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1、栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术第第3节测定微生物的数量定微生物的数量栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术学习导航学习导航1.概述微生物概述微生物计数的基本方法。数的基本方法。2.运用稀运用稀释平板法平板法测定定样品中微生物的数量。品中微生物的数量。重、重、难点点栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练
2、轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术新知初探思维启动新知初探思维启动一、直接一、直接计数法数法1.常用方法：常用方法：显微微镜直接直接计数法。数法。2.具体步具体步骤：将待将待测样品制成品制成悬液液取一定取一定量的量的悬液放在液放在显微微镜下下进行行计数数观察并察并计算出算出单位体位体积内的微生物内的微生物总数。数。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术3.优点点4.缺点：缺点：难以以计数数_的的细菌。菌。5.适用范适用范围：一般适用于一般适用于纯培养培养悬
3、浮液中各种浮液中各种_的的计数。数。二、二、间接接计数法数法1.常用方法：常用方法：_。所需所需设备_，可迅速得到，可迅速得到结果果能能观察到微生物的察到微生物的_简单形形态特征特征微小微小单细胞菌体胞菌体稀稀释平板平板计数法数法栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术2.具具体体步步骤：需需要要将将待待测样品品配配制制成成均均匀匀的的_并并使使其其均均匀匀分分布布于于平平板板中中的的培培养养基基内内，经过培培养养后后，统计培培养养基基中中出出现的的_,即可推算出即可推算出检测样品
4、中的活菌数。品中的活菌数。3.优点：点：在在样品中含菌数品中含菌数_的情形下也的情形下也可以完成可以完成计数。数。系列稀系列稀释液液菌落数菌落数较少少栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术判一判判一判(1)在在用用直直接接计数数法法测量量培培养养瓶瓶中中酵酵母母菌菌时，应在在培培养养液液静静置置一一段段时间后后，从从瓶瓶底底部部吸吸取取液体液体样本。本。()(2)用用稀稀释平平板板计数数法法，通通过观察察菌菌落落，得得出出的数的数值往往比往往比实验值要大。要大。()(3)在在计数
5、数时，用于培养的器皿要，用于培养的器皿要进行行灭菌。菌。()栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术三、三、间接接计数法数法实例例1.土壤中好气性土壤中好气性细菌的菌的计数数(1)制制备土壤稀土壤稀释液液取土壤表取土壤表层_处的土的土样。准确称。准确称取取1 g土土样，放入盛有，放入盛有_ mL无菌水的无菌水的锥形瓶形瓶中，振中，振荡20 min后制成后制成102倍的稀倍的稀释液。然后液。然后进行系列稀行系列稀释，得到，得到103、104、105、106的系的系列稀列稀释菌液。菌液
6、。5 cm10 cm99栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术(2)取取样及倒平板：每个号及倒平板：每个号码设置置_个重复。个重复。(3)培养。培养。(4)观察察记录计数数时对于于细菌、放菌、放线菌、酵母菌以每个菌、酵母菌以每个培养皿内有培养皿内有_个菌落个菌落为宜。霉菌以宜。霉菌以每个培养皿内有每个培养皿内有_个菌落个菌落为宜。宜。33030010100栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章
7、微生物培养技术微生物培养技术栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术2.检测天然水源中天然水源中细菌菌总数和大数和大肠菌群数菌群数(1)细菌菌总数数通通常常是是指指1 g或或1 mL检测样品品中中所所含含_的的总数数,单位用位用cfu/g(mL)表示。表示。细菌菌落菌菌落栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术(2)大大肠菌群数通常是指每菌群数通常是指每100 g或或1
8、00 mL检测样品中所含大品中所含大肠菌群的菌群的实验数数值，以，以(MPN)表表示。大示。大肠菌群是指在菌群是指在_条件下，条件下，24 h内能内能发酵酵_，产酸酸产气的一气的一类_氧或氧或_氧型革氧型革兰氏阴性无芽氏阴性无芽孢杆菌的杆菌的总称。大称。大肠菌群菌群数的数的检测，常用，常用_法，使用乳糖胆法，使用乳糖胆盐蛋白蛋白胨培养基、培养基、_琼脂培养基脂培养基(EMB培养基培养基)和乳糖和乳糖发酵管。酵管。37 乳糖乳糖需需兼性兼性厌多管多管发酵酵伊伊红美美蓝栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生
9、物培养技术微生物培养技术3.土壤中分解尿素土壤中分解尿素细菌的菌的计数数有些有些细菌含有菌含有_酶酶，能将尿素，能将尿素琼脂脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水变成成氢氧化氧化铵，导致培养基致培养基变成成_性，使酚性，使酚红指示指示剂呈呈现_色。色。尿素分解尿素分解碱碱红栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术想一想想一想土土壤壤有有“微微生生物物的的天天然然培培养养基基”之之称称，为什什么？么？【提示提示】由于土壤具由于土壤具备了各种微生物生了各
10、种微生物生长所需的所需的营养、水分、空气、酸碱度、渗透养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活的良好和温度等条件，是微生物生活的良好环境。境。对微生物来微生物来说，是微生物的，是微生物的“大本大本营”；对人人类来来说，是最丰富的，是最丰富的“菌种菌种资源源库”。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术要点突破讲练互动要点突破讲练互动要点一直接要点一直接计数法和数法和间接接计数法的比数法的比较1.显微微镜直接直接计数法数法(1)原原理理：利利用用特特定定细菌菌计数数板
11、板或或血血细胞胞计数数板板，在在显微微镜下下计算算一一定定容容积的的样品品中中微微生生物的数量。物的数量。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术(2)方法：用方法：用计数板数板计数。数。计数板是特制的数板是特制的载玻片，其上有特定的面玻片，其上有特定的面积为1 mm2，高，高为0.1 mm的的计数室，一个数室，一个计数室又被分成数室又被分成25个个(或或16个个)中格，每个中格再被划分成中格，每个中格再被划分成16个个(或或25个个)小格，每个小格，每个计数室都由数室都由400个
12、小格个小格组成。成。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术(3)操操作作：将将稀稀释的的样品品滴滴在在计数数板板上上，盖盖上上盖盖玻玻片片，然然后后在在显微微镜下下计数数45个个中中格格中中的的细菌菌数数，并并求求出出每每个个小小格格所所含含细菌菌的的平平均均数数，再再按按计算算公公式式求求出出每每毫毫升升样品品中中所所含含的的细菌数。菌数。(4)计算公式算公式每每毫毫升升原原液液所所含含细菌菌数数每每小小格格平平均均细菌菌数数40010000稀稀释倍数倍数(5)缺点：不能区分死
13、菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术2.间接接计数法数法(活菌活菌计数法数法)(1)原理：当原理：当样品的稀品的稀释度足度足够高高时，培养基，培养基表面生表面生长的一个菌落，来源于的一个菌落，来源于样品稀品稀释液中液中的一个活菌，通的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就平板上的菌落数，就能推能推测出出样品中大品中大约含有多少活菌。含有多少活菌。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧
14、夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术(2)操作操作设置重复置重复组,增增强强实验的的说服力与准确性。服力与准确性。将待将待测样品品经一系列一系列10倍稀倍稀释，然后，然后选择三三个稀个稀释度的菌液，分度的菌液，分别取取0.1 mL接种到已制接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。数菌落数。为使使结果接近真果接近真实值，可将同，可将同一稀一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上度菌液加到三个或三个以上的平板上,经涂布、培养，涂布、培养，计算出菌落平均
15、数。算出菌落平均数。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术为了了保保证结果果准准确确，要要选择一一个个合合适适的的稀稀释倍倍数数，且且同同一一稀稀释倍倍数数的的各各个个重重复复组菌菌落落数数要要相相近近，若若设置置的的重重复复组中中结果果相相差差太太远,意味着操作有意味着操作有误，需重新，需重新实验。(3)优点：能点：能观察菌落特征。察菌落特征。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养
16、技术微生物培养技术 在探究培养液中酵母菌种群数量在探究培养液中酵母菌种群数量变化化的的实验中，需利用中，需利用计数板数板对微生物微生物细胞胞进行行直接直接计数。数。计数板是一个特制的可在数板是一个特制的可在显微微镜下下观察的察的载玻片，玻片，样品就滴在品就滴在计数室内。数室内。计数室由数室由2516400个小室个小室组成，容成，容纳液体液体总体体积为0.1 mm3。某同学操作。某同学操作时将将1 mL酵母菌酵母菌样品加品加99 mL无菌水稀无菌水稀释，用无菌吸管吸取少，用无菌吸管吸取少许使其自行渗入使其自行渗入计数室，盖上盖玻片并用数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多余菌液，吸去多余菌液，进行行观察
17、察计数。数。例例1栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术(1)在在实验中中，某某同同学学的的部部分分实验操操作作过程程是是这样的的：从从静静置置试管管中中吸吸取取酵酵母母菌菌培培养养液液加加入入计数数板板进行行计数数，并并记录数数据据；把把酵酵母母菌菌培培养养液液放放置置在在冰冰箱箱中中；第第七七天天再再取取样计数数，记录数据，数据，统计分析分析绘成曲成曲线。请纠正正该同学同学实验操作中的操作中的3处错误：_；栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互
18、动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术_；_。(2)在在实验前前应该对计数板、吸管等器具数板、吸管等器具进行行_处理。理。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术(3)如如果果一一个个小小方方格格内内酵酵母母菌菌过多多，难以以数数清清,应采取的措施是采取的措施是_。(4)如果如果观察到如察到如图所示所示a、b、c、d、e 5个大个大格共格共80个小室内共有酵母菌个小室内共有酵母菌48个，个，则上述上述1 mL酵母菌酵母菌样品中品中约有酵
19、母菌有酵母菌_个；要个；要获得得较为准确的数准确的数值，减少，减少误差，你差，你认为该怎怎么做？么做？_。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术【解析解析】(1)在从在从试管中吸取酵母菌之前管中吸取酵母菌之前,应将将试管管轻轻振振荡几次，目的是使酵母菌在培几次，目的是使酵母菌在培养液中均匀分布。酵母菌的培养液养液中均匀分布。酵母
20、菌的培养液应置于适置于适宜温度下培养，并且每隔宜温度下培养，并且每隔24小小时就要就要统计一一次菌落数目。次菌落数目。(2)为了避免了避免杂菌菌污染，染，实验中中所用吸管、所用吸管、计数板等器具需数板等器具需进行行灭菌菌处理。理。(3)、(4)解答解答时要注意以下两点要注意以下两点:统一一单位位;注意体注意体积的的变化。化。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术400个小室共容个小室共容纳液体液体总体体积为0.1 mm3，则80个小室容个小室容纳体体积为：2102mm3，含酵母，
21、含酵母菌菌48个，又因酵母菌培养液个，又因酵母菌培养液总体体积为100 mL,统一一单位后即可求出酵母菌个数。位后即可求出酵母菌个数。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术【答答案案】(1)应将将试管管轻轻振振荡几几次次再再吸吸取酵母菌培养液取酵母菌培养液进行行计数数应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养应连续七七天天，每每天天观察察、取取样计数数并并记录数据数据(2)灭菌菌(3)适当稀适当稀释(4)2.4108多次多次计数，求平均数，求平均值栏目
22、栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术变式式训练用用稀稀释平平板板法法测定定同同一一土土壤壤样品品中中的的细菌菌数数,在在对应稀稀释倍倍数数为106的的培培养养基基中中，得得到到以以下下几种几种统计结果，正确的是果，正确的是()A涂布了涂布了1个平板，个平板，统计的菌落数是的菌落数是230B涂涂布布了了2个个平平板板，统计的的菌菌落落数数是是215和和260，取平均，取平均值238栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠
23、轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术C涂涂布布了了3个个平平板板，统计的的菌菌落落数数分分别是是21、212和和256，取平均，取平均值163D涂布了涂布了3个平板，个平板，统计的菌落数分的菌落数分别是是210、240和和250，取平均，取平均值233栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术解析：解析：选D。在。在设计实验时，一定要涂布至，一定要涂布至少少3个平板，作个平板，作为重复重复组，才能增，才能增强强实验的的说服力与准确性，所以服力与准确性，所以A、B两两项不
24、正确。不正确。C项虽涂布了涂布了3个平板，但是，其中个平板，但是，其中1个平板的个平板的计数数结果与另两个相差太果与另两个相差太远，说明在操作明在操作过程程中可能出中可能出现了了错误，因此，不能，因此，不能简单地用地用3个个平板的平板的计数数值求平均求平均值。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术要要点点二二间接接计数数法法在在统计微微生生物物数数目目时的的注意事注意事项1.设置置对照照(1)目目的的：排排除除实验中中非非测试因因素素对实验结果果的影响，提高的影响，提高实验结果的
25、可信度。果的可信度。(2)方法：取一个未接种的培养基与接种好的方法：取一个未接种的培养基与接种好的培养基一起培养。培养基一起培养。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术2.注意无菌操作注意无菌操作(1)建建立立无无菌菌观念念，严格格控控制制实验器器材材、实验室、室、实验操作者的消毒、操作者的消毒、灭菌。菌。(2)整个整个实验过程必程必须保保证无菌操作。无菌操作。(3)取取样、稀稀释都都要要在在酒酒精精灯灯火火焰焰附附近近的的无无菌菌环境中境中进行。行。(4)规范操作，防止其他微生
26、物范操作，防止其他微生物污染，染，实验结束后洗手、消毒。束后洗手、消毒。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术3.准确准确计数数(1)在在计算算结果果时，不不同同的的微微生生物物要要选择的的稀稀释倍倍数数不不同同。细菌菌、放放线菌菌、酵酵母母菌菌一一般般以以每每个个培培养养皿皿中中有有30300个个菌菌落落为宜宜，而而霉霉菌菌则以有以有10100个个为宜。宜。(2)要要设置置3个个或或3个个以以上上的的重重复复组，然然后后求求其其平均平均值进行行计算。算。(3)每隔每隔24 h统
27、计一次，最后一次，最后选取数目取数目稳定定时的的记录作作为结果。果。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术特特别提提醒醒间接接计数数法法主主要要是是用用来来推推测样品中大品中大约含有的活菌数。含有的活菌数。统计的菌落数往往比的菌落数往往比实际的数目低，因的数目低，因为当两个或两个以上微生物在一起当两个或两个以上微生物在一起时，平板上，平板上观察到的只是一个菌落。察到的只是一个菌落。栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧
28、夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术 在在做做分分离离分分解解尿尿素素的的细菌菌实验时，A同同学学从从对应的的培培养养基基上上筛选出出大大约150个个菌菌落落，而而其其他他同同学学只只选择出出大大约50个个菌菌落落。A同同学学的的结果果产生原因可能有生原因可能有()由由于于土土样不不同同由由于于培培养养基基污染染由由于于操作失操作失误没有没有设置置对照照ABC D例例2栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术【解解析析】实验结论是是否否正正确确与与是是否否设置置对
29、照照有有直直接接关关系系，但但实验结果果与与是是否否设计对照照无关。无关。【答案答案】A栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术变式式训练下下列列调查活活动或或实验中中，计算算所所得得数数值与与实际数数值相比，可能偏小的是相比，可能偏小的是()标志志重重捕捕法法调查灰灰喜喜鹊种种群群密密度度时标志志物物脱脱落落用用血血球球计数数板板计数数酵酵母母菌菌数数量量时只只统计方方格格内菌体内菌体栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术样方方法法调查蒲蒲公公英英种种群群密密度度时在在分分布布较密密的地区取的地区取样调查某某遗传病的病的发病率病率时以患者家系以患者家系为调查对象象A BC D栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第一章第一章 微生物培养技术微生物培养技术
