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1、HBV基因分型和耐药突变基因检测的临床应用产品介绍产品介绍12背景介绍背景介绍主主 要要 内内 容容病原学病原学HBV（hepatitis B virus）乙型肝炎病毒，属嗜肝病毒科，基因组长约3.2Kb，为部分双链环状DNA。HBV已发现有AI 9个基因型，在我国以C型和B型为主。包膜：包膜：HBsAg 糖蛋白细胞脂肪核心：核心：HBV-DNADNA-PolymeraseHBcAg病原学病原学 HBV侵入肝细胞后，部分双链环状HBV DNA在细胞核内以负链DNA为模板延长正链以修补正链中的裂隙区，形成共价闭合环状DNA (cccDNA)；然后以cccDNA为模板，转录成几种不同长度的mRNA
2、，分别作为前基因组RNA和编码HBV的各种抗原。 cccDNA半寿 (衰) 期较长，很难从体内彻底清除。 HBV感染和感染和发展的展的结局局图HBV感染可有不同的发展和结局，这是由病毒和宿主双方因病毒和宿主双方因素素决定的。病毒方面：病毒方面：感染的数量和毒株的异质性、以及传播的方式；宿主方面：宿主方面：免疫状态、以及决定免疫状态的年龄、遗传素质、基础健康状况和并存的疾病。自然史自然史诊断诊断 临床床诊断断 既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月，现HBsAg和（或）HBV DNA仍为阳性者，可诊断为慢性慢性HBV感染感染。可分为： 慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、携慢性乙型肝炎、乙型肝炎
3、肝硬化、携带者、者、隐匿性慢性乙型肝炎匿性慢性乙型肝炎 实验室室诊断断 生物化学生物化学检查：ALT、AST、血清白蛋白、PT、胆碱酯酶、AFP 血清学血清学检查 HBV DNA、基因型和、基因型和变异异检测：定量检测、分型和耐药突变检测 影像学影像学诊断断 病理学病理学诊断断治疗治疗慢性乙型肝炎治慢性乙型肝炎治疗的的总体目体目标 最大限度地长期抑制HBV，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。慢性乙型肝炎治慢性乙型肝炎治疗 抗病毒、免疫调节、抗炎和抗氧化、抗纤维化和对症治疗。 抗病毒治抗病毒治疗是关是关键，只要有适
4、，只要有适应证，且条件允，且条件允许，就，就应进行行规范的范的抗病毒治抗病毒治疗。干干扰素：直接抗病毒作用和免疫素：直接抗病毒作用和免疫调节作用作用清除病毒。清除病毒。我国已批准普通普通IFN （2、2b和和1b）和聚乙二醇干扰素聚乙二醇干扰素（2和和2b）用于治疗慢性乙型肝炎。HBV基因型与疾病基因型与疾病进展和干展和干扰素素治治疗效果有关。效果有关。与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌。HBeAg阳性患者对干扰素治疗的应答率，B基因型高于C基因型；A基因型患者高于D基因型 。治疗治疗治疗治疗核苷（酸）类药物：核苷（酸）
5、类药物：竞争性抑制竞争性抑制HBV DNA聚合酶；参与新的聚合酶；参与新的HBV DNA链合成过程中，终止新链合成。链合成过程中，终止新链合成。目前已应用于临床的抗HBV核苷（酸）类药物有3类，我国已上市4种。核苷（酸）类似物核苷（酸）类似物L-核苷类似物核苷类似物无环磷酸酯无环磷酸酯环戊烯环戊烯拉米夫定拉米夫定 LMV阿德福韦酯阿德福韦酯ADV恩替卡韦恩替卡韦ETV恩曲他滨 ETB替诺福韦替诺福韦TDF阿巴卡韦ABV替比夫定替比夫定 LdT克立夫定 CLV治疗治疗耐药是核苷酸类药物的共性耐药是核苷酸类药物的共性耐药检测的意义耐药检测的意义 治治疗前前检测，有助于，有助于临床判断床判断用用药是
6、否有效；是否有效； 治治疗中每中每36个月个月检测，有助，有助于于观察察疗效，及效，及时调整用整用药。EASL Clinical Practice Guidelines：Management of chronic hepatitis B. European Association for the Study of the Liver. J Hepatol, 2009, 50: 227-242.HBVHBV基因分型和耐药突变基基因分型和耐药突变基因检测产品介绍因检测产品介绍乙型肝炎病毒分型和耐乙型肝炎病毒分型和耐药突突变基因基因检测试剂盒盒 （PCR-反向点反向点杂交法）交法）国食药监械（准）字
7、2011第3401179号样本处理样本处理芯片制备芯片制备产品用途产品用途在在抗病毒治疗前和治疗中抗病毒治疗前和治疗中对血清对血清/血浆中的血浆中的HBV进进行基因分型和耐药突变基因检测行基因分型和耐药突变基因检测1 12 2区分中国和其他亚洲国家常见的区分中国和其他亚洲国家常见的HBV-B、C、D基因型基因型检测检测HBV 3类抗病毒药物类抗病毒药物5个热点突变位点的个热点突变位点的6种突变类型种突变类型HBV耐药突变基因检测的临床意义耐药突变基因检测的临床意义1. 抗病毒药物治疗前的药物选择抗病毒药物治疗前的药物选择在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前，进行耐药突变基因检测，可以指导临床医生合理
8、选择抗病毒药物，真正实现个体化诊治。2.抗病毒药物治疗中的药效监测抗病毒药物治疗中的药效监测在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗过程中，进行耐药突变基因检测，可以监测抗病毒药物治疗效果并及时调整治疗方案。HBV基因分型的临床意义基因分型的临床意义1.预测疾病进展预测疾病进展 与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌。2. 治治疗方案的方案的选择 HBeAg阳性患者对干扰素治疗的应答率，B基因型高于C基因型；A基因型患者高于D基因型3. 流行病学流行病学调查研究研究1. 1. 准确性：准确性：准确性：准确性：检测105例临床慢性HBV感
9、染阳性样本，结果与测序比较显示为相同的基因型和耐药突变类型，准确率为100%。2. 2. 特异性：特异性：特异性：特异性：检测50例临床HBV阴性样本结果全部为阴性；检测非HBV感染性病原体DNA，包括C型肝炎病毒（HCV）、乙型脑炎病毒、梅毒螺旋体和HIV，结果均为阴性。3. 3. 灵敏度：灵敏度：灵敏度：灵敏度：能稳定检测血清HBV的最低检出限为1.0103IU/mL。4. 4. 精密度：精密度：精密度：精密度：检测2.0103IU/mL的血清HBV，批内和批间的一致性好。5. 5. 稳稳定性：定性：定性：定性：产品有效期为6个月，在有效期内产品性能稳定。产品性能指标产品性能指标产品使用产
10、品使用产品操作流程产品操作流程产品使用产品使用HBV膜条探膜条探针阵列列图rt=reverse transcriptase，逆转录酶。以逆转录酶编码氨基酸的顺序命名各检测位点。如：rt180L表示逆转录酶编码氨基酸第180位为亮氨酸。CC为显色控制点。试验成立的条件试验成立的条件显色控制点CC正常显色。阳性质控品正常显色同时阴性质控品除CC外其他所有阵列位点不显色。结果判读结果判读根据显色（蓝色斑点）出现的阵列位点直接判读HBV的基因型和耐药突变类型。示例：产品使用产品使用产品使用产品使用结果判读示例结果判读示例交叉耐药突变与核苷类似物药物的关系表交叉耐药突变与核苷类似物药物的关系表注释： 耐
11、药水平分高、中、低三级，以体外实验IC50的变化倍数计算（变化倍数是相比较于野生株而言）； IC50指：最大药物抑制浓度的一半。 低：IC505；中：IC50为520；高：IC5020。LMVLdTADVTDFETVrtL180M中中/低rtM204V/I高高高高/中rtV/M207I中低/rtA181V中中中低中rtN236T低/中/Marc Chany, T. Jake Liang. Drug targets and molecular mechanisms of drug resistance in chronic hepatitis B. Gastroenterology,2007(1
12、32):1574-1585.产品使用产品使用适用人群及科室适用人群及科室适用人群适用人群：慢性乙肝患者的用药指导及疗效监测科室科室：检验科、感染科、消化内科、肝病科等使用原则使用原则：慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前进行检测，确定HBV基因型和是否发生耐药突变，指导选择敏感的治疗药物；在抗病毒治疗过程中建议3-6个月进行一次检测，实时监控耐药突变的发生。检测后的处理检测后的处理-慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）u对于接受拉米夫定治疗的患者，一旦检出基因型耐药或HBVDNA开始升高时就加用阿德福韦酯联合治疗，抑制病毒更快、耐药发生较少、临床结局较好。u对于替比夫定、恩替卡韦发生耐药者，亦可加用阿德福韦酯联合治疗。u对于阿德福韦酯耐药者，可加拉米夫定、替比夫定、恩替卡韦联合治疗；u对于未应用过其他核苷（酸）类药物者，亦可换用恩替卡韦。u对于核苷（酸）类药物发生耐药者，亦可考虑改用或加用IFN类联合治疗，但应避免替比夫定和PegIFN联合应用，因为可导致外周神经肌肉疾病。
