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1、血液病理检测 行业简介行业简介 金域血液病理项目金域血液病理项目 金域血液综合诊断报告金域血液综合诊断报告内容介绍2第三方医学实验室：是指获得了卫生行政部门许可的、具有第三方法人资格的、专业从事医学检测的医疗机构。行业认识医学独立实验室定义3行业认识国内外独立医学实验室对比产生：上世纪5060年代规模：共有5000多家独立医学实验室；有QUEST与Labcorp等大型第三方实验室销售收入 (2009年)QUEST：80亿美元，占检测市场的14%的份额；Labcorp：50亿美元，份额：美国2009年检验总量为500多亿美元，第三方实验室为160亿美元，约占检验市场份额35%美国-日本SRL:销
2、售收入70亿人民币，有140余家分支实验室日本BML:有40 多家分支机构，检测项目超过4 000 项日本独立医学实验室的营业额占整个检验市场的60%香港：有150余家第三方医学实验室 亚洲初步探索：90年代初数量(2009年)：据有关部门统计，全国50多家第三方医学实验室市场规模：2009年中国检验总量约760亿人民币；独立医学实验室约7亿人民币，占的比例还不到1%，检验项目1000多项 中国绝对朝阳4成立于1994年是中国最早进入医学独立实验室行业的 实验室是中国目前规模最大的医学独立实验室 可检测1000余项检测项目是中国首家同时通过ISO15189和CAP 认证的临床实验室覆盖“医学检
3、验、病理诊断、新药临床试 验、卫 生检验、健康体检”五个方面构建分子病理、细胞病理、血液病理、肾脏病理、分子遗传等专科化发展平台SINCE 1994金域检验简介金域检验简介5n服务全国11000多家医疗机构，其中三甲医院2000多家，二甲医院4000多家。n与山东省内合作客户超过1000家，建立全省物流网络，合作客户包括山东大学齐鲁医院、军区总医院、山大二院、济南市中心医院等医院南京济南西安合肥郑州重庆贵阳昆明南宁福州长春广州成都长沙天津沈阳杭州全国市场网络全国市场网络上海香港6白血病的分型标准1976年法英美提出FAB分型1999年WHO提出最新的分型建议-MICM7血液病理血液病理临床血液
4、病医生临床血液病医生淋巴结淋巴结脾脾CSFFISH流式细胞学流式细胞学分子生物分子生物外周血外周血骨髓骨髓细胞遗传细胞遗传形态学形态学 WHOWHO淋巴造血系统肿瘤分型淋巴造血系统肿瘤分型8骨髓活检骨髓活检91011服务性血液病理学的地位流式细胞术12粒细胞成熟过程13流式细胞术方法原理该法应用荧光素标记的抗人血细胞分化抗原的单克隆抗体与样本中细胞相应的抗原结合，用流式细胞仪检测结合在细胞表面抗体的荧光信号，分析异常细胞群的抗原表达情况。 这种多参数流式细胞分析术为白血病的诊断和分型提供了重要依据。1415正常细胞群的分布正常细胞群的分布粒细胞单核细胞淋巴细胞CD45:CD45:白细胞共同抗原
5、，表达于所有白细胞白细胞共同抗原，表达于所有白细胞16流式细胞术在血液肿瘤免疫分型中的应用1、急淋（T、B系列）和急髓（M0-M7）的辅助诊断和初步分型。2. 急慢性血液肿瘤初步鉴别诊断。3. 微小残留白血病监测（MRD）的监测。4. NHL的筛查与初步分型诊断。5. MDS鉴别诊断与风险评估。6. 异常浆细胞筛查。17目前所开展的项目急慢性白血病/NHL/MDS全面CD系列检测 (40CD) 急慢性白血病CD系列检测 (28CD) 急性白血病快速鉴别诊断CD系列检测 (15CD) MDS相关CD系列检测 (15CD) 多发性骨髓瘤（MM）相关CD系列检测 (15CD) 非何杰金氏淋巴瘤（NH
6、L）相关CD系列检测 (25CD) 微小残留白血病检测（28CD、15CD）毛细胞白血病（HCL）相关CD系列检测 (15 CD) 外周血淋巴细胞增多快速鉴别诊断CD系列检测 (15 CD)18服务性血液病理学的地位 细胞遗传学19 血液病染色体检查的意义克隆性染色体异常的检出有助于白血病的诊断和鉴别诊断，特异性染色体重排的发现有利于急性白血病的分型。染色体异常可作为监测急性白血病病情缓解或复发，以及CML急变的重要指标。染色体也是独立的预后指标,对于患者治疗方案的选择和预后评估具有重要意义。染色体异常的发现还可为分子学研究提供重要线索，从而进一步促进白血病发病机制的研究。20t(9;22)(
7、q32;q23.2) in CML PhPhPhPh染色体染色体染色体染色体21Ph染色体约见于95%的CML15-30%的成人ALL,2-5%的儿童ALL，1-2%的ANLL,及很少的MDS,PV,MF,MM,淋巴瘤，CLL,恶性组织细胞病Ph（+），20%保持46，t（9；22）核型不变。80%核型演变：常见2Ph，+8，i（17q），+19，+2122Ph染色体少数病例Ph染色体可与下列染色体异常同时出现，提示CML急变t（8；21）：提示CML急粒变t（15；17）：提示CML早幼粒变t（9；11）：提示CML急单变inv（16）：提示CML急粒单变inv（3）：提示CML巨核变额外异
8、常通常比临床或血液学急变征象早出现2-4个月因此CML病程中定期进行染色体检测有助于早起诊断CML急变 23培养不成功的原因分析染色体短小,不分散,开叉,显带效果差,核型复杂培养不成功率高24培养不成功的原因分析样品原因:1.抽取时机不合适,化疗中或刚结束2.选材不合格(开单,初诊或怀疑诊断不详,未抗凝)3.样品耽搁时间过长4.运输过程温度失控25患者取材时机 所有的恶性血液病在初诊时（未用化疗药之前）是最好最有价值时机；治疗中的患者如果在临床允许情况下，一个疗程结束后（停化疗药）10-15天左右，抽取骨髓标本送检；治疗过程监测 未完全细胞遗传学缓解前建议不少于每3个月一次抽取骨髓送检； 完全
9、细胞遗传学缓解后建议不少于每6个月一次抽取骨髓送检； 异性间骨髓移植后患者首次检测一般在1个月左右，确认移植成功后复查，各病例不同，一般每6个月一次，对于复发的高危患者，应连续检测嵌合状态，推荐至少每月一次。26样品要求1.抽取骨髓2ml，外周血3ml，加入普通肝素管，轻轻摇匀2.慢淋患者除正常骨髓外加送一个肝素管抗凝的外周血（2ml）3.淋巴瘤患者（未侵犯骨髓之前），淋巴结穿刺液4.慢性增殖性疾病只能送骨髓血27服务性血液病理学的地位荧光原位杂交 FISH 28荧光原位杂交技术与应用荧光原位杂交技术与应用 就是用标记有荧光分子的就是用标记有荧光分子的小段小段DNADNA序列序列( (探针探针
10、) )，在，在合适的湿度和盐离子浓度条件下，与合适的湿度和盐离子浓度条件下，与染色体上染色体上的互补的互补序列特异地退火结合而不破坏染色体的整体形态，以序列特异地退火结合而不破坏染色体的整体形态，以便在显微镜下观察到此特异的便在显微镜下观察到此特异的DNADNA序列及其在染色体序列及其在染色体上的位置。上的位置。29FISH的原理示意图30结果分析流程结果分析流程: :分析200细胞,判读每一个细胞中信号模式,计数各信模式细胞所占的比例.根据不同信号模式细胞的比例来判断阴阳性.如结果在临界范围应如临床进行沟通,结合其它检测结果,临床特征综合分析.31信号模式图32 FISHFISH技术的优点技
11、术的优点1.高敏感度、特异性2.结果直接客观3.应用于多种类型的标本4.中期、间期5.一个标本可同时检测多个基因6.标本较稳定33 FISH的临床应用 慢性粒细胞性白血病(CML)检测 慢性淋巴细胞白血病(CLL)检测 急性髓细胞白血病(AML)检测 急性淋巴细胞白血病(ALL)检测 多发性骨髓瘤(MM)检测 骨髓增生异常综合症(MDS)检测 非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测34急性髓细胞白血病(AML)检测可供选择的探针: 1.AML1/ETO 2.PML/RARA 3.CBF 4.MLL（11q23） 5.+8 6. 5q-/-5 7. 7q-/-7 8.BCR/ABL 9. 20q- 可选择
12、以上多个探针进行组合检测!35急性髓细胞白血病(AML)检测1.AML1/ETO t（8；21）（q22；q22） AML-M2的最特异性分子标志,提示预后较好;但 少数M4，M1和M6患者也可出现。 2.PML/RARA 辅助诊断AML-M3,指导用药。 3.CBF 辅助诊断AML-M4Eo，占总AML的5-10%,监测inv（16）的微小残留病变，提示预后较好;36急性髓细胞白血病(AML)检测 4.MLL（11q23） MLL融合基因60多种，是急性白血病预后不良的独立指征。伴有MLL重排的AML提示预后较差。 5.+8； 5q-/-5 ； 7q-/-7；BCR/ABL 伴有上述染色体异
13、常的AML的患者预后差。 6.20q-： 伴此突变 AML患者预后较好。37非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测临床检测意义： 主要是为NHL提供鉴别诊断，预后评估和治疗方案提供参考。 1. IGH/MYC,CEP8:主要应用于Burkitt淋巴瘤的鉴别诊断,以及治疗预后的判断; 2. IGH/BCL2:主要应用于滤泡性淋巴瘤的鉴别诊断,以及治疗预后的判断; 3.IGH/CCND1:主要应用于套细胞淋巴瘤的鉴别诊断,以及治疗预后的判断; 4.ALK: 辅助诊断B间变性大细胞淋巴瘤38分子生物学检测分子生物学检测 PCRPCR39 内容简介 基因重排 IGH、TCRG基因重排AML预后相关 c-kit基
14、因突变 NPM1（exon12)基因突变 FLT3/ITD突变检测 FLT3 D835突变检测MPD诊断相关 JAK2 V617F，exon12&13 突变检测靶向治疗 BCR-ABL融合基因ABL区突变荧光定量PCR BCR-ABL、PML-RARa 和AML-ETO 40IGH、TCR基因重排淋巴瘤是一类起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤。约有5-10%的病例无法通过形态学结合免疫组化或流式确诊。IGH重排检测主要应用于辅助B系淋巴瘤的诊断TCR重排检测主要应用于辅助T系淋巴瘤的诊断 41AML中c-kit 基因突变CBF-AML：核心结合因子AML 携带t(8;21)/AML1-ETO
15、或Inv（16）/CBFA-MYH11的AML. c-kit 基因：编码第类酪氨酸激酶受体，在约20-40%的CBF-AML患者中存在突变。突变主要集中于激酶区（exon17 codon816&822的点突变）和胞外区（exon8 codon419 的插入/缺失）在CBF-AML中，携带Kit基因突变的患者一般具有较差的预后，尤其是exon17的突变。 42AML-NK预后相关的基因NPM1基因 好的预后因素，仅携带NPM1基因突变的AML-NK患者具有较好的预后FLT3/ITD 较差的预后因素，FLT3/ITD阳性的患者具有较差的预后其它相关基因 PTD-MLL CEBPA Ras Fali
16、ni B,Nicoletti I,Martelli M etal. Blood,2007,109(3):874-88543NPM1 & FLT3/ITD 对AML预后的影响 Good FLT3/ITD- NPM1+ Intermediate FLT3/ITD+ NPM1+ OR FLT3/ITD- NPM1-Poor FLT3/ITD+ NPM1- Falini B,Nicoletti I,Martelli M etal. Blood,2007,109(3):874-885NPM1&FLT3的突变检测应同时进行的突变检测应同时进行44骨髓增殖性疾病（MPD）：以真性红细胞增多症（PV），原发性
17、血小板增多症 （ET）骨髓纤维化 （MF）常见JAK2基因位于9号染色体上，编码非受体型的胞浆酪氨酸蛋白激酶.JAK2基因突变在MPD中常见，在修订的2008年WHO分类系统中，有无JAK2突变已成为MPD主要的诊断标准 JAK2 V617F突变是JAK2最为常见的突变 ，在65-97%PV，23-57%ET和35-67%的MF中存在该位点的突变。JAK2 V617F检测阴性的MPD中，较为常见的突变发生于外显子12和13 JAK2 基因突变检测45慢性粒细胞白血病（CML）是一种起源于造血干细胞的克隆性恶性疾病。ABL激酶区的突变被认为是CML患者对格列卫耐药的主因之一。目前发现的ABL激酶
18、区突变主要集中于ATP结合区(P环，第244255氨基酸)、T315、M351及活化区(A环)四个区，不同突变位点引起的耐药程度不同。 ABL 激酶区突变46 BCR-ABL、AML-ETO&PML-RARa定量检测定量检测95%以上的CML患者具有标志性的Ph染色体， 分子水平上CML患者几乎均表现为M-bcr-abl(p210) 90%以上的APL具有特异性融合基因PML-RARa，由t(15;17)(q22;q21)易位形成，断裂点不同分为三型：bcr1(55%)、bcr2(5%)和bcr3(40%）AML-ETO由t(8;21)(q22;q22)易位形成，与M2相关。 47遗传学检测的
19、选择？48GPS形态学及分子病理解决方案综合报告形态学及分子病理解决方案综合报告49淋巴造血系统肿瘤诊断综合解决方案（GPS) 金域检验利用其自身的技术优势，2007年，与美国先进的血液肿瘤检测服务实验室进行合作，成立了血液淋巴造血系统肿瘤诊断会诊中心，在国内率先提出形态学及分子病理解决方案综合报告模式（GPS：Genetic&Pathology Solutions） ，即将形态学(Morphology) ，流式细胞术（Flow Cytometry），分子生物学（Molecular Diagnosis）、荧光原位杂交（FISH）、细胞遗传（Cytogenetics）和免疫组织化学(IHC)结果
20、整合于一份结论性报告中，致力于为临床医生提供可靠的，全方位的血液淋巴造血系统肿瘤的实验诊断服务。50全面的、整合的血液病理检测服务M 形态形态C 遗传遗传M 分子分子金域检验金域检验l全面整合检测信息全面整合检测信息lGPS 综合诊断报告综合诊断报告l结合临床专家意见结合临床专家意见最终诊断最终诊断,合理治疗合理治疗血液科医生血液科医生标本收集标本收集病理咨询病理咨询GPS报告报告I 免疫免疫GPS,Genetic Pathology Solution,遗传病理学解决方案G= Genetic(Cytogenetic /Molecular) P= Pathology (Morphology/Immunophenotype)S=Solution (Personalized Diagnostics) 51为临床医生搭建最好的诊断平台l将传统形态学分析和现代实验室诊断技术置于 同一屋顶之下l合理使用各种诊断技术以最佳组合使一个标本 得到充分利用,避免不必要的检测,实现一站化 服务l将各种检测结果综合分析以达到最合理的分析 结论l将优秀的血液病理学检测服务送到临床血液医生 手中52Morphology53Biopsy54Flow55Cytogenetics56GPS57一一切切以以客客户户为为中中心心58
