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1、日立日立F-4500荧光光谱仪荧光光谱仪2024/7/26荧光分析法：是基于被测物质的荧光谱线位置及其强度进行荧光分析法：是基于被测物质的荧光谱线位置及其强度进行的分析方法（属于发射光谱法）。的分析方法（属于发射光谱法）。应用对象：应用对象：一般是能产生强荧光的分子或某些特定离子一般是能产生强荧光的分子或某些特定离子本章重点：本章重点：（1）分子荧光产生的过程（）分子荧光产生的过程（2）荧光与分子结构关系）荧光与分子结构关系（3）分子荧光定量方法）分子荧光定量方法 2024/7/26一、分子荧光与磷光的产生过程一、分子荧光与磷光的产生过程1. 1. 分子电子能级与激发过程分子电子能级与激发过程
2、分分子子能能级级比比原原子子能能级级复复杂杂；在在每每个个分分子子的的电电子子能能级级上上，都都存存在振动、转动能级。多数在振动、转动能级。多数分子常温时处在基态最低振分子常温时处在基态最低振动能级，当吸收能量便可发动能级，当吸收能量便可发生能级间跃迁。生能级间跃迁。为便于说明电子跃迁过程，为便于说明电子跃迁过程，必须确定电子能级的多重性必须确定电子能级的多重性用符号用符号M M表示。表示。 M=2S+1 M=2S+1，S S轨道总自旋量子数轨道总自旋量子数 2024/7/26S S为电子自旋量子数的代数和为电子自旋量子数的代数和( (要么为要么为0 0要么为要么为1)1)；S=0S=0时时M
3、=1M=1，此时电子所处的能态为单重态用符号，此时电子所处的能态为单重态用符号S S表示。表示。S=1S=1时时M=3M=3，此时电子所处的能态为三重态用符号此时电子所处的能态为三重态用符号T表示。表示。平平行行自自旋旋比比成成对对自自旋旋稳稳定定( (洪洪特特规规则则) )，三三重重态态能能级级比比相相应应单单重态能级低；大多数有机分子的基态处于单重态用重态能级低；大多数有机分子的基态处于单重态用S S0 0表示；表示； 2024/7/26电子吸收一定能量由基态电子吸收一定能量由基态(S0)向激发态发生跃迁向激发态发生跃迁若电子方向不改变若电子方向不改变产生激发单重态产生激发单重态(用用S1
4、、S2表示表示) )若电子方向改变若电子方向改变产生激发三重态产生激发三重态(用用T1、T2表示表示)激激发发态态基基态态：多多种种途途径径和和方方式式( (见见能能级级图图) )；速速度度最最快快、激激发态寿命最短的途径占优势；发态寿命最短的途径占优势；2024/7/262.2.激发态激发态基态的能量传递途径基态的能量传递途径电电子子处处于于激激发发态态是是不不稳稳定定状状态态，返返回回基基态态时时，通通过过辐辐射射跃跃迁迁(发光发光)和无辐射跃迁等方式失去能量和无辐射跃迁等方式失去能量传递途径传递途径辐射跃迁辐射跃迁荧光荧光磷光磷光内转换内转换外转移外转移振动驰预振动驰预系间跨越系间跨越无
5、辐射跃迁无辐射跃迁激激发发态态停停留留时时间间越越短短、返返回回速速度度越越快快的的途途径径，发发生生几几率率最最大大，发光强度相对也越最大；发光强度相对也越最大；荧光：荧光：10-710 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级第一激发单重态的最低振动能级基态；基态；磷光：磷光：10-410s；第一激发三重态的最低振动能级；第一激发三重态的最低振动能级基态；基态；2024/7/26S2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越系间跨越内转换内转换振动弛豫振动弛豫能能量量 2 1 3 外转换 2T2内转换内转换振动弛豫2024/7/26（1 1）振动弛豫）振动弛豫（Vibrat
6、ional Relaxation, VRVibrational Relaxation, VR）在在液液相相或或压压力力足足够够高高的的气气相相中中，处处于于激激发发态态的的分分子子通通过过与与溶溶剂剂分分子子碰碰撞撞而而将将部部分分能能量量以以热热的的形形式式传传递递给给周周围围的的溶溶剂剂分分子子，电电子子则则从从高高振振动动能能层层返返回回到到低低的的振振动动能能级级的的过过程程，称称为为振振动动弛豫。该过程在同一电子能级内进行。弛豫。该过程在同一电子能级内进行。（2 2）内转换）内转换（Internal ConversionInternal Conversion，ICIC）对对于于具具有
7、有相相同同多多重重度度的的分分子子，若若较较高高电电子子能能级级的的低低振振动动能能层层与与较较低低电电子子能能级级的的高高振振动动能能层层相相重重叠叠时时，则则电电子子可可在在重重叠叠的的能能层层之之间间通通过过振振动动耦耦合合产产生生无无辐辐射射跃跃迁迁的的过过程程，如如S S2 2-S-S1 1；T T2 2-T-T1 1。该过程在同一类电子能级相邻的激发态间进行。该过程在同一类电子能级相邻的激发态间进行。2024/7/26（3）外转换（）外转换（External Conversion，EC）受受激激分分子子与与溶溶剂剂分分子子或或其其它它分分子子相相互互碰碰撞撞而而失失去去能能量量，从
8、从而而使使荧荧光光或或磷磷光光强强度度减减弱弱甚甚至至消消失失的的过过程程，也也称称“熄熄灭灭”或或“猝灭猝灭”。该过程发生在。该过程发生在S1S0，T1S0（4）系间跨跃（）系间跨跃（Intersystem Conversion，ISC）系系间间跨跨跃跃是是发发生生在在两两个个不不同同多多重重态态之之间间的的无无辐辐射射跃跃迁迁，如如从从S1到到T1，该该跃跃迁迁是是禁禁阻阻的的。然然而而，当当不不同同多多重重态态的的两两个个电电子子能能层层有有较较大大重重叠叠时时，处处于于这这两两个个能能层层上上的的受受激激电电子子的的自自旋旋方方向向发发生生变变化化，即即可可通通过过自自旋旋-轨轨道道耦
9、耦合合而而产产生生无无辐辐射射跃跃迁迁，该过程称为系间跨跃。发生在不同多重态之间该过程称为系间跨跃。发生在不同多重态之间2024/7/26（5 5）荧光发射）荧光发射电电子子从从第第一一激激发发单单重重态态最最低低振振动动能能级级（时时间间1010-9-9-10-10-7-7s s）以以辐辐射射形形式式跃跃迁迁到到基基态态各各振振动动能能级级所所产产生生的的光光子子辐辐射射称称为为荧荧光光或或荧荧光光发发射射。由由于于各各种种去去活活化化过过程程的的存存在在，荧荧光光辐辐射射能能通通常常要比激发光能量低，即荧光波长总是大于激发波长。要比激发光能量低，即荧光波长总是大于激发波长。（6 6）磷光发
10、射）磷光发射电电子子从从第第一一激激发发三三重重态态的的最最低低振振动动能能级级以以辐辐射射形形式式跃跃迁迁到到基基态态的的各各个个振振动动能能级级所所产产生生的的光光子子辐辐射射称称为为磷磷光光或或磷磷光光发发射射。由由于于三三重重态态振振动动能能级级比比单单重重态态的的低低，即即磷磷光光波波长长总总是是大大于于荧荧光波长。光波长。2024/7/26二、荧光的激发光谱和发射光谱二、荧光的激发光谱和发射光谱荧光：光致发光，照射光波长如何选择？荧光：光致发光，照射光波长如何选择？1.1.荧光的激发光谱（曲线）荧光的激发光谱（曲线）固定发射波长固定发射波长( (选最大发射波长选最大发射波长),),
11、通过激发单色器扫描，以不同激发通过激发单色器扫描，以不同激发光照射荧光物质，记录荧光强度对光照射荧光物质，记录荧光强度对激发光波长的关系曲线（图中曲线激发光波长的关系曲线（图中曲线I I）。）。激发光谱曲线的最高处，处于激激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，发射的荧光强度发态的分子最多，发射的荧光强度最大。最大。2024/7/262.2.荧光光谱荧光光谱( (发射光光谱发射光光谱) )固定激发光波长和强度固定激发光波长和强度( (选最大选最大激发波长激发波长), ), 通过发射单色器扫通过发射单色器扫描，记录荧光强度与发射光波长描，记录荧光强度与发射光波长关系的曲线关系的曲线( (图中
12、曲线图中曲线II) )。任何荧光都具有两种特征光谱：任何荧光都具有两种特征光谱：激发光谱与发射光谱。激发光谱与发射光谱。它们是荧光定性分析的基础。它们是荧光定性分析的基础。由由于不同物质具不同的特征发射峰，于不同物质具不同的特征发射峰，因而使用荧光发射光谱可用于鉴因而使用荧光发射光谱可用于鉴别荧光物质。别荧光物质。2024/7/263.3.激发光谱与发射光谱的关系激发光谱与发射光谱的关系（1 1）StokesStokes位移位移激激发发光光谱谱与与发发射射光光谱谱之之间间的的波波长长差差值值。发发射射光光谱谱的的波波长长比比激激发光谱的长，发光谱的长，振动弛豫消耗了能量。振动弛豫消耗了能量。（
13、2）发射光谱的形状与激发波长无关发射光谱的形状与激发波长无关电电子子跃跃迁迁到到不不同同激激发发态态能能级级，吸吸收收不不同同波波长长能能量量( (如如能能级级图图 2 , 1)，产产生生不不同同吸吸收收带带，但但均均回回到到第第一一激激发发单单重重态态的的最最低低振动能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光振动能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光(如如 2 )。 （3）镜像规则）镜像规则通通常常荧荧光光发发射射光光谱谱与与它它的的吸吸收收光光谱谱（与与激激发发光光谱谱形形状状一一样样）成镜像对称关系。成镜像对称关系。 2024/7/26200250300350400450500荧光激发光谱荧
14、光激发光谱荧光发射光谱荧光发射光谱nm蒽的激发光谱和荧光光谱蒽的激发光谱和荧光光谱2024/7/26二、二、 荧光产生与分子结构关系荧光产生与分子结构关系1、产生并可观察到荧光的条件：产生并可观察到荧光的条件：（1）分子必须具有强的紫外可见吸收结构（内因）；）分子必须具有强的紫外可见吸收结构（内因）；（2）吸吸收收特特征征频频率率的的光光后后，应应可可产产生生具具一一定定量量子子效效率率的的荧荧光光量子数。即量子效率光光量子数。即量子效率 足够大：足够大：可可见见，凡凡是是使使 kF 增增加加，使使其其它它去去活活化化常常数数降降低低的的因因素素均均可可增增加加荧荧光光量量子子产产率率。通通常
15、常kF 由由分分子子结结构构决决定定（内内因因），而而其其它它参参数数则则由由化化学学环环境境和和结结构构共共同同决决定定。一一般般物物质质的的荧荧光光量子效率为量子效率为012024/7/262.2.有机化合物分子结构与荧光关系有机化合物分子结构与荧光关系（1）跃跃迁迁类类型型： * 的的荧荧光光效效率率高高，系系间间跨跨越越过过程程的的速速率率常数小，有利于荧光的产生；常数小，有利于荧光的产生；（2）共轭效应：提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移）共轭效应：提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移（3）刚刚性性平平面面结结构构：可可降降低低分分子子振振动动，减减少少与与溶溶剂剂的的相相互互
16、作作用用，故故具具有有很很强强的的荧荧光光。如如荧荧光光素素和和酚酚酞酞有有相相似似结结构构，荧荧光光素有很强的荧光，酚酞却没有。素有很强的荧光，酚酞却没有。（4）取代基效应：给电子基）取代基效应：给电子基如如NH2、OH、OCH3使荧光增强，波长长移；吸使荧光增强，波长长移；吸电子基如电子基如NO2、F、Cl使荧光减弱或熄灭。使荧光减弱或熄灭。2024/7/262024/7/263.3.影响荧光强度外部因素影响荧光强度外部因素（1）温度：对荧光强度有显著影响）温度：对荧光强度有显著影响。随温度升高荧光强度降。随温度升高荧光强度降低。低。因为内、外转换增加、粘度或因为内、外转换增加、粘度或“刚
17、性刚性”降低）。因此体降低）。因此体系降低温度可增加荧光分析灵敏度系降低温度可增加荧光分析灵敏度（2）溶剂：）溶剂：溶剂极性可增加或降低荧光强度（改变溶剂极性可增加或降低荧光强度（改变 *及及n * 跃迁的能量）；另外与溶剂作用从而改变荧光物质结跃迁的能量）；另外与溶剂作用从而改变荧光物质结构来增加或降低荧光强度。构来增加或降低荧光强度。（3）酸度：具酸或碱性基团的有机物质，在不同）酸度：具酸或碱性基团的有机物质，在不同pH值时，值时，其结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变；对无机荧其结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变；对无机荧光物质，因光物质，因pH值会影响其稳定性，因而也可使其荧
18、光强度发值会影响其稳定性，因而也可使其荧光强度发生改变。生改变。2024/7/26第十一第十一 章章 荧光分析法荧光分析法一、荧光强度与浓度关系一、荧光强度与浓度关系二、定量方法二、定量方法第二节 荧光定量分析方法2024/7/26一、荧光强度与物质浓度关系一、荧光强度与物质浓度关系 荧光强度荧光强度 F正比于吸收的光量正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率和荧光量子效率 ： F = Ia 由朗由朗-比耳定律：比耳定律： Ia = I0(1-10- l c ) F = I0(1-10- l c ) = I0(1-e-2.3 l c ) 浓度很低时（浓度很低时（ l c 0.050.05），将括号项
19、近似处理后：），将括号项近似处理后： F = 2.3 I0 l c = KC K荧荧光光系系数数（与与物物质质性性质质、激发波长、发射波长、溶剂、温度有关）激发波长、发射波长、溶剂、温度有关）二、定量方法二、定量方法1 1、校校正正曲曲线线法法：用用已已知知量量的的标标准准物物质质经经过过和和试试样样一一样样的的处处理理后，后，配制成系列标准溶液，在一定的仪器条件下测定这些配制成系列标准溶液，在一定的仪器条件下测定这些2024/7/26Fci溶液的荧光强度，以标准溶液的浓度为横坐标，对应的荧光溶液的荧光强度，以标准溶液的浓度为横坐标，对应的荧光强度为纵坐标绘制出标准曲线，再在相同条件下测量未知
20、试强度为纵坐标绘制出标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上查出试样的浓度。样的荧光强度，在标准曲线上查出试样的浓度。在测定工作曲线时，常采用系列中某一标准溶液作在测定工作曲线时，常采用系列中某一标准溶液作为基准，将空白溶液的荧光强度为基准，将空白溶液的荧光强度读数调至读数调至0，将该标准溶液的，将该标准溶液的荧光强度读数调至荧光强度读数调至100或或50，然后测定系列中其他标准溶液的然后测定系列中其他标准溶液的荧光强度。所以荧光强度实为相荧光强度。所以荧光强度实为相对值。对值。2024/7/26注意事项注意事项（1）为了使不同时间所测得的标准曲线先后一致，每次绘为了使不同
21、时间所测得的标准曲线先后一致，每次绘制工作曲线时最好采用同一种稳定的荧光物质（硫酸奎宁制工作曲线时最好采用同一种稳定的荧光物质（硫酸奎宁溶液）来校正仪器的读数。（溶液）来校正仪器的读数。（2）另外，在测量时标准溶液）另外，在测量时标准溶液和试样溶液的荧光强度，都应扣除空白溶液的荧光强度。和试样溶液的荧光强度，都应扣除空白溶液的荧光强度。理想的或者说真实的空白溶液，原则上应当具有与未知试理想的或者说真实的空白溶液，原则上应当具有与未知试样溶液中除分析物质以外的同样组成，可是对于实际遇到样溶液中除分析物质以外的同样组成，可是对于实际遇到的复杂分析体系，很少有可能获得这种真实的空白溶液，的复杂分析体
22、系，很少有可能获得这种真实的空白溶液，在实验中通常只能采用近似于真实空白溶液。最简单的是在实验中通常只能采用近似于真实空白溶液。最简单的是溶剂空白。溶剂空白。2024/7/26它只能用来校正溶剂中的荧光物质，适合于不被荧光杂质它只能用来校正溶剂中的荧光物质，适合于不被荧光杂质沾污的荧光化合物的直接测定。（沾污的荧光化合物的直接测定。（3）采用试剂空白则更好）采用试剂空白则更好一些，由于试剂空白除含溶剂之外，还含有与标准及试样一些，由于试剂空白除含溶剂之外，还含有与标准及试样溶液中相同浓度的各种试剂，因而它可以校正试剂中的杂溶液中相同浓度的各种试剂，因而它可以校正试剂中的杂质所引起的吸收和发光，
23、可用于间接测定法。（质所引起的吸收和发光，可用于间接测定法。（4）但这两）但这两种空白都无法校正原已存在于试样中的基体和沾污物，有种空白都无法校正原已存在于试样中的基体和沾污物，有时候可以通过加入某种化合物于试样溶液中，而这种化合时候可以通过加入某种化合物于试样溶液中，而这种化合物可特效地猝灭分析物质的荧光，从而获得一种很接近于物可特效地猝灭分析物质的荧光，从而获得一种很接近于真实的空白溶液。如测真实的空白溶液。如测VB2时用连二亚硫酸钠时用连二亚硫酸钠Na2S2O42024/7/262 2、比、比较法：如果已知某法：如果已知某测定物定物质的的荧光校准曲光校准曲线浓度的度的线性范性范围，取已知
24、量的，取已知量的荧光物光物质配成一配成一标准溶液，准溶液，测定其定其荧光光强度。然后在同度。然后在同样条件下条件下测定定试样溶液的溶液的荧光光强度，由度，由标准准溶液的溶液的浓度和两个溶液的度和两个溶液的荧光光强度的比度的比值求得求得试样中中荧光物光物质的含量。的含量。3 3、联立方程法（多立方程法（多组分）：依据就是分）：依据就是荧光光强度具有加和性度具有加和性（1 1）当混合物中各）当混合物中各组分的分的荧光峰相距光峰相距颇远、彼此干、彼此干扰很小很小时，可分，可分别在不同的在不同的发射波射波长测定各个定各个组分的分的荧光光强度，然度，然后按后按单一一组分定量方法分定量方法进行定量。行定量
25、。（2 2）若混合物中各）若混合物中各组分的分的荧光峰相近，彼此光峰相近，彼此严重重叠，但重重叠，但2024/7/26它它们激激发光光谱确有确有显著的差著的差别，这时可可选择不同的激不同的激发波波长进行行测定，然后按定，然后按单一一组分分进行定量。行定量。（3 3）选择两波两波长时仍无法达到混合物各仍无法达到混合物各组分的分分的分别测定，定，这时就要就要进行行联和和测定，解定，解联立方程而求得。立方程而求得。例如：硫胺例如：硫胺荧的激的激发峰在峰在385nm385nm，荧光峰在光峰在435nm435nm，吡，吡啶硫胺硫胺荧激激发峰在峰在410nm410nm，荧光峰在光峰在480nm480nm，
26、采用，采用385nm或或410nm为激发峰，测定混合物的试样溶液在为激发峰，测定混合物的试样溶液在435nm和和480nm的荧的荧光强度光强度F，然后由所测出的混合物的荧光强度及事先测定的，然后由所测出的混合物的荧光强度及事先测定的硫胺荧和吡啶硫胺荧在上述的激发波长和发射波长下的相应硫胺荧和吡啶硫胺荧在上述的激发波长和发射波长下的相应荧光系数而列出下列方程。荧光系数而列出下列方程。2024/7/26假设选择假设选择385nm作为激发波长作为激发波长例题：利用连二亚硫酸钠可熄灭核黄色发出的荧光来测定奶例题：利用连二亚硫酸钠可熄灭核黄色发出的荧光来测定奶粉中的维生素粉中的维生素含量。精确称取含量。
27、精确称取0.5000g奶粉，加奶粉，加pH=4.6的的HAcNaAc缓冲液沉淀蛋白质，移入缓冲液沉淀蛋白质，移入50ml溶量瓶中，加溶量瓶中，加水至刻线，摇匀，过滤，取滤液测得荧光强度水至刻线，摇匀，过滤，取滤液测得荧光强度Fx=28.5，取，取出比色皿加入少量的连二亚硫酸钠，迅速摇匀使维生素出比色皿加入少量的连二亚硫酸钠，迅速摇匀使维生素B22024/7/26荧荧光光熄熄灭灭，立立即即再再测测荧荧光光强强度度为为F Fo o=6.20=6.20。在在另另一一比比色色皿皿中中加加入入24ml24ml被被测测维维生生素素B B2 2溶溶液液后后再再加加入入浓浓度度为为0.25000.2500g/
28、mlg/ml维维生生素素B B2 2标标准准溶溶液液1ml1ml，测测得得荧荧光光强强度度为为F=48.6F=48.6。计计算算奶奶粉粉中中维维生生素素B B2 2的含量的含量 解：选用比较法，设含量为解：选用比较法，设含量为C CX X（g/mlg/ml） 28.5-6.20=K 28.5-6.20=K CX 48.6-6.20=K(Cx+CC)=K(Cx+10.2500/25) Cx=0.0111 g/ml， 则则 奶奶 粉粉 中中 维维 生生 素素 B2含含 量量 为为 0.011150/0.5000=0.2775 g/g2024/7/26三、荧光分析法的应用三、荧光分析法的应用(1)(
29、1)无机化合物的分析无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量；可测量约与有机试剂配合物后测量；可测量约6060多种元素。多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法；铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定；氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定；铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定；铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定(2)(2)生物与有机化合物的分析（见表）生物与
30、有机化合物的分析（见表） 2024/7/262024/7/262024/7/26第十一第十一 章章 荧光分析法荧光分析法一、流程图一、流程图二、主要组成部件二、主要组成部件三、应用实例三、应用实例第三节 荧光分光光度计2024/7/26光光源源第一第一单色器单色器第二第二单色器单色器激激发发荧光荧光样品池样品池检测系统检测系统一、荧光光度计示意图一、荧光光度计示意图2024/7/26仪仪器器光光路路图图2024/7/26可获得三维光谱图的仪器可获得三维光谱图的仪器 可获得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧可获得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧( (磷磷) )光光谱图光光谱图2024/7/262、
31、 分光系统分光系统(双单色器双单色器)第一单色器作用：选择激发波长第一单色器作用：选择激发波长第二单色器作用：分离出荧光发射波长第二单色器作用：分离出荧光发射波长二、主要部件二、主要部件1、光源、光源氙弧灯：氙弧灯：250-800 nm连续光谱连续光谱高压汞灯：线光谱（最好）高压汞灯：线光谱（最好）3、 样品池：石英材料做成的四面透光比色皿，样品池：石英材料做成的四面透光比色皿，1cm4 、检测器：光电倍增管、检测器：光电倍增管2024/7/26三、应用实例三、应用实例荧光光度法测量维生素荧光光度法测量维生素B2（标准曲线法）（标准曲线法）维生素维生素B2也称核黄素，在也称核黄素，在43048
32、0nm蓝光照射下会发生绿色蓝光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在荧光，荧光峰在525nm。在。在pH为为67溶液中它的荧光强度最溶液中它的荧光强度最大，而在大，而在pH=11溶液中荧光消失。溶液中荧光消失。（1）先确定激发光谱和发射光谱）先确定激发光谱和发射光谱用用1醋酸溶液溶解核黄素标准品并用醋酸溶液溶解核黄素标准品并用1醋酸稀释定容，制醋酸稀释定容，制得一定浓度的标准溶液，将标准溶液装入比色皿后放入仪器得一定浓度的标准溶液，将标准溶液装入比色皿后放入仪器的池架上，关好样品室盖，进行激发光谱和发射光谱扫描。的池架上，关好样品室盖，进行激发光谱和发射光谱扫描。（2）绘制标准曲线）绘制标准曲线2024/7/26配制系列标准溶液，在固定激发波长和发射波长条件下测量配制系列标准溶液，在固定激发波长和发射波长条件下测量荧光强度。荧光强度。（3）待测试样的处理和测量）待测试样的处理和测量溶解维生素溶解维生素B2片剂，摇匀静止后吸取上层清液配制溶液，在片剂，摇匀静止后吸取上层清液配制溶液，在相同实验条件下进行测量荧光强度，由标准曲线查找浓度或相同实验条件下进行测量荧光强度，由标准曲线查找浓度或含量。含量。2024/7/26
