《微生物实验课件：ELISA(酶联免疫吸附试验) (2)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物实验课件：ELISA(酶联免疫吸附试验) (2)（26页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、凝集反应凝集反应(ABO血型测定血型测定)ELISA(酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验)PFC预备预备 7A208 蒋朋飞蒋朋飞凝集反应凝集反应原理原理: 颗粒性抗原颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并与相应抗体发生特异性结合，并在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。应用：应用：检测未知检测未知AgAg或或AbAb分类：分类：1.1.直接凝集反应直接凝集反应：2.2.间接凝集反应间接凝集反应玻片法玻片法-ABOABO血型鉴定、菌种鉴定血型鉴定、菌种鉴定试管法试管法-肥达反应肥达反应ABOABO血型测定血型测定 实验目的实验目的: 检测待测者检测待测者ABO血型血
2、型材料材料: 抗抗A和抗和抗B血清血清, 生理盐水生理盐水, 载玻片载玻片, 采血针采血针等等.实验方法实验方法 准备准备生理盐水管生理盐水管：0.5ml / 管管制备红细胞悬液制备红细胞悬液: 碘酒、酒精消毒无名指端碘酒、酒精消毒无名指端, 采血采血, 1或或2滴血液滴入生理盐水管中滴血液滴入生理盐水管中载玻片载玻片两端两端分别加分别加抗抗A, 抗抗B血清血清各各1滴滴载玻片载玻片两端两端分别分别加红细胞悬液加红细胞悬液各各1滴滴, 牙签牙签混匀混匀, 10-15分钟内观察结果分钟内观察结果 实验结果实验结果 呈红色片状凝集颗粒为阳性呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；玻片置于消
3、毒缸中；塑料滴管弃去实验结束后，洗涤试管；玻片置于消毒缸中；塑料滴管弃去ELISA (酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验)Enzyme Linked Immunosorbent Assay免疫标记技术免疫标记技术: 将抗原、抗体的特异性反应与标记物相结将抗原、抗体的特异性反应与标记物相结合的新技术，用于定性或定量检测未知的抗原合的新技术，用于定性或定量检测未知的抗原或抗体。或抗体。 免疫标记技术放射物标记技术放射物标记技术酶标技术酶标技术免疫荧光技术免疫荧光技术酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验酶免疫组化技术双抗体夹心法双抗体夹心法竞 争 法双抗原夹心法双抗原夹心法间间 接接 法法直接法免疫免疫荧
4、光法示意光法示意图直接法直接法间接法间接法 1.已知抗原包被已知抗原包被 （HBsAg）2.加入待测标本（血清）加入待测标本（血清）4.加入酶标二抗加入酶标二抗6.加入底物加入底物3.洗涤洗涤5.洗涤洗涤EE底物底物E底物底物ELISA间接法间接法原理：间接原理：间接ELISAELISA法法(酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验)颜色改色改变 = 待待测标本中存在抗体本中存在抗体1.包被已知抗原包被已知抗原2.加入待加入待测标本本 （未知抗体？）（未知抗体？）3.加入加入酶标二抗二抗 （即抗抗体（即抗抗体 ：抗人：抗人Ig的抗体）的抗体）4.加入底物加入底物洗涤洗涤洗涤洗涤不显色不显色实验目的实验
5、目的: 检测血清标本中有无检测血清标本中有无HBsAbHBsAb 材料材料: 48 48孔孔ELISAELISA板板 阳性对照血清（阳性对照血清（HBsAbHBsAb） 阴性对照血清阴性对照血清 酶标二抗酶标二抗 洗涤液洗涤液 底物底物A A和和B B 微量加样器，待测血清标本等微量加样器，待测血清标本等乙肝病毒表面抗体乙肝病毒表面抗体诊断试剂盒诊断试剂盒实验方法实验方法微孔板已包被HBsAgHBsAgABCD1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 + +- - - - -+ + + +步骤：步骤：1、加入、加入待检标本待检标本50ul； 同时设同时设阴性对照阴性对照和和阳性对照
6、阳性对照 (分别各加分别各加1滴滴) 2、加入、加入酶结合物酶结合物1滴滴/每孔，混匀，封板，每孔，混匀，封板，3730min 3、弃去每孔液体、弃去每孔液体, 用洗涤液用洗涤液洗涤洗涤每孔，每孔，5秒秒5次，次， 拍拍干板干板 4、每孔加、每孔加显色液显色液A、B各各1滴滴, 混匀混匀, 37 10-15min 5、肉眼观察颜色深浅、肉眼观察颜色深浅 （+：蓝色；：蓝色； -：无色）：无色） 颜色变化或颜色变化或OD（吸光度）值（吸光度）值酶标仪酶标仪酶标板酶标板实验结果实验结果 思考思考 ELSA实验中，待测标本是否含有乙肝表实验中，待测标本是否含有乙肝表面抗体？为什么？面抗体？为什么？ABO血型鉴定实验中，待测者的血型属哪血型鉴定实验中，待测者的血型属哪一型？血型鉴定在临床中有什么应用？一型？血型鉴定在临床中有什么应用？肥达反应（Widal reaction，WR）是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验间接凝集反应：可溶性抗原与相应抗体直接反应不出现凝集现象。将可溶性抗原包被在一种与免疫无关的颗粒状载体表面形成致敏颗粒，再与相应抗体反应，则出现凝集称间接凝集反应。常用的载体颗粒有人 O型红细胞、绵羊红细胞、乳胶颗粒等。如载体颗粒是红细胞，称间接血凝试验；若为乳胶颗粒，则称为乳胶凝集试验
