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1、实验一油镜的使用及细菌实验一油镜的使用及细菌形态观察形态观察实验目的实验目的了解显微镜的基本构造和使用方法了解显微镜的基本构造和使用方法掌握油镜的原理和使用方法掌握油镜的原理和使用方法了解细菌的三种基本形态了解细菌的三种基本形态 革兰氏染色是革兰氏染色是Gram发明的一种细菌发明的一种细菌鉴别染色法，通过染色，可将细菌分为两鉴别染色法，通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化学组成有关
2、。胞壁结构和化学组成有关。实验原理实验原理实验器材实验器材1、枯草芽孢杆菌（、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）4、载玻片、载玻片5、显微镜等显微镜等2、大肠杆菌（、大肠杆菌（Escherichia coli）3、革兰氏染色液（一套）、革兰氏染色液（一套）操作步骤操作步骤涂片涂片蒸蒸馏馏水水接接种种环环草草酸酸铵铵结结晶晶紫紫 碘碘 液液95%乙醇乙醇 沙沙 黄黄自然干燥自然干燥媒染媒染1min脱色脱色2030s固定固定初染初染1min复染复染2min干燥干燥镜检镜检注意事项注意事项革兰氏染色成败与否与许多因素有关革兰氏染色成败与否与许多因素有关 菌龄菌龄 涂片厚薄涂片厚薄 脱
3、色时间（最为关键）脱色时间（最为关键）实验三实验三 微生物细胞的镜检计数法微生物细胞的镜检计数法实验目的实验目的了解血球计数板的构造了解血球计数板的构造掌握其使用方法掌握其使用方法实验原理实验原理 微生物细胞数量测定方法很多，常用的有微生物细胞数量测定方法很多，常用的有镜检直接计数法和平板菌落计数法。镜检直接镜检直接计数法和平板菌落计数法。镜检直接计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，但对杂菌和杂质则不易分辩。菌体较大的液，但对杂菌和杂质则不易分辩。菌体较大的细胞常采用血球计数板。细胞常采用血球计数板。实验原理实验原理 血球计数板是一块特制厚玻片，
4、中部平台上有两血球计数板是一块特制厚玻片，中部平台上有两个方格网，每个方格网中央有一个正方形大方格，个方格网，每个方格网中央有一个正方形大方格，面积为面积为1m2，等分成，等分成400个小方格，每小格面积为个小方格，每小格面积为1/400m2。计数池深度为。计数池深度为0.1mm，所以，每小格的体，所以，每小格的体积是积是1/4000mm3。因此，使用血球计数板计数需先。因此，使用血球计数板计数需先测定一定数量小格中的微生物细胞数，求得平均值，测定一定数量小格中的微生物细胞数，求得平均值，再换算成每毫升菌液中微生物细胞数量。再换算成每毫升菌液中微生物细胞数量。每毫升样品中微生物细胞数每毫升样品
5、中微生物细胞数每小格细胞平均数每小格细胞平均数 4000 1000稀释倍数稀释倍数实验器材实验器材1、啤酒酵母（、啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液）菌悬液2、血球计数板和盖玻片、血球计数板和盖玻片4、吸水纸、吸水纸3、显微镜、显微镜操作步骤操作步骤调节好菌液浓度调节好菌液浓度放置好计数板放置好计数板加样加样低倍镜观察低倍镜观察高倍镜计数高倍镜计数清洁计数板清洁计数板还原显微镜还原显微镜实验四实验四 微生物细胞大小的测定微生物细胞大小的测定实验目的实验目的掌握利用测微尺测定微生物细胞大小的方法掌握利用测微尺测定微生物细胞大小的方法增强对微生物细胞大小的感性认识增
6、强对微生物细胞大小的感性认识实验原理实验原理 微生物细胞大小是微生物的基本形态特征微生物细胞大小是微生物的基本形态特征,其测定需借助于测微尺，包括目尺和台尺。其测定需借助于测微尺，包括目尺和台尺。 实验原理实验原理 由于不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，由于不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目尺每小格所代表的实际长度也不同，因此，目尺每小格所代表的实际长度也不同，因此，用目尺测量微生物细胞大小时，必须先用台尺用目尺测量微生物细胞大小时，必须先用台尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数目进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数目镜和物镜下，目尺每小格所代表的相对长度。镜和物镜下，目尺每小格所代表
7、的相对长度。然后再根据微生物细胞相对于目尺的格数，计然后再根据微生物细胞相对于目尺的格数，计算出细胞的实际长度。算出细胞的实际长度。 实验器材实验器材1、啤酒酵母（、啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）2、目镜测微尺、目镜测微尺5、吸水纸、吸水纸4、显微镜、显微镜3、镜台测微尺、镜台测微尺6、载玻片和盖玻片、载玻片和盖玻片操作步骤操作步骤调整好显微镜，调节好光源调整好显微镜，调节好光源装好目尺装好目尺校正目尺校正目尺（1）放置好台尺）放置好台尺（2）校正）校正（3）计算）计算菌体大小测定菌体大小测定测定完毕测定完毕实验五实验五 培养基的制备及灭菌培养基的制备及灭菌实验目
8、的实验目的掌握培养基制备的原理和方法掌握培养基制备的原理和方法了解灭菌方法了解灭菌方法实验原理实验原理 不同的微生物生长繁殖都需要提供一定的营养不同的微生物生长繁殖都需要提供一定的营养条件，在实验室中，微生物的营养是由培养基来提条件，在实验室中，微生物的营养是由培养基来提供的。培养基是按照微生物生长繁殖所需要的营养供的。培养基是按照微生物生长繁殖所需要的营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。物质，用人工方法配制而成的营养基质。 除营养条件以外，微生物必须在最适酸碱度范除营养条件以外，微生物必须在最适酸碱度范围内才表现出最大生命力，因此，应针对不同的微围内才表现出最大生命力，因此，应针对不同的
9、微生物将培养基的生物将培养基的pHpH值调节到适当范围。值调节到适当范围。 实验原理实验原理 培养基的种类较多，根据培养基的物理状培养基的种类较多，根据培养基的物理状态可分为三种：态可分为三种： 液体培养基：液体培养基： 半固体培养基：加半固体培养基：加0.20.5%琼脂，琼脂， 固体培养基：加固体培养基：加1.52.0%琼脂。琼脂。实验器材实验器材1、药品、药品2、其他、其他 牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、NaClNaCl、琼脂、琼脂、1N NaOH1N NaOH、1N 1N HClHCl。 培养皿、试管、三角瓶、吸管、烧杯、漏斗、培养皿、试管、三角瓶、吸管、烧杯、漏斗、量筒、硅胶塞、天平
10、、包装纸、包装绳等。量筒、硅胶塞、天平、包装纸、包装绳等。操作步骤操作步骤按培养基按培养基配方称量配方称量加水加加水加热熔化热熔化调节调节pH值值过滤过滤分装分装包装包装灭菌灭菌检查灭菌检查灭菌彻底与否彻底与否实验六实验六 土壤微生物的纯系分离土壤微生物的纯系分离实验目的实验目的了解纯系分离的原理、掌握其方法了解纯系分离的原理、掌握其方法实验原理实验原理 在自然条件下，微生物常以群落的形式与其他的在自然条件下，微生物常以群落的形式与其他的微生物混杂在一起。为了研究某种微生物的特征，必微生物混杂在一起。为了研究某种微生物的特征，必须获得该种微生物的纯培养。纯培养就是从自然界或须获得该种微生物的纯
11、培养。纯培养就是从自然界或已染杂菌的培养体中分离出生产、科研所需的单一微已染杂菌的培养体中分离出生产、科研所需的单一微生物个体，进行培养并产生大量的后代。生物个体，进行培养并产生大量的后代。 获得纯培养的方法称为微生物的纯系分离法。获得纯培养的方法称为微生物的纯系分离法。实验原理实验原理 纯系分离的方法很多，常用的有稀释平板纯系分离的方法很多，常用的有稀释平板分离法和平板划线分离法。这些方法都是根据分离法和平板划线分离法。这些方法都是根据微生物生长所需营养和环境条件不同而人为的微生物生长所需营养和环境条件不同而人为的加以控制，以便某一种微生物在培养基上出现加以控制，以便某一种微生物在培养基上出
12、现单个菌落。单个菌落。实验器材实验器材 无菌培养皿、天平、无菌培养皿、天平、90ml90ml无菌水，无菌无菌水，无菌吸管、接种环、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体吸管、接种环、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、土壤。培养基、土壤。操作步骤操作步骤称取称取10g土样土样加入加入90ml无菌水中无菌水中振荡振荡10分钟分钟取一环在平取一环在平板上划线板上划线培养培养观察观察实验七实验七 平板菌落计数法平板菌落计数法实验目的实验目的掌握平板菌落计数的的原理和方法掌握平板菌落计数的的原理和方法实验原理实验原理 在适当的培养基和培养条件下，将样品稀释至一在适当的培养基和培养条件下，将样品稀释至一定浓度，取一定量接
13、种到平板上，经过培养，就会出定浓度，取一定量接种到平板上，经过培养，就会出现由单个细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落。统现由单个细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据样品的稀释倍数和取样接种量即可计计菌落数，根据样品的稀释倍数和取样接种量即可计算出样品中的微生物总量。算出样品中的微生物总量。每毫升样品中微生物细胞数每毫升样品中微生物细胞数每皿菌落平均数每皿菌落平均数 1/取样体积数取样体积数稀释倍数稀释倍数实验器材实验器材 无菌培养皿、天平、无菌培养皿、天平、90ml90ml无菌水，无菌水，9ml9ml无无菌水、无菌吸管、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固菌水、无菌吸管、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、土壤。体培养基、土壤。操作步骤操作步骤称取称取10g土样土样振荡振荡10min90ml90ml9ml9ml9ml9ml9ml9ml9ml9ml 9ml 9ml0.1ml0.1ml 0.1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1010-1-11010-2-21010-3-31010-4-41010-5-51010-6-620ml20ml20ml20ml20ml20ml倒培养基倒培养基2 2
