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1、学习内容（一）与方法或仪器性能有关的参数（二）定性实验方法的评价(pngji)（三）范例介绍ELISA法检测前S1抗原的方法学评价(pngji)第1页/共51页第一页，共52页。特异性空白(kngbi)读数检出限精密度试剂稳定性等与方法(fngf)或仪器性能有关的参数准确度回收实验(shyn)干扰线性范围敏感性第2页/共51页第二页，共52页。各个(gg)参数的定义准确度国际临床化学联合会（IFCC）将准确度定义为分析(fnx)项目测定值与其“真值”之间的一致性。其受随机误差和系统误差的影响。第3页/共51页第三页，共52页。各个参数(cnsh)的定义回收实验是指当已知量物质加入到真实样本中分
2、析方法正确地测量分析物的能力。通过测定(cdng)比例系统误差，对实验方法的准确度进行评价。第4页/共51页第四页，共52页。GOD-POD测血糖的回收率标本制备：基础管：血清0.9ml+0.1ml生理盐水回收管1：血清0.9ml+0.01ml80mmol/L葡萄糖标准液+0.09ml生理盐水回收管2：血清0.9ml+0.06ml80mmol/L葡萄糖标准液+0.04ml生理盐水回收管2：血清0.9ml+0.09ml80mmol/L葡萄糖标准液+0.01ml生理盐水根据GOD-POD说明书测定各个(gg)标本的血糖浓度，每份样品作双份检测，取平均值。各个(gg)参数的定义第5页/共51页第五页
3、，共52页。各个(gg)参数的定义回收率计算方法（以加入的被测物为标准液为例）回收率（%）=（回收浓度/加入浓度）100%加入浓度=(标准液浓度标准液体积(tj)/（基础样本体积(tj)+标准液体积(tj)）回收浓度=样本最终测定浓度-基础样本浓度第6页/共51页第六页，共52页。各个参数(cnsh)的定义回收率对加入不同浓度水平的样本在完 成回收实验后，计算(j sun)(j sun)平均回收率。理想状态时的回收率为100%100% 误差大的方法其回收率低，准确 度较差第7页/共51页第七页，共52页。干扰干扰描述(miosh)的是除了分析物以外，某些其他成分的影响，或一组成分对分析物测量的
4、准确度的影响。各个(gg)(gg)参数的定义第8页/共51页第八页，共52页。干扰(gnro)物质的来源1病理条件下产生的病理条件下产生的代谢物代谢物如：糖尿病、多发性骨髓瘤等如：糖尿病、多发性骨髓瘤等2由治疗过程引入的由治疗过程引入的化合物化合物如：药物、非肠道营养物、血如：药物、非肠道营养物、血 浆扩充剂、抗凝剂等浆扩充剂、抗凝剂等3病人本身原因引入病人本身原因引入的物质的物质如：饮酒、滥用药物、补品、如：饮酒、滥用药物、补品、 不同饮食习惯等不同饮食习惯等4标本处理过程中的标本处理过程中的添加物添加物如：抗凝剂、添加剂、稳定剂如：抗凝剂、添加剂、稳定剂5操作过程对样本的操作过程对样本的污
5、染污染如：护手霜、手套粉、血清分如：护手霜、手套粉、血清分 离器、采血管盖等离器、采血管盖等6样本本身的基质效样本本身的基质效应应如：化学和物理性质不同于理如：化学和物理性质不同于理 想的新鲜样本想的新鲜样本第9页/共51页第九页，共52页。各个(gg)参数的定义线性范围分析(fnx)系统最终输出的、与被测物浓度或活性成比例的、浓度或活性值的范围。第10页/共51页第十页，共52页。分析灵敏度国际理论和应用化学联合会（IUPAC）将方法的分析灵敏度定义为校准曲线(qxin)的斜率及对于规定量的变化分析程序产生信号的变化。基本上，这一词语定量了相对于分析物量、浓度或特性的变化的信号变化。各个(g
6、g)参数的定义第11页/共51页第十一页，共52页。分析特异性与准确度相关联，并指的是分析方法只确定(qudng)分析物,而对其他相关的物质不起作用的能力。各个(gg)参数的定义第12页/共51页第十二页，共52页。空白测定在测量程序过程(guchng)中，由于试剂和样本成分而观察到的响应被认为是“空白测量”。通过下列试验可获得这些值：没有样本的试剂溶液试剂空白；样本溶液和缺少关键试剂的溶液样本空白各个(gg)参数的定义第13页/共51页第十三页，共52页。检出限IUPAC将检出限定义为给定分析程序具有适当的确定检出的分析物的最小浓度或量。检出限依赖于空白读数(dsh)大小，并且被认为与这些测
7、量的精密度有关系。各个(gg)参数的定义第14页/共51页第十四页，共52页。精密度分析方法对同一样本产生重复测量相同值的能力被称为它的精密度，也被称为随机分析误差。精密度通常(tngchng)由同一材料至少分析20次，并且计算标准差的重复试验来估计。 各个参数(cnsh)的定义第15页/共51页第十五页，共52页。精密度的分类批内精密度在同一分析批内重复地分析同一样本的差异性，或对一系列的临床标本(biobn)的同一批内进行双份检测，并计算双份测定的标准差。 各个(gg)参数的定义第16页/共51页第十六页，共52页。批间精密度 在同一天内，在几个不同批重复(chngf)(chngf)检测同
8、一样本时，可估计日内精密度或批间精密度。各个参数(cnsh)的定义第17页/共51页第十七页，共52页。日间精密度在同一实验室，由同一(组)操作员在同一仪器上，使用同一方法和同种、同一批号试剂，在一段时间内（一般(ybn)为一个月或20个工作日）对同一测定样品（常用质控品）测量结果的精密度。 各个参数(cnsh)的定义第18页/共51页第十八页，共52页。临床(lnchun)免疫学室内控制CV规定：纳克（ng）级可接受的CV在30%。我们检测的各个项目精密度的CV值应达到最低要求30%。各个参数(cnsh)的定义第19页/共51页第十九页，共52页。定性(dngxng)实验方法的评价定义仅给出
9、阳性(yngxng)或阴性（是或非）的实验结果。评价要素临界值（cutoff）重复性实验方法比较第20页/共51页第二十页，共52页。评价(pngji)准备操作人员应接受培训，熟悉样本与试剂的处理和保存、正确的实验过程和结果解释及质量控制操作等用于评价实验的临床标本，应按要求采取(ciq)。必要时，应新鲜采取(ciq)并尽快完成检测。第21页/共51页第二十一页，共52页。临界值实验结果处于（阴、阳性）分界点时的样本中分析物浓度值；低于此值，定性实验的结果为阴性；高于此值，定性实验的结果为阳性。定义定性实验来讲，临界值是唯一(wiy)的医学决定水平。第22页/共51页第二十二页，共52页。临界
10、值当样本中被测定物浓度处于临界水平时，定性实验重复检查同一样本，将产生50%的阳性结果和50%的阴性(ynxng)结果。当样本浓度在临界值以上增加时，阳性结果比率增加；当样本浓度在临界值以下减低时，阴性(ynxng)结果比率增加。第23页/共51页第二十三页，共52页。临界值的95%区间(qjin)当样本浓度高于临界值时，重复实验产生95%阳性结果；当样本浓度低于临界值时，重复实验产生95%阴性结果；之间的样本浓度范围(fnwi)为临界值的95%区间。第24页/共51页第二十四页，共52页。重复性评价(pngji)确立方法的临界值；在临界值基础上准备(zhnbi)出-20%浓度的样本和+20%
11、浓度的样本；对以上低、高浓度样本分别测定20次，记录阴性及阳性结果数。第25页/共51页第二十五页，共52页。重复性评价(pngji)当实验结果表明“临界值”样本的阴性结果和阳性(yngxng)结果不是各占50%时，原因可能是：被评估的临界值浓度不准确；结果数据不充足；方法学剂量反应曲线在临界值处是非线性的。第26页/共51页第二十六页，共52页。重复性评价(pngji)当实验结果表明+20%浓度的样本产生阳性结果数95%，同时，-20%浓度的样本产生阴性结果数95%，说明临界值+20%浓度范围等于或超出临界值的95%区间，对于被测定物浓度在20%浓度范围以外的样本，实验方法将给出稳定的结果。
12、当阳性和/或阴性结果数95%时，应另外准备(zhnbi)不同浓度的实验样本，重新进行评价。第27页/共51页第二十七页，共52页。方法学比较(bjio)样本(yngbn)种类和数量最好使用常规病人的新鲜样本(yngbn)，样本(yngbn)量应保证评价实验方法和比较方法测定的需要。样本(yngbn)中被测物应稳定，应尽可能用评价方法和对比方法同时完成测定。作为最低要求，用对比方法测定的阴性和阳性样本(yngbn)数量，应分别在50例以上。第28页/共51页第二十八页，共52页。方法比较实验(shyn)过程使用临床样本进行方法学对比研究(ynji)应在10到20天内完成。保证足够的样本量；确保对
13、实验方法的评价在常规实验条件下进行。第29页/共51页第二十九页，共52页。已知样本临床(lnchun)诊断结果临床诊断临床诊断总计总计阳性阳性阴性阴性评价评价方法方法阳性阳性A AB BA+BA+B阴性阴性C CD DC+DC+D总计总计A+CA+CB+DB+DN N第30页/共51页第三十页，共52页。已知样本临床(lnchun)诊断结果方法敏感度=100%A/（A+C）方法特异性=100%D/（B+D）相关样本的患病率=100%（A+C）/N阳性结果预测值（PVP）=100%A/（A+B）阴性(ynxng)结果预测值（PVN）=100%D/（C+D）方法效率=100%（A+D）/N第31
14、页/共51页第三十一页，共52页。样本的临床诊断是未知的，实验方法只能(zhnn)与对比方法进行比较。由于对比方法的准确度并非100%，此情况下不能简单使用敏感性和特异性来描述方法学性能，应使用“符合率”对实验方法结果与对比方法结果的一致程度进行描述。第32页/共51页第三十二页，共52页。未知样本的临床诊断(zhndun)结果对比方法对比方法总计总计阳性阳性阴性阴性实验实验方法方法阳性阳性a ab ba+ba+b阴性阴性c cd dc+dc+d总计总计a+ca+cb+db+dn n第33页/共51页第三十三页，共52页。阳性(yngxng)(yngxng)符合率=100%a/=100%a/（
15、a+ca+c） 阴性符合率=100%d/=100%d/（b+db+d） 总符合率=100%=100%（a+da+d）/n/n未知样本的临床诊断(zhndun)结果第34页/共51页第三十四页，共52页。实验(shyn)材料与方法分析性能验证标准结果的判读 ELISA检测(jin c)前S1的方法评价第35页/共51页第三十五页，共52页。在临床实验室中，乙型肝炎前S1定性试验可用于筛查、诊断、确认或监测为目的的检测。试验的敏感度、特异性、预测值和效率(xiol)等决定了其在临床应用的范围。 ELISA检测前S1的方法(fngf)评价第36页/共51页第三十六页，共52页。检测系统(xtng)酶
16、标仪，试剂，质控品及耗材等操作人员经科主任进行岗位授权的技术人员第37页/共51页第三十七页，共52页。评价材料厦门英科新创科技有限公司生产的前S1的弱阳性质控血清,卫生部临床检验中心的室间质量评价标本,厦门英科新创科技有限公司和上海复星长征医学科学(kxu)有限公司生产的乙型肝炎病毒前S1试剂盒(ELISA)第38页/共51页第三十八页，共52页。实验(shyn)方法校验请厂家工程师对酶标仪的滤光片、读板速度(sd)、温度控制系统，操作系统菜单进行校验。使仪器各项功能使用均正常，符合国家相关技术标准要求。第39页/共51页第三十九页，共52页。精密度试验取厦门英科新创科技有限公司生产的前S1
17、的弱阳性质控血清，进行日间(rjin)重复性试验，重复测定20天次，分别计算定性试验的A值、s/co均值、s和CV值。实验(shyn)方法第40页/共51页第四十页，共52页。阳性、阴性符合率以卫生部临床(lnchun)检验中心的室间质量评价标本为材料；将厦门英科新创前S1试剂盒(ELISA)检测的结果与实验室现在使用的上海复星长征前S1试剂盒(ELISA)检测的结果相比较，计算阳性、阴性符合率。实验(shyn)方法第41页/共51页第四十一页，共52页。临界值判定在临界值基础上，准备出+20%浓度的样本和-20%浓度的样本，分别测定(cdng)20次，记录阴性及阳性结果数之间的样本浓度范围。
18、实验(shyn)方法第42页/共51页第四十二页，共52页。分析性能(xngnng)验证标准精密度验证标准若不精密度在规定的允许(ynx)范围内，精密度性能符合要求。第43页/共51页第四十三页，共52页。临界值验证标准(biozhn)“+20%”临界值浓度的血清制备：0.6U/ml(6ml的1U/ml前S1质控血清+4ml的阴性对照血清)。“-20%”临界值前S1浓度的血清制备：0.4U/ml(4ml的1U/ml前S1质控血清+6ml的阴性对照血清)。分析性能验证(ynzhng)标准第44页/共51页第四十四页，共52页。阴、阳性符合率验证标准(biozhn)若两个结果相比较一致，则视为验证
19、的检测系统阳性、阴性符合率性能符合要求。分析性能(xngnng)验证标准第45页/共51页第四十五页，共52页。对于+20%、-20%临界值浓度的血清分别(fnbi)检测20次，用酶标仪测定其A值，根据试剂盒给的cutoff值判别阴性和阳性，并记录。分析性能(xngnng)验证标准第46页/共51页第四十六页，共52页。结果(jigu)的判定精密度具体验证结果详见各检测系统的检定校准验证报告书。检验项目的不精密度均小于规定(gudng)的允许范围，表明验证的检测系统精密度性能符合要求，重复性好。第47页/共51页第四十七页，共52页。阳性符合率两种方法的检测结果(jigu)相比较一致，则视为验
20、证的检测系统阳性符合率为100%，性能符合要求。阴性符合率两种方法的检测结果(jigu)相比较一致，则视为验证的检测系统阴性符合率为100%，性能符合要求。结果(ji gu)的判定第48页/共51页第四十八页，共52页。-20%浓度的样本结果95%结果是阴性(ynxng)；+20%浓度的样本的结果95%结果是阳性，说明试剂生产厂家提供的检测项目临界值大致可靠。结果(ji gu)的判定第49页/共51页第四十九页，共52页。谢谢！第50页/共51页第五十页，共52页。感谢您的欣赏(xnshng)！第51页/共51页第五十一页，共52页。内容(nirng)总结学 习 内 容。在测量程序过程中，由于试剂和样本成分而观察到的响应被认为是“空白测量”。没有样本的试剂溶液试剂空白。临床免疫学室内控制CV规定：纳克（ng）级可接受的CV在30%。当样本浓度在临界值以上增加时，阳性结果(ji gu)比率增加。方法敏感度=100%A/（A+C）。方法特异性=100%D/（B+D）。=100%A/（A+B）。=100%D/（C+D）。阴性符合率=100%d/（b+d）第五十二页，共52页。
