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1、桂林十八中：李保民桂林十八中：李保民动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段：常用的技术手段：1.动物细胞培养、动物细胞培养、2.动物细胞融合、动物细胞融合、3.单克隆抗体单克隆抗体4.胚胎移植胚胎移植5.动物细胞核移植、动物细胞核移植、动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术是其他动物细胞工程技术的基础。的基础。一、动物细胞培养一、动物细胞培养:就是从动物机体内取出相关的组织，就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。细胞生长和增殖。2、选材：、选材： 动物胚胎或幼龄动物
2、的组织、器官，动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。分裂旺盛，分化程度低，容易培养。v在进行动物细胞培养时，用在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶胰蛋白酶分散细胞，说明细胞分散细胞，说明细胞间的物质主要是间的物质主要是蛋白质蛋白质。3.分散成单个细胞分散成单个细胞1.培养液的成分培养液的成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清动物血清等等3、动物细胞培养过程动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代细胞代细胞原代培养
3、原代培养50代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加加培养液培养液动物组织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。韧性的组织和器官。（分解弹性纤维分解弹性纤维）（遗传物质改变）（遗传物质改变）细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或或细胞产物细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、葡萄糖、动物血清动物血清蔗糖、蔗糖、植物
4、激素植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用（1 1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。素、单克隆抗体等。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研
5、究，为治疗和预防疾病提供理论依据为治疗和预防疾病提供理论依据 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是 -（ ） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 -（）（） A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久
6、的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （ ） A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D 4.4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（ ） A.A.培养基成分不同；培养基成分不同； B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够
7、大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A1.1.过程：过程：诱导方式诱导方式物理法物理法化学法化学法生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性 （诱导细胞融合）（诱导细胞融合）细胞融合与诱导细胞融合物质：细胞融合与诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的仙台病毒必须诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活灭活。思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞
8、膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 细胞融合技术应用于哪些方面？细胞融合技术应用于哪些方面？ 主要是制备单克隆抗体。主要是制备单克隆抗体。1.1.过程：过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）主要用于制备主要用于制备单克隆抗体
9、单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动动、电刺激电刺激）化学（聚乙二醇化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较1.其由何种细胞产生？其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里
10、？主要分布在哪里？3.如何得到抗体？如何得到抗体？提提问问？ 抗体抗体1 1。抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激效应效应B 抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激效应效应B 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一效应筛选单一效应B细胞细胞不能增值产生大量抗体不能增值产生大量抗体2 2。特异性差、纯度低；特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖- -化学性质单一、特异性强的抗体。化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞杂种细胞 ？ ？诱
11、导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？ 抗原抗原 效应效应B细胞细胞2.2.制备过程：制备过程：B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞？细胞融合后培养液中有几种细胞？特定的选择培养基特定的选择培养基筛选出杂种细胞筛选出杂种细胞（1 1）为为什什么么选选用用小小鼠鼠骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞与与B B淋淋巴巴细细胞融合胞融合? ?（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，增殖，B B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）（2 2
12、）骨髓瘤细胞是癌细胞吗）骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ?（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。）能等于癌细胞。）（3 3）整个制备过程为何要经过两次筛选）整个制备过程为何要经过两次筛选? ?第一次筛选第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），得到杂交瘤细胞（多种），第二次第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后一个杂交瘤细胞的情况下开
13、始培养，然后再再筛选出能产生特异性抗体的细胞群筛选出能产生特异性抗体的细胞群。3. 3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用： 在基础理论研究中具有重要意义在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性高、灵敏度高等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹：单抗上连接抗癌药物生物导弹：单抗上连接抗癌药物小结小结两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三三个个“一一”一个诱导细胞融合的新方法灭活一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个
14、优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势1、新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下、新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是列技术（或仪器）与应用匹配正确的是 A.PCR技术技术扩增蛋白质扩增蛋白质 B.杂交瘤技术杂交瘤技术制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.光学显微镜光学显微镜观察叶绿体的基粒观察叶绿体的基粒 D.花粉离体培养花粉离体培养培育单倍体植物培育单倍体植物2 2、下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是、下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是培养保留接触抵制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细培养保留接触抵制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞胞克隆培养法培养过程上多数细胞的基因型会发生改变克隆培养法培养过程上多数细胞的基因型会发生改变二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的恶性细胞系的细胞可进行付代培养恶性细胞系的细胞可进行付代培养BDD检测、巩固
