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1、实验三实验三实验三实验三 不规则抗体的筛选与鉴定不规则抗体的筛选与鉴定不规则抗体的筛选与鉴定不规则抗体的筛选与鉴定什么是不规则抗体什么是不规则抗体?指血型以外的抗体，即抗和抗指血型以外的抗体，即抗和抗以外的抗体以外的抗体 . 也包括也包括ABO亚型抗体，如抗亚型抗体，如抗A1、A2、A3等等不规则抗体有何临床意义不规则抗体有何临床意义?引起各类免疫性输血反应引起各类免疫性输血反应缩短输入缩短输入RBC的存活时间的存活时间新生儿溶血病新生儿溶血病不规则抗体筛选方法有那些不规则抗体筛选方法有那些?盐水介质法盐水介质法间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验低离子强度介质聚凝胺法低离子强度介质聚凝胺法酶技术
2、酶技术凝胶微柱法凝胶微柱法 再结吸收、放散等血清学手段，对抗再结吸收、放散等血清学手段，对抗 体的特异性作分析体的特异性作分析 一、不规则抗体筛选实验一、不规则抗体筛选实验 -盐水法水法. .凝聚胺法凝聚胺法 【实验原理原理】应用用特特定定的的筛选细胞胞（1，2，3号号），与与被被检者者血血清清在在两两种种介介质（盐水水，低低离离子子介介质凝凝聚聚胺胺）中中反反应，根根据据反反应结果果判判断断机机体体所所产生生的的同同种种抗抗体体类别。【标本、试剂与器材标本、试剂与器材】1. 标本本 被被检者不抗凝全者不抗凝全血；血；2. 试剂 符合国家符合国家标准的准的1、2、3号号筛选谱细胞、胞、0.9%
3、氯化化钠、凝聚胺、凝聚胺试剂盒盒3. 器材器材 试管管、滴管、滴管、记号号笔、笔、离心机等离心机等.【操作步骤操作步骤】 表表 一一 1 2 3待待捡血清血清 1滴滴 1滴滴 1滴滴 25% 1号筛选谱细胞号筛选谱细胞 1滴滴 25% 2号筛选谱细胞号筛选谱细胞 1滴滴 25% 3号筛选谱细胞号筛选谱细胞 1滴滴 1. 盐水法水法 按表一加按表一加样后后,1000g离心离心15s，轻轻摇动试管，肉眼管，肉眼观察有察有无凝集无凝集结果，果，记录结果果. 2. 凝聚胺凝聚胺 按表一加按表一加样后后,依次加入低离子介依次加入低离子介质溶液、凝聚胺溶液溶液、凝聚胺溶液, 1000g离心离心15s，弃上
4、清夜，弃上清夜,摇动试管管,看是否形成凝集看是否形成凝集(如没有凝集形如没有凝集形成需重做成需重做),加加悬浮液浮液,观察凝集是否散开察凝集是否散开,记录结果果【结果判断结果判断】1、2、3号号筛选谱细胞管出胞管出现4+凝集凝集者者为抗体抗体筛选阳性阳性结果果。【方法评价与注意事项方法评价与注意事项】1. 被被检者自身血清加自身者自身血清加自身红细胞管胞管应无凝集；若出无凝集；若出现凝集凝集则提示存在自身免疫性抗体；提示存在自身免疫性抗体；2. 在在盐水、水、 低离子凝聚胺介低离子凝聚胺介质中，中，1、2、3号号筛选谱细胞只要有一个或一个以上管出胞只要有一个或一个以上管出现4+凝集，表凝集，表
5、示被示被检者血清中存在不者血清中存在不规则抗体，需抗体，需进一步一步鉴定抗体定抗体特异性；特异性；3. 无凝集，表示被无凝集，表示被检者血清中不存在不者血清中不存在不规则抗体。抗体。4.低离子凝聚胺出低离子凝聚胺出现凝集，而凝集，而盐水介水介质无凝集，无凝集，则提提示不示不规则抗体抗体为IgG性性质。二、不规则抗体鉴定试验二、不规则抗体鉴定试验-凝胶微柱法凝胶微柱法 【实验原理实验原理】对不规则同种抗体筛选试验阳性的被检对不规则同种抗体筛选试验阳性的被检者应检查其抗体特异性。根据谱细胞者应检查其抗体特异性。根据谱细胞（1-10号共号共10个鉴定细胞）与被检者个鉴定细胞）与被检者血清在三种介质（
6、盐水、酶、抗人球蛋血清在三种介质（盐水、酶、抗人球蛋白）中反应结果加以判定。白）中反应结果加以判定。 【标本、试剂与器材标本、试剂与器材】1. 标本标本 被检者不抗凝全血；被检者不抗凝全血；2. 试剂试剂 符合国家标准的符合国家标准的1-10号鉴定号鉴定谱细胞、凝胶微柱卡；谱细胞、凝胶微柱卡；3. 器材器材 台式离心机、台式离心机、37水浴箱、血水浴箱、血液细胞洗涤离心机。液细胞洗涤离心机。谱细胞（谱细胞（Panel Cell）由由812个人份的已知血型个人份的已知血型表现型的表现型的O型型RBC配套组成配套组成具有各种不同的抗原成分，具有各种不同的抗原成分，分布各具特点，与抗体反应分布各具特
7、点，与抗体反应出现不同的格局出现不同的格局能检出常见抗体和稀有抗体能检出常见抗体和稀有抗体每种抗原在谱细胞上保持一每种抗原在谱细胞上保持一定的阴阳比率定的阴阳比率为了证实单价抗体，使用的为了证实单价抗体，使用的相应抗原相应抗原RBC应为应为1个以上个以上【操作步骤操作步骤】1.向凝胶卡内依次加向凝胶卡内依次加0.8-1% 110号鉴定谱细胞号鉴定谱细胞50ul,2.每孔加被检者血清每孔加被检者血清25ul,3.37温温15min,4.专用离心机离心专用离心机离心10min,观察结果观察结果【结果判断结果判断】【方法评价与注意事项方法评价与注意事项】1. 被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现凝集则提示存在自身免疫性抗体；凝集则提示存在自身免疫性抗体；2. 4+凝集为阳性结果，表示待检血清中有不规则凝集为阳性结果，表示待检血清中有不规则抗体，结合谱红细胞反应格局，确定抗体特异性；抗体，结合谱红细胞反应格局，确定抗体特异性；3. 无凝集，表示被检者血清中无不规则抗体。无凝集，表示被检者血清中无不规则抗体。4. 凝胶微柱出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示凝胶微柱出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示不规则抗体为不规则抗体为IgG性质。性质。
