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1、一一.实验原理：实验原理： 某些某些化学试剂化学试剂能够使生物组织中的有关能够使生物组织中的有关有有机化合物机化合物产生特定的产生特定的颜色反应颜色反应。如：。如：.还原性糖的鉴定：还原性糖的鉴定：还原性糖还原性糖+.脂肪的鉴定：脂肪的鉴定： 脂肪脂肪+ 脂肪脂肪+ .蛋白质的鉴定：蛋白质的鉴定：蛋白质蛋白质+ +淀粉 +斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色苏丹苏丹染液染液红色红色双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色碘碘蓝色蓝色2二二. .目的要求：目的要求： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质脂肪和蛋白质1 1、还原糖的检测和
2、观察：、还原糖的检测和观察： 选材选材 应该选择含应该选择含 量高量高. .颜色为颜色为 以以苹果苹果. .梨梨为最好。为最好。糖糖白色或近于白色白色或近于白色制备组织样液：制备组织样液：制浆制浆 过滤过滤 取液取液三三. .实验过程实验过程: :用一层纱布用一层纱布的植物组织，的植物组织，3可溶性还原糖与斐林试剂在加热的过可溶性还原糖与斐林试剂在加热的过程中生成砖红色沉淀，程中生成砖红色沉淀，说明植物组织说明植物组织样液中含有样液中含有还原还原糖糖。注入注入2mL2mL苹果组苹果组织样液织样液注入注入1mL1mL刚配制好的刚配制好的斐林试剂斐林试剂水浴加热约水浴加热约2min2min呈色反应
3、呈色反应变成变成砖红色砖红色50-650C的温水的温水结论：结论：甲乙液等量混匀现配现用甲乙液等量混匀现配现用振荡、混振荡、混合摇匀合摇匀呈呈现蓝色现蓝色4 还原糖有还原糖有 。 试剂：试剂： . （甲液：（甲液：0.1g/ml 的的 , 乙液：乙液：0.05g/ml的的 .）甲乙液必须甲乙液必须 后再加入样后再加入样 液中，液中， 。 必须必须 。葡萄糖，果糖，麦芽糖葡萄糖，果糖，麦芽糖用水浴加热用水浴加热斐林试剂斐林试剂NaOHCuSO4等量混合均匀等量混合均匀现配现用现配现用注意事项：注意事项：颜色变化：颜色变化：浅蓝色浅蓝色棕色棕色砖红色砖红色5l思考：思考：l1.为什么加入斐林试剂甲
4、液和斐林试剂乙液为什么加入斐林试剂甲液和斐林试剂乙液时必须混合后再加入？时必须混合后再加入？6l因为若先加入NaOH溶液，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuSO4溶液后不能产生Cu2O砖红色沉淀，只有将其先配成Cu(OH)2悬浊液，才可产生砖红色沉淀。7l2.斐林试剂甲液和乙液既然混合后使用，为什么不能在实验前配制好，一定要使用时临时配制？8l由一分析可知，鉴定试剂实质上是Cu(OH)2悬浊液，很不稳定，容易生成蓝色Cu(OH)2沉淀，所以应将甲液、乙液分别配制储存，使用时再临时配制。92 2、脂肪的检测和观察：、脂肪的检测和观察：圆形小颗粒呈橘黄色，说明有脂肪存在。
5、圆形小颗粒呈橘黄色，说明有脂肪存在。方法一：方法一：待测组织样液待测组织样液+ +苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色取材：取材：花生种子花生种子( (浸泡浸泡3 34h4h），将子叶削成薄片），将子叶削成薄片方法二：制作子叶临时切片，用显微镜观察方法二：制作子叶临时切片，用显微镜观察 子叶细胞的着色情况。子叶细胞的着色情况。制片制片取最理想的薄片取最理想的薄片在薄片上滴苏丹在薄片上滴苏丹染液（染液（2 23min3min）去浮色（用去浮色（用5050酒精）酒精） 制成临时装片制成临时装片观察观察低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察然后用高倍镜观察结论：
6、结论：10注意事项：注意事项： 切片要切片要薄，薄，如厚薄不均就会导致观如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰有的地方模糊。察时有的地方清晰有的地方模糊。 酒精的作用是：酒精的作用是： 。 需需使用显微镜观察使用显微镜观察 使用不同的染色剂染色时间不同使用不同的染色剂染色时间不同颜色变化：颜色变化： 。洗去浮色洗去浮色橘黄色或红色橘黄色或红色11l3.花生种子浸泡的时间是否越长越好？用染色的花生仁切片，在显微镜下观察脂肪微粒颜色时，制片滴加的水一定要用蒸馏水，为什么不能用自来水？12l花生种子浸泡时间短了，不容易切片；浸泡时间过长，切下的薄片不容易成型，所以一般是提前浸泡34小时。自来水中含有C
7、a离子，Mg离子等，易与染色剂发生交换吸附，使染色退去，从而不易观察脂肪粒被染色的情况。133 3、蛋白质的检测和观察：、蛋白质的检测和观察： 选材选材 应该选择含应该选择含 丰富丰富 的的豆浆豆浆或或鸡蛋清鸡蛋清溶液（避免材料自身的颜色对实溶液（避免材料自身的颜色对实 验变化颜色的掩盖）验变化颜色的掩盖）蛋白质蛋白质黄豆浆滤液或蛋清稀释液黄豆浆滤液或蛋清稀释液制备组织样液制备组织样液呈色反应呈色反应组织组织样液样液2mL2mL双缩脲试双缩脲试剂剂A A液液1mL1mL双缩脲试双缩脲试剂剂B B液液4 4滴滴摇匀后变摇匀后变成紫色成紫色结论：结论：说明组织样液中存在蛋白质。说明组织样液中存在蛋
8、白质。14（3 3）注意事项：）注意事项： 试剂：试剂： （ A液：液：0.1g/ml的的 ； B液：液： 0.01g/ml的的 ） 先加先加 ，再加，再加 。 注意：注意：先加入试剂先加入试剂A，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容易与容易与Cu离子发生颜色反应，形成紫色的络合物。离子发生颜色反应，形成紫色的络合物。 B液要求量适中液要求量适中，否则，否则多余的多余的B液液将会将会与与A液液发生反应生成发生反应生成大大量蓝色量蓝色Cu(OH)2沉淀沉淀而而遮盖遮盖试验中所产生的紫色试验中所产生的紫色。同样为了防同样为了防止生成较止生成较Cu
9、(OH)2沉淀遮蔽实验结果，在配制溶液时，双缩脲试剂沉淀遮蔽实验结果，在配制溶液时，双缩脲试剂B比比斐林试剂乙液浓度小得多，这也是斐林试剂和双缩脲试剂不能互换使用的道斐林试剂乙液浓度小得多，这也是斐林试剂和双缩脲试剂不能互换使用的道理。理。 鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比。 用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷双缩脲试剂双缩脲试剂A A液液1ml1mlB B液液4 4滴滴NaOHCuSO4蛋白质的检测结果15斐林试剂与双缩脲试剂的比较：斐林试剂与双缩脲试剂的比较：A A
10、液液:0.1g/mLNaOH:0.1g/mLNaOHB B液液: :0.010.01g/mLCuSOg/mLCuSO4 4甲液甲液:0.1g/mLNaOH:0.1g/mLNaOH乙液乙液: :0.050.05g/mLCuSOg/mLCuSO4 4紫色物质生成紫色物质生成砖红色沉淀砖红色沉淀先加先加A A液液，再加再加B B液液，不不需加热需加热甲液与乙液甲液与乙液先混再用先混再用，且且现配现用现配现用，需，需加热加热蛋白质蛋白质还原性糖还原性糖试剂试剂组成组成检验检验结果结果试剂试剂用法用法检测检测对象对象双缩脲试剂双缩脲试剂斐林试剂斐林试剂164 4、淀粉的检测和观察：、淀粉的检测和观察：
11、取材：取材：马铃薯匀浆马铃薯匀浆检测检测组织组织样液样液2mL2mL碘液碘液2 2滴滴结论：结论：说明组织样液中存在淀粉。说明组织样液中存在淀粉。注意：注意：常用材料：马铃薯常用材料：马铃薯 试剂：试剂： 。颜色变化：。颜色变化： 。碘液碘液变蓝变蓝摇匀后变摇匀后变成蓝色成蓝色172.2.下列关于实验操作步骤的叙述中，正确下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是的是用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定. .脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴成橘黄色的脂肪滴
12、 C.C.鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液甲液摇匀后，再加入乙液用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A A液与液与B B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且必须现配现用且必须现配现用（ ） 18还原性糖还原性糖+斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀还原性糖：葡萄糖、麦芽糖、果糖还原性糖：葡萄糖、麦芽糖、果糖非还原性糖：蔗糖、淀粉等非还原性糖：蔗糖、淀粉等+19如果植物组织中积累的成分是如果植物组织中积累的成分是淀粉淀粉和和蔗糖蔗糖，那就无法检测到还原性糖。，那就无法检测到还原性糖
13、。有些植物尽管含有较多的还原性糖，有些植物尽管含有较多的还原性糖，但如果本身含有叶绿素或其他色素，但如果本身含有叶绿素或其他色素，这些色素就会影响实验现象起到遮这些色素就会影响实验现象起到遮盖作用。这些都不适宜做实验材料。盖作用。这些都不适宜做实验材料。苹果和梨是比苹果和梨是比较理想的实验较理想的实验材料。材料。20苹果、研钵、小刀苹果、研钵、小刀斐林试剂斐林试剂A液、斐林试剂液、斐林试剂B液、二氧化硅液、二氧化硅量筒、试管架、吸管、试量筒、试管架、吸管、试管夹、试管、滴管管夹、试管、滴管漏斗、纱布漏斗、纱布火柴、酒精灯、三脚架、火柴、酒精灯、三脚架、石棉网、烧杯石棉网、烧杯21取一个洗净的苹
14、果切下一块，去皮，取一个洗净的苹果切下一块，去皮，然后切成小块，取一部分切成小块然后切成小块，取一部分切成小块的苹果放在研钵中，加入少许二氧的苹果放在研钵中，加入少许二氧化硅（石英砂），然后研磨，将研化硅（石英砂），然后研磨，将研钵中加入少量水继续研磨。钵中加入少量水继续研磨。将玻璃漏斗插入试管中，在漏斗将玻璃漏斗插入试管中，在漏斗上垫一层纱布，将组织研磨液进上垫一层纱布，将组织研磨液进行过滤，得到苹果的组织样液。行过滤，得到苹果的组织样液。用量筒取两毫升组织样液，用量筒取两毫升组织样液，再用量筒取两毫升新配制好再用量筒取两毫升新配制好的斐林试剂。的斐林试剂。22取一只试管，将量好的苹果组织样
15、取一只试管，将量好的苹果组织样液倒入试管中，然后将量好的斐林液倒入试管中，然后将量好的斐林试剂倒入试管中，震荡试管使溶液试剂倒入试管中，震荡试管使溶液混合均匀，我们可以看到此时溶液混合均匀，我们可以看到此时溶液呈蓝色。呈蓝色。将这只试管放入盛有开水将这只试管放入盛有开水的大烧杯中，用酒精灯加的大烧杯中，用酒精灯加热煮沸。热煮沸。溶液的颜色开始是蓝色，溶液的颜色开始是蓝色，然后慢慢变成砖红色。然后慢慢变成砖红色。23这个实验就证这个实验就证明了，苹果中明了，苹果中含有还原性糖含有还原性糖的存在。的存在。溶液的颜色从蓝色溶液的颜色从蓝色-棕色棕色砖红色。砖红色。苹果中含有还原性的糖。苹果中含有还原
16、性的糖。24 还原糖有还原糖有 。 试剂：试剂： . （甲液：（甲液：0.1g/ml 的的 , 乙液：乙液：0.05g/ml的的 .）甲乙液必须甲乙液必须 后再加入样后再加入样 液中，液中， 。 必须必须 。葡萄糖，果糖，麦芽糖葡萄糖，果糖，麦芽糖用水浴加热用水浴加热斐林试剂斐林试剂NaOHCuSO4等量混合均匀等量混合均匀现配现用现配现用注意事项：注意事项：颜色变化：颜色变化：浅蓝色浅蓝色棕色棕色砖红色砖红色25脂肪脂肪+苏丹苏丹橘黄色橘黄色脂肪脂肪+苏丹苏丹红色红色取少量脂肪样液，加入苏取少量脂肪样液，加入苏丹丹，震荡，可看到溶液，震荡，可看到溶液呈了橘黄色，本实验我们呈了橘黄色，本实验我
17、们用苏丹用苏丹做染液。做染液。芝麻，脂肪含量丰富，但种子颗粒芝麻，脂肪含量丰富，但种子颗粒太小，不利于切片制作。太小，不利于切片制作。玉米，脂肪含量较少，种子颗粒也玉米，脂肪含量较少，种子颗粒也较小，因此也不适合做实验材料。较小，因此也不适合做实验材料。花生是比较理花生是比较理想的实验材料想的实验材料我们选用花生我们选用花生显微镜、镊子、毛显微镜、镊子、毛笔、吸水纸、刀片、笔、吸水纸、刀片、载玻片、盖玻片、载玻片、盖玻片、培养皿培养皿50% %的酒精的酒精、苏、苏丹丹、清水、清水取一粒浸泡过的花生种子，去皮，分开两取一粒浸泡过的花生种子，去皮，分开两片子叶，将子叶切成薄片，然后用毛笔将片子叶，
18、将子叶切成薄片，然后用毛笔将这些材料放入盛有清水的培养皿中。这些材料放入盛有清水的培养皿中。取一片载玻片，用纱布擦净，用毛取一片载玻片，用纱布擦净，用毛笔取一片最薄的材料，放在载玻片笔取一片最薄的材料，放在载玻片中央。中央。用滴管在花生种子薄片上滴几滴苏丹用滴管在花生种子薄片上滴几滴苏丹染液，染色染液，染色2至至3分钟，用吸水纸吸去花分钟，用吸水纸吸去花生种子薄片周围的染液。生种子薄片周围的染液。在薄片上滴在薄片上滴1至至2滴体积分数为滴体积分数为50%的酒精，洗去附色，用吸水的酒精，洗去附色，用吸水纸洗去花生子叶周围的酒精。纸洗去花生子叶周围的酒精。在薄片上滴一滴清水，盖上在薄片上滴一滴清水
19、，盖上盖玻片，制成临时装片。盖玻片，制成临时装片。在低倍镜下寻找花生种子薄在低倍镜下寻找花生种子薄片的最薄处，将这部分移至片的最薄处，将这部分移至视野中央。视野中央。用显微镜观察花生种子用显微镜观察花生种子薄片。薄片。我们可以看到细胞中一个个我们可以看到细胞中一个个圆形的小颗粒，这就是脂肪圆形的小颗粒，这就是脂肪颗粒。颗粒。低低倍倍镜镜下下观观察察高高倍倍镜镜下下观观察察显微镜下观察结果显微镜下观察结果31显微镜下观察到橘黄色的颗粒。显微镜下观察到橘黄色的颗粒。花生种子细胞中含有脂肪。花生种子细胞中含有脂肪。蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂紫色络合物紫色络合物豆浆、蛋清、牛奶都是很豆浆、蛋清
20、、牛奶都是很好的实验材料。好的实验材料。本实验我们用蛋清做实验材料，在本实验我们用蛋清做实验材料，在用蛋清做实验材料时，要注意将蛋用蛋清做实验材料时，要注意将蛋清稀释，如果稀释不够，反应后的清稀释，如果稀释不够，反应后的产物会粘固在试管内壁上，使反应产物会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底。不容易彻底。试管架、试管、吸管试管架、试管、吸管蛋清稀释液蛋清稀释液双缩脲试剂双缩脲试剂A液、液、双缩脲试剂双缩脲试剂B液、液、量筒量筒用量筒量取两毫升的蛋清稀用量筒量取两毫升的蛋清稀释液。再用脲尿试剂释液。再用脲尿试剂A液液将量取的蛋清液和双缩脲试将量取的蛋清液和双缩脲试剂剂A液分别倒入到试管中，震液分别
21、倒入到试管中，震荡均匀，此时可见试管内仍荡均匀，此时可见试管内仍然是透明的。然是透明的。再向试管中加入再向试管中加入1至至2滴双滴双缩脲试剂缩脲试剂B液。液。震荡均匀，此时可见试管内震荡均匀，此时可见试管内溶液呈紫色吗，这就表明蛋溶液呈紫色吗，这就表明蛋清液中含有蛋白质。清液中含有蛋白质。蛋清液呈紫色。蛋清液呈紫色。蛋清液中含有蛋白质。蛋清液中含有蛋白质。四种物质颜色反应的对比四种物质颜色反应的对比还原糖还原糖蛋白质蛋白质淀粉淀粉脂肪脂肪371 1、鉴定还原糖、脂肪、蛋白质所用的试剂和所出现的颜色分别是（、鉴定还原糖、脂肪、蛋白质所用的试剂和所出现的颜色分别是（ ）A、斐林试剂（砖红色）、双缩
22、脲试剂（紫色）、苏丹、斐林试剂（砖红色）、双缩脲试剂（紫色）、苏丹III染液（橘黄色）染液（橘黄色）B、双缩脲试剂（紫色）、斐林试剂（砖红色）、苏丹、双缩脲试剂（紫色）、斐林试剂（砖红色）、苏丹III染液（橘黄色）染液（橘黄色）C、苏丹、苏丹III染液（橘黄色）、双缩脲试剂（紫色）、斐林试剂（砖红色）染液（橘黄色）、双缩脲试剂（紫色）、斐林试剂（砖红色）D、斐林试剂（砖红色）、苏丹、斐林试剂（砖红色）、苏丹III染液（橘黄色）、双缩脲试剂（紫色）染液（橘黄色）、双缩脲试剂（紫色）2 2、生物组织中普遍存在可溶性还原糖，试回答有关鉴定实验的问题：、生物组织中普遍存在可溶性还原糖，试回答有关鉴定实
23、验的问题：（1）实验材料的选择，下面哪一组较为适宜（）实验材料的选择，下面哪一组较为适宜（ ）A、西瓜和甜菜、西瓜和甜菜B、甘蔗和甜橙、甘蔗和甜橙C、苹果和梨子、苹果和梨子D、淀粉和蛋清、淀粉和蛋清（2）下述糖类物质中，不能与斐林试剂发生作用生成砖红色沉淀的是）下述糖类物质中，不能与斐林试剂发生作用生成砖红色沉淀的是（ ）A、葡萄糖、葡萄糖B、果糖、果糖 C、麦芽糖、麦芽糖 D、蔗糖、蔗糖（3）用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程是（）用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程是（ ）A、浅绿色、浅绿色棕色棕色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）B、浅蓝色、浅蓝色棕色棕色砖红色（沉淀
24、）砖红色（沉淀）C、棕色、棕色浅蓝色浅蓝色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）D、棕色、棕色浅绿色浅绿色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）383 3、在做脂肪鉴定的实验中用到、在做脂肪鉴定的实验中用到50%的酒精溶液，其作用是（的酒精溶液，其作用是（ ）A、消毒、消毒B、作为染色的辅助剂、作为染色的辅助剂C、便于观察、便于观察D、洗去切、洗去切片的浮色片的浮色4 4、蛋白质鉴定时，事先留出一些黄豆组织样液的目的是（、蛋白质鉴定时，事先留出一些黄豆组织样液的目的是（ ）A、与反应后物颜色做对比、与反应后物颜色做对比B、失败后重做一遍、失败后重做一遍C、鉴定可溶性还原糖、鉴定可溶性还原糖D、留下次实验用、留下次
25、实验用5 5、（多选）花生子叶薄片用苏丹、（多选）花生子叶薄片用苏丹III染色后，为观察更清楚，需用高染色后，为观察更清楚，需用高倍镜换高倍镜并调好焦距后，发现视野太暗，此时应（倍镜换高倍镜并调好焦距后，发现视野太暗，此时应（ ）A、将反光镜由平面换为凹面、将反光镜由平面换为凹面B、将反光镜由凹面换为平面、将反光镜由凹面换为平面C、将小光圈换成大光圈、将小光圈换成大光圈D、将大光圈换成小、将大光圈换成小光圈光圈6.6.用班氏试剂鉴别健康人的下列四种液体，出现红黄色沉淀的是（用班氏试剂鉴别健康人的下列四种液体，出现红黄色沉淀的是（ ）A A血清血清 B B唾液唾液 C C胃液胃液 D D尿液尿液
26、7.7.下列健康人的下列健康人的4 4种液体样本中，能与双缩脲试剂发生紫色反应的是种液体样本中，能与双缩脲试剂发生紫色反应的是（ ） 尿液尿液 胃液胃液 汗液汗液 唾液唾液 A A B B C C D D398.8.下列关于鉴定糖类、蛋白质和脂肪实验操作的叙述中，正确的是（下列关于鉴定糖类、蛋白质和脂肪实验操作的叙述中，正确的是（ ） A A鉴定还原糖的斐林试剂甲液与乙液，可直接用于蛋白质的鉴鉴定还原糖的斐林试剂甲液与乙液，可直接用于蛋白质的鉴定定 B B鉴定脂肪的存在，要用显微镜观察是否有被染成橘黄色或红鉴定脂肪的存在，要用显微镜观察是否有被染成橘黄色或红色的颗粒色的颗粒 C C鉴定可溶性还原糖时，先加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入鉴定可溶性还原糖时，先加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液乙液 D D鉴定蛋白质时，双缩脉试剂鉴定蛋白质时，双缩脉试剂A液与液与B液要混合均匀后再加入含液要混合均匀后再加入含样品的试管中样品的试管中
