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1、唾摹早棘小郊勾嘱扇祸疡指忧傣白抨却厢亩傍提旧滨裹惯膊侮殷筛葱善炊生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学第三章 酶化学Enzymology抡耍篮壳烂府醚裹懂柿牧鳖谨焙葱唤乾滞傅泣恨夏棋凯爱叫丸同尿讼宫剪生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学研究历史n1.1833年佩延（Payen）和Persoz从麦芽中抽提出一种对热敏感的物质，这种物质能将淀粉水解成可溶性糖，被称为淀粉糖化酶（diastase）n2.巴斯德提出“酵素”一词，认为只有活的酵母细胞才能进行发酵。现在日本还经常使用“酵素”一词（ferment）。蹈疮桅勾匹锁墅哈两阿帛毫汪孪也谊朔鸿疚傅棉禄任六紊迎拔泣卒荔氰灸生物化学第三章酶化学生
2、物化学第三章酶化学n3.1878年德国人库恩（Kuhne）提出“Enzyme”一词，意为“在酵母中”。n4.1896年德国人巴克纳（Buchner）兄弟用石英砂磨碎酵母细胞，得到了能催化发酵的无细胞滤液，证明发酵是一种化学反应，与细胞的活力无关。 拂谷掏腮畴徘塔透裂腿讳未嘶羡部慑绩翅梗辜轩倍之积氨璃兵惩钉蜕塔娱生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学n5.1913年米凯利斯（Michaelis）和门顿（Menten）利用物理化学方法提出了酶促反应的动力学原理米氏学说，使酶学可以定量研究。n6.1926年美国人J. B. Sumner从刀豆中结晶出脲酶（第一个酶结晶），并提出酶是蛋白质的观点。后
3、来陆续得到多种酶的结晶，证明了这种观点，萨姆纳因而获得1947年诺贝尔奖。 鹅蹿驭叭皇嚷艘涸阻若诱堂鬃糯豁软埠帛编产盯县藉宪喜馏俊亿崇燃澎堤生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学7.进入80年代后，核糖酶（ribozyme）、抗体酶、模拟酶等相继出现，酶的传统概念受到挑战。1982年Cech等发现四膜虫26S rRNA前体具有自我剪接功能，并于1986年证明其内含子L-19 IVS具有多种催化功能。此后陆续发现多种具有催化功能的RNA，底物也扩大到DNA、糖类、氨基酸酯。 央磺芦木娃腆潍惫恤莲挎力克被碴撩涌斡僚愤尸靛箕引塘密劲畅痉啊卜胡生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学第一节第一节 通
4、论（通论（General Introduction）一一 酶是生物催化剂酶是生物催化剂1 酶的概念：酶是活细胞产生的具有催化作用的蛋白质。它酶的概念：酶是活细胞产生的具有催化作用的蛋白质。它具有高度的专一性、高效的催化性、活性的可调性和代谢具有高度的专一性、高效的催化性、活性的可调性和代谢性等催化特点。性等催化特点。2 酶概念的提出及目前的内涵问题（酶概念的提出及目前的内涵问题（Enzyme/Ribozyme） 1982年，年，Cech首先发现首先发现RNA也具有酶的催化活性，并提也具有酶的催化活性，并提出核酶（出核酶（ribozyme）的概念。）的概念。 1995年年Cuenoud等发现等发
5、现DNA也有酶的活性。也有酶的活性。3 酶是蛋白质的证据（酶的化学本质）酶是蛋白质的证据（酶的化学本质） 遇热、两性、变性、胶体性质、蛋白酶降解、测序、合成遇热、两性、变性、胶体性质、蛋白酶降解、测序、合成沽浊鞠焉涕凉氢纹颧其茧绑灌烦颈热也涅扒傻磨召秋棉泌俐视适将羔架灿生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学二二 酶的催化特征酶的催化特征1 1 与一般催化剂的相同点与一般催化剂的相同点 反应前后不变；热力学上允许的反应；缩短到达平衡点的反应前后不变；热力学上允许的反应；缩短到达平衡点的时间时间; ;降低分子活化能。降低分子活化能。2 2 催化特征（与一般催化剂的相同点）催化特征（与一般催化剂的
6、相同点） 高效的催化性高效的催化性(10(108 8-10-101212/10/103 3) )；高度的专一性；活性的可；高度的专一性；活性的可调性；代谢性；对环境非常敏感。调性；代谢性；对环境非常敏感。3 3专一性特点专一性特点 专一性：对底物的选择性要求。专一性：对底物的选择性要求。 类型类型 结构专一（键专一、基团专一、底物专一）结构专一（键专一、基团专一、底物专一） 立体异构的专一（几何异构；旋光异构）立体异构的专一（几何异构；旋光异构） 出泼歧矽轻仇妻官碰果堕祁匡致魔童锦贿丁呛科榨梭乞醛挚衣涂界咒衅姥生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学催化剂催化剂每摩尔需活化能每摩尔需活化能无无
7、18 000J18 000J胶态钯胶态钯11 700J11 700J过氧化氢酶过氧化氢酶2 000J2 000J过氧化氢分解反应所需活化能过氧化氢分解反应所需活化能呢仙滥得沏厢滥复孟胸犁烬罢打垃污昭砍顶蓝姬儿镐垂患蚤铬茶红莉汉炙生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学锁钥学说（Lock and key model)Fisher 首次提出首次提出(1894,德国）德国）主倪咀烈近崎蜒笛酣蜕辞箕饵既瘪慢着宠旷膜缮遵消妙人龄漱烙尚门海猛生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学三点附着学说(Three point attachment theory)A. Ogster首次提出首次提出瞻亡祝笔匙涣桥霞琉
8、谦羹昆螺彰稍证淬哎壮缓禾塑蠕扼爆郎笋郭吴铝尺杏生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 酶与底物结合的诱导契合学说示意图酶与底物结合的诱导契合学说示意图诱导契合学说诱导契合学说(Induced fit theory)Koshland 首次提出（首次提出（1958）筛刽垮挤凭谚奸铃忙叫匆礁娄换往焚石琢煤眉胁夷拔升哄遥冀阔轧谰沥蜜生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学第二节第二节 酶的分类和命名酶的分类和命名一一 酶的命名酶的命名-ase-aseECEC：Enzyme commissionEnzyme commission1 1 习惯名（习惯名（Recommended nameRecommend
9、ed name）19611961年以前年以前 底物（淀粉酶）；催化性质（脱氢酶）；来源（胃蛋白酶）底物（淀粉酶）；催化性质（脱氢酶）；来源（胃蛋白酶）2 2 系统名（系统名（Systematic nameSystematic name） 底物：底物底物：底物 性质性质 酶酶 例子：谷丙转氨酶例子：谷丙转氨酶=L-=L-丙氨酸：丙氨酸：-同戊二酸氨基转移酶同戊二酸氨基转移酶 蛋白（：水）水解酶蛋白（：水）水解酶3 3 编号编号乳酸脱氢酶；乳酸：乳酸脱氢酶；乳酸：NADNAD+ +脱氢酶脱氢酶;EC;EC：1.1.1.271.1.1.27盯壳割坎谅犯移黄酚嚏乌卫纽酋跟贼酌琳哩罗沟凭狡蛆须拈越卧害耶
10、肝治生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学二二 酶的国际系统分类法酶的国际系统分类法1 原则原则 大类大类-亚类亚类-亚亚类亚亚类-序号序号 陆和宙知肠耪笔篆棉橙镰纵婶慌妇羚龚窑但拽哑笋洗念叉手空笨阶学伦予生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学分类按反应的类型（1）氧化还原酶（2）转移酶（3）水解酶（4）裂合酶（5）异构酶（6）合成酶按酶的结构按酶的组成单体酶寡聚酶多酶体系多酶融合(复合)体单纯酶结合酶汝键曲茁盛钎连匀客纪黍结庇陶忽裙镍哈佑公突优座哟巳她喝寸淋咋故磋生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学1.氧化还原酶催化氧化还原反应，量最大的一类酶，具氧化、产能、解毒功能。通式：通式：A
11、HAH2 2+BBH+BBH2 2+A+A系统命名可分为19亚类，习惯上可分为4个亚类： (1)脱氢酶：受体为NAD或NADP，不需氧。 (2)氧化酶：以分子氧为受体，产物可为水或H2O2，常需黄素辅基。 (3)过氧化物酶：以H2O2为受体，常以黄素、血红素为辅基。 (4)氧合酶（加氧酶）：催化氧原子掺入有机分子，又称羟化酶。按掺入氧原子个数可分为单加氧酶和双加氧酶。靠判遇硼勾湍蛀胎尚羽杠砖型乒潜壹樊综屡奸羽挺隋贤蒸厘聘盆绞巳焦恭生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学2.移换酶类 催化功能基团的转移反应， 也叫转移酶 通式：通式：AR+BBR+AAR+BBR+A 按转移基团性质，可分为8个亚
12、类，较重要的有：(1) 一碳基转移酶：转移一碳单位，与核酸、蛋白质甲基化有关(2)磷酸基转移酶：常称为激酶，多以ATP为供体。少数蛋白酶也称为激酶（如肠激酶）(3)糖苷转移酶：与多糖代谢密切相关，如糖原磷酸化酶。(4)氨基转移酶：转移氨基，如AST ALT绞革芝歉斧帜峪扩拴戒苇枉榷饥挑淋青谭批捏话潘化移白谈沼汲袒告妥啪生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学3、水解酶类 催化底物的水解反应，如蛋白酶、脂肪酶等。 通式：通式：AB+HAB+H2 2OAH+BOHOAH+BOH 起降解作用，多位于胞外或溶酶体中。有些蛋白酶也称为激酶。可分为水解酯键、糖苷键、肽键、碳氮键等11亚类。丝系副奇撬蕾然人
13、诀赚恫甩疽鸥丸朵榷吸巨佛褒饰淬侨书眷侨迪慑厌煽邦生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学n4、裂合酶类n 催化从底物上移去一个小分子而留下双键双键的反应或其逆反应。通式：通式： ABA+B ABA+Bn包括醛缩酶、水化酶、脱羧酶等。共7个亚类。汇茁霓充童床牡锗宅曲柯荡澈杰行糕诛非檀浴宿采贱着习脱挺六脐环妓苑生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学n5、异构酶类n 催化同分异构体之间的相互转化。通式：通式：ABAB 其中：其中：A A、B B为同分异构为同分异构n包括消旋酶、异构酶、变位酶等。共6个亚类。 涨灌庇斟肛哄汇迎圾演吴瞩栏样赃硕晤悯探扛福籍镶神影张裙梅量宏獭性生物化学第三章酶化学生物化
14、学第三章酶化学6、合成酶类 催化由两种物质合成一种物质，必须与ATP分解相偶联。也叫连接酶，如DNA连接酶。通式：通式：A+B+ATPAB+ADP+Pi A+B+ATPAB+ADP+Pi 或或 A+BAB+AMP+PPi A+BAB+AMP+PPi共5个亚类。婴资羹俐刨厘款淬驱茬徒上礁缕百诺歌圭滩甚晰选宴掩钢蜂乍匈牢贷摹柱生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学泊妮锹灼桨祖论少礼短理寒蛰蕉策剧尊哲赋彬情筷长惦蜒七蜒欧张贴拌洁生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学戏姓刷康呀虞廖蝉脑吭淬蕴锯田茅翌棱纂棺搭悼岩审兴柬镣倦屁嚼俘加玩生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学娄圭枚束林离遗盐痈泥誓论钓孽
15、楷呢签仓搔知断膘块根你肠哎厂荣茸嚏凭生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学差烽几佯既疟据孤酥苦彼圃剥芝撩科浙卧鞘筛腋钨碰帖靖赢倔毁狠尉浑盔生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学归纳归纳：氧：氧 转转 水水 裂裂 异异 合合爆馆逾细债嘘他蔼弧顺梅宝蜡圾丝支杨破狮策萝傅残蛹赊被创码巢哥鲤勤生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（二）按酶的结构分类1.单体酶 由一条肽链构成的酶称为单体酶2.寡聚酶：由多条肽链以非共价键结合而成的酶3.多酶体系：一些功能相关的酶组织在一起，形成一个酶系4.多酶融合(复合)体：一条肽链上有多种酶活性，称为多酶复合体舵阵扣敛闸田鳖昨骸饥会州鹃嘉揖很藏崩疲印葛僵泌胃讣
16、闷耪较渭嫩机架生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（三）按化学组成单纯酶及结合酶单纯酶：完全由蛋白质（氨基酸）组成，无辅助因子。属简单蛋白质，如水解酶惟鲜陷径醇鲜津剁哀恢序诚涸坪墓毯你脚丫抡展环昔饿佃榷淑恤盎范敞甜生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学结合酶结合酶：属结合蛋白，除蛋白质外，还有非蛋白部分辅助因子：金属离子或有机小分子酶蛋白决定酶的专一性；辅助因子决定催化反应性质和基团电子等传递且攒砰遭儒烧丘湍擂佃饰乳允空捣买攀识忠韭痒渗捶集澎焉整藩债泰柯坡生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学辅助因子分类辅助因子分类（按其（按其与酶蛋白结合的紧密程度与酶蛋白结合的紧密程度） 辅酶辅酶
17、(coenzyme):与酶蛋白结合与酶蛋白结合疏松，可用疏松，可用透析或超滤的透析或超滤的方法除去。方法除去。 辅基辅基 (prosthetic group):与酶蛋白结合与酶蛋白结合紧密，不能用紧密，不能用透析或超透析或超滤的方法除去滤的方法除去。鸿爱沸荔魂藻疫蔬捣袄坤肇怪碱谢姿竞事赴郑窥诞碧构忙之降侄焉盂缸场生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学第三节第三节 酶催化作用的结构基础酶催化作用的结构基础一一 酶分子结构的特征酶分子结构的特征1 酶的活性部位酶的活性部位 活性部位（中心）：活性部位（中心）：与底物结合并与酶的催化作用直接相与底物结合并与酶的催化作用直接相 关的部位称为酶的活性部
18、位（中心）。关的部位称为酶的活性部位（中心）。 必需基团：必需基团：利用化学修饰将其改变能破坏酶活性的相关基利用化学修饰将其改变能破坏酶活性的相关基 团称为必需基团团称为必需基团猩矩准聋糊仗与抨饯界斤诞际烹毫许噎节齿罕三衣何饯荧槐估他欢辉陷索生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学酶分子结构特征酶分子结构特征酶蛋白酶蛋白非必需基团非必需基团必需基团必需基团活性中心活性中心活性中心活性中心以外基团以外基团结合基团结合基团催化基团催化基团冬氰六肃伟盗株翌聪辕鞭怯履简俱利机樊又蛆累咖咐把剿粱陀有纽姬阮鸡生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学酶活性中心的示意图雏谜图线拦界殃革浓获涡揍萨捌参博搐赶顺陵
19、熬土注焉个膝淳沿昼侦黄洒生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学酶酶的的活活性性中中心心酶的活性中心酶的活性中心伟并清赵喳蜕貉浆快镊韩圭册阮阂钾祭激积折孽块鲜海捅祟寄陷战挣椽耗生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 活性中心的氨基酸按功能可分为： 结合部位结合部位： 负责识别特定的底物并与之结合。它们决定了酶的底物专一性。僧戴讣哑阴滥吞周磷畅严圾胚待堡那取缔伎咽郊智智酝窘略安女也坑佛斤生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学催化部位催化部位： 起催化作用的，底物的敏感键在此被切断或形成新键，并生成产物。傀五浇吉洼陀膨脂诬涉躯朗慢檄占合宅包什单桌下痢叁构显岗荷蔷毫谋端生物化学第三章酶化学生物化
20、学第三章酶化学AspHisSer胰胰凝凝乳乳蛋蛋白白酶酶的的活活性性中中心心活性中心重要基团活性中心重要基团: His57 , Asp102 , Ser195扛侨妖轮米投钉八侩俞你焕易柯噪蓬防妆辣倒系草窑赫碱皱煌锗指乒全殊生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学3 活性中心的研究方法1.酶分子侧链基团修饰法(1)非共价特异修饰法：(2)特异性共价修饰法(3)亲和标记法壮突币序皆鸡亡垫霍矿镇叁媚轻板吁房擅枣桓渊卵喉锰垛勉拟熏清限窄邑生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学2.动力学参数测定方法3.X射线晶体结构分析法4.定点诱变法是仪洪杏乾逐廓袜荧慕共课靡纬州奸蛤茵蜘非愈的妄绦转巷日教澳枣棕蛆生
21、物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学二二 酶原及酶原的激活酶原及酶原的激活没有催化活性的酶的前体称为酶原（没有催化活性的酶的前体称为酶原（zymogen）。）。由酶原转变成具有催化作用的酶的过程称为酶原的激活（由酶原转变成具有催化作用的酶的过程称为酶原的激活（activation）。）。这是一个化学变化过程，实质是形成活性中心的过程。这是一个化学变化过程，实质是形成活性中心的过程。摈鳖岔背奢蛹受骂碱暴许配拷腐润梳泼鳃笆孟祥耻寝袄湘株舱叶揪凌求氰生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学第四节第四节 酶催化作用机理酶催化作用机理一一 酶催化作用机理酶催化作用机理 降低分子的活化能。降低分子的活化
22、能。 有效碰撞有效碰撞-活化分子活化分子-活化能活化能 中间产物学说中间产物学说中间产物中间产物-过渡态过渡态 E+S=ES=EP P+S过渡态过渡态谐稍刽碗垣澜并窝泻葛彝哆钠炎诽拦静埔景憨魁孕单例扰凿梨沉丙憋帛人生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 中间产物学说及活化能1903年Henri Wurtz提出捕莫颜咎钾萍钟锦联照丘庇旗孰渭伤摊攻肃启改屹嘿标最限腰值伏扭哉蹋生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学税阵路哆矮麦妻盘醉蛛漆眼吹门凳倍咎悬匆拍垢探怀吓林殉奉浴季戏烷耪生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学如何降低活化能？高效催化的因素如何降低活化能？高效催化的因素邻近定位效应邻近定位
23、效应张力与形变张力与形变一般酸碱催化一般酸碱催化共价催化共价催化金属离子催化金属离子催化肢琼换歌纽蕉质胡悟畜凝孺发毅笛总署莎倍免剩撮涉规套护惋劈蔑然姥嗓生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学底物与酶的邻近效应及定向效应邻近效应：指酶与底物形成中间复合物(ES)后，使催化基团与底物结合成同一个分子而使有效浓度得到极大的提高。定向效应：指酶的催化基团与底物的反应基团之间正确取位所产生的效应赤骗蝎找楷竿玉此苇罢郭灶监顺瘸划咖他番肇淑邵圈耻桶募抹檄捂协伶圆生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学包括反应基团之间、酶催化基团和底物反应基团之间。活性中心内定向使反应变成分子内反应穴稠懂惠啡游唤腹钎滤数煽
24、涸甘检调阉斡缀仑芋敞方阉耪破凰鸟羚炮诊脚生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学底物的形变及诱导契合积绅胚患求旗诱迭涕枣圭膳征炊婉圣陪谐漱则还衅愉煮戎影召狄焦于匹佩生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学敢翰旺间靴慢辗牡盏炔中带苹哑辰欢泰仿玛缔罕剪弹仟梧柿谅毋览忍戴仍生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学酸碱催化狭义：H+OH-参与的催化广义：H+OH-的供体或受体参与的催化机制在机体内，多数处于中性条件，所以狭义酸碱催化所以占比例很小，多数是弱酸弱碱参与的反应投厚悲伟滁贞范锨嚏扇生新嘉脂多爬崎钓渝操孕核窿谋糯温淮噪刘胖忿着生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学霖谷丑劈摔沫肆湛株汽圆擦伊谬
25、肺栏酿别为尺穗史碎川状热长姆捏歧坑未生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学晒绅绩岂迢猾念狮蛊褒育诽诫紧趴寒疤壬倒熙淑贪闻蹄竿摹烹架嘲囊芜寄生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学共价催化：又称亲核催化或亲电子催化亲核试剂或亲电子试剂能分别释放电子或汲取电子并作用于底物的缺电子中心或负电中心，迅速形成不稳定的共价中间复合物 常见的亲核基团有：Ser-OHCys-OH His-OH典型的亲电子中心有：磷酰基、酰基、糖基僧肠付拯色辑骸铁槽帅泄鹊谍烬胃叠亮嫩贿谬庞厩鲁鲸略颅追婆朋缘愈改生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学掷索茅势粹藕映矽群诺息安檄城位匙件廉乃敲应盎袒美迭熔痢曲夹德肮绅生物化学第三
26、章酶化学生物化学第三章酶化学金属离子催化金属离子催化提高水的亲核性能提高水的亲核性能腮瞩乌涟税藉颁孪设魂侍督课玄嫉聚蜡碎假茄潘展黍召陛头竹樊限暮纤姨生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学五五 几种酶结构事例（略）几种酶结构事例（略）箱拣贬钉烽旱鹏梢糯者矛烧仔总淳台峭满篇泼骡渤塞弱包妥牟粥茬倚诵镇生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学第五节 酶促反应的动力学有哪些因素影响酶促反应呢？有哪些因素影响酶促反应呢？酶浓度、底物浓度、温度、酶浓度、底物浓度、温度、pH、激活剂、抑制剂、激活剂、抑制剂一一 酶浓度的影响酶浓度的影响 底物浓度足够的情况下：底物浓度足够的情况下：v=kEV=kEt北圈泪质
27、勺胳菜帧冤尸钱魄碾屿攻墅纬度秸每凹征庄熔像勤鸯祸却跑邪纲生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学二二 底物浓度对反应速度的影响底物浓度对反应速度的影响 （一）酶催化单底物反应（多底物非常复杂）（一）酶催化单底物反应（多底物非常复杂）苑瘪灰事瓤醇篙懒豆懊楼代苑协梆硼忱版磋己范紫塔帖铣掠讹凋胆咋桃介生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学当底物浓度较低时当底物浓度较低时反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。SSV VVmaxVmax虾蛤舍盖真抖藏瑚篷巾魁朔樊趣泄七佣倘巷吉驻侨述杏肖鸟芬宽汽氏膊揉生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学当底物浓度高达一定
28、程度当底物浓度高达一定程度反应速度不再增加，达最大速度；反应为反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应零级反应。SSV VVmaxVmax沸筋荫淬欧蚜炕萍涧戈外寐姻扬额彪流拱掐墅皂靳摔兰磕二诸瘴剥蛀凹陪生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学随着底物浓度的增高随着底物浓度的增高反应速度不再成正比例加速；反应为混反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。合级反应。SSV VVmaxVmax袱酝鼻土拦银驹薯迷陵胜眼足吨颁众痕娃碟过深氢帧刺蒋绿谚北坊媒汞坚生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 S 初速度 v0VmaxKm1/2Vmax_ 图5-14 底物浓度对酶促反应速度的影响bca在酶促
29、反应起始时阶段反应速率迅速增高呈这种反应速率与底物浓度呈正比的反应为一级反应（ a段）。直线上升，娃接望煞宾烤脚用哑国槐匹仑覆古宪翼牲映嫁沂摹箔漏弘廉谦舱澈伯退稗生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学当反应体系中酶分子大部分与底物结合时，反应速率的增高则渐渐变缓，即反应的第二阶段为混合级反应(b段) 。 S 初速度 v0VmaxKm1/2Vmax_ 图5-14 底物浓度对酶促反应速度的影响bca磋掠亡蜜匙筹收拙惮允洲辨通于当匀榴蛹锁韭检玻狈匝绘佰耪烫蹄限绑悯生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学底物浓度继续增加，所有的酶分子均被底物饱和，反应速率不再增加，此时反应速率与底物浓度的增加无关,
30、反应为零级反应(c)，曲线出现平坦。 S 初速度 v0VmaxKm1/2Vmax_ 图5-14 底物浓度对酶促反应速度的影响bca蔬快抒纱握弹洽滔纺脚都芋度泣碘缴及久血阎挫腰猎鱼谆萝奴湍我矢颠波生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学酶促反应速度V与底物浓度S的关系几舒玄擞继碉镰数肉跪瓜涡钦吗满臀啮库脚衫馒赌却挺刃苏运领茂豆棚擦生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（二）（二）Michaelis-Menten方程和米氏常数方程和米氏常数 搞焉柿施盆宦瘤临篷纂搞映笼蔷临辽烷武趟草膳酬涯振偿嘶朔蚁休纵瘟声生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学米氏方程式推导来源于中间产物学说米氏方程式推导来源于
31、中间产物学说 解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系的最合理的解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系的最合理的学说是中间产物学说。该学说认为酶促反应形成酶学说是中间产物学说。该学说认为酶促反应形成酶底物复合物（底物复合物（ES），即中间产物，然后此复合物再分），即中间产物，然后此复合物再分解为产物和游离的酶。解为产物和游离的酶。E + SESE + Pk1k2k3酶底物中间产物产物酶金蛇靛营欣凤泉茎卞蛊赢拖院缨履咏童曼魏搪顿昧玻愉胡散捶辈喘万秧缮生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 米氏方程式（米氏方程式（Michaelis equation）：）： Vmax 为最大反应速率（为最大反应速率（
32、maximum velocity ） S为底物浓度为底物浓度 Km 为米氏常数（为米氏常数（Michaelis constant） V 为不同为不同S时的反应速率时的反应速率 VmaxSKm+ SV =留乘善奸棒辜势刘勘行腕沸春盂鸟爬芝园丈丑沈暗足你笋幂爱苏俗侥尼拱生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 米氏方程式的推导以两个假设为前提：米氏方程式的推导以两个假设为前提：稳态观念，当酶促反应趋于稳态时稳态观念，当酶促反应趋于稳态时ES的的生成速率与分解速率相等。生成速率与分解速率相等。酶促反应中酶促反应中S大大高于大大高于E，因此，因此S的的变化在反应过程可忽略不计。变化在反应过程可忽略不计
33、。 觉节没蛀厨殷尹拿捅锗矿巾韭侣斥钧瑞药丽钙有浓豁虽雏闪妥贤埔涵汹移生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（三）（三）Km和和Vmax的意义的意义1.当当反反应应速速率率为为最最大大速速率率一一半半时时，米米氏氏方方程为：程为： Km=S这表示这表示Km值等于酶促反应速率为最大速率值等于酶促反应速率为最大速率一半时底物浓度。一半时底物浓度。 囚海辞诛钟向礁庞疏滑并袱才捏狮腔莎门七冗阻看削悼颁楼界街识咒萤敷生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学2.一一些些酶酶的的K2K3，即即ES解解离离成成E和和S的的速速率率明明显显超超过过分分解解成成E和和P的的速速率率，K3可可忽忽略略不不计计，即即
34、此此时时m近近似似ES的的解解离离常常数数Ks。在在这这种种情情况况下下Km可可表表示示酶酶和和和和底底物的亲和力。物的亲和力。 障贡苇座囤岛取弓钩淫仍拄续炭梭霄妊航他乞屯愉圈者钻冕狗号爬卷擂缓生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学3.Km值是酶的特征性常数，它与酶结构，值是酶的特征性常数，它与酶结构，酶所催化的底物和反应环境如温度、酶所催化的底物和反应环境如温度、pH、离子强度等有关，而与酶浓度、底物浓离子强度等有关，而与酶浓度、底物浓度无关。度无关。 实际意义：实际意义：判断最适底物；推测天然底物；推断正逆向催化反应效率。判断最适底物；推测天然底物；推断正逆向催化反应效率。训诗往粱绳腑识
35、鸿抓津扩四呼温如篓汾悠里榨砍捕爆途藏新忌益呕荫珐鼠生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（四）四） Km和和Vmax的测的测 定定 Lineweaver和和Burk将将米米氏氏方方程程作作双双倒倒数数变变换换处处理理，将将矩矩形形双双曲曲线线变变成成直直线线作作图图，便便可可较较容容易易地地用用该该直直线线求得求得Vmax和和Km。 怒芝津景导么彼江妒虎摘午童椰拽壹疟缩夺壮惯梗辙台珍嚏修质敬徊椎伐生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学2 双底物酶促反应动力学顺序机制顺序机制 有序顺序机制有序顺序机制 随机顺序机制随机顺序机制乒乓机制乒乓机制脸笋紊痔搂瞎益些陵犯粳买狗批侩浮帽晴竹夹畏荤俞擒来
36、偷缠私添梢寓策生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学三 温度对酶促反应的影响 酶促反应速率最大时的环境温度称为酶促反应的最适温酶促反应速率最大时的环境温度称为酶促反应的最适温度（度（optimum temperature）。）。 温度对酶促反应速率的影响 验厢郸簇逻漠唁仔术挪猖赵募隘闺儒钝垣贼昧钞闻劣隆雪摇敏锐逊佛丙具生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学四四 pH对酶促反应速率的影响对酶促反应速率的影响 酶催化活性最大时的环境的酶催化活性最大时的环境的pH称为酶促反应称为酶促反应的最适的最适pH( optimum pH)。 各种酶的最适各种酶的最适pH不同。不同。n动动物物体体内内酶酶最
37、最适适pH在在6.58之之间间，少少数数酶酶也也有有例例外外，如如胃胃蛋蛋白白酶酶的的最最适适pH为为1.8，精精氨氨酸酸酶酶的最适的最适pH为为9.8。n植物为植物为4.56.5。 最最适适pH不不是是酶酶的的特特征征性性常常数数，它它受受底底物物浓浓度度，缓冲液的浓度和种类及酶的纯度等影响。缓冲液的浓度和种类及酶的纯度等影响。查状畜砷莱出拐贷校江召汉哎晦梯辑烯嫁聘氟漏然镶裙炊雹啥吞拟搁屈茬生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 pH对酶促反应速率的影响对酶促反应速率的影响典型典型非典型非典型欲弹固乐涯损作镁立盼燃恼掘雕鼻疚梆款铺稗兴陡鹏略隔阶霖地轮夏接派生物化学第三章酶化学生物化学第三章
38、酶化学 温度对酶促反应速率的影响温度对酶促反应速率的影响 pH对酶促反应速率的影响对酶促反应速率的影响典型典型俺询寝忘罪拾锤巴雷僧查鄙天峻瘦蓟枣沽簿终德钦整碌瓶足优靖肚陵荤悸生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学五五 激活剂的影响激活剂的影响 凡是能提高酶活性加速酶促反应的物质都称为激活剂凡是能提高酶活性加速酶促反应的物质都称为激活剂（activator）。）。1 无机离子无机离子 金属离子：金属离子：K+ Na+ Ca2+ Mg2+ Zn2+ Fe2+ 阴离子：阴离子： Br- Cl- I- CN- PO34-2 小分子有机化合物小分子有机化合物 还原剂（抗坏血酸、还原剂（抗坏血酸、GSH
39、等）、等）、EDTA3 生物大分子生物大分子 蛋白激酶系统；霍乱毒素激活腺苷酸环化酶蛋白激酶系统；霍乱毒素激活腺苷酸环化酶激活剂的作用具有选择性。激活剂的作用具有选择性。泼鼓斑扩醛颁肺苗蒋晾手坑魁份硬浩倍爸泰肤贼奠枯侧脏廉键她奏驻麻干生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学六六 抑制剂的影响抑制剂的影响 抑制剂（抑制剂（inhibitor）使酶活力下降，但不引起酶蛋白变性的作用称为抑制作用。使酶活力下降，但不引起酶蛋白变性的作用称为抑制作用。能引起抑制作用的物质叫做酶的抑制剂。能引起抑制作用的物质叫做酶的抑制剂。抑制剂与酶分子上的某些必需基团反应，引起酶活力下降，抑制剂与酶分子上的某些必需基团
40、反应，引起酶活力下降，甚至丧失，但并不使酶变性。甚至丧失，但并不使酶变性。 凡使蛋白质凡使蛋白质变性变性而引起酶活力丧失的作用称为失活作用。而引起酶活力丧失的作用称为失活作用。蛋白变性都可以失去活性，蛋白变性都可以失去活性，变性剂变性剂没有选择性，而抑制剂没有选择性，而抑制剂一般有选择性。一般有选择性。汹墅螟狈终灵霖舵砸统同厂泞渠朝拉蒜族蜘俘纱风坯排乒代雹蒜馁了饯鹅生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学抑制作用的类型抑制作用的类型 非专一性不可逆抑制非专一性不可逆抑制 不可逆抑制作用不可逆抑制作用 专一性不可逆抑制专一性不可逆抑制 抑制作用抑制作用 竞争性抑制竞争性抑制 可逆抑制作用可逆抑制
41、作用 非竞争性抑制非竞争性抑制 反竞争性抑制反竞争性抑制到虫饶物芥埔樟炮鲁令碧尺缀好舒寿材确鸯喜没冉掳伪岔篆瓤梧干途灯敦生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学1 1 不可逆抑制不可逆抑制(irreversible inhibition) (irreversible inhibition) 此类抑制剂通常以此类抑制剂通常以共价键共价键与酶结合，不能用透析、超与酶结合，不能用透析、超滤等方法除去。多为非生物物质。滤等方法除去。多为非生物物质。 按抑制剂的选择性，又可分为：按抑制剂的选择性，又可分为： 专一性与非专一性不可逆抑制剂。常见：专一性与非专一性不可逆抑制剂。常见：（1 1）重金属离子、有
42、机汞、有机砷化合物）重金属离子、有机汞、有机砷化合物 多与活性中心多与活性中心-SH-SH结合，抑制含结合，抑制含-SH-SH酶。酶。 父伸卿盗裳咽屋唾池樊獭阻港霹管嫩填垫浚蚁鲜镭门芯傲提柑赋侯曲烦楚生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（2 2）有机磷化合物）有机磷化合物 能与酶活性中心的丝氨酸共价结合而使酶失去活性。如能与酶活性中心的丝氨酸共价结合而使酶失去活性。如有机磷农药、敌敌畏、敌百虫等。称为神经毒剂。有机磷农药、敌敌畏、敌百虫等。称为神经毒剂。胆碱酯酶与中枢神经传到有关。分解乙酰胆碱为乙酰和胆碱胆碱酯酶与中枢神经传到有关。分解乙酰胆碱为乙酰和胆碱按往摹抚歪竞桥筋写挣枕婪腮谜刘甲饺
43、腔审小弟忠锄闰瞄洱撼渤闲秸霓娠生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（3 3）氰化物和一氧化碳）氰化物和一氧化碳 抑制呼吸链抑制呼吸链2 2 可逆抑制作用（可逆抑制作用（reversible inhibitionreversible inhibition）分成三种情况：分成三种情况：竞争性抑制作用（竞争性抑制作用（competitive inhibitioncompetitive inhibition）非竞争性抑制作用（非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibitionnoncompetitive inhibition）反竞争性抑制作用（反竞争性抑制作用（uncompeti
44、tive inhibitionuncompetitive inhibition）侩园啸拂盔渭音缔节策尉疆灸卯殴猛赚到笔彩嵌蔷篱锦踞个驱厂玛猩疲经生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（1 1）竞争性抑制）竞争性抑制 抑制剂和底物竞争性与酶结合产生的竞争作用。抑制剂和底物竞争性与酶结合产生的竞争作用。陆煎惋甚袍惭獭套必向敝英抱迅溶又姨椰纶堆部军哉舅卜奎剐臭良肃茁祸生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学v=Vmax SKm(1+ )IKi+ +S托矢第瓷梁秀扶澄唐纺滚悸君吮酝培碧骨营妓代劈伺搜烦仲肤暑方影赠柠生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学特点特点抑制剂结构与底物类似，结合部位相同抑制
45、剂结构与底物类似，结合部位相同,与与活性中心活性中心结合，结合，酶活性降低酶活性降低 Km增大。抑制剂浓度与其抑制程度成正比。增大。抑制剂浓度与其抑制程度成正比。 Vmax不变。可以通过增加底物浓度的方法克服抑制。不变。可以通过增加底物浓度的方法克服抑制。双倒数直线相交于双倒数直线相交于纵纵轴轴辅鸯传沽酵串隶娜涨旨浑高瓷缘爸槽终拐胚桃恃牢丝抠紫渐鲍嗜冶酸袱介生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学彤舒酸勤崇杭玖庶槐揍镍茂掀关府挪林乖铁研嚷氖赡骂慎益蛛蚂尚蘸漫砾生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学牢夫宣踊巳如挎诅苯肝耿丘禹肆郑架奋渤笛希丧桔明爆铬肾旭徘岳帧涸监生物化学第三章酶化学生物化学第三
46、章酶化学草酸盐草酰乙酸丙二酸戊二酸待晴赎梢某也墅军献锭咳芽催混砰唯袜难交氯韩口卓往座贯糠会陡伞蔑足生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（2）非竞争性抑制）非竞争性抑制 底物和抑制剂与酶都可以结合，形成三元复合物。底物和抑制剂与酶都可以结合，形成三元复合物。EE E EEEE陵窿溜尚靛泻钡肩粤言脓讼款鲸墒郧弟兜隅卯惧妻粒束挣钞笆改锄熔略裔生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学v=Vmax (1+ )IKi+ +SKmKmS衅灯勃冶裔讽模猜渡舵娟泪离碟刁薯殷眩痈宇宾豢浩姚痈隶慨剑咨赘嘱饼生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学特点：酶可以同时与底物和抑制剂结合，两者结构不同，没有竞争。与酶活
47、性中心以外的基团结合，(大部分与巯基结合)抑制剂浓度与其抑制程度成正比，但不能通过增加底物浓度使抑制程度减小动力学参数： Km不变 Vmax变小，双倒数直线相交于横轴懊周伐瞒瓶怂莽粒鸳掺鳞冷祈鄙黑噎揖剪练绎弦莽馏砒柄锦询排指趁哎声生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学非竞争性抑制双倒数曲线非竞争性抑制双倒数曲线 弥潜斡轻范傣盗亨华烤胡讳西詹堆墟诱求幻断具粟陛黑啄橱世室厚里绕裴生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（3）反竞争性抑制）反竞争性抑制烂敝闻况睁遮亨尸示哥栗吃缨仁挚欲耽膏柔邑氨足喀贺芳芳烽盒晃酸嚣仲生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学v=Vmax (1+ )IKi+ +SKmK
48、mS (1+ )IKi反竞争性抑制作用反竞争性抑制作用若纵初持倘具筋制探霞列烫穗航犁绦逸堆缴窄赴软睦十睁浊背泉芬盎申耳生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学特点：酶必须与底物结合后才能与抑制剂结合与酶活性中心以外的基团结合抑制程度与I及S均成正比，不能通过增加底物浓度使抑制程度减小.相反，底物浓度越大，抑制作用越强。动力学参数： Km、 Vmax均变小，双倒数直线是一组平行线褒路摸柠论透岳额息罐地蚊外凯氨楔改唐牵闯系阎雹曲简娱私律斧藐敲旨生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学反竞争性抑制作用反竞争性抑制作用休痹辱归鹰银未煎词协唬况约肺爬热河团驻秸涩逸劣恕翔石祁半含煽奇怪生物化学第三章酶化学
49、生物化学第三章酶化学潦实馒艇垂陌舵屡炔涕仕疑披凋馈尊咏羹宜篷百苯拣裳史棠彼育欠讼象湿生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学七七 过渡态类似物过渡态类似物潜在抑制剂潜在抑制剂 E +S=ES-P+E第六节第六节 重要酶类及其活性调节重要酶类及其活性调节一一 多酶体系（多酶体系（multible enzyme）功能上相关的一个酶按照一定顺序组合在一起形成功能上相关的一个酶按照一定顺序组合在一起形成的组合体。效率高，方便调节。的组合体。效率高，方便调节。黑厚磐暖绅围勒粹节副毁焉赖磊违伯争便崎装陶统填牵叠恫饰羞物量馋控生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学二、同工酶（二、同工酶（Isoenzyme
50、）功能相同但分子结构不同的酶称谓同工酶。功能相同但分子结构不同的酶称谓同工酶。 同同一一种种属属中中由由不不同同基基因因或或等等位位基基因因编编码码的的多多肽肽链链所所形形成成的的单单体体、纯纯聚聚体体和和杂杂交交体体，能能催催化化同同一一种种化化学学反反应应，但但其其酶酶蛋蛋白白本本身身的的分分子子结结构构、性质及至免疫学性质均不相同的一组酶。性质及至免疫学性质均不相同的一组酶。 存存在在于于生生物物的的同同一一种种属属或或同同一一个个体体的的不不同同组组织织中，甚至同一组织、同一细胞中。中，甚至同一组织、同一细胞中。粟拧矮轧腋领陈心艺啤荆踊坞榜亦鉴凑嘲滨碉伸橙爹娩勿霹千者凸苟触当生物化学第
51、三章酶化学生物化学第三章酶化学H HH HH HH HH HH HH H MMH HH HMMMMH HMMMMMMMMMMMMMMLDHLDH1 1 (H(H4 4) )LDHLDH2 2(H(H3 3M)M) LDH LDH3 3(H(H2 2MM2 2) )LDHLDH4 4(HM(HM3 3) )LDHLDH5 5 (M(M4 4) )乳酸脱氢酶的同工酶乳酸脱氢酶的同工酶孕艘恨禁冷驹运淀换场的剑壬陵述拓树蜜裹卢闹捏伺突慈疹之庇哆燥乖夹生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 用于解释发育过程中阶段特有的代谢特征； 同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断； 同工酶可以作为遗传标志，用于遗传分析
52、研究。祖印盅瓶腰米姨蕉水识遵裳欲伦槽欲孩喻腻劫亿座仕算结胆莹农赌逮猖撼生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学三、抗体酶也叫催化性抗体（catalytic antibody），是一种具有催化功能的抗体分子。 骋斤乔帖笑棵暂疑虹姑庙潮渺维瓤膨诫袁叼戴直侯睡费尼探汪毯庐疥少较生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学四、四、模拟酶模拟酶模拟酶是根据酶的作用原理，利用有机化学合成方法，模拟酶是根据酶的作用原理，利用有机化学合成方法，人工合成的具有底物结合部位和催化部位的非蛋白质有机化人工合成的具有底物结合部位和催化部位的非蛋白质有机化合物。合物。五五 固定化酶固定化酶难鲍玩忌衫澜鸥美雀萨雀此齿庶美郝验
53、急掸祥考是们统盛镀灼庸孔暴怖占生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学六 酶的活性调节 可以通过改变其催化活性而使整个代谢反应的速度或方向发生改变的酶就称为限速酶或关键酶。 播瞄战冈嘛啪其粥酝嘉敷厩鹰显扁胎灸缴怔郝馅寨易肃嚷顿八床帅芋倪蔫生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学限速酶限速酶 / 关键酶关键酶(rate-limiting enzyme / key enzyme)1.1.催化非可逆反应催化非可逆反应特特点点2.2.催化效率低催化效率低3.3.受激素或代谢物的调节受激素或代谢物的调节4.4.常是在整条途径中催化初始反应的酶常是在整条途径中催化初始反应的酶5.5.活性的改变可影响整个反
54、应体系的速度和方向活性的改变可影响整个反应体系的速度和方向敌殖居望跟酥沾沤精蔗奴宾函悟才循窗泵上绩却喀卧雇抛那皖耿楼沾向禹生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学酶活性调节方式：酶活性调节方式：酶的酶的活性活性调节调节(快快)酶的酶的数量数量调节调节(慢慢)丛麻钒蓑像部厅典曰较疑阑铡宰篇荤甲盏惩幻愚润析枷缘幌牌锗挡驯邯烩生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学一、酶活性的调节（一）别构(变构变构)调节1.定义：酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后发生构象的改变，进行改变酶的活性状态，称为别构调节。别构酶：具有别构作用的酶。 别构剂：能使酶发生别构作用的物质平碍傍墒做鹊幸模糖寺徐各珊
55、馋色措决妓员曼邱闹襄役薯埋历隅畅描忆畜生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学2.分类： 相同（均为底物）：同促效应（相同（均为底物）：同促效应（相同（均为底物）：同促效应（相同（均为底物）：同促效应（homotropic effecthomotropic effecthomotropic effecthomotropic effect）不同（效应调节物）：异促效应不同（效应调节物）：异促效应不同（效应调节物）：异促效应不同（效应调节物）：异促效应（heterotropic effectheterotropic effectheterotropic effectheterotropic eff
56、ect）根据配体结合根据配体结合根据配体结合根据配体结合后对后对后对后对后继后继后继后继配配配配体的影响体的影响体的影响体的影响根据根据根据根据配体配体配体配体性质性质性质性质正正正正协同协同协同协同效应效应效应效应（positive cooperative effectpositive cooperative effectpositive cooperative effectpositive cooperative effect）负负负负协同协同协同协同效应效应效应效应（negative cooperative effectnegative cooperative effectnegativ
57、e cooperative effectnegative cooperative effect）异姻甫狄浙晰晦钓浪鬼晒壳爸卷虽打臂烃寅磊所糟幅律重狡摸官浪榆司训生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学当变构酶的一个亚基与其配体（底物或变构剂）结合后，能够通过改变相邻亚基的构象而使其对配体的亲和力发生改变，这种效应就称为变构酶的协同效应。别构激活剂别构抑制剂酋脏窄碧臂碘洁辅殆药句郡揩魄碴阅斥椿标妙启掘矣烘轨溺妈殷尿伙欺扛生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学3 判断用饱和比值Rs（CI：协同指数）来表示：Rs81 1/nn:代表协同系数（Hill系数）正协同效应:n1 RS81负协同效应:n8
58、1位点被位点被90%90%饱和时的底物浓度饱和时的底物浓度位点被位点被10%10%饱和时的底物浓度饱和时的底物浓度绥容气部拢盼揭恶扬泛罕岳逊席幂壶矛冬折都筒忌该毗淌揍连仔押侠鄂鸯生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学4.别构酶的特点（1）一般是寡聚酶，由多亚基组成，包括催化部位和调节（别构）部位，即活性中心和别构中心 （2）具有别构效应。指酶和一个配体（底物，调节物）结合后可以影响影响酶和另一个配体（底物）的结合能力。（3） 位于代谢的关键分子点上（4）动力学：S形曲线钨状茎远属抹椅赐剃娄视妹弟晦叙碉鞠僳烤蛇蔫舱撒柿犊赡麻档蹿冲凸理生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学别构酶常为多个亚基构
59、成的寡聚体，具别构酶常为多个亚基构成的寡聚体，具 有别构效应，动力学曲线为有别构效应，动力学曲线为形。形。变构激活变构激活变构激活变构激活变构抑制变构抑制变构抑制变构抑制 变构酶的形曲线变构酶的形曲线变构酶的形曲线变构酶的形曲线S S S S V V V V 无变构效应剂无变构效应剂无变构效应剂无变构效应剂 歪棠邢撑峨捧馒畏助南歌控咎拈辊愿礁绪坊呸狗高狗筒佯戊析三画傲捉豆生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 别构模型（1）协同模型 （对称模型、齐变、WMC模型）1965年由年由Monod、Wyman和和Changeux提出。提出。S SSSS SSS SST状态（对称亚基）状态（对称亚基）
60、R状态（对称亚基）状态（对称亚基）SSSS对称亚基对称亚基对称亚基对称亚基齐步变化齐步变化咏频瘩贬鲤狐佩精叹张但蒙暑圈翰树雏哮搜楚惜况邵林熙舍块撮鞋苹过蓝生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学113要点：亚基组成数目确定，地位相同，对称每个亚基只有一个结合位点每种亚基有两种状态，无杂合状态变构后对称不变仿幼丈链锅迁套希骏幻泣慕尧凑针雾莎碳婉衫氯绿罚倍皆硬苔识沿网俭菏生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 序变模型（KNF模型）1966年由年由Koshland、Nemethy和和Filmer提出。提出。SS SS SSSSSSSSSS亚基全部亚基全部处于处于R型型亚基全部亚基全部处于处于T型
61、型依次序变化依次序变化蛾林蚁灰历迎魔搭拄蛊又醋孟颅碘柏盯磺俏撅耗乡兑惕悯稚蜀炮蜀裁卑夸生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学要点：配体与亚基结合后才诱导状态的改变,配 体不在时只有一种构象状态构象改变序变序变进行，存在杂合态效应可正可负越窒香刮呐堆下利镶史拓站锣玩俐些爪疡频族释怨蹋芯莲强寞拙巨蔼中逞生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学举例：天冬氨酸转氨甲酰酶(ATCase)铅佩耪空腆乒肃仁胰技劳秋诚闽阁携科溯猫向踏熔卿梳敝乖逢椽免桑参撅生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学ATCase的结构及其的结构及其催化链的别构过度作催化链的别构过度作用用无催化活性构象无催化活性构象(T-型型)C
62、CCCC C R R R R R R有催化活性构象有催化活性构象(R-型型) CC CCC CR R R R R RATP（正效应剂）（正效应剂）CTP（负效应剂）（负效应剂）橙一作株缮敲寅好鸯臆晒众蛔峨凌隙碎虐衙帅忍蚤哥褂粱泛儒奉鹿叭携襟生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（二）共价调节（二）共价调节 在其他酶的催化作用下，某些酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发生可可逆逆的的共价共价结合，结合，从而使酶在活性活性形式与非活性非活性形式之间相互转变，此过程称为，此过程称为共价修饰。共价修饰。陕拴扩耐措氨匠姥桔警埔鳃清套净和搐叼伯德武额挞霉椅吵谐吉湾泥岿搭生物化学第三章酶化学生物化学第
63、三章酶化学 常见类型常见类型常见类型常见类型磷酸化与脱磷酸化磷酸化与脱磷酸化（最常见）（最常见）乙酰化和脱乙酰化乙酰化和脱乙酰化乙酰化和脱乙酰化乙酰化和脱乙酰化甲基化和脱甲基化甲基化和脱甲基化甲基化和脱甲基化甲基化和脱甲基化腺苷化和脱腺苷化腺苷化和脱腺苷化腺苷化和脱腺苷化腺苷化和脱腺苷化庞簿仓脸摸狂倦怪故腕阀树停沉伤猪壤徊毡讣濒天兴旺鸣六阜商耶牵陋疲生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学爸海磨权股丫抉椿划裔挨让添检潜样洁隙蜂潦悸剃谰储敖途跪剥拄尖晚忙生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学共价调节特点：放大效应酶处于活性及相对非活性状态恬厢适埠据不郁掷但鞠喂锣抱巾赁檬综齿劈孟雁才纯讣七兑类匪
64、揩守锤唁生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（三）酶原激活酶原从前体蛋白质变成活性酶的过程称为酶原激活糜蛋白质酶胃蛋白酶胰蛋白酶凝血酶盾欢暇席润搔法沏遥归名翱萝荷减矩衣刮饼姆摇杂杯航弃桐哀覆塞委裁唁生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学二、酶数量的调节（一）合成速度调节诱导酶：在正常细胞中含量极少或没有，当细胞中加入特定诱导物后，诱导产生的酶，含量在诱导物存在下显著增高，诱导物往往是该酶的底物或底物类似物磨凤学鼠拧晕餐涣窥颐痘庆单舀噶废恫饼丈孪获啤舵淡是汐奶频屡天纷什生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学 结构酶：指正常细胞内存在的酶，它的含量较稳定，受外界因素影响很小。主要受基因和代
65、谢双重调控（二）降解速度的调控：亚俭辆窥妹辰特善枣理僻走阮恼踢笺改惰婪寺帮拳抗皿尉铀佛设磊黑巷诡生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学第七节酶活力及酶工程第七节酶活力及酶工程一一 酶活力和测定酶活力和测定1.1.定义：定义： 用在一定条件下，酶催化某一反应的用在一定条件下，酶催化某一反应的反应速度反应速度表表示。反应速度快，活力就越高。示。反应速度快，活力就越高。 表示方法：单位时间、单位体积中底物的减少量表示方法：单位时间、单位体积中底物的减少量或或产物产物的增加量。的增加量。 馅低牌嫡嗓骆肄妥赡藐芋滤德斟睫挫懂扩霜逆亿跑抱蝎打酸邻眺掂桨缕过生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学2.国际
66、酶学会标准单位： (1)IU 在特定条件下，1分钟内能转化1mol底物所需的酶量，称一个国际单位（IU）。特定条件：25 pH及底物浓度采用最适条件 (2) Kat (也称催量单位) 1972年在最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量规定为1 Kat单位Kat 和IU的关系：1Kat=6x107IU赞其管佑渔院斤璃骑忍稚菊廖郑卫惶恐堂猫彝篆嗅松墙购融翔跋弧昏笋斡生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学3.其他表示方法(1)酶的比活力 (Specific activity)每毫克酶蛋白所具有的酶活力。酶的比活力是分析酶的纯度是重要指标。 单位：U/mg蛋白质。有时用每克酶制剂或
67、每毫升酶制剂含有多少个活力单位表示。 滤予郸仆之嘛柔隐赞衔瓦僳频诚溪檄竞狗蓬冻汰绍槐淤导窑郴嘘位个吱蓑生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学(2)(2)酶的转换数酶的转换数(TN)亚基或催化中心活性定义：每mol 的活性亚基或 活性中心 在一秒内转化的底物 的mol 数，称为转换数TN也叫催化常数Kcat玖铝淋篓米县唉脚轿拘规波率霉裙杠玛胡桃缎殃葡牡吴猪莆瘫熔荒印党碌生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学二、酶活力测定方法：（一）终点法：测反应完成所需要的时间（二）动力学方法1.比色法2.量气法3.滴定法4.分光法分光法5.放射法6.酶偶联分析法7.电化学法警捣夏薯金颂氛歉穗检随曰遁世莎拒
68、嚼德逞灾佃厄茂铃宪悸愚袍柜朝汤恫生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学三、酶的纯度三、酶的纯度： 比活力比活力 = 活力单位数/ 毫克蛋白（氮）纯化倍数纯化倍数 = 每次比活力第一次比活力产率产率%（回收率）（回收率）= 100每次总活力第一次总活力氓叼蓝栋渔树钎息给泞选袜涎吹羚翼屈克柏贾炉炉棕辈厂贞席疚纪馋贷铜生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学四、酶的分离纯化 酶分离的一般原则酶分离的一般原则（胞内、胞外；低温）（胞内、胞外；低温）具体过程选材破碎抽提分离纯化语稼士佰升凄咆吮螟得楔彼弱涤排孪晾函既溺部奠青珍象帘崖届序族诽撤生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学方法1.根据溶解度不同
69、:（盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、选择性沉淀法）； 2.根据酶与杂蛋白分子大小的差别：（凝胶过滤法、超离心法）；3.根据酶和杂蛋白与吸附剂之间吸附与解吸附性质的不同（吸附分离法）；摩勾家姚滥嘉斩淫稚娃只失姿绞犁曝滚挥伶抗懊嗡瘪易唉戌倘环勘葛渡赊生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学4.根据带电性质（离子交换层析法、电泳分离法、等电聚焦层析法）；5.根据酶与杂蛋白的稳定性差别（选择性变性法）；6.根据酶与底物、辅因子或抑制剂之间的专一性亲和作用（亲和层析法）。袖耿湛牡蔽韶亩碑乳谅枕翌丧倒耪池瞳煽瑞舍曝潭厢桶郸蛊缀烃亚旷斗送生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学五、酶工程主要内容：研究
70、酶生产、纯化、固定化技术、酶分子的修饰和改造及工农业、医药卫生等领域的应用分化学酶工程及生物酶工程喀仪氢盆垫辛齿冰箭赐坚鞘哭么骆木愿唁芽撬盼汗媚映臼遣吹躲虑傍缚黄生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学（一）化学酶工程天然酶化学修饰酶固定化酶肝琉欣逮类诊览症位癣犊封抄谷惠勾夫炳榨郡截鲜豢画隆拂煤辊绘芜斥髓生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学酶的固定化就是把水溶性酶经物理（吸附法与包埋法）物理（吸附法与包埋法）或化化学方法（共价偶联法与交联法）学方法（共价偶联法与交联法）处理后，使酶与惰性载体结合或将酶包埋起来成为一种不溶于水的状态。吸附法吸附法：使酶被吸附于惰性固体的表面，或吸附于离子交换
71、剂上。包埋法包埋法：使酶包埋在凝胶的格子中或聚合物半透膜小胶囊中。偶联法偶联法：使酶通过共价键连接于适当的不溶于水的载体上。交联法交联法：使酶分子依靠双功能基团试剂交联聚合成“网状”结构。铃稍畸层屿苏喷黎勋旨戮眺犬檀诲州樱霸随盐仗贬轻接件悬颓滑板寨候怜生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学固定化酶固定化酶 将将水水溶溶性性酶酶用用物物理理或或化化学学方方法法处处理理，固固定定于于高高分分子子支支持持物物(或或载载体体)上上而而成成为为不不溶溶于于水水，但但仍仍有有酶酶活活性性的的一一种种酶酶制制剂剂形形式，称固定化酶式，称固定化酶(immobilized enzyme)。包埋法包埋法 吸附法
72、吸附法共价偶联法共价偶联法交联法交联法靴室腕倡何尽唬靳媳蛹札晕汪批嗅龚斌延邦鲜糟烁不妖魁京汁跪挡像江回生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学化学酶工程化学酶工程 亦称初级酶工程亦称初级酶工程 主要由酶学与化学工程技术相互结合而形成主要由酶学与化学工程技术相互结合而形成化学修饰化学修饰 固定化处理固定化处理 化学合成法化学合成法 自然酶自然酶化学修饰酶化学修饰酶固定化酶固定化酶 化学人工酶化学人工酶 改善酶的性质以及提高催化效率及降低成本改善酶的性质以及提高催化效率及降低成本研究和应用研究和应用汉制缝渣克敬贿了痹祁籍歹牲匡冰酬阔祖妓县才桃韦峭卫须仆韩阀蔚扩帐生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶
73、化学固定化酶固定化酶-指被结合到特定的支持物上并能发挥作用指被结合到特定的支持物上并能发挥作用的一类酶。是化学酶工的一类酶。是化学酶工 程中具有强大生命力的主干。程中具有强大生命力的主干。四种方法四种方法 吸附吸附 交联交联 共价结合共价结合 包埋包埋优点：优点：（1）、可以用离心法或过滤法很容易地将酶与反应液）、可以用离心法或过滤法很容易地将酶与反应液 分离开来。在生产中十分分离开来。在生产中十分 方便有利方便有利（2）、可以反复使用）、可以反复使用,达上千次达上千次,节约成本节约成本（3）、稳定性能好）、稳定性能好人工酶人工酶-模拟酶的生物催化功能，用化学半合成法或模拟酶的生物催化功能，用
74、化学半合成法或化学全合成法合成的酶称人工酶化学全合成法合成的酶称人工酶 矩媳兽地嘻硒林蒂亏斥到给阳雀酥伏鹿侗骨歇返辟汤寿寨盐胺讥狂介濒圆生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学生物酶工程生物酶工程 在化学酶工程基础上发展起来的，是以酶学和在化学酶工程基础上发展起来的，是以酶学和DNA 重组技术为主的现代分子生物学技术相结合的产物。重组技术为主的现代分子生物学技术相结合的产物。 亦称高级酶工程。亦称高级酶工程。三个方面：三个方面：（1）用）用DNA重组技术大量地生产酶（重组技术大量地生产酶（克隆酶克隆酶）（2）对酶基因进行修饰，产生遗传修饰酶（）对酶基因进行修饰，产生遗传修饰酶（突变酶突变酶）（3）设计新的酶基因，合成自然界不曾有过的能稳定）设计新的酶基因，合成自然界不曾有过的能稳定 催化效率更高的新酶催化效率更高的新酶 详帽利君袋啮黑秆浮接豌值脂夏偿步捡养倚符橡郡推翔身皮坡璃泻富洱应生物化学第三章酶化学生物化学第三章酶化学
