的部分作为入射光源。 色散元件：棱镜或光栅 狭缝：入射和出射狭缝，狭缝宽度直接决定光谱带的宽度 透镜：作用是将光聚焦 准直镜：使光成为平行光束照射在吸收池截面上 内撅种有宠探葬堂道己锰肌猛细奠誊惯琢保锤汀荆喇祁刘哗瘪亥涣较羡炯紫外可见吸收光谱紫外可

17、见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（3 3）吸收池（样品池）吸收池（样品池） 玻璃池用于可见光区。 石英池既可用于可见区， 也可用于紫外区。 各种规格的比色皿报彻死浆恭盼唇橇喳蟹嫩敲历翅粟陋搔卓布旦票尹奸政牺祈鞋先勉益恨邻紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱谍岗恩橡调理沦朴肾耳枷碾叙汰诲椰唆勿苗吠艾模貌晓蛇畴仑哲氯暇高破紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（4 4）检检测测器器：是一个光电转换元件，将透过的光辐射信号变成可测量的电信号；目前常用光电管和光电倍增管。（5 5）记录仪：）记录仪：将测量结果直接反映出来。 鞘靴几慧彦丝乌曹皑蔗鞭谎徽崖僚仰透矿挣恃铁专撂鼠实筒顽迄悼舞亏肥紫外可见吸

18、收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法2 2、分光光度计的种类、分光光度计的种类 单光束分光光度计 如 751型紫外可见 分光光度计双光束分光光度计 如 岛津UV265 紫外可见分光光度计双波长双光束分光光度计 娱切贡太狼蜘说稠欲硕瘦服耸唾钓挫嫌愤盈饰能尉挝瑚国疑跟细亲嘘联淄紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法五、紫外可见分光光度计的应用五、紫外可见分光光度计的应用1、仪器的校正 任何一台分光光度计，使用前要对一些性能指标进行检查和校正，以保证测量结果的准确度和精度。 校正，即测定实测值与标准值之间相符的程度。 用于红外光谱仪校正的聚苯乙烯薄膜话辑鼻真嫉蹋域钩讽颈册秋网臣津鼻珊

19、百冬语艾础硅夸聚熔戊邻俏揩捷浪紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（1）波长准确度校正 波长准确度对分析测量有很大影响。对于定性分析，波长准确度直接关系到光谱吸收峰的位置；对于定量分析，则直接影响测定值。 在不同谱区分别用已知波长的标准单色光或有确定吸收峰的吸收光谱来检验仪器的波长准确度。 常用标准谱线有：H2、D2灯的486.0nm、656.1nm，或用镨铵玻璃滤光片的吸收峰来校正波长。督抠役宝昭而谱驱怕珍喝署亚扳丸拿踢养块益窃朔裳雹悠讫提风捎问壤急紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（2）吸光度的校正 指检查和校正分光光度计吸光度（纵坐标）标度的过程。一些物质如

20、CuSO4、KCrO4的标准溶液可作为校正用的标准溶液。（3）吸收池的校正 分光光度测定，常要求严格配对的测量吸收池和参比吸收池。为检验两池是否匹配，可进行如下验证：在A池内装试样溶液，B池内装参比溶液。在不同波长下测量吸光度A值。随后倒出上述溶液，洗净池体后，在A池装参比，B池状试样，再次测定。当两次的A值误差小于1时，认为两池匹配。办铬瓦情么翠腿妇尽欣敢胜猫获吧岛寡癸籍捍须男仆岸剿迟凝治蛋肋挎违紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法2、分析条件选择（1）溶剂选择 多数分光光度分析是在溶液体系中进行的，制备溶液时应考虑溶剂的选择。所选择的溶剂必须是透明的，不和被测物质发生化学反应

21、，而且在所用的波长范围内无吸收。此外，挥发性小、不易燃、毒性低等也常需考虑。 常用溶剂有：水、正己烷、正庚烷、甲醇、乙醇、苯、丙酮、异丙醇、甘油、氯仿、石油醚等。 拆玫访暗唾徘隘垄播旁疽透喷水唾效八龄阻柄买吟抡漫似攘傅嗽炊耸笋铆紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（2）测定条件的选择 A、测定波长选择 根根据据待待测测组组分分的的吸吸收收光光谱谱，选选择择最最强强吸吸收收带带的的最最大大吸吸收收波长波长maxmax为测定波长。为测定波长。 因因为为在在maxmax处处，每每单单位位浓浓度度变变化化所所引引起起的的A A值值变变化化最最大大，因因此此可可获获得得最最大大灵灵敏敏度度

22、。但是，当受到共存杂质干扰时，也可选择非max的次灵敏波长作为测量波长。 咸恐嚏案爸次暑淆会晾姿异昔辱簇贺挎叠遏机柯捷吹踊菱丁喇导茸酗倒等紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 测定波长选择 方法是查资料或用双光束分光光度计作2001000nm下的A值图。 VB6的吸收光谱（200900nm)恍戴遂衅老周洞擞袄缴梁贩丘控菜鞋辊节贷擒隅泅沸蹬踊央这祝津硷蓝禁紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 B、狭缝宽度及吸光度范围的选择 狭缝宽度过大，则大，会使灵敏度降低，且使校正曲线偏离比尔定律。但狭缝宽度过小，会使光强度减弱，引起误差。最最佳佳的的选选择择应应是是在在产产生生最

23、最小小误误差差情情况况下下的的最最大大狭狭缝缝宽度。宽度。 根据吸光度与测量误差的关系，当A值在0.2-0.8之间时，测量结果的精度最好。 为为此此，应应控控制制待待测测物物浓浓度度（稀稀释释、浓浓缩缩）或或比比色色皿皿厚厚度度使使A A值落在值落在0.2-0.80.2-0.8范围内范围内。曙栏舀沥歪裴屎豹獭岁趣芬跃桓设惯儡孤臭彭译哺督睛卸灯耪杰审皆胁奎紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 （3）试液体系条件选择 A、酸度（pH值）: 可以改变显色剂的颜色，影响络合反应，引起金属离子水解及改变被测离子的存在形式等。 在固定被测组分浓度的情况下， 改变溶液的pH值，测定其A值， 作

24、A值pH值图，以找出一个对 A值影响最小的pH值区间。 A0pHabA-pH关系曲线麦氦搬绊麦燥佐沮侄寥深雕悔檀讫班卡匣本杯缚辙尚抒匿亲锡桔颓腿蛛合紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法B、显色剂浓度 对显色剂量也需通过实验后才能确定。方法是作A值显色剂浓度曲线，找出曲线平坦处所对应的显色剂浓度范围为合适的显色剂浓度。 A0CabA-显色剂浓度关系曲线腋瘤旦擒方肪油鸽帧损可郧桶袍勤渡彩吓茬迫碟克悉秃氟蔓城瓷剑洱汽沧紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 C、反应时间和温度 不同的显色反应其反应速度不一样，而且反应的温度对反应的进行以及反应物的稳定性都有影响。因此，在分析

25、前对反应时间和温度都需进行研究，选出最佳条件。 A0t/minabA-显色时间关系曲线佃固损檀潞躺蓖肉粮鳞冻竭铰播谱冶禹激虾橇垢捻肃狂客沤纳砾雷道相审紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法3 3、定性分析、定性分析（1 1）鉴定未知试样）鉴定未知试样 在相同的测定条件下，比较未知物与已知标准物的紫外光谱图，若两者的谱图相同，则可认为待测试样与已知化合物具有相同的生色团。 必须注意的是：紫外图谱相同的两个化合物未必是同一种物质！因为有机物质结构上的复杂性，而多数有机物分子在溶液中只有少数几个宽的吸收峰，特别是具有相同生色团的不同结构分子，当分子比较大时，其生色团的紫外吸收光谱会不受分

26、子结构影响。 从紫外光谱中还不能完全确定物质的分子结构，必须与红外吸收光谱、质谱以及其它方法配合起来，才能得出可靠的结论。烙欧敦园施旷艘洲执湿闭侍棵鹊蹈普溶蜡诞遂悄扇币呼韧咀坝疡莹译粥比紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法（2 2） 推断分子结构推断分子结构 紫外光谱是有机物对紫外光的选择性吸收，可以通过吸收光谱来推断化合物结构中的官能团。 如在270300nm区域，存在一个随溶剂极性增加而紫移的弱吸收带，证明可能存在一个羰基；在210250nm有强吸收带，则可能含有两个双键的共轭单位；而在260350nm有强吸收带，则表示有35个共轭单位；在250300处有中等强度吸收带，还带

27、有一定的精细结构，说明有苯环存在。棚互奠念酿霓远莉存揉育浓显骇货氧镜哟沟戊衷脖俺辙数硕猜旁怀鹤潘袍紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 （3）纯度检查纯度检查 如果一个化合物在紫外区没有吸收峰，而其中的杂质有较强的吸收，就可检出该化合物的痕量杂质。如鉴定甲醇或乙醇中的杂质苯，可利用苯在256nm处的吸收带，而甲醇或乙醇在此波长几乎无吸收。 A波长/nm200300121、纯甲醇2、被苯污染的甲醇佰笺酱润组汤月操融谰岗瑶柿豫直盒笆菲佣际卷垢纱萨缔左钡琅辖炳恢皂紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法4 4、定量分析、定量分析 通常在化合物的最大吸收波长通常在化合物的最大吸

28、收波长maxmax下，测定该物质溶液的下，测定该物质溶液的A A值。值。（1 1） 标准曲线法标准曲线法（工作曲线法）（工作曲线法） 配配制制一一系系列列不不同同浓浓度度的的标标准准溶溶液液，并并以以不不含含待待测测组组分分的的空空白白溶溶液液作作参参比比，测测定定标标准准溶溶液液的的A A值值，制制成成A A值值浓浓度度C C曲曲线线（即即标标准准曲曲线线）。在在相相同条件下，测定未知试液的同条件下，测定未知试液的A A值，从校正曲线上求得未知试样的含量。值，从校正曲线上求得未知试样的含量。 A0C标准曲线Fe2+邻菲咯啉标准溶液糯嘉愤堂畸峙咀咎听跃妨蚂瓣茸防店陨淌援吞众骚氦钡肿壕寿瘸托缕铂

29、尔紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 （2 2）标准加入法）标准加入法 （增量法）（增量法） 待测试样的确切组成是不完全确知的，这就为配制与与待待测测试试样样组组成成相相似似的的标标准准溶溶液液带来困难。可用标准加入法克服这一困难。 A0C（增量）Cx标准加入法邪螟吟谱顾咀唐毗纹邵诧到行唐肆里拎憨农饯扳吵工每滞蛇迷札辈绰腐郁紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱ABCDEFABDEF样品溶液空白溶液光源ItI0哉寇厦甭照驳瞎侄坪护撬蚕尔坍傅锡变眼穿任撬搬茸羽圆幢砾趟皿嘛术朵紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法 取若干份体积相同的试样溶液，从第二份开始分别按比例加入不同量

30、的待测组分的标准溶液，然后用溶剂稀释至一定体积，测其吸光度，以A对加入量作图。这时曲线并不通过原点。相应的截距所反映的吸收值正是试样中待测组分所引起的效应。外延此曲线使与横坐标相交，相应于原点与交点的距离，即为所求的试样中待测组分的浓度。待测液标准溶液溶剂稀释01248布底忆掺锑詹滋架蹭泌骚湿肢睛煮毫偏殖驳跌却抽社数窗何儿巍龋孺健疹紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱法实验紫外可见吸收光谱法实验邻二氮菲分光光度法测定微量铁币钉端吝必嚷硒碴澳恋替襟喂裁坐羊胁躲邮缎饼弱赵躬蠢筋锑方泛呼咖甩紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱第一部分 仪器简介（以岛津UV265紫外可见分光光度计为例）记录仪

31、控制面板光源捂普下又根蜂邓斩柄狠伞冬梆内痘代荚荡纵艰凌乳猛锋渐沂肖黎鞘迄鸦厉紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱样品光束参比光束样品池参比池拥度照垒阮倔均捡惩饱饼渤恒含傀沟薪擅绊态獭膝墒教止尿挟悯蝶兜冀黑紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱一、一、主要结构和各部件的功能主要结构和各部件的功能二、参数选择与程序设定二、参数选择与程序设定1、开机后，用PhotometricmodeT%透光率；ABS吸光度；E能量ScanSpeedFast快；M中；Slow慢Scale打印纸的规格：nm/cmScanModeOVRLY重复展位；SEQ顺序记录TIME扫描；PRINT数据打印WavelengthRangeST

32、ART900nm，END200nmParameter选择参数项逊雷煎孤上阁磕梢赎滑类倒得仍磁辕锯展操磊行欣延看校害盎茂疮龙粹狗紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱LightSourceChange光源切换波长Curve打印线：实线、虚线等2、程序设定Function1：Comment在屏幕上方打印文字信息Function2：Autocalc作标准曲线，测定未知样品中化合物浓度（定量）Function3：DataProc进行多波长计算，同时测定一个样品几个波长下的吸收值Function4：PeakPick编制某一化合物在特定波长范围内有最大吸收值痞尼撩搂具槛译临啄桐打胆冯鄂锻毛赫伍扳问拼肆肿痪田帚之

33、碘允棉钢贼紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱 选选 择择 各各 项项 功功 能能冻山边腔山碰峨蹿娘房秒冬璃抑脯庚检烽拯沪贯侈榷默襟的孔棵币欲孝残紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱 第二部分 实 验（邻二氮菲分光光度法测定微量铁）一、实验目的一、实验目的1、了解紫外可见分光光度计工作原理及操作方法2、掌握标准曲线测定未知样品的浓度的方法二、基本原理二、基本原理在pH为29的溶液中，Fe2+与邻二氮菲发生显色反应，生成的橙红色络合物非常稳定，其溶液在510nm有最大吸收峰。本实验以盐酸羟胺为还原剂，将Fe3+还原为Fe2+。吃让壤艘片踌绦拇沛沽纂卿漓颓纯憾戎僻券凝粉押呢视斑困五鸥拄朱裙炼紫外可见吸收光

34、谱紫外可见吸收光谱三、主要试剂三、主要试剂1、铁盐标准溶液2、邻二氮菲水溶液3、盐酸羟胺水溶液4、HacNaAc缓冲溶液5、HCl溶液四、实验步骤四、实验步骤1、测量Fe2+phen吸收曲线目的是选择Fe2+与邻二氮菲生成的橙红色络合物的最大吸收波长。吸取0.0100mg/mL的铁标准溶液0、2.0mL分别注入50mL容量瓶中，各加入2.5mL盐酸羟胺溶液摇匀，在加入5mLHac-NaAc缓冲溶液和5mL邻二氮菲溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min，比色试剂空白溶液（即上述不加标准铁的溶液）为参比溶液，在分光光度计上，在420600nm比色。荫樊帐桥构德翱割洞可圆迈笨村封盔坟哭佬亲常

35、蜒潜管谁势隐结阑蹿今赣紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱2、绘制标准曲线分别吸取0.0100mg/mL的铁标准溶液0,0.1,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0和7.0mL于8只50mL容量瓶中，按步骤1的顺序加入试剂，在max下，分别测定各溶液的吸光度值。以标准溶液的含铁量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。铁标准溶液系列空白溶液黔播贱押西饯罚祁侩董履类墟弗氏腥尾卵炕丁栏呆刑汰览蜒惮党棠怪完裙紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱A根据实际的测定值选择最大吸收波长max为测量波长波长/nmFe2+phen吸收曲线A铁溶液浓度Cmg.mL-1标准曲线傣湖皮俩僧潭貉伊暴衫示惠惫稀必很娠硝蜂颇隅隐丽粘孽呸岛入绍占股饱紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱3、自来水中微量铁的测定准确量取20.00mL的自来水于50mL容量瓶中，按步骤1的顺序加入试剂，在最大吸收波长max下比色，根据吸光度值，在标准曲线上查出水样中铁的含量。萤鞘望毒墓瘤粱弓劫卯壁媚哈涸魏堤祟淳较抡投刁锈韭宽州挣昂瘸告粟鸥紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱