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1、基金申请技巧讲座基金申请技巧讲座第四军医大学科研部第四军医大学科研部苏景宽苏景宽第第一一部分部分 如何撰写申请书如何撰写申请书一、摘一、摘 要（限要（限400400字）字）包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。 如：采用如：采用方法，进行方法，进行研究，研究， 阐明阐明机制或揭示机制或揭示规律，规律， 为为奠定基础提供奠定基础提供思路。思路。作用：作用：画龙点睛画龙点睛效果：效果：引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心 “他到底是怎
2、么做的他到底是怎么做的 ？ ” 采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。通过基因转染在体和通过基因转染在体和通过基因转染在体和通过基因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状
3、体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，子生物学机制，子生物学机制，子生物学机制，为防治白内障提供
4、新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。二、立论依据二、立论依据 对基础研究，对基础研究，对基础研究，对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势， 论述论述论述论述科学意义科学意义科学意义科学意义 对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围 绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技
5、问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题 论述论述论述论述应用前景应用前景应用前景应用前景 在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、 具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理解 研究领域：研究领域：研究领域：研究领域：白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、 治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究 研究
6、方向：研究方向：研究方向：研究方向：白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病 靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等 科学问题：科学问题：科学问题：科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病 基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导
7、等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等在研究领域层面在研究领域层面从研究方向展开从研究方向展开围绕某一具体科学问题围绕某一具体科学问题（本项目研究目标）（本项目研究目标）进行归纳分析进行归纳分析提出研究提出研究设想设想从从研究领域切入研究领域切入研究意义研究意义国内外现状分析国内外现状分析 1 1 1 1、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大 撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法
8、： 从从从从领域领域领域领域入手，提出主要问题入手，提出主要问题入手，提出主要问题入手，提出主要问题，引出热点研究方向，引出热点研究方向，引出热点研究方向，引出热点研究方向。 围绕围绕围绕围绕热点研究热点研究热点研究热点研究方向进行简要分析，找出目前尚未解方向进行简要分析，找出目前尚未解方向进行简要分析，找出目前尚未解方向进行简要分析，找出目前尚未解决的具体科学决的具体科学决的具体科学决的具体科学问题，以此为切入点提出假设，阐述如果问题，以此为切入点提出假设，阐述如果问题，以此为切入点提出假设，阐述如果问题，以此为切入点提出假设，阐述如果解决解决解决解决了该问题（研究了该问题（研究了该问题（研
9、究了该问题（研究目标），对该目标），对该目标），对该目标），对该领域领域领域领域甚至相关甚至相关甚至相关甚至相关领域领域领域领域的的的的科学贡献科学贡献科学贡献科学贡献（理论意义理论意义理论意义理论意义或应用前景）或应用前景）或应用前景）或应用前景）。 老年性白内障老年性白内障老年性白内障老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增 加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高
10、。特别是人类趋向老龄化， 白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类它已是人类它已是人类它已是人类 第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。迄今为止迄今为止迄今为止迄今为止, , , , 治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的 方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶
11、状体。 虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的 术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障 所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重 的医疗负担
12、。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的 发病时间延缓发病时间延缓发病时间延缓发病时间延缓10101010年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少45%45%45%45%1111。 所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过预防白内障预防白内障预防白内障预防白内障发生或延缓其发展发生或延缓其发展发生或延缓其发展发生或延缓其发展 的途径征服
13、白内障的途径征服白内障的途径征服白内障的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济 问题问题问题问题2222。 但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障发病机理发病机理发病机理发病机理的认识的认识的认识的认识还不十分还不十分还不十分还不十分清楚。清楚。清楚。清楚。多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状
14、体上皮细胞在老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变化的相关基因化的相关基因化的相关基因化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手
15、，研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年
16、性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治
17、白内障提供新思路和理论依据。 2 2 2 2、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别） 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题： A A A A、低水平重复：低水平重复：低水平重复：低水平重复：不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现 状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。 B B B B、文献复习不全：文献复习不全：文献复习不全：文
18、献复习不全：检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词 不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。 C C C C、总结表达不够：总结表达不够：总结表达不够：总结表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析， 只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。 D D 、对方法原理理解不够对方法原理理解不
19、够对方法原理理解不够对方法原理理解不够：对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简 单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。 撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法：要要要要紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。 A A A A、从从从从领域领域领域领域切入，切入，切入，切入，简要论述简要论述简要论述简要论述国内外研究国内外研究国内外研究国内外研究成果成果成
20、果成果，并引，并引，并引，并引 出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。 B B B B、从研究方向展开，从研究方向展开，从研究方向展开，从研究方向展开，较详细地分析较详细地分析较详细地分析较详细地分析国内外的研究国内外的研究国内外的研究国内外的研究 进展进展进展进展，阐明在，阐明在，阐明在，阐明在该方向上该方向上该方向上该方向上存在的问题。存在的问题。存在的问题。存在的问题。 C C C C、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究围绕存在的问题，结合国内外以往的研究围绕存在的问题，结合国内外以往的研究围绕存在的问题，结合国内外以往的研究结果、结果
21、、结果、结果、 当前的当前的当前的当前的现状现状现状现状及今后的及今后的及今后的及今后的发展趋势发展趋势发展趋势发展趋势，详细论述和分详细论述和分详细论述和分详细论述和分 析析析析这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、 未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，从而为自己从而为自己从而为自己从而为自己 申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究
22、目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。 D D D D、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。对拟采用的技术方法进行介绍和分析。对拟采用的技术方法进行介绍和分析。对拟采用的技术方法进行介绍和分析。 成熟的方法成熟的方法成熟的方法成熟的方法重点介绍可以应用于本研究的理论重点介绍可以应用于本研究的理论重点介绍可以应用于本研究的理论重点介绍可以应用于本研究的理论依据和实验依据。依据和实验依据。依据和实验依据。依据和实验依据。 新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上，阐明可，阐明可，阐明可，阐明可以
23、应用于本研究的理论依据和实验依据。以应用于本研究的理论依据和实验依据。以应用于本研究的理论依据和实验依据。以应用于本研究的理论依据和实验依据。 需特别注意的问题：需特别注意的问题：需特别注意的问题：需特别注意的问题：必须对所运用的技术方必须对所运用的技术方必须对所运用的技术方必须对所运用的技术方法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚，要十分清楚，要十分清楚，要十分清楚，绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。
24、绝不能是一种简单的移植。 例如：抗体例如：抗体例如：抗体例如：抗体 + + + + 功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融合，但存在合，但存在合，但存在合，但存在“活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。 E E E E、提出本项目的研究设想。提出本项目的研究设想。提出本项目的研究设想。提出本项目的研究设想。 防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以
25、来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。就致就致就致就致病的环境因素讲，病的环境因素讲，病的环境因素讲，病的环境因素讲，氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一
26、些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，晶状晶状晶状晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体上晶状体上晶状体上晶状体
27、上皮细胞皮细胞皮细胞皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。 因为因为因为因为晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终
28、生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，此，此，此，晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞还是晶状体中还是晶状体中还是晶状体中还是晶状体中受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响较早较早较早较早的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮
29、细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生还发生还发生还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化与单纯老化与单纯老化与单纯老化的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异3-53-53-53-5 。 体外实
30、验也证实体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实多种因素多种因素多种因素多种因素(H2O2(H2O2(H2O2(H2O2、UV-BUV-BUV-BUV-B、晶状体蛋晶状体蛋晶状体蛋晶状体蛋白的自身抗体白的自身抗体白的自身抗体白的自身抗体) ) ) )诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中晶状体上皮的损伤晶状体上皮的损伤晶状体上皮的损伤晶状体上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节是晶状体混浊的主要环节是晶状体混浊的主要环节是晶状体混浊的主要环节6-86-86-86-8。因此，从晶状体上皮细因此，从晶状体上皮细因此，从晶状体上皮细因此，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白
31、内障的成因，有可能抓住揭示白内胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而障发病机理的主要环节。而障发病机理的主要环节。而障发病机理的主要环节。而晶状体上皮细胞变化的基因晶状体上皮细胞变化的基因晶状体上皮细胞变化的基因晶状体上皮细胞变化的基因调控机制调控机制调控机制调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的问题。问题。问题。问题。 白内障的形成与白
32、内障的形成与白内障的形成与白内障的形成与晶状体的老化晶状体的老化晶状体的老化晶状体的老化密不可分，是晶状密不可分，是晶状密不可分，是晶状密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果，的结果，的结果，的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特
33、异性也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的多种基因表达的多种基因表达的多种基因表达的改变。改变。改变。改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：三方面：三方面：三方面： 一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究。研究。研究。研究。UV-BUV-BUV-BUV-B辐射作用诱导的
34、白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其Na-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATP酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有c-fosc-fosc-fosc-fos基因基因基因基因的表达增加；还有组蛋白
35、的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白H4H4H4H4、H3 H3 H3 H3 的低表达的低表达的低表达的低表达 和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶C C C C、-肌动蛋白、肌动蛋白、肌动蛋白、肌动蛋白、-肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达9-129-129-129-12。CarperCarperCarperCarper等等等等13131313利用利用利用利用RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse
36、transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)技技技技术研究术研究术研究术研究H2O2H2O2H2O2H2O2诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果诱导的晶体上皮细胞的基因差异性
37、表达结果诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显示显示显示显示NADHNADHNADHNADH脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶4 4 4 4亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素b b b b、谷氨酰胺转移酶基谷氨酰胺转移酶基谷氨酰胺转移酶基谷氨酰胺转移酶基因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 2 2 2 （alternative splicing factoralternative splicing fa
38、ctoralternative splicing factoralternative splicing factor）、）、）、）、-三羟基异丁酰三羟基异丁酰三羟基异丁酰三羟基异丁酰辅酶辅酶辅酶辅酶A A A A水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。 二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因（vimentinvimentinvimentinvimentin）、）、）、）、杂交的杂交的杂交的杂交的型中间纤维蛋白基因的转基
39、因型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑制受抑制受抑制受抑制14,1514,1514,1514,15。GongGongGongGong等等等等16161616报告晶状体的细
40、胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白接蛋白接蛋白接蛋白3333（3 3 3 3 ConnexinConnexinConnexinConnexin）基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（knockout knockout knockout knockout mousemousemousemouse）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。响，其后出现与晶状
41、体蛋白溶解有关的核性白内障。响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。 虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。否与老年性白内障形
42、成有关，目前尚缺乏进一步的报告。否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。 三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。Lee17Lee17Lee17Lee17利用利用利用利用RT-PCRRT-PCRRT-PCRRT-PCR技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、I I I I型胶原纤维、型
43、胶原纤维、型胶原纤维、型胶原纤维、-平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、TGF-1TGF-1TGF-1TGF-1、TGF-2TGF-2TGF-2TGF-2、TGF-TGF-TGF-TGF-型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。KantorowKantorowKantorowKantorow等等等等18181818利用利用利用利用RT-PCR-DDRT-PCR-DDRT-PCR-DDRT-PCR-DD研研研研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的
44、究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和12121212个低表个低表个低表个低表达的基因。达的基因。达的基因。达的基因。但就但就但就但就DD-PCRDD-PCRDD-PCRDD-PCR技术来讲，在实验中难以解决假技术来讲，在实验中难以解决假技术来讲，在实验中难以解决假技术来讲，在实验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长阴性、假阳性以及
45、克隆全长阴性、假阳性以及克隆全长阴性、假阳性以及克隆全长cDNAcDNAcDNAcDNA的问题。的问题。的问题。的问题。 上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。 寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状
46、体上寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间皮细胞间皮细胞间皮细胞间差异表达的基因差异表达的基因差异表达的基因差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。 寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术（subtractive hybridization, SHsubtractive hybridization,
47、SHsubtractive hybridization, SHsubtractive hybridization, SH），），），），它是它是它是它是，但是，但是，但是，但是实验操作复杂。实验操作复杂。实验操作复杂。实验操作复杂。 经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交（suppression suppression suppression suppression subtractive hybridization ,SSHsubtractive hybridization ,SSHsubtractive hybridizat
48、ion ,SSHsubtractive hybridization ,SSH是是是是DiatchenkoDiatchenkoDiatchenkoDiatchenko等等等等1996199619961996年年年年建立的方法）建立的方法）建立的方法）建立的方法）简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。 我校生化教研室我校生化教研室我校生化教研室我校生化教研室建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术19191919，20202020，其特点是：其特点是：其特点是：
49、其特点是：简便易行，能够获得目的细胞特异表达简便易行，能够获得目的细胞特异表达简便易行，能够获得目的细胞特异表达简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。 该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异
50、表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中5 5 5 5个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮
51、细胞间差异表达的基因，并克隆到全长cDNAcDNAcDNAcDNA，为进一步为进一步为进一步为进一步的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。 基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知知知知DNADNADNADNA分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。基因芯片是在基因芯片是在基因芯片是在基因芯片是在1996199619961996年
52、被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的DNADNADNADNA探针探针探针探针集中到集中到集中到集中到1 1 1 1厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，DNADNADNADNA探针探针探针探针中的已知碱基序列与被测定的未知中的已知碱基序列与被测定的未知中的已知碱基序列与被测定的未知中的已知碱基序列与被测定的未知DNADNADNADNA分子杂交后由标记分子杂交后由
53、标记分子杂交后由标记分子杂交后由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而对对对对检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知DNADNADNADNA分子。分子。分子。分子。 由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，由于目前尚没有
54、针对白内障研究的现成基因芯片，根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基因建立因建立因建立因建立cDNAcDNAcDNAcDNA文库，再利用基因芯片技术文库，再利用基因芯片技术文库，再利用基因芯片技术文库，再利用基因芯片技术制备成基因芯片制备成基因芯片制备成基因芯片制备成基因芯片，以此以此以此以此检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状检测多个样本中白内障
55、晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，体上皮细胞间差异表达的基因，体上皮细胞间差异表达的基因，体上皮细胞间差异表达的基因，从中从中从中从中进一步筛选出白内进一步筛选出白内进一步筛选出白内进一步筛选出白内障特异的基因障特异的基因障特异的基因障特异的基因，它们中可能有已知基因，也可能有未知，它们中可能有已知基因，也可能有未知，它们中可能有已知基因，也可能有未知，它们中可能有已知基因，也可能有未知基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、
56、有效、准确地得到白内障相关基因。有效、准确地得到白内障相关基因。有效、准确地得到白内障相关基因。有效、准确地得到白内障相关基因。 综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武器。器。器。器。本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减本项目从晶状体上皮
57、细胞入手，利用改良的消减本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障基因转染，探讨它们在晶状体上
58、皮细胞变化和白内障形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理论依据。论依据。论依据。论依据。 3 3 3 3、参考文献、参考文献、参考文献、参考文献 A A A A、文献类别要全文献类别要全文献类别要全文献类别要全：以英文文献为主，同时也要引用：以英文文献为主，同时也要引用
59、：以英文文献为主，同时也要引用：以英文文献为主，同时也要引用 中文文献中文文献中文文献中文文献- - - - 国内同行中知名专家的文献。国内同行中知名专家的文献。国内同行中知名专家的文献。国内同行中知名专家的文献。 B B B B、引文信息要全引文信息要全引文信息要全引文信息要全：文章题目、作者姓名、具体出处：文章题目、作者姓名、具体出处：文章题目、作者姓名、具体出处：文章题目、作者姓名、具体出处 （包括期刊名、年份、卷期、页码等）。（包括期刊名、年份、卷期、页码等）。（包括期刊名、年份、卷期、页码等）。（包括期刊名、年份、卷期、页码等）。 C C C C、文献年代要新文献年代要新文献年代要新
60、文献年代要新：主要是近五年的文献，最好能有：主要是近五年的文献，最好能有：主要是近五年的文献，最好能有：主要是近五年的文献，最好能有 07070707年的最新文献。年的最新文献。年的最新文献。年的最新文献。三、研究方案三、研究方案 1 1 1 1、研究目标、研究目标、研究目标、研究目标 撰写要求：撰写要求：撰写要求：撰写要求： 有限目标，与研究内容相呼应有限目标，与研究内容相呼应有限目标，与研究内容相呼应有限目标，与研究内容相呼应 如：明确如：明确如：明确如：明确关系，揭示关系，揭示关系，揭示关系，揭示规律，规律，规律，规律， 阐明阐明阐明阐明原理（机制），建立原理（机制），建立原理（机制），
61、建立原理（机制），建立方法等方法等方法等方法等举例举例举例举例：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基：筛选出与老年性白内障相关的基因，明确部分基因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐因在白内障形成中的作用，从晶状体上皮变化的角度阐明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。
62、2 2、研究内容：、研究内容： 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：内容过多，一个研究周期难以完成内容过多，一个研究周期难以完成内容过多，一个研究周期难以完成内容过多，一个研究周期难以完成 内容分散，不能集中阐明研究目标内容分散，不能集中阐明研究目标内容分散，不能集中阐明研究目标内容分散，不能集中阐明研究目标 撰写要求：撰写要求：撰写要求：撰写要求：内容要适当内容要适当内容要适当内容要适当确保研究周期内完成确保研究周期内完成确保研究周期内完成确保研究周期内完成 为目标服务为目标服务为目标服务为目标服务与目标相辅相成与目标相辅相成与目标相辅相成与目标相辅相成 要重点阐述要重点阐述要重点阐述要
63、重点阐述注意与技术路线区别注意与技术路线区别注意与技术路线区别注意与技术路线区别 举例举例举例举例： （1 1 1 1）筛选白内障相关基因：）筛选白内障相关基因：）筛选白内障相关基因：）筛选白内障相关基因：采用改良的消减采用改良的消减采用改良的消减采用改良的消减杂交技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正杂交技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正杂交技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正杂交技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞和正常晶状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立常晶状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立常晶状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立常晶状体上皮细胞差异表达的基因片段
64、，建立cDNAcDNAcDNAcDNA文文文文库。制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技库。制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技库。制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技库。制备差异表达基因的基因芯片，利用基因芯片技术从多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选术从多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选术从多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选术从多个标本的老年性白内障晶状体上皮细胞中筛选出白内障相关基因。出白内障相关基因。出白内障相关基因。出白内障相关基因。 （2 2 2 2）研究白内障相关基因的结构）研究白内障相关基因的结构）研究白内障相关基因的结构）研究白内障相关基
65、因的结构： （3 3 3 3）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞变化中的作用的作用的作用的作用： 观察指标如下：观察指标如下：观察指标如下：观察指标如下： 存活细胞数存活细胞数存活细胞数存活细胞数；光镜、透射电镜下细胞形态的光镜、透射电镜下细胞形态的光镜、透射电镜下细胞形态的光镜、透射电镜下细胞形态的变化变化变化变化；细胞凋亡检测细胞凋亡检测细胞凋亡检测细胞凋亡检测：用原位末端标记和连接酶介导：用原位末端标记和连接酶介导：用原位末端标记和连接酶介导：用原位末端标记和连接
66、酶介导PCRPCRPCRPCR方法，从形态和方法，从形态和方法，从形态和方法，从形态和DNADNADNADNA水平分析细胞凋亡；水平分析细胞凋亡；水平分析细胞凋亡；水平分析细胞凋亡；细胞增殖的细胞增殖的细胞增殖的细胞增殖的检测检测检测检测：；细胞骨架蛋白的检测细胞骨架蛋白的检测细胞骨架蛋白的检测细胞骨架蛋白的检测：；晶状体蛋晶状体蛋晶状体蛋晶状体蛋白的检测白的检测白的检测白的检测： 3 3 3 3、拟解决的关键问题：、拟解决的关键问题：、拟解决的关键问题：、拟解决的关键问题： 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：抓不住关键问题或抓得不准。抓不住关键问题或抓得不准。抓不住关键问题或抓得不准。
67、抓不住关键问题或抓得不准。 什么是关键问题什么是关键问题什么是关键问题什么是关键问题 ？ -研究过程中对达预期目标有重要影响的某些研究研究过程中对达预期目标有重要影响的某些研究研究过程中对达预期目标有重要影响的某些研究研究过程中对达预期目标有重要影响的某些研究 内容或因素。内容或因素。内容或因素。内容或因素。 -为达预期目标所必须掌握的关键技术或研究手段。为达预期目标所必须掌握的关键技术或研究手段。为达预期目标所必须掌握的关键技术或研究手段。为达预期目标所必须掌握的关键技术或研究手段。 撰写要求：撰写要求：撰写要求：撰写要求：找出关键问题，提出解决办法。找出关键问题，提出解决办法。找出关键问题
68、，提出解决办法。找出关键问题，提出解决办法。 举例举例举例举例： （1 1 1 1）建立差异表达的）建立差异表达的）建立差异表达的）建立差异表达的cDNAcDNAcDNAcDNA文库文库文库文库： 建立差异建立差异建立差异建立差异cDNAcDNAcDNAcDNA文库是筛选老年性白内障相关基因的文库是筛选老年性白内障相关基因的文库是筛选老年性白内障相关基因的文库是筛选老年性白内障相关基因的前提。为使差异前提。为使差异前提。为使差异前提。为使差异cDNAcDNAcDNAcDNA文库具有代表性，我们采取以下解决方文库具有代表性，我们采取以下解决方文库具有代表性，我们采取以下解决方文库具有代表性，我们
69、采取以下解决方案：案：案：案： 选择各种类型老年性白内障晶状体的前囊膜、取选择各种类型老年性白内障晶状体的前囊膜、取选择各种类型老年性白内障晶状体的前囊膜、取选择各种类型老年性白内障晶状体的前囊膜、取足够大量的标本（拟取足够大量的标本（拟取足够大量的标本（拟取足够大量的标本（拟取50505050例标本）作为建库的例标本）作为建库的例标本）作为建库的例标本）作为建库的mRNAmRNAmRNAmRNA的来源。的来源。的来源。的来源。 利用改良的消减杂交技术可快速、有效地获得差利用改良的消减杂交技术可快速、有效地获得差利用改良的消减杂交技术可快速、有效地获得差利用改良的消减杂交技术可快速、有效地获得
70、差异表达的完整异表达的完整异表达的完整异表达的完整cDNAcDNAcDNAcDNA片段。此技术是本课题组成员主要的研究片段。此技术是本课题组成员主要的研究片段。此技术是本课题组成员主要的研究片段。此技术是本课题组成员主要的研究成果，在应用此项技术中已积累了较丰富的实验经验。成果，在应用此项技术中已积累了较丰富的实验经验。成果，在应用此项技术中已积累了较丰富的实验经验。成果，在应用此项技术中已积累了较丰富的实验经验。（2 2 2 2）制备基因芯片：）制备基因芯片：）制备基因芯片：）制备基因芯片： 制备用于本研究的芯片是筛选老年性白内障相制备用于本研究的芯片是筛选老年性白内障相制备用于本研究的芯片
71、是筛选老年性白内障相制备用于本研究的芯片是筛选老年性白内障相关基因的关键环节。制备基因芯片的关键是在关基因的关键环节。制备基因芯片的关键是在关基因的关键环节。制备基因芯片的关键是在关基因的关键环节。制备基因芯片的关键是在 1 1 1 1平方平方平方平方厘米的基片上放上成百上千的不同基因探针而不使它厘米的基片上放上成百上千的不同基因探针而不使它厘米的基片上放上成百上千的不同基因探针而不使它厘米的基片上放上成百上千的不同基因探针而不使它们发生任何混淆。在制作基因芯片时做到：们发生任何混淆。在制作基因芯片时做到：们发生任何混淆。在制作基因芯片时做到：们发生任何混淆。在制作基因芯片时做到：严格按严格按
72、严格按严格按操作程序进行；操作程序进行；操作程序进行；操作程序进行；在标本的处理及在标本的处理及在标本的处理及在标本的处理及RNARNARNARNA提取时避免污染，提取时避免污染，提取时避免污染，提取时避免污染，否则即会造成严重的损失。只要严格按操作程序进行否则即会造成严重的损失。只要严格按操作程序进行否则即会造成严重的损失。只要严格按操作程序进行否则即会造成严重的损失。只要严格按操作程序进行操作就可以避免发生差错。操作就可以避免发生差错。操作就可以避免发生差错。操作就可以避免发生差错。 （3 3 3 3）在体基因转染：）在体基因转染：）在体基因转染：）在体基因转染： 在体基因转染是进行白内障
73、相关基因功能研究的关在体基因转染是进行白内障相关基因功能研究的关在体基因转染是进行白内障相关基因功能研究的关在体基因转染是进行白内障相关基因功能研究的关键。在体的晶状体上皮细胞大部分处在静息状态，只有位键。在体的晶状体上皮细胞大部分处在静息状态，只有位键。在体的晶状体上皮细胞大部分处在静息状态，只有位键。在体的晶状体上皮细胞大部分处在静息状态，只有位于赤道前区的少量细胞具有分裂活性，而且晶状体表面有于赤道前区的少量细胞具有分裂活性，而且晶状体表面有于赤道前区的少量细胞具有分裂活性，而且晶状体表面有于赤道前区的少量细胞具有分裂活性，而且晶状体表面有一层胶原性质的囊膜包裹。一层胶原性质的囊膜包裹。
74、一层胶原性质的囊膜包裹。一层胶原性质的囊膜包裹。在体晶状体的基因转染的关键在体晶状体的基因转染的关键在体晶状体的基因转染的关键在体晶状体的基因转染的关键是如何使大量分裂后细胞转染，如何使病毒穿过晶状体的是如何使大量分裂后细胞转染，如何使病毒穿过晶状体的是如何使大量分裂后细胞转染，如何使病毒穿过晶状体的是如何使大量分裂后细胞转染，如何使病毒穿过晶状体的囊膜，囊膜，囊膜，囊膜，针对以上问题我们拟采取下列方法解决：针对以上问题我们拟采取下列方法解决：针对以上问题我们拟采取下列方法解决：针对以上问题我们拟采取下列方法解决：选用反选用反选用反选用反转录病毒的慢病毒载体（转录病毒的慢病毒载体（转录病毒的慢
75、病毒载体（转录病毒的慢病毒载体（ lentivirallentivirallentivirallentiviral vector vector vector vector ），），），），它克它克它克它克服了一般反转录病毒只能转染有分裂能力细胞的局限性，服了一般反转录病毒只能转染有分裂能力细胞的局限性，服了一般反转录病毒只能转染有分裂能力细胞的局限性，服了一般反转录病毒只能转染有分裂能力细胞的局限性，对分裂后细胞也能有效的转染。这对在体晶状体的基因转对分裂后细胞也能有效的转染。这对在体晶状体的基因转对分裂后细胞也能有效的转染。这对在体晶状体的基因转对分裂后细胞也能有效的转染。这对在体晶状体的基
76、因转染有很大的优越性。染有很大的优越性。染有很大的优越性。染有很大的优越性。采用直径采用直径采用直径采用直径1-2m1-2m1-2m1-2m玻璃微管在显微镜玻璃微管在显微镜玻璃微管在显微镜玻璃微管在显微镜下将病毒载体注入晶状体的前囊膜下，既不破坏晶状体的下将病毒载体注入晶状体的前囊膜下，既不破坏晶状体的下将病毒载体注入晶状体的前囊膜下，既不破坏晶状体的下将病毒载体注入晶状体的前囊膜下，既不破坏晶状体的完整性，又可使病毒接触到囊膜下的上皮细胞。完整性，又可使病毒接触到囊膜下的上皮细胞。完整性，又可使病毒接触到囊膜下的上皮细胞。完整性，又可使病毒接触到囊膜下的上皮细胞。 4 4 4 4、研究方法、
77、研究方法、研究方法、研究方法 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题： 过于简单：在方案中只有方法名称而无具体步骤。过于简单：在方案中只有方法名称而无具体步骤。过于简单：在方案中只有方法名称而无具体步骤。过于简单：在方案中只有方法名称而无具体步骤。 过于繁杂：大量罗列一些常规的实验方法。过于繁杂：大量罗列一些常规的实验方法。过于繁杂：大量罗列一些常规的实验方法。过于繁杂：大量罗列一些常规的实验方法。 撰写要求：撰写要求：撰写要求：撰写要求：以研究项目的需求为前提，尽量采用以研究项目的需求为前提，尽量采用以研究项目的需求为前提，尽量采用以研究项目的需求为前提，尽量采用最适合的方法和手段，并将其操
78、作步骤和关键环节体现最适合的方法和手段，并将其操作步骤和关键环节体现最适合的方法和手段，并将其操作步骤和关键环节体现最适合的方法和手段，并将其操作步骤和关键环节体现在技术路线当中。在技术路线当中。在技术路线当中。在技术路线当中。 5 5 5 5、技术路线、技术路线、技术路线、技术路线 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题： 不清楚，不详细，不可行。不清楚，不详细，不可行。不清楚，不详细，不可行。不清楚，不详细，不可行。 撰写要求：撰写要求：撰写要求：撰写要求： 清晰、详细、注意逻辑性。清晰、详细、注意逻辑性。清晰、详细、注意逻辑性。清晰、详细、注意逻辑性。 撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写
79、方法： 以时间顺序为主线设计技术路线以时间顺序为主线设计技术路线以时间顺序为主线设计技术路线以时间顺序为主线设计技术路线 以研究内容为主线设计技术路线以研究内容为主线设计技术路线以研究内容为主线设计技术路线以研究内容为主线设计技术路线 分大小标题，突出逻辑关系。分大小标题，突出逻辑关系。分大小标题，突出逻辑关系。分大小标题，突出逻辑关系。 详细地写清楚每个具体步骤。详细地写清楚每个具体步骤。详细地写清楚每个具体步骤。详细地写清楚每个具体步骤。 （1 1 1 1）人晶状体上皮细胞的获得：）人晶状体上皮细胞的获得：）人晶状体上皮细胞的获得：）人晶状体上皮细胞的获得：老年性白内障晶状老年性白内障晶状
80、老年性白内障晶状老年性白内障晶状体上皮细胞取自白内障患者手术中取出的前囊膜（晶状体体上皮细胞取自白内障患者手术中取出的前囊膜（晶状体体上皮细胞取自白内障患者手术中取出的前囊膜（晶状体体上皮细胞取自白内障患者手术中取出的前囊膜（晶状体上皮细胞紧贴于前囊膜），直径约上皮细胞紧贴于前囊膜），直径约上皮细胞紧贴于前囊膜），直径约上皮细胞紧贴于前囊膜），直径约5mm5mm5mm5mm。正常晶状体上皮细正常晶状体上皮细正常晶状体上皮细正常晶状体上皮细胞取自角膜移植供体眼的晶状体，在显微镜下撕下前囊膜，胞取自角膜移植供体眼的晶状体，在显微镜下撕下前囊膜，胞取自角膜移植供体眼的晶状体，在显微镜下撕下前囊膜，胞
81、取自角膜移植供体眼的晶状体，在显微镜下撕下前囊膜，直径约直径约直径约直径约8mm8mm8mm8mm。按文献提供的方法去除晶状体纤维细胞，仔细按文献提供的方法去除晶状体纤维细胞，仔细按文献提供的方法去除晶状体纤维细胞，仔细按文献提供的方法去除晶状体纤维细胞，仔细清洗以去除血细胞污染。清洗以去除血细胞污染。清洗以去除血细胞污染。清洗以去除血细胞污染。 （2 2 2 2）建立差异）建立差异）建立差异）建立差异cDNAcDNAcDNAcDNA文库：文库：文库：文库：从从从从50505050例白内障手术患者例白内障手术患者例白内障手术患者例白内障手术患者的前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为实验组，从的前囊
82、膜上取下的晶状体上皮细胞作为实验组，从的前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为实验组，从的前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为实验组，从25252525例正例正例正例正常晶状体前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为对照组，利常晶状体前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为对照组，利常晶状体前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为对照组，利常晶状体前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为对照组，利用改良的消减杂交技术用改良的消减杂交技术用改良的消减杂交技术用改良的消减杂交技术19191919，20202020，获得差异表达的，获得差异表达的，获得差异表达的，获得差异表达的cDNAcDNAcDNAcDNA，并建立文库。并建立文库。并建立
83、文库。并建立文库。主要的实验流程如下：主要的实验流程如下：主要的实验流程如下：主要的实验流程如下： 正常晶状体上皮细胞正常晶状体上皮细胞正常晶状体上皮细胞正常晶状体上皮细胞 白内障晶状体上皮细胞白内障晶状体上皮细胞白内障晶状体上皮细胞白内障晶状体上皮细胞 PromegaPromegaPromegaPromega PolyATtractPolyATtractPolyATtractPolyATtract System 1000 System 1000 System 1000 System 1000 mRNAmRNAmRNAmRNA分离分离分离分离 mRNAmRNAmRNAmRNA分离分离分离分离o
84、ligo-dT18oligo-dT18oligo-dT18oligo-dT18反转录反转录反转录反转录 ntechntechntechntech Cap-finder Cap-finder Cap-finder Cap-finder方法反转录方法反转录方法反转录方法反转录 cDNAcDNAcDNAcDNA Biotin-21-dUTP Biotin-21-dUTP Biotin-21-dUTP Biotin-21-dUTP pending-pending-pending-pending-cDNAcDNAcDNAcDNA 随机引物随机引物随机引物随机引物PCR PCR PCR PCR 杂交杂交杂
85、交杂交 SephacrylSephacrylSephacrylSephacryl S-400 S-400 S-400 S-400柱柱柱柱 除盐及小片段除盐及小片段除盐及小片段除盐及小片段 链亲和素链亲和素链亲和素链亲和素- - - -生物素磁性分离生物素磁性分离生物素磁性分离生物素磁性分离 除去杂交体及过量正常晶状体上皮细胞除去杂交体及过量正常晶状体上皮细胞除去杂交体及过量正常晶状体上皮细胞除去杂交体及过量正常晶状体上皮细胞cDNAcDNAcDNAcDNA “长距离长距离长距离长距离”PCRPCRPCRPCR 目的目的目的目的cDNAcDNAcDNAcDNA的特异扩增的特异扩增的特异扩增的特异
86、扩增 克隆、鉴定、转化克隆、鉴定、转化克隆、鉴定、转化克隆、鉴定、转化 建立差异基因文库建立差异基因文库建立差异基因文库建立差异基因文库 （3 3 3 3）制备基因芯片筛选白内障相关基因：）制备基因芯片筛选白内障相关基因：）制备基因芯片筛选白内障相关基因：）制备基因芯片筛选白内障相关基因： 基因芯片的制备：基因芯片的制备：基因芯片的制备：基因芯片的制备： 白内障相关基因的筛选：白内障相关基因的筛选：白内障相关基因的筛选：白内障相关基因的筛选： （4 4 4 4）白内障相关基因的结构分析：）白内障相关基因的结构分析：）白内障相关基因的结构分析：）白内障相关基因的结构分析： 序列测定：序列测定：序
87、列测定：序列测定：. . . . . 序列的计算机分析：序列的计算机分析：序列的计算机分析：序列的计算机分析： . . . . . 获得全长基因：获得全长基因：获得全长基因：获得全长基因： . . . . . （5 5 5 5）基因转染：）基因转染：）基因转染：）基因转染： 培养人晶状体上皮细胞的转染：培养人晶状体上皮细胞的转染：培养人晶状体上皮细胞的转染：培养人晶状体上皮细胞的转染： 在体晶状体的转染：在体晶状体的转染：在体晶状体的转染：在体晶状体的转染： 6 6 6 6、可行性分析、可行性分析、可行性分析、可行性分析 对实验方案设计的分析对实验方案设计的分析对实验方案设计的分析对实验方案设
88、计的分析 理论分析理论分析理论分析理论分析 研究手段方法分析研究手段方法分析研究手段方法分析研究手段方法分析 预实验结果分析预实验结果分析预实验结果分析预实验结果分析 对相关条件的分析对相关条件的分析对相关条件的分析对相关条件的分析 所用特殊实验材料（试剂）的分析所用特殊实验材料（试剂）的分析所用特殊实验材料（试剂）的分析所用特殊实验材料（试剂）的分析 对所具备的实验条件进行分析对所具备的实验条件进行分析对所具备的实验条件进行分析对所具备的实验条件进行分析 对项目组成员搭配及其运用技术方法的能力分析对项目组成员搭配及其运用技术方法的能力分析对项目组成员搭配及其运用技术方法的能力分析对项目组成员
89、搭配及其运用技术方法的能力分析(1)(1)(1)(1)关于建立差异关于建立差异关于建立差异关于建立差异cDNAcDNAcDNAcDNA文库：文库：文库：文库： 老年性白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上老年性白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上老年性白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上老年性白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞是处在不同状态下的细胞，细胞基因表达的改变皮细胞是处在不同状态下的细胞，细胞基因表达的改变皮细胞是处在不同状态下的细胞，细胞基因表达的改变皮细胞是处在不同状态下的细胞，细胞基因表达的改变 是细胞蛋白功能等改变的基础。寻找这些有差异的基是细胞蛋白功能等改变的基础。寻找这些有差
90、异的基是细胞蛋白功能等改变的基础。寻找这些有差异的基是细胞蛋白功能等改变的基础。寻找这些有差异的基 因是探索细胞功能、状态变化原因的突破口。利用的因是探索细胞功能、状态变化原因的突破口。利用的因是探索细胞功能、状态变化原因的突破口。利用的因是探索细胞功能、状态变化原因的突破口。利用的 消减杂交技术是筛选差异表达基因的有效方法。改良消减杂交技术是筛选差异表达基因的有效方法。改良消减杂交技术是筛选差异表达基因的有效方法。改良消减杂交技术是筛选差异表达基因的有效方法。改良 的消减杂交技术是我们研究组成员建立的方法，应用的消减杂交技术是我们研究组成员建立的方法，应用的消减杂交技术是我们研究组成员建立的
91、方法，应用的消减杂交技术是我们研究组成员建立的方法，应用 此方法已经从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表此方法已经从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表此方法已经从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表此方法已经从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表 达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其 中中中中 5 5 5 5个为新基因，这一研究成果进一步证实了该方法个为新基因，这一研究成果进一步证实了该方法个为新基因，这一研究成果进一步证实了该方法个为新基因，这一研究
92、成果进一步证实了该方法 的可操作性，而且我们在运用此方法过程中也积累了的可操作性，而且我们在运用此方法过程中也积累了的可操作性，而且我们在运用此方法过程中也积累了的可操作性，而且我们在运用此方法过程中也积累了 较丰富的经验，因此，本研究利用这一方法从两种状较丰富的经验，因此，本研究利用这一方法从两种状较丰富的经验，因此，本研究利用这一方法从两种状较丰富的经验，因此，本研究利用这一方法从两种状 态的晶状体上皮细胞中筛选差异表达的基因并建立态的晶状体上皮细胞中筛选差异表达的基因并建立态的晶状体上皮细胞中筛选差异表达的基因并建立态的晶状体上皮细胞中筛选差异表达的基因并建立 cDNAcDNAcDNAc
93、DNA文库是可行的。文库是可行的。文库是可行的。文库是可行的。 7 7 7 7、创新性、创新性、创新性、创新性 存在问题存在问题存在问题存在问题： 对创新点提炼不够对创新点提炼不够对创新点提炼不够对创新点提炼不够 把运用新技术、新方法理解为创新把运用新技术、新方法理解为创新把运用新技术、新方法理解为创新把运用新技术、新方法理解为创新 与研究目标、研究内容相混淆与研究目标、研究内容相混淆与研究目标、研究内容相混淆与研究目标、研究内容相混淆 对创新的理解对创新的理解对创新的理解对创新的理解： 原始创新：填补空白或修改传统的理论原始创新：填补空白或修改传统的理论原始创新：填补空白或修改传统的理论原始
94、创新：填补空白或修改传统的理论 发明创造新技术、新方法发明创造新技术、新方法发明创造新技术、新方法发明创造新技术、新方法 跟踪创新：补充、完善现有理论跟踪创新：补充、完善现有理论跟踪创新：补充、完善现有理论跟踪创新：补充、完善现有理论 修改、完善现有技术方法（修改、完善现有技术方法（修改、完善现有技术方法（修改、完善现有技术方法（1 1 1 11 1 1 12 2 2 2） 提炼方法：提炼方法：提炼方法：提炼方法：用逆向思维方法提炼创新点用逆向思维方法提炼创新点用逆向思维方法提炼创新点用逆向思维方法提炼创新点 （1 1 1 1）基因筛选方法上的创新：）基因筛选方法上的创新：）基因筛选方法上的创
95、新：）基因筛选方法上的创新： 首次采用改良的消减杂交技术首次采用改良的消减杂交技术首次采用改良的消减杂交技术首次采用改良的消减杂交技术建立白内障晶状建立白内障晶状建立白内障晶状建立白内障晶状体上皮细胞差异表达基因文库，并制备相应的基因芯片体上皮细胞差异表达基因文库，并制备相应的基因芯片体上皮细胞差异表达基因文库，并制备相应的基因芯片体上皮细胞差异表达基因文库，并制备相应的基因芯片，利用此基因芯片利用此基因芯片利用此基因芯片利用此基因芯片筛选出老年性白内障相关基因筛选出老年性白内障相关基因筛选出老年性白内障相关基因筛选出老年性白内障相关基因。上述两。上述两。上述两。上述两种方法的有机结合使我们能
96、种方法的有机结合使我们能种方法的有机结合使我们能种方法的有机结合使我们能快速、准确、定性、定量地快速、准确、定性、定量地快速、准确、定性、定量地快速、准确、定性、定量地获得多个白内障相关基因获得多个白内障相关基因获得多个白内障相关基因获得多个白内障相关基因。通过分析这些基因的结构、。通过分析这些基因的结构、。通过分析这些基因的结构、。通过分析这些基因的结构、研究它们的功能，揭示老年性白内障晶状体上皮细胞变研究它们的功能，揭示老年性白内障晶状体上皮细胞变研究它们的功能，揭示老年性白内障晶状体上皮细胞变研究它们的功能，揭示老年性白内障晶状体上皮细胞变化的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路。化
97、的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路。化的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路。化的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路。 （2 2 2 2）基因功能研究上的创新：）基因功能研究上的创新：）基因功能研究上的创新：）基因功能研究上的创新：. 8 8、年度研究计划及预期研究结果、年度研究计划及预期研究结果 年度研究计划：年度研究计划： 按年度列出研究内容及其阶段目标按年度列出研究内容及其阶段目标 拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划 预期研究结果：预期研究结果： 理论成果：建立理论成果：建立/丰富丰富/补充补充/填补填补 . 技术方
98、法：建立技术方法：建立/完善完善 . 专专 利：可望获得利：可望获得 论论 文：国际、国内文：国际、国内 人才培养：青年科技骨干、博硕研究生人才培养：青年科技骨干、博硕研究生 四、研究基础四、研究基础 1 1、研究工作积累、研究工作积累 存在问题：存在问题： 内容过简；内容过简； 与申请项目无关。与申请项目无关。 撰写要求：撰写要求： 介绍与申请项目直接相关的预实验研究结果；介绍与申请项目直接相关的预实验研究结果； 提供相关的研究论文、成果及专利等材料；提供相关的研究论文、成果及专利等材料； 以往应用与申请项目有关的技术方法的经历；以往应用与申请项目有关的技术方法的经历； 工作积累也要包括项目
99、组成员的工作积累也要包括项目组成员的所有信息。所有信息。 （1 1 1 1）有关消减杂交技术和基因芯片技术的工作基础）有关消减杂交技术和基因芯片技术的工作基础）有关消减杂交技术和基因芯片技术的工作基础）有关消减杂交技术和基因芯片技术的工作基础: : : : 本研究所用的基因筛选技术主要是改良的消本研究所用的基因筛选技术主要是改良的消本研究所用的基因筛选技术主要是改良的消本研究所用的基因筛选技术主要是改良的消减杂交技术，此技术是我们研究组成员主要参与建立减杂交技术，此技术是我们研究组成员主要参与建立减杂交技术，此技术是我们研究组成员主要参与建立减杂交技术，此技术是我们研究组成员主要参与建立的，并
100、利用此技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的的，并利用此技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的的，并利用此技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的的，并利用此技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其中因，其中因，其中因，其中5 5 5 5个为新基因，有关此技术的研究论文有：个为新基因，有关此技术的研究论文有：个为新基因，有关此技术的研究论文有：个为新基因，有关此技术的研究论文有：. （2 2 2 2）有关基因转染方面的研究工作
101、基础：）有关基因转染方面的研究工作基础：）有关基因转染方面的研究工作基础：）有关基因转染方面的研究工作基础：. . . . （3 3 3 3）有关老年性白内障相关基因的研究基础：）有关老年性白内障相关基因的研究基础：）有关老年性白内障相关基因的研究基础：）有关老年性白内障相关基因的研究基础：. 2 2 2 2、工作条件、工作条件、工作条件、工作条件 实验室整体实力和规模（地位、课题、成果等）实验室整体实力和规模（地位、课题、成果等）实验室整体实力和规模（地位、课题、成果等）实验室整体实力和规模（地位、课题、成果等） 实验室所具备的与申请项目相关的主要仪器设备实验室所具备的与申请项目相关的主要仪
102、器设备实验室所具备的与申请项目相关的主要仪器设备实验室所具备的与申请项目相关的主要仪器设备 实验室所在单位具备的申请项目所需的实验条件实验室所在单位具备的申请项目所需的实验条件实验室所在单位具备的申请项目所需的实验条件实验室所在单位具备的申请项目所需的实验条件 3 3 3 3、项目组人员简历、项目组人员简历、项目组人员简历、项目组人员简历 所有人员均需介绍（重点是项目负责人）所有人员均需介绍（重点是项目负责人）所有人员均需介绍（重点是项目负责人）所有人员均需介绍（重点是项目负责人） 介绍内容根据在项目中的分工有所侧重介绍内容根据在项目中的分工有所侧重介绍内容根据在项目中的分工有所侧重介绍内容根
103、据在项目中的分工有所侧重 列出与申请项目相关的研究论文及成果列出与申请项目相关的研究论文及成果列出与申请项目相关的研究论文及成果列出与申请项目相关的研究论文及成果第二部分第二部分撰写申请书时常见问题解析撰写申请书时常见问题解析 1 1、对立论依据、实验方案、研究基础应阐述的内容、对立论依据、实验方案、研究基础应阐述的内容、对立论依据、实验方案、研究基础应阐述的内容、对立论依据、实验方案、研究基础应阐述的内容 以及三者关系的理解以及三者关系的理解以及三者关系的理解以及三者关系的理解 立论依据立论依据立论依据立论依据：阐述背景和理由，回答：阐述背景和理由，回答：阐述背景和理由，回答：阐述背景和理由
104、，回答“ “为什么为什么为什么为什么” ” 实验方案实验方案实验方案实验方案：是申请书的核心，回答：是申请书的核心，回答：是申请书的核心，回答：是申请书的核心，回答“ “怎么做怎么做怎么做怎么做” ” 研究基础研究基础研究基础研究基础：展示积累和实力，回答：展示积累和实力，回答：展示积累和实力，回答：展示积累和实力，回答“ “做了啥做了啥做了啥做了啥” ”一、对部分撰写内容及其相互关系的理解一、对部分撰写内容及其相互关系的理解一、对部分撰写内容及其相互关系的理解一、对部分撰写内容及其相互关系的理解 2 2、对研究目标的确定、对研究目标的确定、对研究目标的确定、对研究目标的确定 国内外现状分析中
105、提出的具体科学问题就是项目国内外现状分析中提出的具体科学问题就是项目国内外现状分析中提出的具体科学问题就是项目国内外现状分析中提出的具体科学问题就是项目的研究目标，研究目标具体到什么程度，要的研究目标，研究目标具体到什么程度，要的研究目标，研究目标具体到什么程度，要的研究目标，研究目标具体到什么程度，要根据研究根据研究根据研究根据研究周期、资助强度来确定。周期、资助强度来确定。周期、资助强度来确定。周期、资助强度来确定。 3 3、研究目标、研究内容、研究方法的关系、研究目标、研究内容、研究方法的关系、研究目标、研究内容、研究方法的关系、研究目标、研究内容、研究方法的关系 依据依据依据依据目标确
106、定研究内容目标确定研究内容目标确定研究内容目标确定研究内容 根据内容选择研究方法根据内容选择研究方法根据内容选择研究方法根据内容选择研究方法4 4 4 4、研究内容与技术路线的区别、研究内容与技术路线的区别、研究内容与技术路线的区别、研究内容与技术路线的区别 研究内容研究内容研究内容研究内容：根据总体目标分若干分题，重点回答：根据总体目标分若干分题，重点回答：根据总体目标分若干分题，重点回答：根据总体目标分若干分题，重点回答 做什么做什么做什么做什么观察指标、阶段目标观察指标、阶段目标观察指标、阶段目标观察指标、阶段目标 技术路线技术路线技术路线技术路线：重点回答怎么做：重点回答怎么做：重点回
107、答怎么做：重点回答怎么做在具体步骤中体现在具体步骤中体现在具体步骤中体现在具体步骤中体现 研究内容和研究方法研究内容和研究方法研究内容和研究方法研究内容和研究方法5 5、对拟解决的关键问题与可行性分析撰写时的区别、对拟解决的关键问题与可行性分析撰写时的区别、对拟解决的关键问题与可行性分析撰写时的区别、对拟解决的关键问题与可行性分析撰写时的区别 二者相同之处：二者相同之处：二者相同之处：二者相同之处：拟解决的关键问题在可行性分析时也要提及拟解决的关键问题在可行性分析时也要提及拟解决的关键问题在可行性分析时也要提及拟解决的关键问题在可行性分析时也要提及 二者不同之处：二者不同之处：二者不同之处：二
108、者不同之处： 撰写拟解决关键问题，撰写拟解决关键问题，撰写拟解决关键问题，撰写拟解决关键问题，重点回答重点回答重点回答重点回答如何解决如何解决如何解决如何解决。 解决办法包括：通过研究思路的设计巧妙解决办法包括：通过研究思路的设计巧妙解决办法包括：通过研究思路的设计巧妙解决办法包括：通过研究思路的设计巧妙 运用最新出现的研究方法运用最新出现的研究方法运用最新出现的研究方法运用最新出现的研究方法 通过不同方法各自优点的有机结合通过不同方法各自优点的有机结合通过不同方法各自优点的有机结合通过不同方法各自优点的有机结合 在进行可行性分析时，在进行可行性分析时，在进行可行性分析时，在进行可行性分析时，
109、重点回答重点回答重点回答重点回答能够解决。能够解决。能够解决。能够解决。 分析问题角度：通过对现有理论分析提供理论依据分析问题角度：通过对现有理论分析提供理论依据分析问题角度：通过对现有理论分析提供理论依据分析问题角度：通过对现有理论分析提供理论依据 通过对预研结果分析提供实验依据通过对预研结果分析提供实验依据通过对预研结果分析提供实验依据通过对预研结果分析提供实验依据 通过对他人研究成果描述提供佐证通过对他人研究成果描述提供佐证通过对他人研究成果描述提供佐证通过对他人研究成果描述提供佐证 6 6、创新点、研究目标和预期研究结果的区别、创新点、研究目标和预期研究结果的区别、创新点、研究目标和预
110、期研究结果的区别、创新点、研究目标和预期研究结果的区别 三者的共同点三者的共同点三者的共同点三者的共同点：都包含一个：都包含一个：都包含一个：都包含一个“ “新新新新” ”字。字。字。字。 三者的不同点三者的不同点三者的不同点三者的不同点：概念的外延不同。：概念的外延不同。：概念的外延不同。：概念的外延不同。 创创创创 新新新新 点：点：点：点： 形态学证实在脑下垂体中形态学证实在脑下垂体中形态学证实在脑下垂体中形态学证实在脑下垂体中确有确有确有确有神经纤维神经纤维神经纤维神经纤维存存存存在在在在 进一步实验证实进一步实验证实进一步实验证实进一步实验证实是是是是肽能神经肽能神经肽能神经肽能神经
111、 研究目标：研究目标：研究目标：研究目标：通过各种形态学研究充分证明在脑下垂体中通过各种形态学研究充分证明在脑下垂体中通过各种形态学研究充分证明在脑下垂体中通过各种形态学研究充分证明在脑下垂体中确确确确 有有有有肽能神经肽能神经肽能神经肽能神经支配支配支配支配 预期研究结果：预期研究结果：预期研究结果：预期研究结果：提出脑下垂体提出脑下垂体提出脑下垂体提出脑下垂体肽能神经和体液双重调节肽能神经和体液双重调节肽能神经和体液双重调节肽能神经和体液双重调节 假说，对原有理论提出挑战。假说，对原有理论提出挑战。假说，对原有理论提出挑战。假说，对原有理论提出挑战。 二二二二、尚需注意的几个问题、尚需注意
112、的几个问题、尚需注意的几个问题、尚需注意的几个问题 1 1 1 1、在项目设计过程中要树立整体观念，要、在项目设计过程中要树立整体观念，要、在项目设计过程中要树立整体观念，要、在项目设计过程中要树立整体观念，要 讲述一个完整的故事。讲述一个完整的故事。讲述一个完整的故事。讲述一个完整的故事。 2 2 2 2、文字表达要精雕细琢，每一句话说明什么、文字表达要精雕细琢，每一句话说明什么、文字表达要精雕细琢，每一句话说明什么、文字表达要精雕细琢，每一句话说明什么 要做到心中有数。要做到心中有数。要做到心中有数。要做到心中有数。 3 3 3 3、文献回顾不能回避国内外最新研究进展，、文献回顾不能回避国
113、内外最新研究进展，、文献回顾不能回避国内外最新研究进展，、文献回顾不能回避国内外最新研究进展， 尤其是不同学派的观点。尤其是不同学派的观点。尤其是不同学派的观点。尤其是不同学派的观点。 4 4 4 4、重点内容、观点要用黑体强调。、重点内容、观点要用黑体强调。、重点内容、观点要用黑体强调。、重点内容、观点要用黑体强调。 第三部分第三部分基金申报相关规定及要求基金申报相关规定及要求一、 基金申报管理规定申请者申请者申请者申请者基本资格基本资格基本资格基本资格：项目的实际负责人；正式受聘，年工作不：项目的实际负责人；正式受聘，年工作不：项目的实际负责人；正式受聘，年工作不：项目的实际负责人；正式受
114、聘，年工作不少于六月；在职研究生只可申请面上项目少于六月；在职研究生只可申请面上项目少于六月；在职研究生只可申请面上项目少于六月；在职研究生只可申请面上项目限项规定限项规定限项规定限项规定：高级专业技术职务的科技工作者申请与承担（含：高级专业技术职务的科技工作者申请与承担（含：高级专业技术职务的科技工作者申请与承担（含：高级专业技术职务的科技工作者申请与承担（含参加）面上、重点、重大等类别基金项目的数量（不包括执参加）面上、重点、重大等类别基金项目的数量（不包括执参加）面上、重点、重大等类别基金项目的数量（不包括执参加）面上、重点、重大等类别基金项目的数量（不包括执行期一年及在一年以内的基金项
115、目）累计不得超过三项行期一年及在一年以内的基金项目）累计不得超过三项行期一年及在一年以内的基金项目）累计不得超过三项行期一年及在一年以内的基金项目）累计不得超过三项项目管理相关规定项目管理相关规定面上项目管理办法面上项目管理办法面上项目包括面上项目包括面上项目包括面上项目包括自由申请项目、青年科学基金项目自由申请项目、青年科学基金项目自由申请项目、青年科学基金项目自由申请项目、青年科学基金项目和地区科学基和地区科学基和地区科学基和地区科学基金项目，资助期限一般为金项目，资助期限一般为金项目，资助期限一般为金项目，资助期限一般为三年三年三年三年 面上项目的申请采取面上项目的申请采取面上项目的申请
116、采取面上项目的申请采取集中受理集中受理集中受理集中受理方式方式方式方式申请者须符合申请者须符合申请者须符合申请者须符合规定规定规定规定要求，并具有高级专业技术职务或已获要求，并具有高级专业技术职务或已获要求，并具有高级专业技术职务或已获要求，并具有高级专业技术职务或已获得博士学位。具有中级专业技术职务但未获得博士学位的研究得博士学位。具有中级专业技术职务但未获得博士学位的研究得博士学位。具有中级专业技术职务但未获得博士学位的研究得博士学位。具有中级专业技术职务但未获得博士学位的研究人员，经两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐，亦可申人员，经两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐，亦可申人员，
117、经两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐，亦可申人员，经两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐，亦可申请。在职研究生作为申请者须征得导师同意请。在职研究生作为申请者须征得导师同意请。在职研究生作为申请者须征得导师同意请。在职研究生作为申请者须征得导师同意青年科学基金项目的申请者限在受理申请青年科学基金项目的申请者限在受理申请青年科学基金项目的申请者限在受理申请青年科学基金项目的申请者限在受理申请当年当年当年当年1 1月月月月1 1日未满日未满日未满日未满3535周岁周岁周岁周岁，并且，并且，并且，并且未曾获得该类项目未曾获得该类项目未曾获得该类项目未曾获得该类项目的资助的资助的资助的资助申请者
118、申请者申请者申请者同期只能申请一项同期只能申请一项同期只能申请一项同期只能申请一项，每个项目的，每个项目的，每个项目的，每个项目的申请者限为一人申请者限为一人申请者限为一人申请者限为一人。申申申申请者和具有高级专业请者和具有高级专业请者和具有高级专业请者和具有高级专业技术职务的项目组主要成员，当年申请技术职务的项目组主要成员，当年申请技术职务的项目组主要成员，当年申请技术职务的项目组主要成员，当年申请及承担（含参加）在研的面上项目数合计及承担（含参加）在研的面上项目数合计及承担（含参加）在研的面上项目数合计及承担（含参加）在研的面上项目数合计不得超过两项不得超过两项不得超过两项不得超过两项。不
119、。不。不。不具有高级专业技术职务的申请者，当年具有高级专业技术职务的申请者，当年具有高级专业技术职务的申请者，当年具有高级专业技术职务的申请者，当年申请及负责申请及负责申请及负责申请及负责在研的面在研的面在研的面在研的面上项目数合计不得超过一项，但参加项数不限上项目数合计不得超过一项，但参加项数不限上项目数合计不得超过一项，但参加项数不限上项目数合计不得超过一项，但参加项数不限面上项目管理办法面上项目管理办法研究经费研究经费研究经费研究经费是指直接用于科学研究的费用。是指直接用于科学研究的费用。是指直接用于科学研究的费用。是指直接用于科学研究的费用。科研业务费科研业务费科研业务费科研业务费：测
120、试计算分析费：测试计算分析费：测试计算分析费：测试计算分析费, ,动力能源费动力能源费动力能源费动力能源费, ,差旅费差旅费差旅费差旅费, ,调研和学术会议费调研和学术会议费调研和学术会议费调研和学术会议费, ,资料、论文版面费和印刷费资料、论文版面费和印刷费资料、论文版面费和印刷费资料、论文版面费和印刷费, ,文献检索、入网等信息通讯费文献检索、入网等信息通讯费文献检索、入网等信息通讯费文献检索、入网等信息通讯费, ,学术刊物订学术刊物订学术刊物订学术刊物订阅费阅费阅费阅费 实验材料费实验材料费实验材料费实验材料费: :原材料、试剂、药品等消耗品购置费原材料、试剂、药品等消耗品购置费原材料、
121、试剂、药品等消耗品购置费原材料、试剂、药品等消耗品购置费, ,实验动物、植物的购实验动物、植物的购实验动物、植物的购实验动物、植物的购置、种植、养殖费置、种植、养殖费置、种植、养殖费置、种植、养殖费, ,标本、样品的采集加工费和包装运输费标本、样品的采集加工费和包装运输费标本、样品的采集加工费和包装运输费标本、样品的采集加工费和包装运输费 仪器设备费仪器设备费仪器设备费仪器设备费: :专用仪器设备购置、运输、安装费和修理费专用仪器设备购置、运输、安装费和修理费专用仪器设备购置、运输、安装费和修理费专用仪器设备购置、运输、安装费和修理费, ,自制专用仪器自制专用仪器自制专用仪器自制专用仪器设备的
122、材料、配件购置费和加工费设备的材料、配件购置费和加工费设备的材料、配件购置费和加工费设备的材料、配件购置费和加工费 实验室改装费实验室改装费实验室改装费实验室改装费: :不得用于实验室扩建、土建、房屋维修等费用的开支不得用于实验室扩建、土建、房屋维修等费用的开支不得用于实验室扩建、土建、房屋维修等费用的开支不得用于实验室扩建、土建、房屋维修等费用的开支 协作费协作费协作费协作费: :外单位协作承担自然科学基金项目部分研究试验工作的费用外单位协作承担自然科学基金项目部分研究试验工作的费用外单位协作承担自然科学基金项目部分研究试验工作的费用外单位协作承担自然科学基金项目部分研究试验工作的费用经费管
123、理办法经费管理办法 国际合作与交流经费国际合作与交流经费国际合作与交流经费国际合作与交流经费：直接关系的国际合作与交流费用：直接关系的国际合作与交流费用：直接关系的国际合作与交流费用：直接关系的国际合作与交流费用, ,包包包包括项目组人员出访及外国专家来访的部分费用括项目组人员出访及外国专家来访的部分费用括项目组人员出访及外国专家来访的部分费用括项目组人员出访及外国专家来访的部分费用劳务费劳务费劳务费劳务费：用于直接参加项目研究的：用于直接参加项目研究的：用于直接参加项目研究的：用于直接参加项目研究的研究生、博士后研究生、博士后研究生、博士后研究生、博士后人员的人员的人员的人员的劳务费用劳务费
124、用劳务费用劳务费用管理费管理费管理费管理费：项目依托单位为组织和支持项目研究而支出的费：项目依托单位为组织和支持项目研究而支出的费：项目依托单位为组织和支持项目研究而支出的费：项目依托单位为组织和支持项目研究而支出的费用用用用, ,包括项目执行中公用仪器设备、房屋占用费等包括项目执行中公用仪器设备、房屋占用费等包括项目执行中公用仪器设备、房屋占用费等包括项目执行中公用仪器设备、房屋占用费等经费管理办法经费管理办法 科目科目科目科目面上面上面上面上重大、重大、重大、重大、重点重点重点重点杰出杰出杰出杰出国际合国际合国际合国际合作费作费作费作费15%15%15%15% 10% 10% 10% 10
125、% 20% 20% 20% 20%劳务费劳务费劳务费劳务费 15% 15% 15% 15% 10% 10% 10% 10% 10% 10% 10% 10%管理费管理费管理费管理费 5% 5% 5% 5% 5% 5% 5% 5% 5% 5% 5% 5%经费管理办法经费管理办法 二、2007版申请书注意事项建议正文编辑方式建议正文编辑方式建议正文编辑方式建议正文编辑方式 使用使用 Word Word 录入、编辑和排版需要录入的申请书正文部录入、编辑和排版需要录入的申请书正文部分内容。完成编辑后，将该文件分内容。完成编辑后，将该文件命名保存命名保存打开申请书文件打开申请书文件，光标定位在正文中需要插
126、入内容的位置，光标定位在正文中需要插入内容的位置选择选择 “插入插入”下拉菜单中的下拉菜单中的“文件文件”插入功能插入功能，选择包，选择包含申请书正文内容的文件，将其内容全部导入到申请书中含申请书正文内容的文件，将其内容全部导入到申请书中（不要使用剪贴板功能进行文件内容导入）（不要使用剪贴板功能进行文件内容导入）20072007年面上项目申请资助经费年面上项目申请资助经费 3030万元万元/ /项项确认项目负责人确认项目负责人确认项目负责人确认项目负责人申报资格申报资格申报资格申报资格确认申请书确认申请书确认申请书确认申请书为为为为2007200720072007版版版版确认提交和打印电子文档
127、时确认提交和打印电子文档时确认提交和打印电子文档时确认提交和打印电子文档时已已已已“检查保护检查保护检查保护检查保护”确认电子版的确认电子版的确认电子版的确认电子版的版本号与纸质文件版本号与纸质文件版本号与纸质文件版本号与纸质文件完全一致完全一致完全一致完全一致确认确认确认确认申报学科选择正确申报学科选择正确申报学科选择正确申报学科选择正确，项目信息项目信息项目信息项目信息填报完整无误填报完整无误填报完整无误填报完整无误确认项目负责人和项目组成员确认项目负责人和项目组成员确认项目负责人和项目组成员确认项目负责人和项目组成员亲自签字亲自签字亲自签字亲自签字形式审查要点：形式审查要点：形式审查要点
128、：形式审查要点：12121212个确认个确认个确认个确认确认参与多个项目的确认参与多个项目的确认参与多个项目的确认参与多个项目的人员身份和提法一致人员身份和提法一致人员身份和提法一致人员身份和提法一致确认项目组成员确认项目组成员确认项目组成员确认项目组成员统计人数与填报人数一致统计人数与填报人数一致统计人数与填报人数一致统计人数与填报人数一致确认正文中确认正文中确认正文中确认正文中流程图及插入图片位置、形式正确流程图及插入图片位置、形式正确流程图及插入图片位置、形式正确流程图及插入图片位置、形式正确确认电子确认电子确认电子确认电子邮箱畅通邮箱畅通邮箱畅通邮箱畅通，以便及时查阅邮件，以便及时查阅邮件，以便及时查阅邮件，以便及时查阅邮件确认所有附件确认所有附件确认所有附件确认所有附件材料完整材料完整材料完整材料完整并已经并已经并已经并已经尽量电子化尽量电子化尽量电子化尽量电子化确认确认确认确认A3A3A3A3纸双面纸双面纸双面纸双面套印，盖章页放在最后套印，盖章页放在最后套印，盖章页放在最后套印，盖章页放在最后形式审查要点：形式审查要点：形式审查要点：形式审查要点：12121212个确认个确认个确认个确认 谢 谢！
