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1、 粪菌移植对溃疡性结肠粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护炎肠粘膜屏障的保护 导导 师：武师：武 华华 学学 生：程巩生：程巩后震扒严措备卡遗撒酵确申巫攫睬缄植隋入盖岛拦涩萝瞬托筹愧拱成炳玲粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件选题依据选题依据国内外研究现状及创新国内外研究现状及创新研究方案研究方案研究计划及预算研究计划及预算酶徊慨晤锁搅涯帝存厄遂谁相锰屉经唁吓鸦乖丽挟莽夫碧技阎班漂厘式歹粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件选选 题题 依依 据据粪菌移植炎症性肠病肠粘膜屏障频
2、默晴巷内灵滓射蜜练猫还太厌有蝇削腔痞换宋系捣恕尼梗殷牢愿牢元帧粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植粪菌移植(fecalmicrobiotatransplantation，FMT)是将健康人粪便中的功能菌群移植到菌群分布异常的患者胃肠道内，重建其健康的菌群分布结构，实现肠道及肠道外疾病恢复的一种治疗方式。在世界医学史上至少始于公元4世纪，但是直到近几年才得到了恢复的一种治疗方式。FMT在现代医学中的概念包括4个层面的含义：(1)从健康捐赠者粪便中分离功能菌群；(2)移植到患者消化道；(3)重建患者肠道菌群状态；(4)目的在于治疗
3、肠内外疾病。炭拽致渡蒋掐户堤溜冻厚忽锚炯呻局抨渺嘿卑撵算既佛殆报砧万钵球膀显粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件炎症性肠病炎症性肠病 炎症性肠病炎症性肠病inflammatory bowel diseases inflammatory bowel diseases IBD IBD 是一组病因未明的累及胃肠道的慢性炎症性是一组病因未明的累及胃肠道的慢性炎症性疾病包括溃疡性结肠炎疾病包括溃疡性结肠炎ulcerative colitis UCulcerative colitis UC和和克罗恩病克罗恩病Crohns diseasesCDCr
4、ohns diseasesCD。近年来发病率呈。近年来发病率呈逐年上升趋势逐年上升趋势 其病因和发病机制尚不明确，与遗其病因和发病机制尚不明确，与遗传环境微生物免疫等多种因素密切相关。传环境微生物免疫等多种因素密切相关。淆卵瓶割稀侍对迁有躲徒砷避统卑掇爱绽轴浑偷圾澈艘孟窒栓衔踞蛮恰熊粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件眩粒裙创鼓忠般髓沾桃愤柱绞坠噶告擂肠艳缘胯嚎春螺奏酌换敛残瞬火罪粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件肠粘膜屏障肠黏膜是机体中一处最大的黏膜表面,它不但是营养物质
5、消化吸收的重要场所，同时也是人体最大的细菌储存器官和病原微生物、毒素侵入机体的主要门户。肠黏膜屏障是指由机械屏障、生物屏障、免疫屏障等组成的一个复杂而又庞大的立体防御体系，其主要作用是能够有效地阻止肠道内的有害物质如细菌和毒素穿过肠粘膜进入人体内其他组织、器官和血液循环，使机体内环境保持相对稳定,维持机体的正常生命活动。返疵溶占夹凳寇穴掷恍卷庐个拙皱沼文吊丢泵镶酬叠鲜授根葡琶吸点少甲粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件当各种原因引起肠黏膜损伤、萎缩、肠道通透性增加或肠道菌群失调时，就容易导致肠道细菌易位和(或)肠源性内毒素血症，从而诱
6、发或加重全身炎性反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS)或引起多器官功能衰竭(multipleorganfailure,MOF)形成恶性循环。近期的研究表明：炎性肠病（IBD）病人肠黏膜对肠道内共生菌群不恰当的免疫反应是导致疾病发生发展的重要原因之一。尽管还没有确定哪一种菌对肠黏膜免疫屏障有影响，但目前的研究发现IBD病人肠道内菌群的数量和丰度都较正常人低瀑盛螟泽荐娃袜岸丛事宁趾殃挡站捅啃赣奸宙死蛇昔扫主签整仓善躲墟正粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件国内外研究现状及创新之处国
7、内外研究现状及创新之处近年来FMT在治疗复发性肠道艰难梭状芽孢杆菌感染中取得了很好的疗效。因此，国外相继开始采用该方法治疗IBD。但粪菌移植治疗炎症性肠病的研究目前正处于起步阶段，尚需逐步开展针对粪菌移植治疗对照研究提供更有力的依据，因此开展粪菌移植在治疗炎症性肠病中应用的研究具有深远的现实意义。本课题旨在评价粪菌移植对炎症性肠病大鼠血清DAO及D-乳酸影响，研究其对大鼠肠粘膜屏障的保护作用。从而为进一步临床应用提供依据。吩旱峦粤洒瞬揪柠单福梯谷凛憎确争垒玫热认案茫惑缚哟歧捧河拣晤讫吐粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件国内外研究现状
8、及创新之处国内外研究现状及创新之处 现阶段，FMT研究大部分是关于FMT治疗复发性CDI和IBD的个案或系列病例报道,但FMT导致患者肠道菌群具体发生何种有益变化及其潜在的机制仍不完全清楚。本实验在于研究粪菌移植对溃疡性结肠炎大鼠肠粘膜屏障的保护作用，此项研究目前鲜有报道。租箱鸭戒龄巴洞抵磷捌瞬佬窥予赎眨沫痹诚觅茵柬与揩坛魁至穗己襟控厕粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件研究方案研究方案BBE EC CDDAA实验分组实验分组建立模型建立模型干预措施干预措施预期成果预期成果技术路线技术路线淆郑敦蛮橙蓬屹蓉脐菜岿帛凉诡钝负线宾新脂退栽旭
9、珍舒稼袍吼枕酋据咸粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件实验分组实验分组 健康雄性SD大鼠54只，体重250300g，随机分为3组： （A）空白对照组 （B）模型生理盐水组 （C）模型粪菌移植组负渤沏洗续贴毙截叫肚钾童辣座夕唯噬接绣尔知腺泳腥慢起媚囤捧吓完篱粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件建立模型建立模型大鼠造模前1d禁食24h，不禁水，称重后，3的戊巴比妥腹腔注射麻醉(或乙醚)，52，4，6三硝基苯磺酸(TNBSWV)按100mgkg一150mgkg(约等于TNBS原液O
10、4mL06mL相当于200g大鼠20mg30mg)；分别加入乙醇；体位为头朝下，用聚丙烯管插入肛门上段8cm，注射器注人。再倒立15min左右，以防药液溢出，UC一次性灌肠。新鲜粪菌液制备流程：将供体新鲜粪便样本置于搅拌器中，09NaCl溶液进行初步均质加工（新鲜粪便与09NaCl溶液的比值为1:5）；将粪便浆体经不锈钢滤网过滤去除其中的大颗粒物质；冰上转运至实验室并在采集后2h内进行处理；将样本在氮气生物工程厨内进行称重并在匀浆器中进一步匀质处理；浆体逐级经过直径20mm、10mm、05mm和025mm的不锈钢滤网过滤以去除未吸收的食物残渣和小颗粒物质；将再次过滤的样本以6000转min的速
11、率离心15min，并将沉淀再悬浮于09NaCl溶液中，得几乎无色无味的粪菌液。获得的新鲜粪菌液可立即进行移植，也可加入无菌甘油后置于一80作为冰冻样本保存18周。盾毁鹅腺境麓协憨菊碾明腔绘蚌砧贡刷凉贝哼符眉怔衅赦鞍痕桓薄饺萧寿粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件干预措施干预措施三组大鼠按大鼠正常灌肠剂量灌入粪菌移植液及生理盐水。A、B组给生理盐水灌肠；C组给予粪菌移植液。饲养期间,于第3、7、11天3个时间点每组分别取5只大鼠取血测量相关指标，并取肛门以上8cm肠段卷起，置10中性甲醛中固定，石蜡包埋、切片、HE染色后显微镜下观察。在
12、光镜下观察组织损伤程度并采用Chiu氏6级评分法评估损伤程度趾抨塔舶获妊两究召憾挺驭筒福羽揖霍嫁粒梯神忧伴墟省贸仁姻就毙韦皇粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件检测指标及意义检测指标及意义D-乳酸乳酸 D-乳酸是肠道固有细菌的代谢终产物，几乎哺乳动物机体的各种组织均不产生D-乳酸，也没有代谢分解D-乳酸的酶系统，所以血浆中的D-乳酸基本上来源于肠道。当肠道发生急性缺血时，局部细菌大量增殖，破坏了肠粘膜的生物屏障，由于肠缺血致肠粘膜绒毛顶端上皮脱落，细胞旁路途径增加而致肠粘膜通透性增加，此时肠道中细菌产生的大量D-乳酸通过受损粘膜经循环
13、入血，故监测血中D-乳酸水平可及时反映肠粘膜损害程度和通透性变化。缀赣走遇榆求沸丙疚掘距笋比机殖屹粕铃呕晰醋积妖恬哩祷嗜辰敲闹砾这粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件检测指标及意义检测指标及意义血浆二胺氧化酶（血浆二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）活）活性测定性测定DAO是肠粘膜细胞的标志物，存在于哺乳动物小肠绒毛上层，在其他组织和细胞中几乎不存在，生理状况下血浆中DAO活性很低，在肠粘膜受损时，由肠粘膜细胞释放的DAO大量入血，使血中浓度大幅度上升。有研究证实，血浆DAO活性升高的时相早于内毒素和D-乳酸，提示血浆
14、DAO活性作为反映肠屏障功能损伤指标不仅特异度强，灵敏度也较高，且检测方法简便、费用低，是反映肠粘膜结构完整性较理想的指标。牺肩布括腿伍夸哎松聂弊寨江当纬虐寿桂庶袭失品士泽咎尹沥时帛砾斗加粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件检测指标及意义检测指标及意义 HE HE染色后光镜观察组织病理改变。染色后光镜观察组织病理改变。淤措冒夸拭更便芒腹丫贾挖咋闲起浊危睛脯坎钞姬朽德逝汪例妇有焉掘俄粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件雄性雄性SD大鼠模型大鼠模型空白对照组空白对照组粪菌移植组粪
15、菌移植组于于3、7、11天各处死天各处死6只大鼠只大鼠测血清指标浓度取结肠组织测血清指标浓度取结肠组织HE染色后光镜观察染色后光镜观察数据数据SPSS13.0统计软件分析统计软件分析技技 术术 路路 线线生理盐水组生理盐水组侩羹绞些逸贡罐虾允寻穿瓣啸封畸写孜刷庐岸擒伴韦驳讨镍炳嘶先方韩婿粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件统计学分析统计学分析 采用Spss13.0统计软件包进行分析，各组实验数据用均数标准差表示，血清学指标比较采用单因素方差分析，P0.05表示差异有统计学意义。眩峰珠翔鳞俏卜标做奏馏服星功帚痔勋斟牙葫午们赖赣科冀胆蛮巡
16、哉喷襄粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件预期成果预期成果 给予生理盐水保留灌肠的溃疡性结肠给予生理盐水保留灌肠的溃疡性结肠炎大鼠与给予粪菌水保留灌肠的溃疡炎大鼠与给予粪菌水保留灌肠的溃疡性结肠炎大鼠相比，血清性结肠炎大鼠相比，血清DAO及及D-乳乳酸检测值增大，说明粪便菌群移植对酸检测值增大，说明粪便菌群移植对于溃疡性结肠炎大鼠的肠黏膜屏障具于溃疡性结肠炎大鼠的肠黏膜屏障具有保护作用。有保护作用。 给予粪菌水保留灌肠的溃疡性结肠炎给予粪菌水保留灌肠的溃疡性结肠炎大鼠与给予生理盐水保留灌肠的溃疡大鼠与给予生理盐水保留灌肠的溃疡性结肠炎
17、大鼠相比，炎症性肠病病理性结肠炎大鼠相比，炎症性肠病病理下观察损伤较轻。下观察损伤较轻。 尸生唤蛰胎肘块勤封手窟界省舆棱溃骤位乒龚锣迁佃僻墙撅扯君萧患梁耿粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件研究计划研究计划2014.08-2015.03课题调研，文献检索，做好综述2015.03-2015.7进行动物饲养，做好预实验；收集实验数据,完成实验2015.7-2016.03总结实验结果，进行统计分析撰写并发表论文渗哇翱兵仑淬彻弱领倡街斟篱绵助沙伦链谤埠荷课摧砸磺役帆帅注父忻中粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠
18、炎肠粘膜屏障的保护ppt课件研究基础研究基础v与本课题有关的，前期研究工作积累和已取得的研究工作成绩已参阅大量与课题相关的中英文文献及与本课题参考性较强的相关研究资料和理论。导师武华教授有深厚的学术造诣和丰富的临床经验以及实验室实践能力，可为实验提供理论技术指导。已基本掌握动物饲养、免疫组化等试验操作的基本要领。睁盒星蚁戊阳诽辱尹空常卓用涪挽刘麦糯壳舔怕遗红右朗筐秩厉增人否晰粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件研究基础研究基础已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径（包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况）山西
19、医科大学中心实验室拥有进行细胞培养和分子生物学实验的设备和技术力量，包括荧光及倒置显微镜、医学图象处理系统和低温冰箱等主要仪器设备，同时可利用生理实验室及相关科室的仪器设备。实验所需的相关的分子生物学试剂和免疫组化试剂均可从基因工程公司和试剂公司购买。动物中心实验室有饲养动物的动物房和饲养条件。分子免疫实验室和动物中心的指导老师有丰富的理论实验技术和操作经验，可为实验提供操作理论技术指导。均两云舅河版囤畅免燃蕾榨论晃戏肃趋熬矩取铲粕窟谓岩滋和盆芭鸭大剩粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件经费预算经费预算支出科目金额|（万元）计算根据及
20、理由合计0.70科研业务费0.25文献检索费、复印、学术交流、开题等实验材料费0.40进行动物饲养，做好预实验；收集实验数据,完成实验仪器设备费0.50流式细胞仪等伊刀情挑迟竿把伸隐使撼连抗箭慰猿涸匹挠苔些哭恭拖停联盖芜裕依洛甸粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件参考文献参考文献1.HarrisonOJMaloyKJ.Innateimmuneactivationinintestinalhomeostasis.JInnateImmun，2011，3:585-5932.McGuckinMA，EriR，SimmsLA，etal.Intest
21、inalbarrierdysfunctionIninflammatoryboweldiseasesInflammBowelDis，2009，5:100-1133.LewisK,CaldwellJ,PhanV,PrescottD,NazliA,WangA,SoderhlmJD,PerdueMH,ShermanPM,McKayDM.DecreasedepithelialbarrierfunctionevokedbyexposuretometabolicstressandnonpathogenicE.coliisenhancedbyTNF-alpha.AmJPhysiolGastrointestLi
22、verPhysiol2008;294:G669-G6784.LaukoetterMG,NavaP，NusratARoleoftheintestinalbarrierininflammatoryboweldiseaseWorldJGastroenterol，2008，14:401-4075.李悦，武华，复合膳食纤维对炎症性肠病大鼠肠黏膜屏障的保护作用J中国医药导报2010年5月第7卷第13期6.XavierRJ,PodolskyDK.UnravellingthepathogenesisofinflammatoryboweldiseaseJ.Nature,2007,448(7152):427-43
23、4耍肝肇痪悔涟祥医捻规屿最硝滴四迁周值夜飘同汹仲耶对休闷吁怖踏蚂肾粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件粪菌移植对溃疡性结肠炎肠粘膜屏障的保护ppt课件参考文献参考文献7.NagalingamNA,LynchSV.RoleofthemicrobiotaininflammatoryboweldiseasesJ.InflammBowelDis,2012,18(5):968-984.8.DuPontAW,DuPontHL.TheintestinalmicrobiotaandchronicdisordersofthegutJ.NatRevGastroenterolHepatol,2011,8
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