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1、食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）模块八模块八 食品中有害成分的检测食品中有害成分的检测知识目标知识目标1.了解食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见毒了解食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见毒素的种类及危害。素的种类及危害。2.理解农药、兽药及残留概念、种类及分析检测方法，抗理解农药、兽药及残留概念、种类及分析检测方法，抗生素类药物残留及激素类药物残留的快速测定。生素类药物残留及激素类药物残留的快速测定。3.掌握食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见毒掌握食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见毒素的测定原理、操作方法及要点等。素的测定原
2、理、操作方法及要点等。技能技能目标目标能运用现代分析仪器如气相色谱仪、高效液相色谱仪等。能运用现代分析仪器如气相色谱仪、高效液相色谱仪等。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目一农药残留的检测项目一农药残留的检测张奶奶去菜市场买菜，看到张奶奶去菜市场买菜，看到空心菜鲜亮无虫，便买回烧空心菜鲜亮无虫，便买回烧菜吃，随后就出现腹痛、腹菜吃，随后就出现腹痛、腹泻、恶心呕吐、视物不清等泻、恶心呕吐、视物不清等症状，经医院确诊为空心菜症状，经医院确诊为空心菜残留的农药中毒。残留的农药中毒。案例引入案例引入有机氯农药的检测有机氯农药的检测有机氯农药包括六六六、滴滴涕D
3、DT）等，是一类应用最早的高效广谱杀虫剂。有机氯农药化学性质稳定，在自然界不易分解，通过食物链最终进入人体，并在人体内蓄积，影响食品安全，危害人类健康。因此，我国的食品卫生标准中明确限定有机氯农药在食品中的最大限量。如表8-1食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）表8-1 有机氯农药在食品中的残留最大限量标准(GB 27632005)样品中六六六、滴滴涕经提取和净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量分析。电子捕获检测器对于负电极强的化合物具有极高的灵敏度，利用这一特点，分别测出痕量的六六六、滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。出峰顺序：-HCH、-HCH
4、、-HCH、-HCH、P,P-DDE、O,P-DDT、P,P-DDD、P,P-DDT。有机氯农药的测定有机氯农药的测定- GCGCECDECD法法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2 2. .试剂试剂丙酮、正己烷、石油醚（沸程3060）、苯、硫酸、无水硫酸钠、硫酸钠溶液（20g/L）农药标准品：六六六（-HCH、-HCH、-HCH和-HCH）纯度99；滴滴涕（P,P-DDE、O,P-DDT、P,P-DDD、P,P-DDT）纯度99。农药标准储备液：精密称取-HCH、-HCH、-HCH、-HCH、P,P-DDEO,P-DDT、P,P-DD
5、D、P,P-DDT各10mg，溶于苯中，分别移于100mL容量瓶中，以苯稀释至刻度，混匀，浓度为100mg/L,储存于冰箱中。农药混合标准工作液：分别量取上述个标准储备液于同一容量瓶中，以正己烷稀释至刻度。-HCH、-HCH和-HCH的浓度为0.005mg/L，-HCH和P,P-DDE的浓度为0.01mg/L，O,P-DDT的浓度为0.01mg/L，P,P-DDD的浓度为0.02mg/L，P,P-DDT的浓度为0.01mg/L。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器（1）气相色谱仪（具电子捕获检测器和微处理机）（2）旋转蒸发仪（3）匀浆机（4）
6、调速多用振荡器（5）离心机（6）粉碎机4.4.操作步骤操作步骤样品处理样品处理谷物制成粉末，其制品制成匀浆；蔬菜水果及其制品制成匀浆；蛋品去壳制成匀浆；肉制品去皮、筋后，切成小块，制成肉糜；鲜乳混匀待用；食用油混匀待用。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）提取提取称取具有代表性的各类食品试样匀浆20g，加水5mL（视其水分含量加水，使总水量约20mL），加丙酮405mL，震荡30min，加氯化钠6g，摇匀。加石油醚30mL，再震荡30min，静置分层。取上清液35mL经无水硫酸钠脱水，于旋转蒸发器中浓缩至近干，以石油醚定容至5mL，加0.5mL浓硫酸净化，震
7、荡0.5min，于3000r/min离心15min。取上清液进行GC分析。称取具有代表性的试样粉末2g，加石油醚20mL，震荡30min，过滤，浓缩，定容至5mL，加0.5mL浓硫酸净化，震荡0.5min，于3000r/min离心15min。取上清液进行GC分析。称取具有代表性食用油试样0.5g，以石油醚溶解于10mL试管中，取上清液进行GC分析。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）气相色谱条件气相色谱条件色谱柱：内径3mm，长2m的玻璃柱，内装1.5OV-17和2QF-1混合固定液的80100目硅藻土。载气：高纯氮，流速110mL/min。温度：柱温185
8、，检测温度225，进样温度195。进样量：进样量为110L。测定：以外标法定量分析。5.5.结果计算结果计算样品中六六六、滴滴涕及其异构物或代谢物的单一含量用下式进行计算：2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中：X试样中六六六、滴滴涕及其异构物或代谢物的单一含量，mg/kg；A1被测定试样组分的峰值（峰高或面积）；A2各农药组分标准的峰值（峰高或面积）；m1单一农药标准溶液的含量，ng；m2被测定试样的取样量，g；V1被测定试样的稀释体积，mL；V2被测定试样的进样体
9、积，L；有机磷农药的检测有机磷农药的检测有机磷农药是指有机磷酸酯类化合物，广泛应用于农业、畜牧业、公共卫生事业，在农药中是极为重要的一类化合物。根据其毒性大小，可将有机磷农药分为高毒、中毒和低毒三类，其中高毒农药不准用于蔬菜、果树、茶叶、中药材，不准用于防治卫生虫害及人、畜皮肤病。有机磷农药大多呈油状或结晶状，工业品呈淡黄色至棕色，除敌百虫和敌敌畏之外，大多是有蒜臭味。一般不溶于水，易溶于有机溶剂如苯、丙酮、乙醚、三氮甲烷及油类，对光、热、氧均较稳定，遇碱易分解破坏。有机磷农药残留的测定常采用气相色谱法、薄层色谱酶抑制法等。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编
10、）食品中残留的有机磷农药经有机溶剂提取并经净化、浓缩后，注入气相色谱仪，气化后在载气携带下于色谱柱中分离，由火焰光度检测器检测当含有机磷的试样在检测器中的富氢焰上燃烧时，以HPO碎片的形式，放射出波长为526nm的特性光，这种光经检测器的单色器（滤光片）将非特征光谱滤除后，由光电倍增管接收，产生电信号而被检出。试样的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量。有机磷农药的测定有机磷农药的测定- 气相色谱法气相色谱法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2 2. .试剂试剂二氯甲烷、丙酮、无水硫酸钠（在700灼烧4h后备用）、中性氧化铝（
11、在550灼烧4h）、硫酸钠溶液有机磷农药标准贮备液：分别准确称取有机磷农药标准品敌敌畏、乐果马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷各10.0mg用苯（或三氯甲烷）溶解并稀释至100mL，放在冰箱中保存。有机磷农药标准使用液：临用时用二氯甲烷稀释为使用液，使其浓度为敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷每毫升各相当于1.0g，稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷每毫升各相当于2.0g。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器气相色谱仪（附火焰光度检测器）、电动振荡器、组织捣碎机、旋转蒸发仪4.4.操作步骤操作步骤样品处理样品处理蔬菜
12、：取适量蔬菜擦净,去掉不可食部分后称取蔬菜试样，将蔬菜切碎混匀。称取10.0g混匀的试样，置于250mL具塞锥形瓶中，加30g100g无水硫酸钠脱水，剧烈振摇后如有固体硫酸钠存在，说明所加无水硫酸钠已够。加0.2g0.8g活性炭脱色。加70mL二氯甲烷，在振荡器上振摇0.5h，经滤纸过滤。量取35mL滤液，在通风柜中室温下自然挥发至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣，移入10mL具塞刻度试管中，并定容至2mL，备用。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）谷物：将样品磨粉（稻谷先脱壳），过20目筛，混匀。称取10g置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝（小麦、玉
13、米再加0.2g活性炭）及20mL二氯甲烷，振摇0.5h，过滤，滤液直接进样。若农药残留过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液浓缩，并定容至2mL进样。植物油：称取5.0g混匀的试样，用50mL丙酮分次溶解并洗入分液漏斗中，摇匀后，加10mL水，轻轻旋转振摇1min，静置1h以上，弃去下面析出的油层，上层溶液自分液漏斗上口倾入另一分液漏斗中，当心尽量不使剩余的油滴倒入（如乳化严重，分层不清，则放入50mL离心管中，于2500r/min转速下离心0.5h，用滴管吸出上层清夜）。加30mL二氯甲烷，100mL50g/L硫酸钠溶液，振摇1min。静置分层后，将二氯甲烷提取液移至蒸发皿中
14、。丙酮水溶液再用10mL二氯甲烷提取一次，分层后，合并至蒸发皿中。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）自然挥发后，如无水，可用二氯甲烷少量多次研洗蒸发皿中残液移入具塞量筒中，并定容至5mL。加2g无水硫酸钠振摇脱水，再加1g中性氧化铝、0.2g活性炭（毛油可加0.5g）振荡脱油和脱色，过滤，滤液直接进样。如自然挥发后尚有少量水,则需反复抽提后再如上操作。色谱条件色谱条件色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长1.5m2.0m。分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱住内装涂以2.5SE30和3QF1混合固定液的60目80目ChromosorbWAWDMCS；内装涂
15、以1.5OV17和2QF1混合固定液的60目80目ChromosorbWAWDMCS；内装涂以2OV101和2QF1混合固定液的60目80目ChromosorbWAWDMCS。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱住内装涂以3PEGA和5QF1混合固定液的60目80目ChromosorbWAWDMCS；内装涂以2NPGA和3QF1混合固定液的60目80目ChromosorbWAWDMCS；气流速度：载气为氮气80mL/
16、min；空气50mL/min；氢气180mL/min（氮气、空气和氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件）。温度：进样口：220；检测器：240；柱温：180，但测定敌敌畏为130。测定测定将有机磷农药标准使用液2L5L分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高，分别绘制有机磷农药质量-峰高标准曲线。同时取试样溶液2L5L注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相应的含量。5.结果计算按下式计算：式中：X试样中有机磷农药的含量，单位为mg/Kg；A进样体积中有机磷农药的质量，由标准曲线中查得，单位为ng；计m与进样体积（L）相当的试样质量，单位为g。计算结果保留两位
17、有效数字。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目二黄曲霉毒素的检测项目二黄曲霉毒素的检测 黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类代谢产物，具有极强的毒性和致癌性，是已确定的肝癌致癌物。由于黄曲霉毒素的剧毒性、强致癌性及广泛存在性，世界各国都制定了最高允许限量标准。我国的黄曲霉毒素允许量标准如表8-2所示：样品中AFTB1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱分离后，在波长365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFTB1最低检出量产生的荧光
18、强度比较来测定样品中AFTB1的含量。2 2试剂试剂三氯甲烷、正己烷（沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）、甲醇苯、乙腈、无水乙醚、丙酮以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰。薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）苯-乙腈(98:2)混合溶液、甲醇-水（55:45）混合溶液、三氟乙酸、氯化钠无水硫酸钠（AR）、硅胶G（薄层色谱用）5%次氯酸钠溶液：称取100g漂白精，加入500mL水，搅匀。另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于500mL温水中，倒入上述溶
19、液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。黄曲霉毒素B1标准贮备液：精密称取1-1.2mgAFTB1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光置于4冰箱中保存。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中黄曲霉毒素B1标准溶液的浓度，g/mL；A 测得的吸光度；M 黄曲霉毒素B1的相对分子量，312；f 使用仪器的校正因素；E2黄曲霉毒素B1在苯-乙腈混合液中的摩尔消光系数，19800。3 3主要仪器主要仪器（1）小型粉碎机（2）玻璃板：520cm（3）薄层板涂布
20、器（4）色谱展开槽（2564cm）（5）紫外光灯：100-125W，带有波长365nm滤光片（6）微量注射器：20uL,10uL各一支食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4 4操作步骤操作步骤样品处理样品处理玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等：称取20g粉碎过筛样品（面粉、花生酱不需粉碎）置于250mL锥形瓶中，加30mL石油醚或正己烷和100mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一层水，盖严防漏。震荡30min，静置片刻，过滤于分液漏斗，待下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一锥形瓶中。取20mL甲醇水溶液，置于125mL分液漏斗中，加20mL三
21、氯甲烷，振摇2分钟，静止分层。放出三氯甲烷层，经盛有约10g先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的慢速滤纸过滤于50mL蒸发皿中，分液漏斗中再加5mL三氯甲烷提取一次，三氯甲烷层一并滤入蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并入蒸发皿中。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）在通风柜中，将蒸发皿于65水浴上挥干，然后放入冰盒上泠却2-3分钟，准确加入1mL苯-乙腈混合液，用带橡皮头滴管的管尖将残渣充分混合，若有结晶析出，将蒸发皿取下，继续溶解、混匀，晶体消失后用滴管吸取上清液转移于2mL具塞试管中。花生油、香油、菜油等：称取4g混匀样品于小烧杯中，用20mL石油醚
22、或正己烷，将其转移到125mL分液漏斗中，用20mL甲醇-水溶液分数次洗烧杯，洗液并入分液漏斗中，振摇2分钟，静止分层后，将下层甲醇-水溶液移入第二分液漏斗，再用5mL甲醇-水溶液重复提取一次，提取液并入第二分液漏斗中。在第二分液漏斗中加入20mL三氯甲烷，以下按a法中自“振摇2分钟，静止分层”起依法操作。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）酱油、醋：称取10g样品于小烧杯中，为防止提取时乳化，加0.4g氯化钠，于分液漏斗，用15mL三氯甲烷分次洗涤烧杯，洗液并入漏斗。
23、以下按a法中自“振摇2分钟，静止分层”起依法操作，最后加入2.5mL苯-乙腈混合液，此溶液每毫升相当于4g样品。发酵酒类：用酱油、醋的测定方法，但不加氯化钠。样品测定样品测定薄层板的制备：称取约3g硅胶G，加相当于硅胶量的2-3倍左右的水，用力研磨1-2分钟，至成糊状后立即倒入涂布器内，推铺成520cm、厚度为0.25mm的薄层板三块。于空气中干燥约15分钟后，在100下活化2小时，取出放入干燥器中保存。 点样：将薄层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层板底端3cm的基线上用微量注射器滴加样液和标准液：第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B1 标准使用液。第二点：20uL样液第三点：20
24、uL 样液 + 10uL 0.04ug/mL AFT B1标准使用液。第四点：20uL 样液 + 10uL 0.2ug/mL AFT B1标准使用液。要求点距边缘和点间距约为1cm,样点直径约3cm,大小相同，点样时可用电吹风冷风边吹边点。 展开：在展开槽内加10mL无水乙醚，将点好样的薄层板预展12cm，取出挥干。再于另一展开槽内加10mL 丙酮+三氯甲烷（8+92）混合溶剂，展开10-12cm，取出挥干。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编） 结果观察：将展开好的薄板放在365nm的紫外灯光下观察：a.若第一点无荧光或都无荧光。说明薄板或展开剂未制备好，需
25、重新制备。b.第一点有荧光，而其余三点无荧光。说明样液中有荧光猝灭剂，样液需重新制备。c.第一点有荧光，第二点无荧光，三、四点有荧光。说明样液不含AFT B1或含量小于最低检出量。d.四个点都有荧光。需做确证实验后再进行定量。 确证实验：于另一薄板上左边依次点二个样，第一点：10uL0.04ug/mL AFT B1标准使用液；第二点，20uL样液。在以上两点各加一小滴三氟乙酸（TFA），待反应5min后，用电吹风热风2分钟，使温度不高于40。再于薄层板的右边点以下二个点：第三点：10uL 0.04ug/L AFT B1标准使用液。第四点：20uL样液；展开(方法同)，于紫外光下观察样液是否产生
26、与AFT B1标准点相同的衍生物,未加TFA的第三、四点作空白对照。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编） 稀释定量：若第二点的荧光强度比第一点强，则根据其强度估计减少点样体积，于另一薄板上点四个点：第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B1标准使用液第二点：10uL 样液第三点：15uL 样液第四点：20uL 样液展开后取荧光强度与第一点相同的样点进行计算。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中X 样品中AFT B1 的含量，ug/kg(pp
27、b)；V1稀释前样液的总体积，mL；D 样液的稀释倍数；V2出现同等荧光强度的稀释后样液点样量mL；m加入苯乙腈混合液溶解时相当于样品的质量，g；0.004黄曲霉毒素B1的最低检出量，ug。5 5计算计算试样经过甲醇+水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性。用水将免疫亲和柱上杂质除去.以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度。洗脱液通过荧光光度计测定黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)总量。免疫亲和层析净化荧光光度法测定大米中黄曲霉毒素免疫亲和层
28、析净化荧光光度法测定大米中黄曲霉毒素 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2 2. .试剂试剂甲醇(CH30H):色谱纯；甲醇+水(7+3):取70mL甲醇加30mL水；甲醇+水(8+2):取80ml甲醇加20ml水；氯化钠(NaCl)；磷酸氢二钠(Na2HPO4)；磷酸二氢钾(Na2HPO4)；氯化钾(KCl)；溴溶液储备液(0.01%):称取适量溴，溶于水，配成0.01%的储备液，4避光保存；溴溶液工作液(0.002%):取10ml0.01%的溴溶液加入40ml水混匀，于棕色瓶中保存备用。需每次使用前配制；二水硫酸奎宁(C20H24N2
29、O2H2SO42H20)；硫酸溶液(0.05mol/L):取2.8ml浓硫酸，缓慢加入适量水中，冷却后定容至1000ml；荧光光度计校准溶液:称取3.40g硫酸奎宁(C20H24N2O2H2SO42H20)用0.05mol/L硫酸溶液稀释至100mL，此溶液荧光光度计读数相当于20g/L黄曲霉毒素标准溶液。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器荧光光度计、高速均质器.18000r/min22000r/min、黄曲霉毒素免疫亲和柱玻璃纤维滤纸:直径11cm，孔径1.5m、玻璃注射器:10mL,20mL、玻璃试管:直径12mm，长75mm，无荧光特
30、性、空气压力泵。4.4.操作步骤操作步骤提取提取准确称取经过磨细(粒度小于2mm)的试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及甲醇+水(7+3)至125.0mL(V1)，以均质器高速搅拌提取2min定量滤纸过滤，准确移取15.00mL(V2)滤液并加入30.0mL(V3)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤12次，至滤液澄清，备用。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）净化净化将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.00mL(V4)样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免
31、疫亲和柱，抽干。以10mL水淋洗柱子两次，弃去全部流出液，抽干。准确加入1.00mL(V)色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。荧光光度计校准荧光光度计校准在激发波长360nm，发射波长450nm条件下，以0.05mol/L硫酸溶液为空白，调节荧光光度计的读数值为0.0g/L；以荧光光度计校准溶液(4.12)调节荧光光度计的读数值为20.0g/L。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样液测定样液测定取上述净化后的甲醇洗脱液加入1.00mL0.002%溴溶液，混匀，静置1min按条件进行操作，于荧光光度计中读
32、取样液中黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的浓度c(空白试验空白试验用水代替试样，按步骤做空白试验。5.5.结果计算结果计算样品中（B1B2G1G2）的含量(X)以微克每千克表示，按下式计算：2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中:X样品中黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)含量，g/kg；C1试样中黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的含量，g/kg；C0空白试验黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的含量，g/L；V最终甲醇洗脱液体积，mL；W最终净化洗脱液所含的
33、试样质量，g；m试样称取的质量的数值，g；V1样品和提取液总体积，mL；V2稀释用样品滤液体积，mL；V3稀释液体积，mL；V4通过亲和柱的样品提取液体积，mL。6.6.说明及注意事项说明及注意事项方法操作中所有试剂不得出现荧光干扰物质。每个试样平行测定两次，以其算术平均值作为结果。计算结果精确到0.1g/L。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目三食品中动、植物毒素的测定项目三食品中动、植物毒素的测定食品中的天然毒素是指某些动、植物中所含有的有毒天然成分，如河豚中含有河豚毒素、苦杏仁中的氰化物、毒蘑菇中含有的毒肽或毒蝇碱等。有些动植物食品是由于储存不当而
34、形成某些有毒物质，如马铃薯发芽后可产生龙葵碱毒素。一、常见的天然毒素一、常见的天然毒素(一一)动物性食品毒素动物性食品毒素动物性食品含有天然毒素的多为海产品。主要包括以下两类：1.鱼类的内源性毒素2.贝类毒素（二）植物性食品毒素（二）植物性食品毒素1.有毒植物蛋白、氨基酸2.毒苷主要有三类：氰苷类、致甲状腺肿素和皂苷。3.生物碱主要是指存在于植物中的含氮碱性化合物。组胺的测定组胺的测定动物类食品（如鱼肉）中组胺的测定是利用其与重氮试剂反应生成红色化合物的现象予以鉴定的。重氮试剂一般称取0.1g对硝基苯胺，置于100mL0.1moL/LHCL溶液中。取5mL移至冰箱中冷却，加入5亚硝酸钠溶液0.
35、1mL，混匀，冷却。具体方法如下：鱼肉样品去皮、去骨、去内脏，置于烧杯中，加入相当于样品9倍的水，用玻璃棒将鱼肉打碎，再加入等量5三氯乙酸溶液，搅拌均匀，过滤。取滤液2mL，滴加0.5NAOH溶液中和，加入1mL4Na2CO3溶液，移入冰箱中冷却5min，加入1mL重氮化试剂，静置5min后，加入乙酸乙酯10mL，振摇30s，静置。如乙酸乙酯层呈现红色，则表示鱼肉中有组胺存在。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）操作方法：取适量样品置于烧杯中，加入适量甲醇，用1的乙酸溶液调pH为45，在水浴中回流浸出20min，取下，离心分离后收集上清液。重复回流提取一次，
36、收集离心后的上清液，移入蒸发皿中，在水浴上蒸发至糖浆状，用乙醚分数次洗涤，去除脂肪后，加少量水溶解糖浆，过滤。取滤液0.5mL注入小白鼠腹腔内，观察1530min。若在此期间小白鼠出现不安，突然旋动，继之走路蹒跚，呼吸急促，最后突然跳起，翻身，四肢痉挛而死，则样品中有河豚毒素存在。河豚毒素的测定河豚毒素的测定-生物试验法生物试验法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）操作方法：取适量样品置于烧杯中，加入适量甲醇，再加入1的乙酸溶液至呈微酸性，在水浴中回流浸出20min，取下，离心分离后收集上清液。重复回流提取一次，收集离心后的上清液，移入蒸发皿中，在水浴上蒸发
37、至糖浆状，用乙醚分数次洗涤，去除脂肪后。将所提取浆状物质溶于浓硫酸后，再加入少量重铬酸钾呈现绿色，则样品中有河豚毒素存在。河豚毒素的测定河豚毒素的测定-呈色反应法呈色反应法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）操作方法：取适量样品置于烧杯中，加入适量甲醇，再加入1的乙酸溶液至呈微酸性，在水浴中回流浸出20min，取下，离心分离后收集上清液。重复回流提取一次，收集离心后的上清液，移入蒸发皿中，在水浴上蒸发至糖浆状，用乙醚分数次洗涤，去除脂肪。将得到的浆状物质少许溶于10mL0.5的乙酸溶液中，用1cm比色皿，于波长250300nm检测吸光度，在波长270nm出现
38、最大吸收峰，为河豚毒素特征吸收波长。河豚毒素的测定河豚毒素的测定-紫外分光光度法紫外分光光度法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目项目四四 食品食品加工过程中形成的有害物质的检测加工过程中形成的有害物质的检测食品加工对食物营养素的影响具有双重性。一方面加工可以有效地杀灭微生物并钝化酶的活性，减小微生物和酶对加工工艺及营养价值的不利影响，破坏食物中某些抗营养因子和有毒物质，从而提高食物的消化率和营养价值；另一方面则由于各种营养素稳定特性以及对不同加工工艺适应程度的差异，在加工中也会造成
39、营养素不同程度的破坏会损失，甚至在加工过程中还会产生一些有害物质，对人体健康可产生很大的危害。如，在习惯吃熏鱼的冰岛、芬兰和挪威等国家，胃癌的发病率非常高。我国胃癌和食道癌高发区的居民也有喜食烟熏肉和腌制蔬菜的习惯。在这几类食品加工过程中形成的有害物质主要可分为三类：N亚硝基化合物、多环芳烃和杂环胺。食品中苯并a芘的测定方法有荧光分光光度法、目测比色法、气相色谱法和液相色谱法等。荧光分光光度法可准确用于苯并a芘的定量分析，是我国食品卫生检验标准的首选方法，也是公认的方法之一。食品中苯并a芘的允许量标准如表8-3所示3,4苯并芘的检测苯并芘的检测食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）
40、（杨玉红、田艳花主编）品种指标品种指标肉制品烧烤猪肉、鸭、鹅、鸡5植 物油花生油10叉烧肉、羊肉串5菜油10火腿、板鸭5茶油10烟熏鱼5其他油10熏鸡、熏牛肉、熏马肉5粮食稻谷5熏红肠、香肠5小麦5植物油豆油10大麦5表8-3 食品中苯并a芘的允许量标准 单位：g/样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液-液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并（a）芘，因苯并（a）芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后有苯并（a）芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。2 2试剂试剂苯、环己烷（或石油醚，弗程3060）、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜、无水乙
41、醇、乙醇（95%）、氢氧化钾、无水硫酸钠。展开剂：乙醇：二氯甲烷（2：1）、层析用氧化铝（中性）、乙酰化滤纸。3,4苯并芘的检测苯并芘的检测-荧光法荧光法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编） 1.1.原理原理 苯并（a）芘标准溶液：精密称取10.0mg苯并（a）芘，用苯溶解后移入100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于苯并（a）芘100g。放置冰箱中保存。苯并（a）芘标准使用液：吸取1.00mL苯并（a）芘标准溶液置于10mL容量瓶中，用苯稀释至刻度，同法依次用苯稀释，最后配成每毫升相当于1.0及0.1g苯并（a）芘两种标准使用液，放置冰箱中
42、保存。3.3.仪器仪器层析柱、层析缸（筒）、K-D浓缩器、紫外光灯：带有波长为365nm或254nm的滤光片、振荡器、微量注射器（25L、50L）、荧光分光光度计。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4.4.操作步骤操作步骤1.样品处理样品处理称取试样50.00g于三角瓶中，加95乙醇100mL，氢氧化钾12g，装上冷凝管，于水浴（95）加热回流3h，取下三角烧瓶，样液滤入装有100mL水的分液漏斗中。依次用乙醇50mL环己烷150mL分2次洗涤三角瓶，过滤后一并收于分液漏斗中，振摇3min，静置分层，下层液放于第2个分液漏斗中，再用环己烷70mL提取3mi
43、n，分层后，弃水层。环己烷提取液合并于第1个分液漏斗中，用环己烷8mL淋洗漏斗，洗液一并收入，用40100mL水洗环己烷提取液3次，水洗液合并于第2个分液漏斗中用环己烷30mL，提取1次，振摇1min，分层后弃水层，再用40水50mL重复1次。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）全部环己烷提取液经层析柱纯化，用100mL苯淋洗层析柱，流速2Ml/min。洗脱液用K-D浓缩器浓缩至0.10.5mL，待测。2.纸层析纸层析点样：在乙酰化滤纸条上的一端5cm处，用铅笔划一横线为起始线，吸取一定量净化后的浓缩液，点于滤纸条上，同时点20L苯并（a）芘的标准使用液（1
44、g/mL）。展开：将点样后的乙酰化滤纸上端挂在圆柱形层析缸缸盖的挂钩上，层析缸内加30mL无水乙醇、5mL二氯甲烷为展开剂，滤纸条下端浸入展开剂约1cm，待溶剂前沿至约20cm时取出阴干。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）紫外灯照射：在365或254nm紫外光灯下观察展开后的滤纸条，用铅笔划出标准苯并（a）芘及与其同一位置的样品的蓝紫色斑点，剪下此斑点分别放入小比色管中，各加4mL苯加盖，插入5060水浴中不时振摇，浸泡15min。3.测定测定将样品及标准斑点的苯浸出液移入荧光分光光度计的石英杯中，以365nm为激发波长，以365460nm波长进行荧光扫描
45、，所得荧光光谱与标准苯并（a）芘的荧光光谱比较定性。与样品分析的同时做试剂空白，包括处理样品所用的全部试剂同样操作，分别读取样品、标准及试剂空白于波长406、406+5、4065nm处的荧光强度，按基线法由下式计算所得的数值，为定量计算的荧光强度。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中：X1样品中苯并（a）芘的含量，g/kg；m1苯并（a）芘标准斑点的质量，g；F标准的斑点浸出液荧光强度，mm；F1样品斑点浸出液荧光强度，mm；F2试剂空白浸出液荧光强度，mm；V1样
46、品浓缩液体积，mL；V2点样体积，mL；m2样品质量，g。4.4.操作步骤操作步骤N亚硝基化合物是具有强致癌性的一类有机化合物，按其化学结构，可分为两类：一类为亚硝胺，另一类为N亚硝酸胺。低相对分子质量的亚硝胺在常温下为黄色油状液体，高相对分子质量的为固体。亚硝胺和N亚硝酸胺在紫外光照射下都可发生光分解反应。约90具有强致癌性，其中N亚硝酸胺是终末致癌物，亚硝胺需要在体内活化后才能成为致癌物。由于N亚硝胺在在食品中含量较低（10g/水平），要求分析方法具有足够的灵敏性和特异性，所以只能有气相色谱热能分析仪（GCTEA）和气相色谱质谱分析仪（GCMS）才能满足这两方面的要求。亚硝胺类化合物的检测
47、亚硝胺类化合物的检测食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样品中的N一亚硝胺类化合物经水蒸气蒸馏和有机溶剂萃取后，浓缩至一定量，采用气相色谱一质谱联用仪的高分辨峰匹配法进行确认和定量分析。2.2.试剂试剂二氯甲烷、无水硫酸钠、氯化钠、硫酸(1+3)、氢氧化钠溶液(3molL)N一亚硝胺标准溶液、N一亚硝胺标准使用液、耐火砖颗粒。3.3.仪器仪器水蒸气蒸馏装置、KD浓缩器、气相色谱一质谱联用仪。亚硝胺类化合物的检测亚硝胺类化合物的检测-气相色谱气相色谱质谱测定法质谱测定法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）
48、4.4.操作步骤操作步骤水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏：称样品取200g，切碎(或绞碎、粉碎)后，置于水蒸气蒸馏装置的蒸馏瓶中(液体试样直接量取200mL)，加入100mL水(液体试样不加水)，摇匀。在蒸馏瓶中加入120g氯化钠，充分摇动，使氯化钠溶解。将蒸馏瓶与水蒸气发生器及冷凝器连接好，并在锥形接收瓶中加入40mL。二氯甲烷及少量冰块，收集400mL馏出液。萃取纯化萃取纯化：在锥形接收瓶中加入80g氯化钠和3mL的硫酸(1+3)，搅拌使氯化钠完全溶解。然后转移到500mL分液漏斗中，振荡5min，静止分层，将二氯甲烷层分至另一锥形瓶中，再用120mL二氯甲烷分三次提取水层，合并四次提取液，总体积为1
49、60mL。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）对于含有较高浓度乙醇的试样，如蒸馏酒、配制酒等，应用50mL氢氧化钠溶液(3molL)洗有机层两次，以除去乙醇的干扰。浓缩浓缩:将有机层用10g无水硫酸钠脱水后，转移至KD浓缩器中，加入一粒耐火砖颗粒，于50水浴上浓缩至1mL备用。气相色谱一质谱联用测定条件气相色谱一质谱联用测定条件a.色谱条件色谱条件.气化室温度：190。.色谱柱温度：对N一亚硝基二甲胺、N一亚硝基=乙胺、N一亚硝基二丙胺N一亚硝基吡咯烷分别为130、145、130、160。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编
50、）.色谱柱：内径1.8mm3.0mm，长2m的玻璃柱，内装涂以质量分数为15的PEG20M固定液和氢氧化钾溶液(10gL)的80目100目ChromosorbWAWDWCS。.载气：氦气，流速为40mLmin。b.质谱仪条件质谱仪条件.分辨率：7000；.离子化电压：70V；.离子化电流：300A；.离子源温度：180；.离子源真空度：1.3310-4Pa；.界面温度：180。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）c.测定测定采用电子轰击源高分辨峰匹配法，用全氟煤油(PFK)的碎片离子(它们的质荷比为68.99527、99.9936、130.992O、99.9
51、936)分别监视N一亚硝基二甲胺、N一亚硝基二乙胺、N一亚硝基二丙胺及N-亚硝基吡咯烷的分子、离子(它们的质荷比为74.0480、102.0793、130.1106、100.0636)，结合它们的保留时间来定性以示波器上该分子、离子的峰高来定量分析。5.5.计算计算2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中：X样品中某一N一亚硝胺化合物的含量，g/或gL；h1浓缩液中该N一亚硝胺化合物的峰高，mm；h2标准使用液中该N一亚硝胺化合物的峰高，mm；标准使用液中该N一亚硝胺化
52、合物的浓度，gmL；m样品质量或体积，g或mL。计算结果表示到两位有效数字。6.6.说明说明由于质谱灵敏度为10-10g，当取样量为200g、进样量为1L时，检测下限位0.5g/。由于挥发性N一亚硝胺（如NDMA、NDEA、NDPA和NPYR）在100时都具有一定的蒸汽压，可随水蒸气带入气相，在接收瓶中冷凝收集。待蒸馏的样品中加入氯化钠使之饱和是为了减低N一亚硝胺在水中的溶解度，使之易于蒸发。在接收瓶中加入冰块和二氯甲烷，可利于挥发性N一亚硝胺的冷凝收集，提高回收率。在水相中加入3mL硫酸（1+3）是为了出去碱性杂质。浓缩时，如果温度过高（超过60），会使亚硝胺明显损失。对于含有较高浓度乙醇的
53、样品，可能在溜出液中含有较多的乙醇，在萃取时可转入二氯甲烷中。为此必须用50mL氢氧化钠溶液(3molL)洗涤有机相两次。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）兽药残留是“兽药在动物源食品中的残留”的简称，是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及（或）其代谢物，以及与兽药有关的杂质。所以，兽药残留既包括原药，也包括药物在动物体内的代谢产物和兽药生产中所伴生的杂质。在动物源食品中较容易引起兽药残留量超标的兽药主要有抗生素类、磺胺类、呋喃类、抗寄生虫类和激素类药物。1抗生素类如青霉素类、氨基糖苷类、四环素类、土霉素、螺旋霉素、链霉素、金霉素等。食品分析与检
54、测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目五兽药残留的检测项目五兽药残留的检测2磺胺类常见药物有磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺脒、新诺明、菌得清等。3激素激素是指由内分泌腺或内分泌细胞分泌的具有传递信息作用的高效能生物活性物质。这类药物主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育速度，常见使用的激素和-兴奋剂类主要有性激素类、皮质激素类和盐酸克仑特罗等。4其他兽药呋喃唑酮和硝呋烯腙常用于猪或鸡的饲料中来预防疾病，它们在动物源食品中应为零残留，即不得检出，是我国食品动物禁用兽药。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样品经提取，微孔
55、滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。2.2.试剂试剂乙腈（分析纯）、0.01mol/L磷酸二氢钠溶液、土霉素（OTC）标准溶液四环素（TC）标准溶液、金霉素（CTC）标准溶液、混合标准溶液（取土霉素、四环素标准溶液各1.00mL，取金霉素标准溶液2.00mL，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各0.1mg，金霉素0.2mg，临时现配）、5%高氯酸溶液。畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素含量的测定畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素含量的测定 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉
56、红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器高效液相色谱仪，紫外检测器。4.4.色谱条件色谱条件 色谱柱：ODSC18（5m）6.2mm15cm、检测波长（355nm）、柱温流速（1.0mL/min）、进样量（10L）、流动相（乙腈/0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30%（V/V）硝酸溶液调节pH2.5），3565（v/v），使用前用超声波脱气10min）。5.5.操作方法操作方法 （1）样品测定）样品测定食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）称取5.00g（0.01g）切碎的肉样（5mm），置于50mL锥形烧瓶中，加入5%高氯酸25.0mL，于
57、振荡器上振荡提取10min，移入到离心管中，以2000r/min离心3min，取上清液经0.45m滤膜过滤，取溶液10L进样，记录峰高，从工作曲线上查得含量。2.绘制工作曲线绘制工作曲线分别称取7份切碎的肉样，每份为5.00g（0.01g），分别加入混合标准溶液0、25、50、100、150、200、250L（含土霉素、四环素各为0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0g，含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0g），按样品测定方法操作、以峰高为纵坐标，以抗生素含量为横坐标绘制工作曲线。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田
58、艳花主编） 6. 6.计算计算 式中：X样品中抗生素含量，mg/g；A样品溶液测得抗生素质量，g；m样品质量，g。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样品中的激素经提取分离后，用高效液相色谱分离测定，以峰保留时间定性，以峰高或峰面积与标准比较定量。2.2.试剂试剂甲醇、丙酮、乙醚、二氯甲烷、乙酸钠、乙酸、无水硫酸钠、乙酸钠缓冲液（5.2）。内标储备液：区安眠酮0.1000g，用甲醇溶液溶解并定容至100mL此溶液每毫升含安眠酮1.000mg。激素的检测激素的检测 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）内标使
59、用液：取内标储备液2.0mL，用甲醇溶液溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含安眠酮20.00g。激素标准储备液分别称取雌三醇、雌二醇、雌酮、睾酮、孕酮0.1000g用甲醇溶液溶解并定容至100mL，每毫升含各种激素均为1.000mg。激素标准使用液精密吸取一定量的激素标准品和内标储备液，用甲醇配制成每毫升含各种激素为10.00g、安眠酮2.00g和每毫升含各种激素为2.00g、安眠酮2.00g的两种标准使用液。3.3.仪器仪器高效液相色谱仪、紫外检测器、离心机、旋转蒸发器、K-D浓缩器。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4.4.操作步骤操作步骤（1）样品
60、处理）样品处理去可食部分，捣成匀浆，称取50g左右置于250mL具塞三角瓶中在上述样品中加入安眠酮20.00g/mL的内标使用液1.0mL，加甲醇-丙酮（1+1）混合溶液150mL，在振荡器上振摇提取30min。用滤纸过滤，残渣用少量甲醇-丙酮（1+1）混合液洗涤数次，洗液并入滤液中，于旋转蒸发器或K-D浓缩器中将溶剂蒸除，残渣用甲醇20mL溶解，经盛有无水硫酸钠的漏斗滤入250mL分液漏斗中，再用10mL甲醇分数次洗涤漏斗，洗液并入滤液中。加pH5.2的乙酸钠缓冲液80mL左右，混匀后用二氯甲烷50、30、30mL振摇提取3次，合并提取液并用无水硫酸钠脱水，在水浴中挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并
61、定容至10.00mL，混匀后以3000r/min离心5min，取上清液供色谱分析用。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）（2）高效色谱分析参考条件）高效色谱分析参考条件色谱柱HP-ODS，4.6mm200mm流动相乙腈：甲醇：四氢呋喃：0.01molL乙酸钠溶液（超纯水配制）=20:20:10:50流速1.0mL/min测定波长270nm进样体积10L（3）样品测定）样品测定取样品10L注入液相色谱仪，以内标法定量。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）5.5.结果计算结果计算式中X样品中激素的含量，g/g；A1样品中激素的
62、峰高与安眠酮峰高之比；A2标准溶液中激素的峰高与安眠酮峰高之比；m样品的质量，g；标准溶液中激素的质量浓度，g/mL；V样品定容体积，mL。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）动物性食品中瘦肉精残留的测定动物性食品中瘦肉精残留的测定瘦肉精，、学名盐酸克伦特罗，是一种白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。盐酸克伦特罗是一种平喘药，该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂而是肾上腺类神经兴奋剂。盐酸克伦特罗属于非蛋白质激素，耐热，使用后会在猪体组织中形成残留，尤其是在猪的肝脏等内脏器官残留较高，食后直接危害人体健康。动物性食品中盐酸
63、克伦特罗（瘦肉精）残留的测定方法主要有气相色谱质谱法、高效液相色谱法和酶联免疫法等。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目六项目六 食品中其他有害成分的检测食品中其他有害成分的检测基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定。微孔板包被有针对克伦特罗IgG的包被体。克伦特罗抗体被加入，经孵育及洗涤后，加入竞争性酶标记物、标准或试样溶液。克伦特罗与竞争性酶标记物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体连接的克伦特罗标记酶在洗涤中被除去。将底物（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中孵育，结合的标记酶将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色，在4
64、50nm处测量吸光度，吸光度比值与克伦特罗浓度的自然对数成反比。瘦肉精的测定瘦肉精的测定-酶联免疫法酶联免疫法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2.2.试剂试剂高氯酸溶液（0.1mol/L）、磷酸二氢钠缓冲液（0.1mol/L，pH=6）、异丙醇+乙酸乙酯（40+60）、针筒式微孔过滤膜（0.45m，水相）、克伦特罗酶联免疫试剂盒、96孔板（12条8孔）包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体、过氧化物酶标记物（浓缩液）、克伦特罗系列标准液（至少5个倍比稀释浓度水平，1个空白）、酶底物（过氧化尿素）、克伦特罗抗体（浓缩液）反应停止液（1mol
65、/L硫酸）、缓冲液（酶标记物及抗体浓缩液稀释用）。3.3.仪器仪器酶标仪（配备450nm滤光片）、微量移液器、匀浆器、旋转蒸发器、离心机、酸度计、磨口玻璃离心管、超声波清洗器。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4.4.操作步骤操作步骤（1）样品提取）样品提取肌肉、肝脏、肾脏样品。称取样品10g，用20mL0.1mol/L高氯酸溶液匀浆，置于磨口玻璃离心管中，然后置于超声波清洗器中超声20min，取出置于80水浴中加热30min。取出后离心（4500r/min）15min。倾出上清液，沉淀用5L0.1mol/L高氯酸溶液洗涤，再离心，将两次上清液合并。用1m
66、ol/L氢氧化钠溶液调pH至9.50.1，若有沉淀产生，再离心（4500r/min）10min,将上清液转移至磨口玻璃离心管中，加8g氯化钠，混匀，加入25mL异丙醇+乙酸乙酯（40+60），置于振荡器上振荡提取20min。提取完毕，放置5min。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）用吸管小心将上层有机相移至蒸发器中，用20mL异丙醇+乙酸乙酯（40+60）再重复萃取一次，合并有机相，于60再旋转蒸发器上浓缩至近干用1mL磷酸二氢钠缓冲液充分溶解残留物，经针筒式微孔过滤膜过滤，洗涤三次完全转移至5mL玻璃离心管中，并用磷酸二氢钠缓冲液定容至刻度。尿液试样。若
67、尿液浑浊先离心（3000r/min）10min,将上清液适当稀释后上酶标板进行酶联免疫法筛选实验。血液试样。将血清或血浆离心（3000r/min）10min,将血清适当稀释后上酶标板进行酶联免疫法筛选实验。2.测定测定试剂的准备试剂的准备食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）竞争酶标记物使用液：提供的竞标酶标记物为浓缩液。由于稀释的酶标记物稳定性不好，仅稀释实际使用酶标记物。在吸取浓缩液之前，要仔细振摇。用缓冲液以1:10的比例稀释酶标记物浓缩液。克伦特罗抗体使用液：提供的克伦特罗抗体为浓缩液。由于稀释的克伦特罗抗体溶液稳定性变差，仅稀释实际使用克伦特罗抗体。
68、在吸取浓缩液之前，要仔细振摇。用缓冲液以1:10的比例稀释克伦特罗抗体浓缩液。包被有抗体的微孔板条：将锡箔袋沿横向边压皱外沿剪开，取出需用的微孔板及框架，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，28保存。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样品准备：样品提取物20L进行分析，高残留样品用蒸馏水进一步稀释。测定。使用前将试剂盒再室温（1925）下放置12h。将标准和试样（至少按双平行实验计算）所用数量的孔条插入微孔架，记录标准和试样的位置。加入100L稀释后的抗体溶液到每一个微孔中，充分混合并在室温孵育15min。倒出孔中
69、的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每行拍打3次）以保证完全除去孔中的液体。用250L蒸馏水充入孔中，再次倒掉微孔中液体，重复操作2次。加入20L的标准或处理好的试样到各自的微孔中（标准和试样至少做两个平行实验）。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）加入100L稀释的酶标记物，室温孵育30min。倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每行拍打3次）以保证完全除去孔中的液体。用250L蒸馏水充入孔中，再次倒掉微孔中液体，重复操作2次。加入50L酶底物和50L发色试剂到微孔中，充分混合并在室温暗处孵育15min。加入100L反应停止液微孔
70、中，混合好尽快在450nm波长处测定吸光度。5.5.结果计算结果计算用所获得的标准溶液和和试样溶液吸光度与空白溶液的比值进行计算。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）相对吸光度（）=式中标准（或试样）溶液的吸光度空白（浓度为0的标准溶液）的吸光度将计算的相对吸光度值（）对应盐酸克伦特罗浓度（ng/L）的自然对数作半对数坐标系统曲线图，校正曲线在0.0040.054ng呈线性，对应的试样浓度可从校正曲线算出。2024/7/25=式中：X试样中克伦特罗的含量，g/kg或g/L；A试样的相对吸光度（）对应的克伦特罗质量，ng；f试样稀释倍数；m试
71、样的取样量，g或mL。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）苏丹红，俗称油溶黄，是一种人工合成的化学染色剂，并非食品添加剂。它的化学成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。苏丹红属于化工染色剂，广泛应用于溶剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等的增光。我国明文禁止江将苏丹红作为色素在食品中添加，但由于其染色鲜艳，故一些食品企业在辣椒粉、香肠、熟肉、泡面、调味酱、馅饼等食品中违法加入苏丹红。食品中苏丹红可采用高效液相色谱法进行测定。苏丹红的检测苏丹红的检测食品分析与检测食品分析与
72、检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。2.2.试剂试剂乙腈、丙酮、甲酸、乙醚、正己烷、无水硫酸钠、层析柱管：1cm（内径）5cm（高）的注射器管、层析用氧化铝、氧化铝层析柱、5%丙酮的正己烷液、标准物质（苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红；纯度95%）、标准储备液。苏丹红的检测苏丹红的检测-高效液相色谱法高效液相色谱法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）、分析天平（感量0.1mg）旋转
73、蒸发仪、均质机、离心机、0.45m有机滤膜。4.4.样品制备样品制备将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。5.5.操作方法操作方法（1）样品处理）样品处理红辣椒粉等粉状样品食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）称取1g5g（准确至0.001g）样品与三角瓶中，加入10mL30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全过程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化
74、铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂志的多少用10mL30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45m有机滤膜过滤后待测。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品称取0.5g2g（标准至0.001g）样品与小烧杯中，加入适量正己烷溶解（约1mL10ml），难溶解的应品可于正己烷中加温溶解。按中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品称取10g20g（准确至0.01
75、g）样品于离心管中，加10mL20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品对加水，加入30mL正己烷：丙酮=3：1，匀浆5min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）香肠等肉制品称取粉碎样品10g20g（准确至0.01g）于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆，滤出清液，再以20mL2次正己烷匀浆过滤。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上
76、蒸至5mL以下，按a中“慢慢加入到氧化铝层析柱.过滤后待测”操作。2.色谱条件色谱条件仪器条件色谱柱：ZorbaxSB-C18,3.5m,4.6mm150mm（或相当型号色谱柱）。流动相溶剂A：0.1甲酸的水溶液：乙腈=85：15。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）溶剂B：0.1甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20。梯度洗脱：流速1mL/min，柱温30.检测波长：苏丹红478nm、苏丹红苏丹红及苏丹红520nm；于苏丹红出峰后切换。进样量10L。梯度条件见表8-4。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）时间/min指标流动相
77、曲线AB010.025.032.035.040.0252500252575751001007575线性线性线性线性线性线性表8-4 梯度条件标准曲线吸取标准储备液0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.6mL，用正己烷定容至25mL，此标准系列浓度为0g/mL、0.16g/mL、0.32g/mL、0.64g/mL、1.28g/mL、2.56g/mL，绘制标准曲线。6.6.计算计算按下式计算苏丹红含量：2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中 R样品中苏丹红含量，mg/kg；c由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，g/mL；
78、 V样液定容体积，mL ； M样品质量，g 。孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，其既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水，溶液呈蓝绿色；溶于甲醇、乙醇和戊醇。长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。科研结果表明，孔雀石绿在鱼内残留时间太长，且其具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，鉴于此，许多国家均将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。孔雀石绿的检测孔雀石绿的检测食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）试样中的残留物用乙腈-乙酸盐缓冲混合液
79、提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层并浓缩，经酸性氧化铝柱净化后，高效液相色谱-PbO2柱后衍生测定，外标法定量。2.2.试剂试剂（除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。）乙腈（液相色谱纯）、二氯甲烷、甲醇（液相色谱纯）乙酸盐缓冲液：溶解4.95g无水乙酸钠及0.95g对-甲苯磺酸于950mL水中,用冰乙酸调节溶液pH到4.5,最后用水稀释到1L。孔雀石绿的检测孔雀石绿的检测-高效液相色谱法高效液相色谱法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）20%盐酸羟胺溶液。1.0mol/L对-甲苯磺酸：称取17.2g对-甲苯磺酸，并用水稀释
80、至100mL。50mmol/L乙酸铵缓冲溶液：称取3.85g无水乙酸铵溶解于1000mL水中，冰乙酸调pH到4.5。二甘醇。酸性氧化铝：80-120目。二氧化铅。硅藻土545：色谱层析级。标准品：孔雀石绿（MG）、隐色孔雀石绿（LMG）、结晶紫（CV）、隐色结晶紫（LCV），纯度大于98%。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）标准溶液：准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫，用乙腈分别配制成100g/mL的标准贮备液，再用乙腈稀释配制1g/mL的标准溶液。-18避光保存。混合标准工作溶液：用乙腈稀释标准溶液（3.2.13），配制成每毫升含孔
81、雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫均为20ng的混合标准溶液。-18避光保存。3.3.仪器和设备仪器和设备高效液相色谱仪：配有紫外-可见光检测器；匀浆机；离心机：4000r/min；固相萃取装置；25%PbO2氧化柱；酸性氧化铝柱：1g/3mL，使用前用5mL乙腈活化。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4.4.实验步骤实验步骤（1）样品制备）样品制备提取称取5.00g样品于50mL离心管内，加入1.5mL20%的盐酸羟胺溶液、2.5mL1.0mol/L的对-甲苯磺酸溶液、5.0mL乙酸盐缓冲溶液，用匀浆机以10000r/min的速度均质30s，加入1
82、0mL乙腈剧烈震摇30s。加入5g酸性氧化铝，再次震荡30s。3000r/min离心10min。把上清液转移至装有10mL水和2mL二甘醇的100mL离心管中。然后在50mL离心管中加入10mL乙腈，重复上述操作，合并乙腈层。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）净化在离心管中加入15mL二氯甲烷,振荡10s，3000r/min离心10min，将二氯甲烷层转移至100mL的梨形瓶中，再用5mL乙腈、10mL二氯甲烷重复上述操作一次，合并二氯甲烷层于100mL梨形瓶中。45旋转蒸发至约1mL用2.5mL乙腈溶解残渣。将酸性氧化铝柱(3.3.6)安装在固相萃取装置
83、上，将梨形瓶中的溶液转移到柱上，再用乙腈洗涤瓶两次，每次2.5mL,把洗涤液依次通过柱，控制流速不超过0.6mL/min，收集全部流出液，45旋转蒸发至近干，残液准确用0.5mL乙腈溶解，过0.45m滤膜，滤液供液相色谱测定。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）（2）色谱分析）色谱分析液相色谱条件：液相色谱条件：a)色谱柱：C18柱，250mm4.6mm（i.d.），粒度5m，在C18色谱柱和检测器之间连接25%PbO2氧化柱;b)流动相：乙腈和乙酸铵缓冲溶液(3.2.7),梯度洗脱参数见表8-5；c）流速：1.0mL/min；d）柱温：室温；e）检测波长：
84、618nm(孔雀石绿);588nm(结晶紫)；f）进样量：50L。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）时间（min）乙腈, %乙酸铵缓冲溶液, %060404802015802015.19551795517.16040206040表8-5 流动相梯度表液相色谱测定：液相色谱测定：a）根据样液中被测孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫响应值均应在仪器检测线性范围内。对
85、标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的保留时间约为6.10min、7.88min、17.77min、18.22min，标准品色谱图参见图8-1。2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）图8-1：孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫标准的液相色谱图5.5.计算结果与讨论：计算结果与讨论：按下式计算样品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫残留量。计算结果需扣除空白值。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中：X-样品中待测组分残留量，mg
86、/kg；C-待测组分标准工作液的浓度,g/mL；A-样品中待测组分的峰面积；As-待测组分标准工作液的峰面积；V-样液最终定容体积，mL；W-最终样液所代表的试样量,g。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）6 6注意事项注意事项本方法孔雀石绿的残留量测定结果系指孔雀石绿和它的代谢物隐色孔雀石绿残留量的之和，以孔雀石绿表示。本方法结晶紫的残留量测定结果系指结晶紫和它的代谢物隐色结晶紫残留量的之和，以结晶紫表示。本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测限均为2.0g/kg。丙二醛，无色针状晶体，熔点7274，一般含两个结晶水，60下真空干燥可得无水
87、物，易潮解，纯的丙二醛在中性条件下稳定，但在酸性条件下不稳定。由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得，可在高真空下升华精制主要用于医药中间体、感光色素的原料。与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。丙二醛(MDA)脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外影响线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性。油脂中丙二醛的测定油脂中丙二醛的测定食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）丙二醛(MDA)是脂质过氧化物的分解产物，一定条件下能和硫代巴比妥酸(TBA)形成紫红色物
88、质，呈色强度与脂质过氧化物的含量成正比。2.2.试剂试剂0.2硫代巴比妥酸(TBA)：称取0.2g，加蒸馏水100mL，加热助溶，贮于棕色瓶中。5三氯醋酸(TCA)。油脂中丙二醛的测定油脂中丙二醛的测定-分光光度法分光光度法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）丙二醛标准贮备液：准确称取l，1，3，3-四乙氧基丙烷(简称TMP)0.315g，溶于1000mL无水乙醇内(1mL相当于100g)。放入密闭的棕色瓶中，贮于冰箱内。丙二醛标准使用液：准确吸取标准贮备液10mL于100mL容量瓶中，再加蒸馏水至刻度(1mL相当于10g)。贮于棕色瓶中
89、，在冰箱中可稳定3个月。三氯甲院。3.3.仪器和设备仪器和设备72l型分光光度计；恒温水浴箱；25mL比色管。4.4.实验步骤实验步骤食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）（1）样品处理准确称取粉碎方便面1g，置于100mL锥形瓶中，加三氯乙酸20mL，振摇10min，过滤、备用。（2）绘制标准曲线准确吸取每相当于丙二醛10g的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于比色管中，加水至总体积为5ml，加入5mlTBA溶液，测得吸光度，绘制标准曲线。（3）样液测定取样液5ml于25ml比色管中，加入5mlTBA，放入90水浴加热30m
90、in，取出后食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）置于冷水中冷却，移入离心管，离心5min，上清夜倾入25ml比色管，加入5ml三氯甲烷摇均，静置分层，吸出上清液于538nm波长比色，对照标准曲线得到微克数（同时作空白试验）。5.5.结果计算结果计算丙二醛含量按下式进行计算。式中：丙二醛含量（g/g）C从标准曲线查得丙二醛的微克数(ug)m样品质量（g）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）一、名词解释一、名词解释1. 有害物质 2. 食品中兽药残留 3. 黄曲霉毒素 4. 蛋白酶抑制剂 5. 凝聚素二、判断题二、判断题1.
91、斑点所走的距离与溶剂所走的距离的比值，称为比移值。（ ）2. 可见分光光度计使用氘灯光源。（ ）3. 紫外分光光度计使用的单色器是玻璃棱镜。（ )4. 在腌制的食品中常含有较多的亚硝酸盐。（ ）5. 熏烤食品中多环芳烃的含量会增加。（ ）三、选择题三、选择题1. 下列属于有机磷农药的是（ ）A敌百虫六六六DDT毒杀芬2. 斐林试剂与葡萄糖作用生成红色的（ ）沉淀ACuOCu(OH)2Cu2OFe(OH)23.下列哪些食品中不含有苯并芘（ ）复习思考题复习思考题食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）A香肠面包烤肉火腿4. 下列属于挥发性毒物的是（ ）A生物碱亚硝
92、酸盐氰化物强酸5. 下列属于动物性毒素的是（ ）A有机磷农药河豚毒素苯强碱四、填空题四、填空题1.根据食品中有害成分的结构和对人体的生理作用，可将食品中有害成分分为 、 、 。 2.有机氯农药有666，其分子式为C6H6Cl6，化学名为 。 3.亚硝胺又称N-亚硝基化合物，具有较强的毒性和 。 4.食用菜豆前不能完全破坏有毒糖苷及相关的酶活性，他们在人体内会产生游离的 。 5.四环素族抗生素主要包括 、 和 。 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）五、简答题五、简答题1.简述有机磷农药的优缺点。2.什么是激素？3.牛奶中抗生素残留的测定方法有哪几种？4.瘦肉
93、精主要有哪些临床表现？检测方法有哪些？5.黄曲霉毒素常在哪些食品中出现？毒素有何特点？六、论述题六、论述题1.简述食品有害物质的种类及其来源。2.简述影响食品中兽药残留的因素。3.说明二噁英的主要来源及提取方法。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）实训一实训一 薄层色谱法测定袋泡茶叶中有机氯农药残留薄层色谱法测定袋泡茶叶中有机氯农药残留一、实训一、实训目标目标1.掌握薄层色谱法的基本原理及其在食品分析中的应用。2.了解薄层板的制备。二、实训原理二、实训原理样品中六六六、滴滴涕经提取，净化
94、、浓缩后，点样于薄层板上，点样展开后，用硝酸银显色，经紫外线照射后生成黑色斑点，再与标准比较可进行定性、定量分析。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）三、实训仪器与试剂三、实训仪器与试剂（一）仪器小型粉碎机、1020玻璃板、烘箱、紫外线杀菌灯、微量注射器、展开槽、喷雾器、电动振动器、K-D浓缩器、分液漏斗（二）试剂及材料丙酮、乙醚、苯、95乙醇、石油醚（沸程3060）、无水硫酸钠、硫酸、氧化铝G、20g/L硫酸钠溶液四、实训操作四、实训操作（一）样品处理（一）样品处理1.提取提取食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）茶叶粉碎
95、，称取20g粉末，置于250ml锥形瓶中，加石油醚100mL，震荡30min，滤入150mL分液漏斗中，用石油醚洗涤残渣，洗液倒入分液漏斗中，稀释至100ml。2.净化净化将100mL样品石油醚提取液转入分液漏斗中，加10mL硫酸，摇动数下，倒置分液漏斗、打开塞子放气，再振摇0.5min，静置分层，弃去下层液，上层液倒入另一个250mL分液漏斗，用少许石油醚洗涤原漏斗，并入250mL分液漏斗中，加100mL20g/L硫酸钠溶液，振摇后静置分层，弃下层水溶液，将石油醚经盛有15g无水硫酸钠的漏斗过滤，用石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。洗液并入滤液中，用石油醚稀释至100mL。食品分析与检测食
96、品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.浓缩浓缩将已净化过的石油醚溶液经过盛有15g无水硫酸钠的漏斗，慢慢滤入K-D浓缩器中，以少量石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗35次，合并洗液与滤液，定容至1mL。（二）测定方法（二）测定方法1.薄层板的制备称取氧化铝G9g，加1硝酸银溶液1mL及13mL水于研钵中研磨至糊状，涂在玻璃板上，厚度约为0.25mm，于100烘0.5h，置于干燥器中，避光保存。2.点样在距离薄层板底端2cm处，用针划一标记（原点），在薄层板上点10L样液和六六六及滴滴涕标准溶液，一块板可点34个点，中间点标准溶液，两边点样液。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉
97、红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.展开再展开槽中预先倒入展开剂10mL，将点过样的薄层板放入槽内，当溶剂前沿距离原点1012cm时取出，自然晾干。4.显色将展开后的薄层板喷以10mL硝酸银显色剂，干燥后句紫外线8cm处照1020min，六六六、滴滴涕等全部呈现棕黑色斑点。分别测量六六六、滴滴涕各异构体斑点的移动距离及溶剂前沿移动距离，计算比移值Rf值。六、数据处理六、数据处理采用目测比较法进行定量，即目测样品斑点的颜色深浅，与一系列相应的标准农药异构体斑点比较，找出与样品斑点最接近的标准斑点，并以此标准斑点农药量作为点板样液中相应农药异构体含量，用下式计算含量。食品分析与检测食品分析与
98、检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中X样品中农药单一含量，mg/kg或mg/L；A点样板液中六六六、滴滴涕及其异构体的单一含量，g；V1点样液的体积，L；V样液浓缩液总体积，mL；m样品质量或体积，g或mL。最后，将六六六、滴滴涕的不同异构体或衍生物单一含量相加，即得出样品有机氯农药六六六、滴滴涕的总量。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）实训二实训二 免疫亲和层析净化荧光光度法测定花生油免疫亲和层析净化荧光光度法测定花生油中黄曲霉毒素中黄曲霉毒素B B1 1含量含量一、实训一、实训目标目标 1.了解花生油中黄曲霉毒素B1的测定原理。2.掌握
99、免疫亲和层析净化荧光光度法测定黄曲霉毒素B1的操作方法。二、原理二、原理试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒具有专一识别能力，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用蒸馏水将免疫亲和柱上杂质除往，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，加进溴溶液衍生，以进步测定灵敏度。洗脱液通过荧光光度计测定黄曲霉毒素B1含量。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编） 三、实训仪器与试剂三、实训仪器与试剂（一）仪器（一）仪器1.荧光光度计2.高速均质器：18,000r/min22,000r/min。3.黄曲霉毒素免疫
100、亲和柱。4.玻璃纤维滤纸：直径11cm，孔径1.5m。5.玻璃注射器：10mL，20mL。6.玻璃试管：直径12mm，长75mm，无荧光特性。7.空气压力泵。（二）试剂及材料（二）试剂及材料1.甲醇（CH3OH）：色谱纯2.甲醇-水（7+3）：取70mL甲醇加30mL水食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.甲醇-水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水4.甲醇-水（45+55）：取45mL甲醇加55mL水5.苯：色谱纯6.乙腈：色谱纯7.苯-乙腈（98+2）：取2mL乙腈加98mL苯8.氯化钠（NaCl）9.磷酸氢二钠（Na2HPO4）10.磷酸二氢钾（K
101、H2PO4）11.氯化钾（KCl）12.溴溶液储备液（0.01%）：称取适量溴，溶于水，配成0.01%的储备液，4避光保存。13.溴溶液工作液（0.002%）：取10mL0.01%的溴溶液加进40mL水混匀，于棕色瓶中保存备用。需每次使用前配制。14.二水硫酸奎宁（C20H24N2O2H2SO42H2O）15.硫酸溶液（0.05mol/L）：取2.8mL浓硫酸，缓慢加进适量水中，冷却后定容至1000mL。16.荧光光度计校准溶液：称取3.40g硫酸奎宁（C20H24N2O2H2SO42H2O）用0.05mol/L硫酸溶液稀释至100mL，此溶液荧光光度计读数相当于20mg/L黄曲霉毒素标准溶液
102、2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）四、操作步骤四、操作步骤1.提取提取正确称取试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加进5.0g氯化钠及甲醇-水（7+3）至125.0mL（V1），以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，正确移取15.0mL（V2）滤液并加进30.0mL（V3）水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤12次，至滤液澄清，备用。2.净化净化将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。正确移取15.0mL（V4）样品提取液注进玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器
103、连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至23mL空气通过柱体。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）以10.0mL水淋洗柱子2次，弃往全部流出液，并使2mL3mL空气通过柱体。正确加进1.0mL（V）色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。3.测定荧光光度计校准在激发波长360nm，发射波长450nm条件下，以0.05mol/L硫酸溶液为空白，调节荧光光度计的读数值为0.0mg/L；以荧光光度计校准溶液（3.2.16）调节荧光光度计的读数值为20.0mg/L。样液测定取上述净化后的甲醇
104、洗脱液加进1.0mL0.002%溴溶液，混匀，静置1min，按条件进行操作，于荧光光度计中读取样液中黄曲霉毒素B1的浓度（mg/L）。空白试验用蒸馏水代替试样，按步骤做空白试验。五、结果计算五、结果计算样品中黄曲霉毒素B1的含量（X）以毫克每千克表示，按下式计算：2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中：X样品中黄曲霉毒素B1含量，mg/kg；C2样品中黄曲霉毒素B1含量，mg/L；C0空白中黄曲霉毒素B1含量，mg/L；V最终甲醇洗脱液体积，mL；W最终净化洗脱液所含的试样质量，g；m试样称取量，g；V1样品和提取液总体积，mL；V2稀释
105、用样品滤液体积，mL；V3稀释液体积，mL；V4通过亲和柱的样品提取液体积，mL。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）实训三实训三 分光光度法测定鱼罐头中组胺的含量分光光度法测定鱼罐头中组胺的含量一、实训一、实训目标目标1.了解偶氮试剂比色法测定水产品中组胺的方法原理；2.掌握正戊醇提取组胺的操作技术；3.学会用偶氮试剂比色法检测水产品中组胺的检测技术。二、原理二、原理组胺是水产品中游离的组氨酸在组氨酸脱羧酶作用下，发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。脱羧酶来自一些含有组氨酸脱羧酶的微生物，如某些肠杆菌、弧菌属等，其中最重要的是摩根变形杆菌和组胺无色杆菌。当水
106、产品受到这些细菌污染后，会产生大量组胺，从而反映出水产品受微生物污染的程度。水产品中组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）三、实训仪器与试剂三、实训仪器与试剂（一）仪器锥形瓶、分液漏斗、721分光光度计（二）试剂及材料1.正戊醇2.三氯乙酸溶液(100g/L)3.碳酸钠溶液(50g/L)4.氢氧化钠溶液(250g/L)5.盐酸(111)食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）6.组织胺标准溶液：准确称取0.2767g于1005干燥2h的磷酸组织胺，溶于水，移入100mL容量
107、瓶中，再加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg组织胺。7.磷酸组织胺标准使用液：吸取1.0mL组织胺标准溶液，置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20g组织胺。8.偶氮试剂：甲液5mL、乙液40mL混合后立即使用。甲液（称取0.5g对硝基苯胺，加5mL盐酸溶液溶解后，再加水稀释至200mL，置冰箱中）。乙液（亚硝酸钠溶液(5g/L)，临用现配）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）6.组织胺标准溶液：准确称取0.2767g于1005干燥2h的磷酸组织胺，溶于水，移入100mL容量瓶中，再加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg组织
108、胺。7.磷酸组织胺标准使用液：吸取1.0mL组织胺标准溶液，置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20g组织胺。8.偶氮试剂：甲液5mL、乙液40mL混合后立即使用。甲液（称取0.5g对硝基苯胺，加5mL盐酸溶液溶解后，再加水稀释至200mL，置冰箱中）。乙液（亚硝酸钠溶液(5g/L)，临用现配）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）四、操作步骤四、操作步骤1.样品处理样品处理称取5.0010.00g切碎样品，置于具塞锥形瓶中，加入15ml20ml三氯乙酸溶液，浸泡2h3h，过滤。吸取2.0mL滤液置于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液使呈碱性。每次
109、加入3mL正戊醇，振摇5min，提取三次。合并正戊醇提取液并稀释至10.0mL。吸取2.0mL正戊醇提取液于分液漏斗中，每次加3mL盐酸（1+11）振摇提取三次，合并盐酸提取液并稀释至10.0mL。备用。2.测定测定吸取2mL盐酸提取液于10mL比色管中。另吸取0、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.0mL组胺标准使用液（相当于0.4g、8g、12g、16g、20g组胺），分别置于10mL比色管中，加水至1mL，再各加1mL盐酸溶液。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样品与标准管各加3mL碳酸钠溶液、3mL偶氮试剂，加水至刻度，混匀
110、放置10min后用1cm比色杯以零管调节零点，于480nm波长处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。四、结果计算四、结果计算式中：X-试样中组胺的含量，mg/100g；V1-加入三氯乙酸溶液（100g/L）的体积，mL；m1-测定时试样中组胺的质量，g；m2-试样质量，g。五、注意事项五、注意事项用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的组胺时，必须用氢氧化钠溶液调PH至碱性，以便于游离组胺的提取。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）实训四实训四 分光光度法测定熟肉制品中挥发性分光光度法测定熟肉制品中挥发性亚硝胺类化合物亚硝胺类化合物一、实训一、实训目标目标
111、1.了解分光光度法测定熟肉制品中挥发性亚硝胺类化合物的测定原理。2.掌握分光光度法测定熟肉制品中挥发性亚硝胺类化合物的操作方法。二、原理二、原理本法主要是利用食品中挥发性亚硝胺可采用夹层保温水蒸气蒸馏加以纯化，在紫外光的照射下，亚硝胺分解释放亚硝酸根。通过强碱性离子交换树脂浓缩，在酸性条件下，与对位氨基苯磺酸形成重氮盐，再与M萘乙烯二胺二盐酸盐形成红色偶氮染料来测定。颜色的深浅与亚硝胺的含量成正比，此法可用于测定挥发性N一亚硝胺总量。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）三、实训仪器与试剂三、实训仪器与试剂（一）仪器（一）仪器分光光度计、紫外灯。（二）试剂（二
112、）试剂(1)磷酸缓冲溶液(0.1molL，pH=7)：吸取0.1molL磷酸氢二钠61mL和0.1molL磷酸二氢钠39.0mI混合而成。(2)300gL乙酸溶液。(3)0.5molL氢氧化钠溶液。(4)显色试剂显色剂A10gL对氨基苯磺酸的300gL乙酸溶液。显色剂B2gLN一1一萘乙烯二胺二盐酸盐的300gL乙酸溶液。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）显色剂C10gL对氨基苯磺酸的1.7molL盐酸溶液。显色剂Dl0gLN-1一萘乙烯二胺二盐酸盐溶液。(5)盐酸溶液(1.7molL)。(6)二乙基亚硝胺标准溶液(100gmL)。(7)亚硝酸钠标准溶液(
113、100gmL)。(8)强碱性离子交换树脂：交链度8，粒度150目。(9)正丁醇饱和的1molL氢氧化钠溶液。四、操作步骤四、操作步骤(1)亚硝胺标准曲线的绘制亚硝胺标准曲线的绘制 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）(2)样品制备样品制备取经捣碎或研磨均匀的样品20.0g，加入正丁醇饱和的lmolL氢氧化钠溶液，移人100mL容量瓶中，并加至刻度，摇匀，浸泡过夜，离心分离，取清滤液待测定。(3)挥发性挥发性N一亚硝胺的总量的测定一亚硝胺的总量的测定 吸取样品的清液50mI。移人蒸馏瓶内进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集25mi。馏出液，用300gL乙酸调节至pH3
114、4。再移入隙馏瓶内进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集20mL馏出液，用0.5molL氢氧化钠调至pH78。将馏出液在紫外光下照15min，通过强碱性离子(氯离子型)交换柱(1cm0.5cm)浓缩，以少量水洗后，用1molL氯化钠溶液洗脱亚硝酸根，分管收集洗脱液(每管1mL)，至所收集的洗脱液加入显色剂不显色为止。各管中加人1.0mL，pH7有磷酸缓冲溶液，0.5mL显色剂A，摇匀后再加入0.5mL显色剂B，以下操作同标准曲线的绘制。根据测得的吸光值，从标准曲线中查得每管亚硝胺的含量，汇总总含量。四、结果计算四、结果计算2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳
115、花主编）式中：X挥发性N亚硝胺含量，gkg； A相当于挥发性N一亚硝胺标准的量，g；m测定时样品液相当于样品的量，g。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）实训五实训五 牛乳中青霉素含量的快速检测牛乳中青霉素含量的快速检测一、实训一、实训目标目标1.了解牛乳中若含有青霉素，那么在生产乳酸和乳酪中，乳酸杆菌的生长、繁殖将会受到抑制。2.掌握牛乳中青霉素含量的测定方法。二、实训原理二、实训原理青霉素具有还原性，其分子中含有自由的酮基，可将Benedict试剂中的Cu2+还原成Cu+。Cu+以红色的Cu2O形式存在。含有青霉素的牛乳加入Benedict试剂后，煮沸5
116、min，可因试管内含青霉素量的多少不等而呈现深红、红、红黄、橘黄、浅橘黄、正黄等颜色。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）三、实训仪器与试剂三、实训仪器与试剂（一）仪器试管、烧杯、电炉（二）试剂及材料鲜牛乳Benedict试剂：称取硫酸铜（CuSO45H2O）8.65溶于50mL蒸馏水中，冷却后，稀释至75mL。称取柠檬酸86.5g及无水碳酸钠100g，加水300mL，加热溶解，冷却后稀释至425mL。最后把硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠（碳酸钠）溶液中，混匀后，存于棕色细口瓶中。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）四、实训操
117、作四、实训操作取2支试管，编号。1号试管加入待测乳1mL，2号试管加入纯牛乳（不含青霉素）1mL。然后向2支试管中各加入3滴Benedict试剂，煮沸5min，观察并记录颜色变化。根据观察到的颜色，参照表8-6判断1号试管牛乳中的青霉素含量。青霉素含量/10-6颜色变化青霉素含量/10-6颜色变化8010050703040红色红黄色橘黄色10205904浅橘黄正黄黄色表8-6牛乳中青霉素含量的检测结果食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编） 实训六实训六 分光光度法测定油炸方便面中丙二醛含量分光光度法测定油炸方便面中丙二醛含量一、实训一、实训目标目标 1.使学生
118、了解丙二醛的含量一般可反映油脂过氧化的程度；2.掌握油炸方便面中丙二醛的定量测定方法。二、原理二、原理丙二醛(MDA)是脂质过氧化物的分解产物，一定条件下能和硫代巴比妥酸(TBA)形成紫红色物质，呈色强度与脂质过氧化物的含量成正比。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编） 三、实训仪器与试剂三、实训仪器与试剂（一）仪器（一）仪器72l型分光光度计；恒温水浴箱；25mL比色管。（二）试剂及材料（二）试剂及材料0.2硫代巴比妥酸(TBA)、5三氯醋酸(TCA)。丙二醛标准贮备液：准确称取l，1，3，3-四乙氧基丙烷(简称TMP)0.315g，溶于1000mL无水乙醇
119、内(1mL相当于100g)。放入密闭的棕色瓶中，贮于冰箱内。丙二醛标准使用液：准确吸取标准贮备液10mL于100mL容量瓶中，再加蒸馏水至刻度(1mL相当于10g)。贮于棕色瓶中，在冰箱中可稳定3个月。三氯甲院。 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）四、实训操作四、实训操作1.样品处理：准确称取粉碎方便面1g，置于100mL锥形瓶中，加三氯乙酸20mL，振摇10min，过滤、备用。2.绘制标准曲线：准确吸取每相当于丙二醛10g的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于比色管中，加水至总体积为5ml，加入5mlTBA溶液，测得吸光度，绘制标准曲线。3.样液测定：取样液5ml于25ml比色管中，加入5mlTBA，放入90水浴加热30min，取出后置于冷水中冷却，移入离心管，离心5min，上清夜倾入25ml比色管，加入5ml三氯甲烷摇均，静置分层，吸出上清液于538nm波长比色，对照标准曲线得到微克数（同时作空白试验）。五、结果计算五、结果计算2024/7/25食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中：X丙二醛含量，g/g；C从标准曲线查得丙二醛的微克数，ug；m样品质量，g。
