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1、实验三实验三 沉淀反应沉淀反应 实验内容实验内容：1 环状沉淀反应（示教）2 单向琼脂扩散（示教）3 双向琼脂扩散4 微量免疫电泳（示教） 实验三沉淀反应沉淀反应类型 环状沉淀反应：最早使用的沉淀反应 以琼脂为支架的扩散反应：单扩，双扩 在扩散的基础上加上电泳：火箭电泳；对流免疫电泳；微量免疫电泳 实验三沉淀反应一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应 抗人血清抗牛血清待检血稀释液人血稀释液人血稀释液待检血稀释液抗牛血清抗人血清意义： 可检测小量的抗原进行法医学上血迹的鉴定 及流行病学中昆虫吸血习性的检查。其缺点是对含几个抗原抗体系统的反应缺乏分辨作用。 实验三沉淀反应二、 琼脂扩散 (1)单向琼脂扩
2、散（单扩）意义：用于定量测定人或动物血清中各种Ig( IgD、IgE除外）的含量。 不 同稀 释度 的Ag已知Ab实验三沉淀反应(2)双向琼脂扩散已知Ab未知Ag实验三沉淀反应三、 扩散的基础上进行电泳 n n优点：提高反应敏感度，缩短反应时间。n n抗原抗体在电场中能定向移动，既限制了抗原抗体向四周扩散，增加局部反应浓度，又加快泳动速度，从而缩短反应时间（1-2h即可），提高反应敏感度（10倍）。实验三沉淀反应 火箭电泳火箭电泳 单扩单扩+ +电泳电泳不同稀释度Ag已知Ab融于琼脂板意义：用于制作不同稀释度FP含量的标准曲线，测定病人血清中FP含量。 实验三沉淀反应 对流免疫电泳 双扩+电泳
3、 已知Ab未知Ag意义： 用于HBsAg、FP检测及脑膜炎球菌分型检测。Ag接电源负极，Ab接电泳正极 实验三沉淀反应 微量免疫电泳 先电泳后扩散 病人血清正常人血清已知Ab意义：用于免疫球蛋白不同成分的鉴定。 实验三沉淀反应血清蛋白电泳示意图实验三沉淀反应图7-1 电泳和双扩散不同阶段示意图 电泳后各蛋白质的位置 加抗体后双扩散的情况 双扩散结果 实验三沉淀反应132654中央孔中央孔FP诊断血清诊断血清1，4阳性对照阳性对照2 阳性病人血清（原液）阳性病人血清（原液）3 阳性病人血清（阳性病人血清（1：10）5 阴性病人血清（原液）阴性病人血清（原液）6 阴性病人血清（阴性病人血清（1：1
4、0）1实验内容：双扩 按图示加样实验三沉淀反应操作步骤 n n用蜡笔在一洁净的载玻片中央用蜡笔在一洁净的载玻片中央1/31/3上划区，并作好标记上划区，并作好标记n n制制备备琼琼脂脂板板：将将玻玻片片平平放放于于水水泥泥平平台台上上，用用吸吸管管吸吸足足量量琼琼脂脂，沿沿划划区区边边缘缘快快速速一一次次性性加加入入，形形成成厚厚约约3mm3mm的的琼琼脂脂板板，放放置置1-21-2分分钟钟使使之之凝凝固固。（*避避免免产产生生气气泡泡、分层及厚薄不均）分层及厚薄不均）n n琼脂板凝固后依模板打孔琼脂板凝固后依模板打孔n n加样：加样： 原原则则：每每孔孔10ul10ul、加加满满孔孔、不不含
5、含气气泡泡、不不溢溢出出，每每孔孔加加样量要准确均一样量要准确均一 微微量量移移液液器器的的使使用用：各各个个微微量量移移液液器器与与相相应应血血清清一一一一对对应，不混用；吸液时下压有阻力即可，放液时须压到底。应，不混用；吸液时下压有阻力即可，放液时须压到底。n n加样完置湿盒过夜后观察结果。加样完置湿盒过夜后观察结果。实验三沉淀反应 注意事项 n n加样前判断孔内的琼脂是否已取出n n加样时注意不要刮破琼脂以免影响沉淀线形状n n加样时抗体、阳性血清及待测标本应各用一支加样器，以免混淆，影响实验结果 实验三沉淀反应实验报告双扩的实验原理、结果、结果分析实验三沉淀反应n n附：沉淀线形状与抗原、抗体浓度的关系附：沉淀线形状与抗原、抗体浓度的关系 Ab 表示Ag与Ab的分子量大小适中、浓度适宜 表示Ag的浓度大于Ab 表示Ab浓度的大于Ag实验三沉淀反应
