病毒学-第三章 病毒总论-2

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1、病毒学-第三章病毒总论-2Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望LOGO 病毒的感染与免疫病毒的感染与免疫 主要内容主要内容病毒感染的病毒感染的途径与途径与类型类型病毒病毒感染的感染的致病机制致病机制 抗病毒免疫抗病毒免疫v水平传播水平传播: : 病毒在人群不同个体间，或受染病毒在人群不同个体间，或受染动物与人群个体之间的传播。是大多数病毒的动物与人群个体之间的传播。是大多数病毒的传播方式。传播方式。 途径途径：呼吸道，消化道，泌尿生殖道呼吸道，消化道，泌尿生殖道, , 皮

2、肤和接触。皮肤和接触。v垂直传播垂直传播: : 病毒直接由亲代传给子代，引起病毒直接由亲代传给子代，引起垂直感染。垂直感染。 途径途径：胎盘，产道。：胎盘，产道。病毒的传播方式和途径病毒的传播方式和途径 产前产前 胎盘胎盘 风疹、巨细胞病毒风疹、巨细胞病毒、梅梅 毒螺旋体、弓形体、淋毒螺旋体、弓形体、淋 病奈病奈瑟瑟菌菌 围产期围产期 已感染的产道已感染的产道 衣原体衣原体 产后产后 哺乳哺乳 直接接触巨细胞病毒、乙直接接触巨细胞病毒、乙 型肝炎病毒型肝炎病毒 生殖细胞生殖细胞 人基因组含病毒人基因组含病毒DNA DNA 多种反转录病毒多种反转录病毒垂直传播方式及常见微生物性疾病垂直传播方式及

3、常见微生物性疾病类型类型 途径途径 微生物性疾病微生物性疾病人类病毒的感染途径人类病毒的感染途径主要感染途径主要感染途径传播方式及途径传播方式及途径 病毒种类病毒种类呼吸道呼吸道空气、飞沫或皮屑空气、飞沫或皮屑流感病毒、鼻病毒流感病毒、鼻病毒等等消化道消化道污染水或食品污染水或食品脊髓灰质炎病毒、脊髓灰质炎病毒、其他肠道病毒等其他肠道病毒等输血、注射或器官输血、注射或器官移植移植污染血或血制品污污染血或血制品污染注射器染注射器HIV、HBV等等眼或泌尿生殖道眼或泌尿生殖道接触、游泳池、性接触、游泳池、性交交HIV、疱疹病毒、疱疹病毒1、2型等型等经胎盘、围产期经胎盘、围产期宫内、分娩产道、宫内

4、、分娩产道、哺乳等哺乳等HBV、HIV等等破损皮肤破损皮肤昆虫叮咬、狂犬、昆虫叮咬、狂犬、鼠类鼠类脑炎病毒、出血热脑炎病毒、出血热病毒等病毒等病毒感染的类型病毒感染的类型 隐性感染隐性感染 ：不引起临床症状：不引起临床症状 显性感染显性感染 ：引起明显的临床症状引起明显的临床症状 可获得免疫力而终止感染可获得免疫力而终止感染 重要传染源（病毒携带者）重要传染源（病毒携带者） 病毒在宿主细胞内大量增殖病毒在宿主细胞内大量增殖按是否引起临床症状局部局部和和全身性感染全身性感染（局部增殖（局部增殖血流血流单核吞噬细胞系统增单核吞噬细胞系统增殖殖血流血流靶器官）靶器官）按感染部位按感染部位：病毒感染的

5、类型病毒感染的类型v急性感染急性感染: : 潜伏期短潜伏期短, , 发病急发病急, , 病程短病程短, , 病后体病后体内不留病毒，又称内不留病毒，又称病原消灭型感染病原消灭型感染。病后常获得。病后常获得特异性免疫，特异性抗体可作为受过感染的证据。特异性免疫，特异性抗体可作为受过感染的证据。v持续性感染持续性感染: : 病毒感染机体后，病毒感染机体后， 7天连锁酒店可在可在受感染细胞内长期存在或终生携带，且不断或间受感染细胞内长期存在或终生携带，且不断或间断地向外界排出病毒。可有或无临床症状，为重断地向外界排出病毒。可有或无临床症状，为重要传染源。要传染源。 按病毒在机体内滞留的时间按病毒在机

6、体内滞留的时间: :病毒感染的类型病毒感染的类型持续性感染的产生机制持续性感染的产生机制 病毒和宿主两方面因素：病毒和宿主两方面因素：v机体免疫力弱，无力完全清除病毒；机体免疫力弱，无力完全清除病毒；v病毒隐藏逃避宿主的免疫作用；病毒隐藏逃避宿主的免疫作用；v病毒的抗原性太弱难以产生免疫应答；病毒的抗原性太弱难以产生免疫应答；v病毒产生缺损性干扰颗粒改变了感染过程；病毒产生缺损性干扰颗粒改变了感染过程；v病毒基因整合，长期与宿主细胞共存。病毒基因整合，长期与宿主细胞共存。持续性感染的分类持续性感染的分类 根据患病过程、感染表现，分为四类：根据患病过程、感染表现，分为四类：v慢性感染：慢性感染：

7、显性或隐性感染后仍带毒显性或隐性感染后仍带毒, , 排毒排毒, , 病程病程长长, , 无或有轻微症状。如无或有轻微症状。如乙型肝炎病毒（乙型肝炎病毒（HBVHBV）等。等。v潜伏感染：潜伏感染：显性或隐性感染后显性或隐性感染后, ,病毒基因存在细胞病毒基因存在细胞内内, ,不产生感染性病毒颗粒不产生感染性病毒颗粒, ,无临床症状无临床症状, ,不排毒不排毒, ,常常规方法查不到病毒规方法查不到病毒（潜伏期）。（潜伏期）。病毒受激活而增殖病毒受激活而增殖, , 进入进入发作期。发作期。http:/潜伏感染潜伏感染可在同一部位反复发作可在同一部位反复发作v迟发感染迟发感染：或称慢发病毒感染：或称

8、慢发病毒感染, 潜伏期很长潜伏期很长, 病情病情呈慢性进行性呈慢性进行性, 终为致死性感染。如终为致死性感染。如HIV、狂犬病、狂犬病和朊粒感染（羊瘙痒病、库鲁病和克雅病和朊粒感染（羊瘙痒病、库鲁病和克雅病)。v急性病毒感染的迟发并发症急性病毒感染的迟发并发症：急性感染后：急性感染后1年或数年或数年，发生致死性的病毒病，如年，发生致死性的病毒病，如亚急性硬化性全脑亚急性硬化性全脑炎炎(SSPE),该病是儿童期感染该病是儿童期感染麻疹病毒麻疹病毒后，青春期后，青春期发作的中枢神经系统致死性病毒病。发作的中枢神经系统致死性病毒病。持续性感染的分类持续性感染的分类 病毒的病毒的致病机制致病机制 v杀

9、细胞性感染杀细胞性感染v稳定状态感染稳定状态感染v包涵体的形成包涵体的形成v细胞凋亡细胞凋亡v细胞整合与转化细胞整合与转化（一）病毒直接破坏宿主细胞（一）病毒直接破坏宿主细胞 杀细胞性感染：杀细胞性感染： 多为无包膜病毒多为无包膜病毒(脊髓灰质炎，腺病毒脊髓灰质炎，腺病毒)v 阻断细胞大分子合成：阻断细胞大分子合成：早期蛋白早期蛋白v 病毒蛋白的毒性作用病毒蛋白的毒性作用: 某些病毒的衣壳蛋某些病毒的衣壳蛋 白直接杀伤作用。白直接杀伤作用。 v 细胞器的改变细胞器的改变: 大多数病毒感染，非特异大多数病毒感染，非特异 损伤细胞器。损伤细胞器。v 影响细胞溶酶体：影响细胞溶酶体：释放溶酶体酶释放

10、溶酶体酶 细细 胞溶解。胞溶解。形成多核巨细胞形成多核巨细胞 稳定状态感染：稳定状态感染：细胞膜变化细胞膜变化v 多为有包膜病毒多为有包膜病毒1）感染与未感染的细）感染与未感染的细 胞融合，有利于病胞融合，有利于病 毒在细胞间的毒在细胞间的扩散扩散。2）出现病毒抗原，引）出现病毒抗原，引 起宿主起宿主免疫反应免疫反应。http:/可作为诊断依据可作为诊断依据 某些受病毒感染的细胞内，用光学显微镜可看到某些受病毒感染的细胞内，用光学显微镜可看到有与正常细胞结构和着色不同的圆形和椭圆形斑块，有与正常细胞结构和着色不同的圆形和椭圆形斑块，称为称为包涵体。包涵体。 包涵体形成：包涵体形成： 内基小体内

11、基小体 （狂犬病毒）（狂犬病毒） 细胞凋亡细胞凋亡: 有利于病毒释放有利于病毒释放v直接由感染病毒本身直接由感染病毒本身v由病毒编码蛋白间接地由病毒编码蛋白间接地 作为诱导因子作为诱导因子 由基因控制的程序性细胞死亡由基因控制的程序性细胞死亡为正常的生物学现象。为正常的生物学现象。 整合与转化：整合与转化：细胞生长、分裂失控。细胞生长、分裂失控。EB病毒病毒淋巴瘤和鼻咽癌淋巴瘤和鼻咽癌 单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒2型型宫颈癌宫颈癌人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒乙、丙型肝炎病毒乙、丙型肝炎病毒 肝癌肝癌人嗜人嗜T细胞病毒细胞病毒 白血病白血病人疱疹病毒人疱疹病毒-8 卡波济肉瘤卡波济肉瘤至少至少100种

12、病毒能引起动物恶性肿瘤种病毒能引起动物恶性肿瘤 受病毒感染的细胞膜常发生一定的变化，受病毒感染的细胞膜常发生一定的变化，如嵌合病毒特异性抗原，或宿主细胞自身抗原如嵌合病毒特异性抗原，或宿主细胞自身抗原暴露，引发宿主免疫应答，导致宿主细胞损伤。暴露，引发宿主免疫应答，导致宿主细胞损伤。（二）病毒感染（二）病毒感染的的免免疫病理疫病理损伤损伤 病毒的病毒的致病机制致病机制 体液免疫病理作用体液免疫病理作用: 型、型、型变态反应型变态反应; 细胞免疫病理作用细胞免疫病理作用: 致敏致敏T细胞细胞(CTL), 共同抗原共同抗原 7天连锁酒店自身免自身免疫病；疫病；免疫抑制作用免疫抑制作用: 与病毒侵犯

13、免疫细胞有与病毒侵犯免疫细胞有 关关, 如如HIV直接杀伤直接杀伤CD4+T淋巴细胞。淋巴细胞。（二）病毒感染（二）病毒感染的的免免疫病理疫病理损伤损伤型变态反应：型变态反应： 病毒侵入细胞病毒侵入细胞 诱发细胞表面出现新抗原诱发细胞表面出现新抗原 与特异性抗体结合与特异性抗体结合+补体参与补体参与 细胞破坏细胞破坏型变态反应：型变态反应：病毒感染后，病毒感染后，抗病毒的抗体抗病毒的抗体因亲和力低或与抗原的比例不当因亲和力低或与抗原的比例不当，可在体内形成，可在体内形成抗原抗体复合物的沉积，激活补体后可造成局部抗原抗体复合物的沉积，激活补体后可造成局部组织损伤。组织损伤。 细胞免疫病理作用细胞

14、免疫病理作用: 特异性细胞毒性特异性细胞毒性T细胞细胞（CTL）可以同时损伤受病毒感染而出现膜新）可以同时损伤受病毒感染而出现膜新抗原的靶细胞，造成细胞病变。病毒蛋白亦可抗原的靶细胞，造成细胞病变。病毒蛋白亦可因与宿主细胞的某些蛋白间存在有共同抗原性因与宿主细胞的某些蛋白间存在有共同抗原性而导致自身免疫病。而导致自身免疫病。 （三）病毒的免疫逃逸机制（三）病毒的免疫逃逸机制v病毒的免疫逃逸是病毒的免疫逃逸是反映反映病毒病毒毒力毒力的另一重要因素的另一重要因素v病毒通过逃避免疫监视、防止免疫激活或阻止病毒通过逃避免疫监视、防止免疫激活或阻止 免疫反应发生等方式来逃脱免疫应答。免疫反应发生等方式来

15、逃脱免疫应答。v有些病毒通过编码特异性抑制免疫反应有些病毒通过编码特异性抑制免疫反应蛋白质蛋白质 实现免疫逃逸。实现免疫逃逸。v有些病毒形成有些病毒形成合胞体合胞体让病毒在细胞间传播逃避让病毒在细胞间传播逃避 抗体作用。抗体作用。 病毒逃逸免疫应答举例病毒逃逸免疫应答举例免疫逃逸机制免疫逃逸机制病毒举例及作用方式病毒举例及作用方式细胞内寄生细胞内寄生所有病毒皆为严格细胞内寄生，通过逃避抗体、所有病毒皆为严格细胞内寄生，通过逃避抗体、补体及药物作用而发挥逃避免疫机制的作用补体及药物作用而发挥逃避免疫机制的作用 抗原变异抗原变异HIV、甲型流感病毒高频率的抗原变异使得免疫、甲型流感病毒高频率的抗原

16、变异使得免疫应答滞后应答滞后 抗原结构复杂抗原结构复杂鼻病毒、柯萨奇病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、ECHO病毒等型别多，抗病毒等型别多，抗原多态性致使免疫应答不利原多态性致使免疫应答不利 损伤免疫细胞损伤免疫细胞HIV、EB病毒、麻疹病毒等可在病毒、麻疹病毒等可在T或或B细胞内寄细胞内寄生并导致宿主细胞死亡生并导致宿主细胞死亡 降低抗原表达降低抗原表达腺病毒、巨细胞病毒可抑制腺病毒、巨细胞病毒可抑制MHC-转录、表达转录、表达 病毒的免疫增强作病毒的免疫增强作用用登革病毒以及其他黄病毒再次感染，因机体内预登革病毒以及其他黄病毒再次感染，因机体内预先存在或经胎盘获得中和抗体能促进游离的病毒先存在或经

17、胎盘获得中和抗体能促进游离的病毒进入单核细胞内，并大量增殖，导致病毒血症及进入单核细胞内，并大量增殖，导致病毒血症及病毒病毒-抗体复合物形成，继之大量细胞因子及血管抗体复合物形成，继之大量细胞因子及血管活性因子释放，导致登革热休克综合征活性因子释放，导致登革热休克综合征 抗病毒免疫抗病毒免疫（一）非特异性免疫（一）非特异性免疫 遗传因素、宿主年龄和生理状态遗传因素、宿主年龄和生理状态 机体对病毒入侵的最早应答机体对病毒入侵的最早应答v诱生干扰素诱生干扰素vNK细胞的杀伤作用细胞的杀伤作用非特异性天然免疫非特异性天然免疫 干扰素干扰素定义定义：由病毒或其他干扰素诱生剂由病毒或其他干扰素诱生剂 刺

18、激机体细胞所产生的刺激机体细胞所产生的 一种具有抗病毒等作用的糖蛋白一种具有抗病毒等作用的糖蛋白 1.干扰素的种类及特点比较干扰素的种类及特点比较 2. 干扰素的诱生干扰素的诱生v编码基因位于人细胞中编码基因位于人细胞中，型位于第型位于第9对染色体对染色体短臂上，短臂上，型位于第型位于第12对染色体长臂上；正常对染色体长臂上；正常处于抑制状态。处于抑制状态。 3. 抗病毒作用机理抗病毒作用机理 v不直接作用于病毒（间接性），而作用于宿不直接作用于病毒（间接性），而作用于宿 主细胞基因，合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋主细胞基因，合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋 白合成。白合成。早期中断病毒复制，阻止病毒扩

19、散早期中断病毒复制，阻止病毒扩散4. 干扰素的生物学活性干扰素的生物学活性v 抗病毒作用抗病毒作用: IFN作用具有种属特异性；作用具有种属特异性； 抗病毒蛋白作用广谱；干扰素产生早。抗病毒蛋白作用广谱；干扰素产生早。v 免疫调节作用免疫调节作用: 活化活化NK细胞细胞v 抗肿瘤作用抗肿瘤作用: 抑制细胞分裂抑制细胞分裂。 NK细胞细胞: 杀伤病毒感染的细胞杀伤病毒感染的细胞 病毒感染细胞后，细胞膜发生了变化（穿病毒感染细胞后，细胞膜发生了变化（穿孔素），成为孔素），成为NK细胞识别的细胞识别的“靶靶”。 v中和抗体中和抗体: :由病毒衣壳或包膜抗原刺激由病毒衣壳或包膜抗原刺激产生；早期应用可

20、阻断病毒在血液中扩散，产生；早期应用可阻断病毒在血液中扩散，保护细胞免受感染保护细胞免受感染, , 7天连锁酒店会员注册控控制病情的发展。制病情的发展。 起预防而非治疗作用起预防而非治疗作用; ; 对细胞内病毒无效。对细胞内病毒无效。 （二）特异性免疫（二）特异性免疫 (1)(1)体液免疫的保护作用体液免疫的保护作用 中和抗体的保护作用中和抗体的保护作用 阻止病毒吸附并侵入易感细胞阻止病毒吸附并侵入易感细胞 中和抗体的种类及抗病毒作用的比较中和抗体的种类及抗病毒作用的比较 v针对细胞内病毒针对细胞内病毒vTC细胞细胞(CTL)直接作用直接作用，TC分泌穿孔素分泌穿孔素 (perforin)和细

21、胞毒素和细胞毒素 (cytotoxin) 杀伤杀伤靶细胞。靶细胞。v致敏致敏TD细胞通过释放细胞通过释放淋巴因子淋巴因子(淋巴毒淋巴毒素素, 趋化因子，趋化因子，IL-2， - IFN等等) (2)(2)细胞免疫的保护作用细胞免疫的保护作用抗病毒免疫的持续时间抗病毒免疫的持续时间 各种病毒之间差异很大各种病毒之间差异很大v有病毒血症的全身性感染有病毒血症的全身性感染v只有单一血清型的病毒感染只有单一血清型的病毒感染v不易发生抗原变异的病毒感染不易发生抗原变异的病毒感染病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法与防治原则与防治原则检测检测病毒病毒抗原抗原检测检测病毒病毒抗体抗体病毒的分离与培养病毒的分

22、离与培养病毒感染的治疗和预防病毒感染的治疗和预防 主要内容主要内容检测检测病毒病毒核酸核酸 应注意下列原则：应注意下列原则：v对本身带有杂菌的标本进行病毒分离培养时，对本身带有杂菌的标本进行病毒分离培养时，应使用应使用抗生素抗生素。 v因病毒在室温中易失去活性，标本应因病毒在室温中易失去活性，标本应婴儿湿婴儿湿疹疹低温低温保存并尽快送检。保存并尽快送检。 v血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后23w内各取内各取1份血清，若第份血清，若第2次血清次血清抗体滴度抗体滴度比第比第1次高出次高出4倍以上时，才有诊断意义。倍以上时，才有诊断意义。病毒感染的检查方法

23、病毒感染的检查方法病毒分离的一般程序病毒分离的一般程序 采集标本采集标本 杀灭杂菌杀灭杂菌( (青、链霉素青、链霉素) ) 接种易感的动物接种易感的动物出现病状出现病状 鸡胚鸡胚病变或死亡病变或死亡细胞培养细胞培养细胞病变细胞病变 鉴定病毒种型鉴定病毒种型( (血清学方法血清学方法) )病毒的人工培养病毒的人工培养 必需在活细胞内增殖，必需在活细胞内增殖，提供活细胞的方式：提供活细胞的方式：v动物接种：动物接种：早期对病毒生物学特性研究的主要早期对病毒生物学特性研究的主要 方式，现仅限于研究病毒或毒株的致病性或为方式，现仅限于研究病毒或毒株的致病性或为确诊病原体为病毒。确诊病原体为病毒。 未断

24、奶小鼠、小白鼠、天竺鼠、未断奶小鼠、小白鼠、天竺鼠、胸小穿什么胸小穿什么兔兔子或猴子等。子或猴子等。v鸡胚接种：鸡胚接种：个别病毒（如流感病毒）必须在个别病毒（如流感病毒）必须在受受 精精鸡胚（羊膜腔和尿囊腔）中进行分离培养。鸡胚（羊膜腔和尿囊腔）中进行分离培养。v细胞培养：细胞培养：病毒发展史上的突破性成就病毒发展史上的突破性成就。 登革病毒对新生乳鼠的致病作用登革病毒对新生乳鼠的致病作用 1-3日龄乳鼠接种病毒日龄乳鼠接种病毒6日后，小鼠陆续日后，小鼠陆续 出现体弱、弓背、行动迟缓等症状。出现体弱、弓背、行动迟缓等症状。细细 胞胞 培培 养养v原代细胞原代细胞：来自动物或人组织直接用蛋白酶

25、消化所：来自动物或人组织直接用蛋白酶消化所获得的细胞，经培养后可贴壁或悬浮生长。对病毒易获得的细胞，经培养后可贴壁或悬浮生长。对病毒易感性高，主要作为从标本中分离病毒的工具。感性高，主要作为从标本中分离病毒的工具。v二倍体细胞株二倍体细胞株：在体外连续传在体外连续传50-100代后仍保持其代后仍保持其二倍染色体数目的单层细胞。二倍染色体数目的单层细胞。人用疫苗生产中首选的人用疫苗生产中首选的细胞株。细胞株。v传代细胞株传代细胞株：可连续传代的细胞系或来自肿瘤组织：可连续传代的细胞系或来自肿瘤组织或来自发生自动转化的原代细胞系。或来自发生自动转化的原代细胞系。病毒在细胞内增殖的检查病毒在细胞内增

26、殖的检查 v有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为称为细胞病变效应细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。聚集、坏死、溶解或脱落等。v有些病毒如麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞体有些病毒如麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞体病毒等作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，病毒等作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成形成多核巨细胞多核巨细胞或称融合细胞。或称融合细胞。 v有些病毒有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养细可在培养细胞中形成胞浆或核内的胞中形

27、成胞浆或核内的包涵体包涵体。 1、蚀斑试验、蚀斑试验 病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑蚀斑，蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位蚀斑形成单位（PFU），），病毒悬液中的感染性病毒量以病毒悬液中的感染性病毒量以PFU/ml来表示。来表示。2、50%组织细胞感染量组织细胞感染量(TCID50) 病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起50%发生死亡发生死亡或病变的最小量。或病变的最小量。病毒数量和感染性测定病毒数量和感染性测定病毒的快速诊断病毒的快速诊断光镜光镜-包涵体包

28、涵体电镜电镜免疫荧光免疫荧光ELISA分子生物学技术分子生物学技术杂交杂交Southern blotPCRNorthern blotv用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。1. 免疫荧光技术免疫荧光技术 (immunofluorescence,IF) 2. 固相放射免疫测定固相放射免疫测定 (solid-phase radioimmunoassay, SPRIA)，较少使用，非放

29、射性（地高辛）标记物代替。，较少使用，非放射性（地高辛）标记物代替。 3. 酶免疫技术酶免疫技术 (enzyme immunoassay,EIA)此法可检测多此法可检测多种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法附试验法(ELISA)。（一）病毒蛋白抗原检查（一）病毒蛋白抗原检查 检测病毒成分检测病毒成分 HSV(人合胞体病毒人合胞体病毒) 荧光抗体法查抗原荧光抗体法查抗原v选择特异并保守的片段作靶选择特异并保守的片段作靶基因，需要特异性引物。基因，需要特异性引物。v检测方法：核酸杂交技术检测方法：核酸杂交技术, PCR （RT-PCR

30、）,定量实定量实时荧光时荧光PCRv核酸阳性不代表有活病毒，核酸阳性不代表有活病毒，不适用未知病毒不适用未知病毒 标本中标本中DNA 凝胶电泳转到膜上凝胶电泳转到膜上 病毒探针病毒探针 核酸杂交核酸杂交 洗膜洗膜放射自显影法或生放射自显影法或生物素物素-亲和素系统亲和素系统 分子量大小分辨标分子量大小分辨标 本中病毒核酸本中病毒核酸（二）检测病毒核酸（二）检测病毒核酸（三）检测病毒抗体（三）检测病毒抗体v 需特异的抗原（病毒抗原、基因工程表达重组需特异的抗原（病毒抗原、基因工程表达重组 抗原、合成肽）抗原、合成肽）v 须待抗体产生后才能检出，不能进行早期诊断须待抗体产生后才能检出，不能进行早期

31、诊断 下列情况下仍需做血清学诊断下列情况下仍需做血清学诊断采集标本分离病毒为时已晚采集标本分离病毒为时已晚目前尚无分离病毒的方法或难以分离目前尚无分离病毒的方法或难以分离为证实所分离病毒的临床意义为证实所分离病毒的临床意义进行血清流行病学调查进行血清流行病学调查病毒的血清学诊断病毒的血清学诊断中和试验中和试验补体结合试验补体结合试验血凝抑制试验血凝抑制试验免疫扩散等免疫扩散等中和试验中和试验 (NT test)v是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去失去感染性感染性的一种试验。的一种试验。v中和抗体中和抗体(NTAb)是作用于病毒表面抗原是

32、作用于病毒表面抗原(衣壳或包膜衣壳或包膜)的的抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体在体内维持时间长。抗体在体内维持时间长。v中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也可能因以前有中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况过隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，在临床诊断上较少使用。的调查，在临床诊断上较少使用。补体结合试验补体结合试验 (CF test)v用已知病毒可溶性补体抗原来检测病人血清用已知病毒可溶性补体抗原来检测病人血清中相应补体抗体。中相应补体抗体。v补体

33、抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常补体抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉，故特异性较中和试验有交叉，故特异性较中和试验低低。v但补体抗体出现较早，消失较快，故可作为但补体抗体出现较早，消失较快，故可作为近期感染的指标近期感染的指标。血凝抑制试验血凝抑制试验 (HI test) v具有具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称称血凝现象血凝现象。v血凝现象能被相应抗体抑制，称血凝现象能被相应抗体抑制，称HI试验试验。其原。其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的的HA与红细胞的结合。与红细胞的结合。v本试

34、验本试验简易、经济，特异性高简易、经济，特异性高，常用于粘病毒，常用于粘病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。查，也可鉴定病毒的型与亚型。v病毒病毒+鸡鸡RBC=凝集凝集（血凝试验）（血凝试验）v病毒病毒+特异性抗体特异性抗体+鸡鸡RBC=不凝集不凝集 （血凝抑制试验）（血凝抑制试验）HI试验原理试验原理 病毒感染的防治原则病毒感染的防治原则 人工主动免疫人工主动免疫: : v灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、合成肽灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗、疫苗、DNA疫苗、基因工程疫苗。疫苗、基因工程疫苗。 人工被

35、动免疫：人工被动免疫：v免疫血清免疫血清, 胎盘球蛋白胎盘球蛋白, 丙种球蛋白等用于紧急丙种球蛋白等用于紧急预防。预防。v因其半衰期短，故应注意有效期。因其半衰期短，故应注意有效期。（一）免疫预防（一）免疫预防减毒活疫苗减毒活疫苗v减毒的病毒或与人类病毒抗原性有交叉的减毒的病毒或与人类病毒抗原性有交叉的 动物病毒动物病毒v可在体内增殖诱生免疫应答可在体内增殖诱生免疫应答v接种量与接种次数均较灭活疫苗为少接种量与接种次数均较灭活疫苗为少v首选的预防疫苗首选的预防疫苗减毒活疫苗：减毒活疫苗：用自然或人工选择法用自然或人工选择法( (如温度敏感株如温度敏感株) ) 筛选的对人低毒或无毒的变异株制成的

36、疫苗，如筛选的对人低毒或无毒的变异株制成的疫苗，如脊髓灰质炎、流感、麻疹的减毒活疫苗等。脊髓灰质炎、流感、麻疹的减毒活疫苗等。死疫苗死疫苗(killed vaccine)v灭活全病毒疫苗：灭活全病毒疫苗：应用物理或化学方法使病毒应用物理或化学方法使病毒完全灭活而制成的疫苗。常用的有乙型脑炎、完全灭活而制成的疫苗。常用的有乙型脑炎、狂犬病、流感等灭活疫苗。狂犬病、流感等灭活疫苗。 v亚单位疫苗：亚单位疫苗：制备不含有病毒核酸、仅含有能制备不含有病毒核酸、仅含有能诱发中和抗体的病毒衣壳蛋白或包膜表面抗原，诱发中和抗体的病毒衣壳蛋白或包膜表面抗原，是最理想的疫苗。是最理想的疫苗。 v合成肽病毒疫苗：

37、合成肽病毒疫苗：人工合成，与病毒抗原决定人工合成，与病毒抗原决定簇具有相同氨基酸序列的肽段。簇具有相同氨基酸序列的肽段。减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较特点特点减毒活疫苗减毒活疫苗死疫苗死疫苗制备方法制备方法通过非正常培养减毒株通过非正常培养减毒株通通过过化化学学物物理理方方法法使使感感染失活染失活免疫接种免疫接种一般为一次性一般为一次性多次免疫多次免疫疫苗的稳定性疫苗的稳定性相对不稳定相对不稳定相对稳定相对稳定免疫的类型免疫的类型体液免疫和细胞免疫体液免疫和细胞免疫体液免疫体液免疫毒力回升毒力回升有可能有可能不可能不可能安全性安全性对免疫缺陷者有危险对免疫缺陷者有危险

38、安全性好安全性好生产和成本生产和成本生产较复杂、成本高生产较复杂、成本高生产简单、成本低生产简单、成本低 基因工程疫苗基因工程疫苗v基因工程疫苗基因工程疫苗：利用基因工程技术，分离、重：利用基因工程技术，分离、重组、转化和表达基因，制备出的能引起人体组、转化和表达基因，制备出的能引起人体保护性免疫应答的疫苗。保护性免疫应答的疫苗。 vDNA疫苗疫苗：又称基因疫苗或核酸疫苗，这种：又称基因疫苗或核酸疫苗，这种核酸分子是一种细菌的质粒，在克隆了特异核酸分子是一种细菌的质粒，在克隆了特异性的基因以后，能在真核细胞中表达蛋白质性的基因以后，能在真核细胞中表达蛋白质抗原，刺激机体产生特异性体液和细胞免疫

39、。抗原，刺激机体产生特异性体液和细胞免疫。基因工程的基因工程的基本程序基本程序载体质粒载体质粒外源外源DNADNA片段片段外源外源DNADNA插入插入剪切剪切引入宿引入宿主细胞主细胞选出含有选出含有重组重组DNADNA的的细胞扩增细胞扩增abbAAb (二二)药物防治药物防治: 抗病毒的化学治疗剂抗病毒的化学治疗剂 抑制病毒穿入与脱壳的药物：抑制病毒穿入与脱壳的药物：金刚烷胺金刚烷胺 抑制病毒核酸合成的药物：抑制病毒核酸合成的药物：5碘碘-2脱氧尿苷，脱氧尿苷， 阿昔洛韦（无环鸟苷）、齐多夫定（阿昔洛韦（无环鸟苷）、齐多夫定（AZT） 抑制病毒蛋白质合成的药物抑制病毒蛋白质合成的药物; 抑制病毒蛋白翻译后加工抑制病毒蛋白翻译后加工; 反义反义RNA或核酶或核酶; 治疗性疫苗治疗性疫苗: DNA疫苗疫苗 治疗性单克隆抗体治疗性单克隆抗体复习思考题复习思考题1 1、试述病毒感染的传播方式和类型；病毒、试述病毒感染的传播方式和类型；病毒对机体的致病作用包括哪些方面？对机体的致病作用包括哪些方面？2 2、机体抗病毒免疫有什么特点？简述干扰、机体抗病毒免疫有什么特点？简述干扰素的种类、作用机制和生物学活性。素的种类、作用机制和生物学活性。3 3、病毒感染检查的基本原则是什么？防治、病毒感染检查的基本原则是什么？防治病毒性疾病最有效的措施是什么？病毒性疾病最有效的措施是什么？LOGO