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1、1 1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。的配制原理。的配制原理。的配制原理。2 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。3 3、掌握高压蒸汽灭菌的方法步骤。掌握高压蒸汽灭菌的方法步骤。掌握高压蒸汽灭菌的方法步骤。掌握高压蒸汽灭菌的方法步骤。实验目的实验目的实验目的实验目的培养基的配制培养基的配制 培养基培养基培养基培养基(culture medium
2、)(culture medium)是是是是指人工配制的、适合指人工配制的、适合指人工配制的、适合指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不实验和研究目的不同，所以
3、培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应同种类的培养基一般都应同种类的培养基一般都应同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳含有微生物生长所需的碳含有微生物生长所需的碳含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适要素，且各成分比例应合适要素，且各成分比例应合适要素，且各成分比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要
4、求，为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的还必须控制培养基合适的还必须控制培养基合适的还必须控制培养基合适的pHpH。 实验原理实验原理实验原理实验原理牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和NaClNaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷。其中牛
5、肉膏为微生物提供碳源、能源、磷。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而而而而NaCLNaCL提供无机盐。提供无机盐。提供无机盐。提供无机盐。 琼脂在常用浓度下琼脂在常用浓度下琼脂在常用浓度下琼脂在常用浓度下9696时溶化，在时溶化，在时溶化，在时溶化，在4040时凝时凝时凝时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼固，通常不被微生物分解利用。固体
6、培养基中琼固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。同。同。同。 常用培养基：常用培养基：常用培养基：常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏一号培养基用于培养放线菌；高氏一号培养基用于培养放线菌；高氏一号培养基用于培养放线菌；高氏一号培养基用于培养放线菌；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。马
7、铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为；半固体培养基琼脂加量为；半固体培养基琼脂加量为；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%0.5%-0.8%。实验分组安排实验分组安排实验分组安排实验分组安排4-54-5人一组人一组人一组人一组配制牛肉膏蛋白胨配制牛肉膏蛋白胨配制牛肉膏蛋白胨配制牛肉膏蛋白胨固体固体固
8、体固体培养基培养基培养基培养基 400 400 mLmL 马铃薯糖琼脂培养基马铃薯糖琼脂培养基马铃薯糖琼脂培养基马铃薯糖琼脂培养基 200 200 mLmL 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）200 200 mLmL 平皿平皿平皿平皿3030个个个个 99 99 mLmL无菌水无菌水无菌水无菌水 装三角瓶装三角瓶装三角瓶装三角瓶 6 6 瓶瓶瓶瓶 9 9 mLmL无菌水无菌水无菌水无菌水 试管装试管装试管装试管装 12 12 支支支支 1 1 mLmL 吸管吸管吸管吸管 15 15 支支支支 牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨
9、牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固体固体固体固体培养基培养基培养基培养基 斜面斜面斜面斜面 5 5支支支支牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏 3g3g蛋白胨蛋白胨蛋白胨蛋白胨 10g 10g NaClNaCl 5g 5g琼脂琼脂琼脂琼脂 15-20g15-20g水水水水 1000ml1000mlpH 7.4-7.6pH 7.4-7.6 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉 20 g 20 g 硝酸钾
10、硝酸钾硝酸钾硝酸钾 1 g 1 g 磷酸氢二钾磷酸氢二钾磷酸氢二钾磷酸氢二钾 0.5 g0.5 gNaClNaCl 0.5 g 0.5 g硫酸镁硫酸镁硫酸镁硫酸镁 0.5g 0.5g 硫酸亚铁硫酸亚铁硫酸亚铁硫酸亚铁 0.010.01克克克克 琼脂琼脂琼脂琼脂 15-20g15-20g水水水水 1000ml1000mlpH 7.2-7.4pH 7.2-7.4马铃薯蔗糖琼脂培养基：马铃薯蔗糖琼脂培养基：马铃薯蔗糖琼脂培养基：马铃薯蔗糖琼脂培养基：把马铃薯洗净去皮，取把马铃薯洗净去皮，取把马铃薯洗净去皮，取把马铃薯洗净去皮，取200200克切成小克切成小克切成小克切成小块，加水块，加水块，加水块，
11、加水10001000毫升，煮沸半小时后，毫升，煮沸半小时后，毫升，煮沸半小时后，毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入补足水分。在滤液中加入补足水分。在滤液中加入补足水分。在滤液中加入1515克琼脂，克琼脂，克琼脂，克琼脂，煮沸溶解后加蔗糖煮沸溶解后加蔗糖煮沸溶解后加蔗糖煮沸溶解后加蔗糖2020克补足水分克补足水分克补足水分克补足水分 pHpH值调到值调到值调到值调到7.27.27.47.4 1 1、称量及溶化称量及溶化2 2、调、调pH pH 3 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤）、加琼脂、溶化、定容、（过滤）4 4、分装、加塞、包扎、分装、加塞、包扎5 5、灭菌、灭菌6 6、摆斜面、摆斜
12、面操作步骤操作步骤 称量与溶化：称量与溶化：注意：注意：1 1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。操作步骤操作步骤 (continued) (continued) 称量与溶化：称量与溶化：注意：注意：2 2）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速
13、。另外，称药品时严防药品混杂，一把速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品瓶盖也不洗净，擦干，再称取另一药品瓶盖也不要盖错。要盖错。操作步骤操作步骤 (continued) (continued) 调调pHpH值：值：在未调在未调pHpH值前，先用精密值前，先用精密pHpH试纸测量培养试纸测量培养基的原始基的原始pHpH，如果偏酸，用滴管向培养基，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入中逐滴加入1 mol/L 1 mol/L NaOHNaOH边加边搅拌，并边加边搅拌，并随时用随时用pHpH试纸测其试纸
14、测其pHpH，直至，直至pHpH达要求。反达要求。反之，用之，用1mol/L 1mol/L HClHCl进行调节。进行调节。 操作步骤操作步骤 (continued) (continued) 加琼脂、溶化、定容、（过滤）加琼脂、溶化、定容、（过滤）加琼脂、溶化、定容、（过滤）加琼脂、溶化、定容、（过滤） 琼脂一般应在调好了琼脂一般应在调好了琼脂一般应在调好了琼脂一般应在调好了pHpHpHpH后加入，琼脂的加入后加入，琼脂的加入后加入，琼脂的加入后加入，琼脂的加入不会影响培养基的不会影响培养基的不会影响培养基的不会影响培养基的pHpHpHpH。 琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，琼脂加入后
15、应煮沸数分钟，以使其完全溶化，琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多软，另外部分则琼脂过多软，另外部分则琼脂过多软，另外部分则琼脂过多。 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应补充水分至所需量。减小，应补充水分至所需量。减小，应补充水分至所需量。
16、减小，应补充水分至所需量。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued) (continued) (continued) (continued) 分装：分装：分装：分装：1 1）装量：）装量：）装量：）装量： 液体液体液体液体试管高度的试管高度的试管高度的试管高度的1/41/4左右左右左右左右 固体固体固体固体试管高度的试管高度的试管高度的试管高度的1/5 1/5 ，灭菌后摆斜面，灭菌后摆斜面，灭菌后摆斜面，灭菌后摆斜面 半固体半固体半固体半固体一般为试管高度的一般为试管高度的一般为试管高度的一般为试管高度的1/31/3，灭菌后垂，灭菌后垂，灭菌后垂，灭菌后垂直放置直放置直放置直放置
17、操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued) (continued) 棉塞棉塞棉塞棉塞制作方法：制作方法：制作方法：制作方法：加塞：加塞：棉塞棉塞 或或 硅胶塞硅胶塞 作用：防止外界微生物进入培养基内造成污作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。染，并保证有良好的通气性能。包扎：包扎：包扎：包扎：加加加加塞塞塞塞后，试管通常每后，试管通常每后，试管通常每后，试管通常每7 7支一起，包上一层牛皮纸或两支一起，包上一层牛皮纸或两支一起，包上一层牛皮纸或两支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也
18、用牛皮纸包扎。层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。验组。验组。验组。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued) (continued) 灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸灭菌：灭
19、菌：灭菌：灭菌： 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌 通常灭菌条件为通常灭菌条件为通常灭菌条件为通常灭菌条件为1.05kg/cm1.05kg/cm2 2, 121, 121灭菌灭菌灭菌灭菌2020分钟；含糖量高的培养基，则为分钟；含糖量高的培养基，则为分钟；含糖量高的培养基，则为分钟；含糖量高的培养基，则为0.56kg/cm0.56kg/cm2 2,115,115灭菌灭菌灭菌灭菌3030分钟。分钟。分钟。分钟。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued) (continued) 摆摆摆摆斜面：斜面
20、：斜面：斜面： 成成成成扎扎扎扎摆放，不需将每支试管单独摆放摆放，不需将每支试管单独摆放摆放，不需将每支试管单独摆放摆放，不需将每支试管单独摆放 最好待培养基冷至最好待培养基冷至最好待培养基冷至最好待培养基冷至6060时摆斜面，以免形时摆斜面，以免形时摆斜面，以免形时摆斜面，以免形成大量冷凝水成大量冷凝水成大量冷凝水成大量冷凝水无菌无菌无菌无菌检查：检查：检查：检查： 将灭菌的培养基放在将灭菌的培养基放在将灭菌的培养基放在将灭菌的培养基放在3737温箱中培养温箱中培养温箱中培养温箱中培养24-4824-48小小小小时，以检查灭菌是否彻底。时，以检查灭菌是否彻底。时，以检查灭菌是否彻底。时，以检
21、查灭菌是否彻底。二二 消毒与灭菌消毒与灭菌 加加加加热热热热法法法法干热干热干热干热法法法法湿热法湿热法湿热法湿热法火焰烧灼火焰烧灼火焰烧灼火焰烧灼热空气灭菌热空气灭菌热空气灭菌热空气灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌间歇灭菌间歇灭菌间歇灭菌间歇灭菌煮沸灭菌煮沸灭菌煮沸灭菌煮沸灭菌巴斯德消毒巴斯德消毒巴斯德消毒巴斯德消毒实验原理实验原理实验原理实验原理1 1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。2 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。学
22、习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。实验目的实验目的实验目的实验目的 滤膜过滤器的滤膜是一滤膜过滤器的滤膜是一滤膜过滤器的滤膜是一滤膜过滤器的滤膜是一种多孔纤维素，孔径一般为种多孔纤维素，孔径一般为种多孔纤维素，孔径一般为种多孔纤维素，孔径一般为0.45um0.45um，过滤时，液体和过滤时，液体和过滤时，液体和过滤时，液体和小分子物质通过，细菌被截小分子物质通过，细菌被截小分子物质通过，细菌被截小分子物质通过，细菌被截流在滤膜上。流在滤膜上。流在滤膜上。流在滤膜上。过滤除菌过滤除菌过滤除菌过滤除菌 许多材料，如血许多材料，如血许多材料，如血许多材料，
23、如血清、糖溶液等，用清、糖溶液等，用清、糖溶液等，用清、糖溶液等，用一般加热消毒灭菌一般加热消毒灭菌一般加热消毒灭菌一般加热消毒灭菌方法，均会被热破方法，均会被热破方法，均会被热破方法，均会被热破坏，应采用过滤除坏，应采用过滤除坏，应采用过滤除坏，应采用过滤除菌。菌。菌。菌。 应用最广的过滤应用最广的过滤应用最广的过滤应用最广的过滤器有蔡氏器有蔡氏器有蔡氏器有蔡氏(Seitz)(Seitz)过滤器和膜过滤器。过滤器和膜过滤器。过滤器和膜过滤器。过滤器和膜过滤器。紫外线灭菌紫外线灭菌紫外线灭菌紫外线灭菌 紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在200-300 nm,200-300 nm,
24、具有杀菌作用，具有杀菌作用，具有杀菌作用，具有杀菌作用，其中以其中以其中以其中以265-266 nm265-266 nm杀菌力最强。杀菌力最强。杀菌力最强。杀菌力最强。 无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。灭菌。灭菌。灭菌。实验原理实验原理实验原理实验原理 (continued)(continued) 干热干热干热干热灭菌灭菌灭菌灭菌电电电电烤箱烤箱烤箱烤箱实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤 1 1、干热灭菌、干热灭菌、干热灭菌、干热灭
25、菌 2 2、压力蒸汽灭菌、压力蒸汽灭菌、压力蒸汽灭菌、压力蒸汽灭菌干热干热干热干热灭菌灭菌灭菌灭菌1 1、装入待灭菌物品、装入待灭菌物品、装入待灭菌物品、装入待灭菌物品2 2、升温、升温、升温、升温 接通电源，加热升温至接通电源，加热升温至接通电源，加热升温至接通电源，加热升温至160-170160-170。3 3、恒温、恒温、恒温、恒温 保持保持保持保持160-170160-170 2 2小时。小时。小时。小时。4 4、降温、降温、降温、降温 切断电源，自然降温。切断电源，自然降温。切断电源，自然降温。切断电源，自然降温。5 5、开箱取物、开箱取物、开箱取物、开箱取物 待烤箱温度降到待烤箱温
26、度降到待烤箱温度降到待烤箱温度降到7070以下以后，以下以后，以下以后，以下以后，方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于7070，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤 (continued)(continued) 实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤 (continued) 压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽
27、灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌1 1、检查水位，放入物品。、检查水位，放入物品。、检查水位，放入物品。、检查水位，放入物品。2 2、加盖、拧紧、加盖、拧紧、加盖、拧紧、加盖、拧紧 对称用力对称用力对称用力对称用力3 3、加热升温、加热升温、加热升温、加热升温 4 4、排冷空气、排冷空气、排冷空气、排冷空气 等压力升至等压力升至等压力升至等压力升至0.5kg/cm20.5kg/cm2时，打开排气时，打开排气时，打开排气时，打开排气阀，排净冷空气。阀，排净冷空气。阀，排净冷空气。阀，排净冷空气。5 5、升温、保压、升温、保压、升温、保压、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为等锅内压力升至所需数值（通常为等锅内压力升至所需数值（通常为等锅内压力升至所需数值（通常为1.03kg/cm21.03kg/cm2），），），），保持压力保持压力保持压力保持压力20-3020-30分钟。分钟。分钟。分钟。6 6、降压、取物、降压、取物、降压、取物、降压、取物 实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤 (continued)(continued)
