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1、临床微生物标本的采集与送检主要内容主要内容1、标本采集的意义和原则2、标本的运送与拒收原则3、各种标本的采集l血液、骨髓标本l尿液l粪便l痰及上呼吸道标本l穿刺液标本（脑脊液、胆汁、胸腹水等）l脓液及创伤感染分泌物标本l生殖道标本 标本采集是指采集患者体内的一小部分血血液液、体体液液、排排泄泄物物、分分泌泌物物以以及及组组织织细细胞胞等标本进行检验，以反映机体正常的生理现象和病理改变。 标 本 采 集 标 本 采 集60%以上的实验误差发生在分析前！标本采集正确与否与检验结果的准确性有密切的关系!因此，我们应掌握正确的标本采集方法。l正确的微生物标本采集和运送是准确的病原学诊断的前提掌握正确的
2、标本采集方法掌握正确的标本采集方法 为保证标本的质量，获得阳性结果，应掌握正确的标本采集方法、采集量和采集时间并应及时送检，特殊标本还需注明采集时间。 基本原则基本原则1.1.及时采集微生物标本作病原学检查及时采集微生物标本作病原学检查2.2.在抗菌药物使用前采集标本在抗菌药物使用前采集标本3.3.采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作4.4.采样后立即送检采样后立即送检5.5.混有正常菌群标本，不可置肉汤培养混有正常菌群标本，不可置肉汤培养6.6.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。7.7.送检标本应注明来源和检验目的送检标本应注明来源和检验目的
3、标本的运送原则标本的运送原则1、所有的标本都必须立即送往实验室，最好在2h内,保存时间不应超过24h.2、最佳的临床标本送检首先取决于所获取标本的量.量少的标本应在采集后15-30min内送检.3、对环境敏感的微生物如志贺菌、奈瑟氏菌和流感嗜血杆菌（对低温敏感）应立即处理，禁止冷藏脊髓液和生殖道、眼部、内耳道标本。标本的拒收原则标本的拒收原则l无标签、无检验单无标签、无检验单不检测，并与送检的医生和护士联系。l送检延误送检延误不接收，提醒送检者，要求重新采集。l送检容器不当或渗漏送检容器不当或渗漏不接收，告知送检者，要求重新采集。l标本不符合要求标本不符合要求不接收，联系送检者，指出不符合要求
4、之处，要求重新采集符合试验要求的标本.临床微生物检验常见标本临床微生物检验常见标本l血液、骨髓标本l尿液l粪便l痰及上呼吸道标本l穿刺液标本（脑脊液、胆汁、胸腹水等）l脓液及创伤感染分泌物标本l生殖道标本一、血培养标本采集一、血培养标本采集血培养送检指征血培养送检指征l病人出现以下临床表现，或同时具备以下几种临床表现时应采集血培养。l1 、发热（38）或低温（36）l2 、寒战l3 、白细胞增多（10109/L，特别有“核左移”时）l4 、粒细胞减少（成熟的多形核白细胞1109/L）l5 、血小板减少l6 、皮肤、粘膜出血l7 、昏迷l8 、多器官衰竭l9 、血压降低l10 、呼吸加快l11、
5、特殊情况：可疑新生儿败血症时，除发热或低温外，很少培养出细 菌，应增加尿液和脑脊液培养。血培养采集须知血培养采集须知l应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集 ！l对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。药物之前，应立即采集血培养标本。l必须同时或间隔短时间内采集套以上血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集套以上血培养标本。血培养采集容器血培养采集容器l法国梅里埃公司血培养仪配套血培养瓶或安图公司
6、血培养瓶 血培养标本采集方法血培养标本采集方法l1、皮肤消毒l2、培养瓶消毒 ：(1) 用75酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。(2) 酒精作用60s。(3) 在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。l3、血液注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固 。血培养采集次数血培养采集次数l成年患者：成年患者：推荐同时采集套（不同部位）血培推荐同时采集套（不同部位）血培养标本（即双瓶双臂同时采集血培养标本）。养标本（即双瓶双臂同时采集血培养标本）。l婴幼儿患者：婴幼儿患者：推荐同时采集次（不同部位）血培养推荐同时采集次（不同部位）血培养标本。标本。原因：原因：l血培
7、养做血培养做1套的检出率为套的检出率为65%。l做做2套和套和3套检出率的检出率分别为套检出率的检出率分别为80%和和90%。l单瓶的血培养检出率不高，而且结果很难临床解释。单瓶的血培养检出率不高，而且结果很难临床解释。 l在采取血培养后的在采取血培养后的2至至5天内，无需重复采取血培养。天内，无需重复采取血培养。l两个例外：细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症。两个例外：细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症。血培养采血量血培养采血量l成年患者：推荐采血量每瓶不少于成年患者：推荐采血量每瓶不少于5ml。l婴幼儿患者：婴幼儿患者：儿童3-5ml，婴儿为1-2ml，推荐推荐采血量每瓶不少于采血量每
8、瓶不少于2ml。（少于病人总血容量。（少于病人总血容量的的1%）注意事项注意事项1、严禁在输液、输血的针头处抽取标本，以免影响检验结果。（最好在对侧采集）2、若同时抽取几个项目的血标本，一般注入容器的顺序为：血血培养瓶培养瓶抗凝管抗凝管干燥试管干燥试管. 动作要迅速准确，避免溶血。注入标本后的血培养瓶务必立即送至检验科细菌室3、每次领培养瓶不宜过多，以防过期，未使用的培养瓶亦应室温保存（15-30），切勿放冰箱保存。骨髓标本的微生物学检查骨髓标本的微生物学检查 l采集部位：骨髓穿刺法从髂骨采集标本。 l采集时间：在用药前、发热初期或高热期 当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者，抽当骨髓炎时或长期使
9、用抗菌药物患者，抽取骨髓培养阳性率远高于血液培养取骨髓培养阳性率远高于血液培养 二、尿液标本的采集二、尿液标本的采集尿液标本的送检指征尿液标本的送检指征l1 有典型的尿路感染症状；l2 肉眼脓尿或血尿；l3 尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性；l4 不明原因的发热，无其他局部症状；l5 留置导尿管的病人出现发热；l6 膀胱排空功能受损；l7 泌尿系统疾病手术前。尿液标本采集容器尿液标本采集容器 l无菌试管或无菌尿液标本留取容器 尿液尿液标本采集方法标本采集方法1、 清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，女性应用
10、手分开大阴唇，男性应翻上包皂水清洗会阴部，女性应用手分开大阴唇，男性应翻上包皮，仔细清洗，再用清水冲洗尿道口周围，开始排尿，将皮，仔细清洗，再用清水冲洗尿道口周围，开始排尿，将前段尿排去，插入性接取中段尿约前段尿排去，插入性接取中段尿约10ml于无菌容器中，立于无菌容器中，立即送检，于一小时内接种。该方法简单、易行，是最常用即送检，于一小时内接种。该方法简单、易行，是最常用的尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，的尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。尿液尿液标本采集方法标本
11、采集方法2 、耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上、耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染经皮穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的的“金标准金标准”方法，但有一定的痛苦，病人难以方法，但有一定的痛苦，病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集儿尿标本的采集 尿液尿液标本采集方法标本采集方法3 、直接导尿：按常规方法对会阴部进行清洗消毒后，、直接导尿：按常规方法对会阴部进行清洗消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液。用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液。可减少尿液
12、标本的污染，准确地反映膀胱感染情可减少尿液标本的污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道的细菌引入膀胱，导致继况。但有可能将下尿道的细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。发感染，一般不提倡使用。 尿液尿液标本采集方法标本采集方法4 、小儿收集包：对于无控制能力的小儿可应用收集、小儿收集包：对于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可
13、使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法行分析，必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复查。留取尿液进行复查。 尿液尿液标本采集方法标本采集方法5、 留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒剂，不能从收集袋操作时应防止混入消毒剂，不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者，应在更中采集尿液。长期留置导尿患者，应在更换新尿管时留取尿标本。换新尿管时留取尿标本。 注意事项注意事项 v严格进行无菌操作，因为尿液标本
14、的采集和培养中最大的问题是污染杂菌 v通常应取晨起第一次尿液送检 v多数药物均通过尿液排泄，因此采集尿液应在用药前进行 三、粪便标本的采集三、粪便标本的采集 粪便标本的送检指征粪便标本的送检指征l1 急性腹泻：大便次数明显增多，腹痛，里急后重，往往伴有发热，大便性状为粘液便或脓血便。l2 慢性腹泻：大便次数多，多为稀便，伴有全身乏力等症状。l3 无痛性大量水样便或米泔样稀便。l4 先吐后泻：恶心、呕吐、腹痛、腹泻。有集体发病史，多为细菌性食物中毒所致。l5 抗生素治疗后腹泻：常发生于长期抗生素治疗后，糊状便，排便次数增加。l6 高热惊厥：通常为中毒性痢疾，多见于婴幼儿和小儿。粪便标本的采集容器
15、粪便标本的采集容器 l一次性无菌便盒一次性无菌便盒 粪便粪便标本采集时间标本采集时间1采样原则 腹泻病人应在急性期采集（3天以内），以提高检出率，亦最好在用药之前。2沙门菌感染 肠热症在2周以后；胃肠炎病人在急性期，早期采集新鲜粪便 粪便标本采集方法粪便标本采集方法 l自然排便采集法 自然排便后，挑取其脓血、粘液部分2-3g，液状粪便取絮状物2-3ml，盛于灭菌容器内或保存液中送检 l直肠拭子方法 如不易获得粪便时，或排泄困难的患者及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm（幼儿2-3cm）轻轻转动取出，插入无菌试管内送检。注意事项注意事项 虽粪便含有多种杂
16、菌，但应尽量采用无菌容器（一次性无菌平皿）。 为提高检出率，要采集新鲜粪便作培养，且应挑取其脓血、粘液部分。 四、痰及上呼吸道标本的采集四、痰及上呼吸道标本的采集 痰标本送检指征痰标本送检指征l1 咳嗽、咳痰：痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨样痰。l 2 咯血：肺结核病人常痰中带血。l 3 呼吸困难l4 发热l5 胸痛：当炎症病变累及壁层胸膜时，会发生胸痛。l*肺部感染的患者有2550可能发生菌血症，应同时作血培养。 上呼吸道标本送检指征上呼吸道标本送检指征l1病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。l2细菌性咽扁桃体炎：明显咽痛、畏寒、发热，体温可达39以上。
17、l3 上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。痰标本和上呼吸道标本采集容器痰标本和上呼吸道标本采集容器l一次性无菌留痰盒 l咽拭子或鼻咽拭子 痰及上呼吸道标本痰及上呼吸道标本 采集时间采集时间痰：一般以晨痰为好；支气管扩张症患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。咽拭标本：时间上虽无严格限制，但应于抗菌药物治疗前为好。咽部又是呼吸和食物的通路，因此亦以晨起后采集为宜 痰标本采集方法：痰标本采集方法： l自然咳痰法：患者清晨起床后，先用漱口水漱口，再以开水或生理盐水漱口，以减少口腔常居菌群的污染，然后用力自气管深部咳出第一口痰于无菌痰怀内送检
18、 l小儿取痰法：用压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上，送检 上呼吸道标本（咽拭子）采集方法：上呼吸道标本（咽拭子）采集方法： l采集上呼吸道标本通常采用无菌棉拭子。采集前患者应用开水或生理盐水反复漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次，但拭子要避免接触口腔和舌粘膜 注意事项注意事项l1采集标本以清晨为佳，以减少口腔正常菌群的污染，采集前先用漱口液充分漱口。l2做结核分枝杆菌和真菌培养的标本若不能及时送检，应放4冰箱保存，以免杂菌生长。l3作结核分枝杆菌检查，痰量要多或留取24小时痰液，
19、以提高阳性检出率。五、穿刺液标本五、穿刺液标本穿刺液标本穿刺液标本 采集时间：当怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后1-2日采集 采集容器：无菌容器采集方法：采用无菌方法用注射器抽取体内可疑感染部位的液体，注入无菌试管立即送检 注意事项：注意事项： l如果用于检测细菌，收集脑脊液后，最好能在常温下15-30分钟内接种培养皿。脑脊液标本不可置冰箱保存，否则会使病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈瑟菌（能产生自溶素迅速自溶）、肺炎链球菌和嗜血杆菌 。注意事项：注意事项：l如果只采集了一管脑脊液，应先送细菌室做细菌培养，再做脑脊液生化、常规等检查l穿刺时应严格无菌操作 l作脑脊
20、液培养时，建议同时作血培养 注意事项：注意事项：l为了防止穿刺液的凝固，最好在无菌试管中预先加入灭菌肝素，再注入穿刺液l尽可能采集更多的液体，至少1ml六、六、脓液及创伤感染分泌物标本脓液及创伤感染分泌物标本 脓液及创伤感染分泌物标本脓液及创伤感染分泌物标本采集采集l开放性脓肿和脓性分泌物 先以无菌盐水冲洗溃疡表面，用2支无菌棉拭子拭取溃疡深处的分泌物后插入无菌试管送检。一支为涂片检查用，另一支作培养用 l大面积烧伤的创面分泌物 用无菌棉拭子取多部位创面的脓液或分泌物，置无菌试管内送检 l封闭性脓肿 消毒局部皮肤或粘膜表面后，用注射器抽取，将脓液注入无菌试管内送检 注意事项：注意事项： l不能
21、立即送检的标本，应放4保存；培养淋球菌、脑膜炎奈瑟菌的标本除外 l用药前采集标本，严格无菌采样 七、生殖道标本七、生殖道标本生殖道标本检验生殖道标本检验l生殖道标本的细菌培养、真菌培养、结核菌培生殖道标本的细菌培养、真菌培养、结核菌培养；解脲支原体、沙眼衣原体、淋菌的培养；养；解脲支原体、沙眼衣原体、淋菌的培养；淋菌涂片；细菌性阴道病相关检测、真菌涂片淋菌涂片；细菌性阴道病相关检测、真菌涂片 生殖道标本送检指征生殖道标本送检指征l1 皮肤黏膜损害：原发损害可有斑疹、丘疹、结节、水疱、囊肿、糜烂、溃疡等。继发损害由原发损害演变而来，有萎缩或斑痕等，患者可出现疼痛或瘙痒症状。l2 全身症状：多数无
22、全身症状。偶有发热、乏力、食欲不振等。l3 男性生殖系统表现 l4 女性生殖系统表现l5 疑为下列疾病时需送检标本：前庭大腺脓肿、外阴阴道念珠菌病、细菌性阴道病、急性子宫颈炎、急性盆腔炎、急性尿道炎、急性膀胱炎、羊膜腔感染、产褥期感染。生殖道标本采集容器生殖道标本采集容器l无菌试管、男性拭子、女性拭子 生殖道标本采集方法生殖道标本采集方法l1 尿道分泌物 男性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，采取从尿道口溢出的脓性分泌物或用无菌男性拭子插入尿道内24厘米取出分泌物。如无脓液溢出，可从阴茎的腹面向龟头方向按摩，促使分泌物溢出。 女性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，然后从阴道内诊压迫尿道，或
23、从尿道的后面向前按摩，使分泌物溢出。无肉眼可见的脓液，可用灭菌拭子轻轻深入前尿道内，旋转拭子，采集标本。 生殖道标本采集方法生殖道标本采集方法l2 巴氏腺、尿道旁腺：清洗或局部消毒，然后压迫腺体，使分泌物溢出。l3 阴道分泌物：用窥器扩张阴道，用灭菌女性拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹隆处分泌物培养或涂片镜检。l4 宫颈分泌物：用窥器扩张阴道，先用无菌棉球擦取宫颈口分泌物；用女性拭子插入宫颈管2厘米采取分泌物，转动并停留1020秒钟，让拭子充分吸附分泌物，或用去针头的注射器吸取分泌物，置入灭菌试管内送检 。生殖道标本采集方法生殖道标本采集方法l5 宫颈内容物：羊膜腔感染时可经腹壁羊膜腔穿刺抽
24、取羊水或经子宫颈插管抽取羊水进行病原体检测。l6 前列腺按摩液：用前列腺按摩法采集前列腺液。l7 精液：受检者应在5天以上未排精，清洗尿道口，采用手淫法或体外排精法，射精于灭菌容器内送检。生殖道标本采集方法生殖道标本采集方法l8 溃疡分泌物：先用生理盐水清洗患处，用灭菌棉拭子取其边缘或其基底部的分泌物，置灭菌试管内送检。l9 组织标本：将组织研磨成细菌匀浆接种液体培养基。 生殖道标本采集注意事项生殖道标本采集注意事项l应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。细菌培养标本采集注意事项：细菌培养标本采集注意事项： 采集标本最好能在用药前采样，以提高阳性率
25、采集标本时必须注意无菌操作，使用密闭的无菌容器，避免污染杂菌 采集标本后应尽快送检，否则病原菌会死亡而影响细菌检查的正确性 采集的标本中不得加防腐剂或消毒剂 报告时间报告时间l涂片找细菌、真菌、隐球菌、结核杆菌等，一般是当天发报告。(周末除外)l普通细菌、真菌培养，若为阴性2-3天发报告，若为阳性4-5天发报告。l血培养阳性报危急值，阴性5天发报告小结小结l正确的采集方法l具有参考价值的的检验结果小结小结l加强培训工作加强培训工作l正确规范的采集（无菌观念）正确规范的采集（无菌观念）l及时送检及时送检l正确地选择检查目的正确地选择检查目的l应用良好正确的检测技术和方法应用良好正确的检测技术和方法正正确确的的检检验验结结果果正确的诊断和治疗正确的诊断和治疗
