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1、体外诊断试剂体外诊断试剂原理工艺及质量控制原理工艺及质量控制1概念概念体外诊断体外诊断试剂：试剂： 是是指按医疗器械管理指按医疗器械管理的，的，包括可单独使包括可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用，用或与仪器、器具、设备或系统组合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，用于对人体样本（各种体液、细胞、组织样用于对人体样本（各种体液、细胞、组织样本等）进行体外检测的试剂、试剂盒、校准本等）进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等品（物）、质控品（物
2、）等。2概念解读概念解读1 1、检验的标的物是体液、细胞、组织样本；要检验的物质、检验的标的物是体液、细胞、组织样本；要检验的物质是蛋白质、核酸、离子等等；目的是检查或测定样本中被检测是蛋白质、核酸、离子等等；目的是检查或测定样本中被检测物质的多少（有或无、多或少），从而对健康状态进行评价。物质的多少（有或无、多或少），从而对健康状态进行评价。2 2、总的原则就是使不可见的物质经过生物（如细菌生长）、总的原则就是使不可见的物质经过生物（如细菌生长）、化学（如显色反应）、生物化学（如酶催化）、免疫（如免疫化学（如显色反应）、生物化学（如酶催化）、免疫（如免疫复合物）、分子生物（如核酸扩增）等反应
3、转化为可观察（肉复合物）、分子生物（如核酸扩增）等反应转化为可观察（肉眼观察）或测量（光、电、磁等物理信号）。眼观察）或测量（光、电、磁等物理信号）。3 3、形式包括：试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）、形式包括：试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）。4 4、由于特异性或各种干扰因素的影响，检测结果一般作为、由于特异性或各种干扰因素的影响，检测结果一般作为临床诊断的辅助手段，多数不是金标准（组织病理学检查、手临床诊断的辅助手段，多数不是金标准（组织病理学检查、手术发现、影像诊断、病原体的分离培养以及长期随访所得的结术发现、影像诊断、病原体的分离培养以及长期随访所得的结论论 ）。）。5
4、 5、结果一般会存在偏差（假阳性、假阴性），但应该可控。、结果一般会存在偏差（假阳性、假阴性），但应该可控。3体外诊断试剂检测的物质体外诊断试剂检测的物质抗原、抗体（包括血型、组织配型）、核酸等抗原、抗体（包括血型、组织配型）、核酸等一般为直接指标；一般为直接指标；其它类型蛋白质、多肽、糖类、激素、酶类、其它类型蛋白质、多肽、糖类、激素、酶类、酯类、维生素、无机离子等一般为辅助指酯类、维生素、无机离子等一般为辅助指标；标；微生物；微生物；麻醉、精神、毒性药品。麻醉、精神、毒性药品。4体外诊断试剂分类体外诊断试剂分类（ 按照学科）按照学科）1 1、临床血液学检验试剂；、临床血液学检验试剂；2 2
5、、临床体液学检验试剂；、临床体液学检验试剂；3 3、临床化学检验试剂；、临床化学检验试剂；4 4、临床免疫学检验试剂；、临床免疫学检验试剂；5 5、临床微生物学检验试剂；、临床微生物学检验试剂；6 6、组织细胞学检验试剂；、组织细胞学检验试剂；7 7、变态反应、自身免疫诊断检验试剂；、变态反应、自身免疫诊断检验试剂；8 8、遗传性疾病检验试剂；、遗传性疾病检验试剂；9 9、分子生物学检验试剂。、分子生物学检验试剂。体外诊断试剂形式是多种多样，含盖的学科广泛，体外诊断试剂形式是多种多样，含盖的学科广泛，每一次生物学、化学、生物化学、分子生物学，特别每一次生物学、化学、生物化学、分子生物学，特别是
6、物理学领域有新技术的诞生或突破，都将伴随产生是物理学领域有新技术的诞生或突破，都将伴随产生一类新的体外诊断试剂。一类新的体外诊断试剂。了解原理了解原理5体外诊断试剂典型的应用模式体外诊断试剂典型的应用模式样本中的被检测物质样本中的被检测物质固相或液相固相或液相试剂中的化学物质、生物活性试剂中的化学物质、生物活性物质（含标记物）作用物质（含标记物）作用产生物理信号（光、电、磁）产生物理信号（光、电、磁）肉眼或仪器检测信号肉眼或仪器检测信号检测结果检测结果与对照比较与对照比较放大放大对应关键控制点对应关键控制点校准、质控、标准校准、质控、标准品（物）的朔源品（物）的朔源凝集现象是为看见凝集现象是为
7、看见6关键控制点关键控制点原材料质量：纯度、生物活性（效价、亲和力、原材料质量：纯度、生物活性（效价、亲和力、位点等）、多肽核酸序列准确性、含量、浓度位点等）、多肽核酸序列准确性、含量、浓度（前滞反应、后滞反应）、污染（化学物质污染、（前滞反应、后滞反应）、污染（化学物质污染、微生物污染）微生物污染）工艺：分离、纯化、配制、包被、点样、封闭、工艺：分离、纯化、配制、包被、点样、封闭、干燥、真空度、标记、灭活、醛化致敏、浸润、干燥、真空度、标记、灭活、醛化致敏、浸润、切割、包装等等。切割、包装等等。标准物质（是指供体外诊断试剂试验用，且具标准物质（是指供体外诊断试剂试验用，且具有确定特性量值，用
8、于评价测定方法的物质，包有确定特性量值，用于评价测定方法的物质，包括标准品、参考品）。试剂盒评价、仪器校验、括标准品、参考品）。试剂盒评价、仪器校验、定值。定值。7十六个体系考核类型分类表十六个体系考核类型分类表1（注：带（注：带（注：带（注：带的类别为我省有或即将有生产的类别）的类别为我省有或即将有生产的类别）的类别为我省有或即将有生产的类别）的类别为我省有或即将有生产的类别）序号分类产品型别1酶酶联免疫（酶标联免疫（酶标板、磁珠、微粒子）板、磁珠、微粒子）类试剂类试剂酶联免疫酶联免疫法；化学发光法；法；化学发光法；增强化学发光免疫分析法；增强化学发光免疫分析法；时间时间分辨荧光分辨荧光法；
9、电化学发法；电化学发光法；微粒光法；微粒子酶免子酶免法。法。2胶体金胶体金（硒、（硒、乳乳胶）类胶）类试剂试剂胶体金胶体金法；胶体法；胶体硒法；硒法；3免疫印迹试剂免疫印迹试剂免疫印迹试剂免疫印迹试剂盒；盒； 4蛋白芯片（微阵列）蛋白芯片（微阵列）类试剂类试剂蛋白芯片（微阵列）；蛋白芯片（微阵列）；8十六个体系考核类型分类表十六个体系考核类型分类表2序号序号分类分类产品型产品型别别5 5单抗类试剂单抗类试剂血型定型类血型定型类试剂；免疫试剂；免疫组组化；化；免疫免疫比比浊；乳胶凝集。浊；乳胶凝集。6 6多抗类试剂多抗类试剂同上同上7 7诊断血清（菌液）诊断血清（菌液）诊断诊断血清；诊断血清；诊
10、断菌菌液。液。8 8血球凝集类试剂血球凝集类试剂抗体致敏抗体致敏血球。血球。9 9核酸核酸扩增类试剂扩增类试剂荧光荧光PCRPCR；PCR-ELISAPCR-ELISA；PCR-PCR-毛毛细管电泳；细管电泳；PCR-PCR-电泳；转录电泳；转录介介导扩增（导扩增（TMATMA） 1010基因芯片（微阵列）基因芯片（微阵列）类试剂类试剂基因芯片（微阵列）；基因芯片（微阵列）；PCR-PCR-杂杂交；交；9十六个体系考核类型分类表十六个体系考核类型分类表3序号序号分类分类产品型产品型别别1111探针放大（原位杂交）探针放大（原位杂交）类试剂类试剂bDNAbDNA类。类。1212普通普通生化类试剂
11、生化类试剂（十万级要求）（十万级要求）包括酶类化学试剂、凝血试剂包括酶类化学试剂、凝血试剂类等类等试剂。试剂。1313普通普通生化类试剂生化类试剂（清洁环境）（清洁环境）包括一般化学试剂、血气电解包括一般化学试剂、血气电解质类、血液分析仪用试剂类等质类、血液分析仪用试剂类等1414 干干化学类试剂化学类试剂干化学试剂（条、卡或盒）；干化学试剂（条、卡或盒）；1515 药敏类试剂药敏类试剂药敏纸片（卡药敏纸片（卡）；）；1616 培养基类培养基类培养基。培养基。10体外诊断试剂的分析性能评估体外诊断试剂的分析性能评估分析性能主要包括：分析性能主要包括：分析灵敏度；分析灵敏度；分析特异性；分析特异
12、性；测定范围；测定范围；测定准确性；测定准确性；批内不精密度；批内不精密度；批间不精密度。批间不精密度。出厂检验时上述性能要求一般都应该检出厂检验时上述性能要求一般都应该检验！验！11酶联免疫(酶标板、磁珠、微粒子等)类试剂原理：酶联免疫吸附测定(ELISA)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用结合起来的一种敏感性很高的新型免疫检测技术。以酶标板、磁珠(微粒子)等为载体，将抗原（或抗体）包被于载体，与样本中相对应的抗体（或抗原）反应形成免疫复合物，再与不同位点抗原（或抗体）的标记物(包括标记酶、发光物、稀土元素等)反应，最后与底物反应，产生可检测的物理信号，实
13、现对抗体或抗原的检测。工艺过程： 抗原(或抗体)的包被(包被、封闭、干燥、抽真空) ；标记物、底物的制备，浓度确定（滴定），配制分装；缓冲液、其他液体组分的配制分装。关键质控点：主要生物原料的质量控制；标记过程；滴定；包被工艺；含有蛋白质的组分需要抑菌措施。12典型的酶联免疫反应典型的酶联免疫反应13胶体金胶体金(硒硒)试剂试剂原理：层析加抗原抗体免疫学反应。将抗原(或抗体)以固定在膜上，胶体金标记试剂吸附在结合垫上；当待检样本加到样本垫上后，通过毛细作用向前移动，使结合垫上的胶体金标记物溶解后相互反应，再在膜上层析，移动至固定的抗体(或抗原)的区域时，待检物与金标试剂的结合物与之发生特异性结
14、合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。工艺过程：胶体金标记物的制备；抗原（抗体）、标记物使用浓度确定；膜条的制备、干燥、分装。关键质控点：主要生物原料的质量控制；标记物的制备浓度确定；点膜、封闭和干燥；切膜(需防尘措施)；其中温度湿度等的控制尤为关键：14胶体金免疫层析反应示意图胶体金免疫层析反应示意图15核酸扩增类试剂核酸扩增类试剂原理：PCR技术是利用体内DNA复制原理和DNA变性与复性等性质，使目的基因在体外大规模扩增技术。PCR技术是在模板、dNTP、Mg2+等条件下，用耐热的Taq酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引物，经过DNA变性、引物与模板结合(复
15、性)和延伸3个步骤的循环过程(25-30个循环)，使目的基因成100万倍扩增。工艺过程： 引物(探针)液的配制分装，核酸提取试剂的制备分装，酶类物质的分装，缓冲液的配制分装，其他溶液的配制分装。关键质控点： 引物(探针)的纯度和浓度，核酸提取试剂的制备、各种酶的效力、防污染酶。16荧光荧光PCR检测示意图检测示意图17荧光荧光PCR检测扩增曲线检测扩增曲线18核酸分子杂交类试剂核酸分子杂交类试剂原理：利用核酸双链碱基互补、变性和复性，用已知碱基序列的单链核酸片段作为探针，与待测样本中的单链核酸互补配对，以判断有无互补的同源核酸序列的存在。包括原位杂交类试剂和探针放大类试剂。工艺过程： 微孔板（
16、或膜）的包被和封闭，各种探针的制备分装，各种缓冲液的配制分装。关键质控点： 捕获探针的包被和封闭、各种探针(靶探针、预放大探针、放大探针)的纯度和浓度。19分子杂交试验示意图分子杂交试验示意图20普通生化试剂普通生化试剂(十万级要求十万级要求)方法：比浊法、比色法、血凝法（凝集时间）产品： l、酶类：含酶、辅酶与牛血清白蛋白等、剂型为干粉或液体。 2、血凝类：试剂组分中含有其他活性类组分(如兔脑粉等)。生产工艺： 原材料称量、溶解、定容、中试、分装、组装、成品检验。关键控制点：原料称量、配制、物料平衡。21普通生化类试剂普通生化类试剂(清洁环境清洁环境)产品：无机离子检测（离子选择电极法、火焰
17、分光光度法、电量分析法、比色发、滴定法、微分电位溶出法、比色发、滴定法、微分电位溶出法、原子吸收分光光度法等）、血气电解质类（质控品为主）、血液分析仪用试剂类等试剂。工艺要求：除生产可在清洁环境中进行操作外，生产工艺和关键控制点与普通生化试剂 (十万级要求)类相同。22干化学类试剂干化学类试剂原理：以滤纸为载体，将各种试剂组分浸渍后干燥，作为试剂层，固定在支持物上，试纸上的各测试块与被测样品中的成分发生酶化学反应，使试纸块发生不同的颜色变化，颜色深浅与样品中的成份含量成正比，再由光电耦合元件对测试块的颜色进行判读，达到测定样品中化学成分含量的目的。生产工艺： 特定试剂的配制、试剂条的浸润、干燥
18、、切割、分包装等。关键控制点： 试剂的配制、试剂条的浸润、干燥。23培养基培养基培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。工艺特点：原料按配方称料，混匀，pH值，灭菌，检定，分包装。 培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。 一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基)，较长时间的贮存，必须放在26的冰箱内。 厂房要求：普通洁净间，有除湿、去粉尘设施。24谢谢指正！电话：6263393925
