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1、第五章 农药、兽药残留速测技术农药中毒事件回顾海南“毒豇豆”事件2010年1月，海南豇豆在武汉白沙洲农副产品市场连续三次被检测出含有禁用农药水胺硫磷水胺硫磷。随后在武汉、上海、郑州、合肥、杭州、广州等11个城市检测出海南豇豆农药残留超标。仅武汉销毁毒豇豆3596.9公斤 水胺硫磷，是一种高毒性农药，早在2002年，农业部已将它例如黑名单中，禁止在水果蔬菜、中草药植物上使用。它能经由食道、皮肤和呼吸道，引起人体中毒。农药中毒事件回顾青岛“毒韭菜”事件2010年4月，青岛一些医院陆续接到9名食用韭菜后中毒的患者，他们都是食用韭菜之后出现了头疼、恶心、腹泻等症状，经医院检查属于有机磷中毒，也就是说韭
2、菜上的残余农药严重超标导致中毒。随后，检出农药残留超标韭菜1930公斤。农药中毒事件回顾张裕红酒农药超标事件2012年8月7日某媒体报道：记者将三家国内葡萄酒上市公司的十款葡萄酒送国家食品质量监督检验中心检测，均检出多菌灵或甲霜灵农药残留，而张裕产品残留值超过另两家。多菌灵为美国禁用的农药，有导致肝癌的风险。张裕A股价直奔跌停，最终大跌9.83%2001年，杭州的空心菜有机磷中毒事件。2003年，南京蔬菜有机磷残留导致中毒的事件。2007年，福建大田发生有机磷污染水源导致中毒事件。2008年1月，日本发生饺子中毒事件，该饺子被化验出含甲胺磷残留2008年1月9日，中国决定停止甲胺磷、对硫磷等五
3、种高毒农药的生产、流通和使用。 2011年3月，河南毒韭菜事件有机磷中毒(超标农药残留主要是甲拌磷)6一、前言一、前言 随着人们环境意识的不断加强，由农药引起的食品安全问题也越来越受到人们的关注。为了保障消费者的安全和健康，提高农产品的质量安全水平，增强农业产品的国际竞争力，我国政府决定加强农产品中农药残留的监控，建立健全农药残留的检测体系，实施对蔬菜、瓜果、茶叶生产全过程的农药监控，从源头抓起，加强农产品的产地检测，把住农产品的市场准入关。7 （一）农药概念（一）农药概念农药农药农药农药(pesticides)(pesticides)是指用于预防、消灭或者控制危是指用于预防、消灭或者控制危害
4、农业、林业的病、虫、草及其他有害生物，以及害农业、林业的病、虫、草及其他有害生物，以及有目的地调节植物、昆虫生长的的化学合成或者来有目的地调节植物、昆虫生长的的化学合成或者来源于生物、其他天然物质的一种物质或者几种物质源于生物、其他天然物质的一种物质或者几种物质的混合物及其制剂。的混合物及其制剂。现在农药不仅应用于农业，而且也广泛应用于畜牧业、林现在农药不仅应用于农业，而且也广泛应用于畜牧业、林业和公共卫生事业等方面。业和公共卫生事业等方面。一、概述一、概述8（二）农药残留的概念（二）农药残留的概念 农药残留农药残留是指农药使用后残存于生物体、食品是指农药使用后残存于生物体、食品( (农副产品
5、农副产品) )和环境中的微量农药原体、有毒代谢和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。物、降解物和杂质的总称。 农药残留几乎无处不在！ 土壤 水体 空气农药植物 动物 人10（三）农药的分类（三）农药的分类1.按化学成分按化学成分可分为有机氯、有机磷、氨基甲可分为有机氯、有机磷、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类及砷、汞、铜、硫磺等制酸酯类、拟除虫菊酯类及砷、汞、铜、硫磺等制剂。剂。2.按用途按用途可分为杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植可分为杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂和粮食熏蒸剂等。物生长调节剂和粮食熏蒸剂等。11（四）农药的毒性及种类（四）农药的毒性及种类N农药除了可造成人体的
6、急性中毒外，绝大多数对农药除了可造成人体的急性中毒外，绝大多数对人体产生的慢性危害，多是通过污染食品的形式人体产生的慢性危害，多是通过污染食品的形式造成。造成。N某些农药对人和动物的遗传和生殖造成影响，产某些农药对人和动物的遗传和生殖造成影响，产生畸形和引生畸形和引起癌症等方面的毒素作用。起癌症等方面的毒素作用。 我国农药的发展 20世纪80年代前，中国生产的农药尚不足80种，大多是进口，农药主要是有机氯。1983年禁止生产和使用有机氯农药后，代之以有机磷、氨基甲酸酯类农药，但其中一些品种比有机氯的毒性大10倍甚至100倍。90年代之后，中国逐渐由农药进口国变成出口国，近两年，农药进口量只相当
7、于产量的2%-3%，出口量已是进口量的十几倍。 131、有机氯农药、有机氯农药品种：品种：DDT、六六六、艾氏剂、六六六、艾氏剂、狄氏剂等。狄氏剂等。特点：特点：化学性质稳定，不易分化学性质稳定，不易分解，解，易溶于脂肪中，并在脂肪易溶于脂肪中，并在脂肪中蓄积，中蓄积，长期使用会严重的环长期使用会严重的环境污染。境污染。危害：危害：有机氯农药容易积累在人体的脂肪、肝脏、有机氯农药容易积累在人体的脂肪、肝脏、肾脏等部位，并且不容易排除体外。肾脏等部位，并且不容易排除体外。DDT：当人：当人体蓄积的浓度体蓄积的浓度20mg/kg时，神经系统放生障碍，时，神经系统放生障碍，达到达到500mg/Kg时
8、，可以致死。动物实验证实有时，可以致死。动物实验证实有致畸、致癌致畸、致癌作用作用目前许多国家都已禁止使用，我国已于目前许多国家都已禁止使用，我国已于1983年全年全部禁止生产和使用。部禁止生产和使用。15六六六，六六六，BHCBHC滴滴涕，滴滴涕，DDTDDT16滴滴涕：减少了蛋壳的厚度，从而降低了小鸟滴滴涕：减少了蛋壳的厚度，从而降低了小鸟的孵出率。的孵出率。二恶英：进入机体后几乎不被排泄、沉积在肝二恶英：进入机体后几乎不被排泄、沉积在肝脏和脂肪组织中。属于剧毒物质，毒性比氰化脏和脂肪组织中。属于剧毒物质，毒性比氰化钾高钾高130倍，致癌毒性比黄曲霉毒素高倍，致癌毒性比黄曲霉毒素高10倍，
9、会倍，会引起基因突变，影响繁殖力和智力发育。引起基因突变，影响繁殖力和智力发育。17早期的高效高毒品种：对硫磷（早期的高效高毒品种：对硫磷（1605）、甲拌磷）、甲拌磷（3911）、内吸磷（）、内吸磷（1059）后期使用得较多的为高效低毒低残留的品种，如：后期使用得较多的为高效低毒低残留的品种，如：乐果、敌百虫、杀螟松、倍硫磷乐果、敌百虫、杀螟松、倍硫磷毒性极低的马拉硫磷、双硫磷、氯硫磷、锌硫磷、毒性极低的马拉硫磷、双硫磷、氯硫磷、锌硫磷、碘硫磷、地亚农、灭蜈松碘硫磷、地亚农、灭蜈松2、有机磷农药有机磷农药18有机磷农药主要品种有机磷农药主要品种甲胺磷甲胺磷乙酰甲胺磷乙酰甲胺磷19乐乐 果果一
10、六一六0 0五五20急性毒性急性毒性：有机磷农药化学性质不稳定，分解快，：有机磷农药化学性质不稳定，分解快，在作物中残留时间短，在作物中残留时间短，大多不溶于水、碱性条件下大多不溶于水、碱性条件下易水解而失效易水解而失效 。危害：危害：有机磷类农药的中毒特征是有机磷类农药的中毒特征是抑制抑制血液和组织血液和组织中中胆碱酯酶胆碱酯酶的活性，导致的活性，导致神经系统机能失调神经系统机能失调,从而使从而使一些受神经系统支配的脏器一些受神经系统支配的脏器,如心脏、支气管、肠、如心脏、支气管、肠、胃等发生功能异常。胃等发生功能异常。21主要表现为主要表现为植物性食物残留植物性食物残留，尤其是含有，尤其是
11、含有芳香物质芳香物质的植物的植物如：水果、蔬菜，特别是叶菜类如小白菜、大白菜、如：水果、蔬菜，特别是叶菜类如小白菜、大白菜、鸡毛菜、甘蓝、芹菜、韭菜、芥菜、花菜、绿花菜、鸡毛菜、甘蓝、芹菜、韭菜、芥菜、花菜、绿花菜、茼蒿、枸杞菜和黄瓜等茼蒿、枸杞菜和黄瓜等223、氨基甲酸酯类农药、氨基甲酸酯类农药是目前使用量较大的杀虫剂。是目前使用量较大的杀虫剂。品种：西维因、杀灭威、速灭威、叶蝉散等品种：西维因、杀灭威、速灭威、叶蝉散等在作物上的残留时间为在作物上的残留时间为4d，在动物的肌肉和脂肪，在动物的肌肉和脂肪中的明显蓄积时间约为中的明显蓄积时间约为7d特点：分解快、残留期短、低毒、高效、选择性特点
12、：分解快、残留期短、低毒、高效、选择性强强危害：同有机磷农药危害：同有机磷农药23 氨基甲酸酯类农药是农药急性中毒的主要原因，氨基甲酸酯类农药是农药急性中毒的主要原因，也是时下蔬菜中农药残留的重点检测品种。也是时下蔬菜中农药残留的重点检测品种。氨基甲酸酯类农药的中毒原因与有机磷农药相氨基甲酸酯类农药的中毒原因与有机磷农药相同，也是抑制人体内胆碱酯酶，从而影响人体内同，也是抑制人体内胆碱酯酶，从而影响人体内神经冲动的传递。神经冲动的传递。氨基甲酸酯类杀虫剂进入人体内，在胃中酸性氨基甲酸酯类杀虫剂进入人体内，在胃中酸性条件下可与食物中的亚硝酸盐和硝酸盐反应生成条件下可与食物中的亚硝酸盐和硝酸盐反应
13、生成亚硝基化合物亚硝基化合物，具有，具有致癌性致癌性。我国农药在农产品的用量居高不下 导致农产品中的农药残留超标食品安全、影响消费者健康、影响农产品的贸易加强农残检测不合理使用不合理使用 分析步骤分析步骤 所需设备所需设备1.采集样品采集样品2.称取样品称取样品分析天平分析天平3.捣碎样品捣碎样品高速组织捣碎机高速组织捣碎机4.样品的提取样品的提取分离漏斗等分离漏斗等5.样品的净化样品的净化SPE、SPME等等6.样品的浓缩样品的浓缩氮吹仪、旋转蒸发仪等氮吹仪、旋转蒸发仪等7.样品的定性、定量测样品的定性、定量测定定GC、HPLC、GC-MS等等（五）传统农残分析技术一般过程（五）传统农残分析
14、技术一般过程26 优点优点 缺点缺点能够对每一种农药进行准确能够对每一种农药进行准确的定性和定量的定性和定量检验分析周长长检验分析周长长检验费用高检验费用高需要消耗大量的有机溶剂、需要消耗大量的有机溶剂、容易造成环境污染容易造成环境污染需要使用需要使用GC、HPLC等昂贵等昂贵的大型仪器设备的大型仪器设备对检验分析人员的化学分析对检验分析人员的化学分析水平有较高要求水平有较高要求检验分析过程繁琐、影响因检验分析过程繁琐、影响因子复杂、不易掌控子复杂、不易掌控（六）传统农残分析技术的优缺点（六）传统农残分析技术的优缺点27传统的农残化学分析传统的农残化学分析主要是主要是气相气相或或液相色谱液相色
15、谱等仪器等仪器优点：优点：敏感敏感(10l2 106molL)、准确、准确缺点：缺点：操作复杂、费时及成本高。操作复杂、费时及成本高。难以满足需求难以满足需求怎么办？怎么办？发展适合我国的快速检测技术发展适合我国的快速检测技术28生化检测生化检测生物检测生物检测化学比色法化学比色法二、适合我国的农药残留快速检测方法二、适合我国的农药残留快速检测方法酶抑制法酶抑制法免疫分析法免疫分析法发光菌检测法发光菌检测法敏感家蝇检测法敏感家蝇检测法速测卡速测卡速测仪速测仪主要为酶免疫法主要为酶免疫法29酶抑制法酶抑制法酶抑制技术酶抑制技术是研究比较成熟、应用最广是研究比较成熟、应用最广泛快速的农药残留检测技
16、术，是根据泛快速的农药残留检测技术，是根据有机有机磷磷和和氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类农药对农药对乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶（AChE)的特异性生化反应建立起来的农的特异性生化反应建立起来的农药残留的微量和痕量快速检测技术。药残留的微量和痕量快速检测技术。301、速测卡法、速测卡法1）原理：）原理：速测卡速测卡（即纸片，固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片）即纸片，固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片） 浸提液浸提液（ pH7.5pH7.5缓冲溶液，缓冲溶液，15.0g Na15.0g Na2 2HPOHPO4 412H12H2 2O+1.59gO+1.59g KH KH2 2POPO4 4 ，用，
17、用500 mL500 mL蒸馏水溶解）蒸馏水溶解）仪仪 器器（常量天平，有条件时配备（常量天平，有条件时配备373722恒温装置，专为速测卡恒温装置，专为速测卡 法而设计的法而设计的“农药残留速测仪农药残留速测仪”和超声波提取器）和超声波提取器） 2）、试剂及仪器 预反应预反应速测卡反应速测卡反应加样加样样本前处理样本前处理样本制备样本制备采样采样白白色色药药片片不不变变色色或略有浅蓝色或略有浅蓝色白白色色药药片片变变为为天天蓝蓝色色或与空白对照卡相同或与空白对照卡相同阳性 阴性阴性空白试验确证对对照照 3）、检测流程 整体测定法整体测定法 选取选取有代表性的蔬菜样品，有代表性的蔬菜样品，擦擦
18、去表面泥土，去表面泥土，剪剪成成1cm左右见方左右见方片，取片，取5g放入带盖瓶中，放入带盖瓶中，加入加入10ml浸提液，浸提液，震摇震摇50次次，静置静置2min以上以上（超声波提取中震荡（超声波提取中震荡30秒）。（采样秒）。（采样-样本制备样本制备-样本前处理）样本前处理） 取取一片速测卡，在一片速测卡，在白色药片白色药片上上滴上滴上23滴滴提取液。（加样）提取液。（加样） 在在37温度中放置温度中放置10min（有条件时在恒温装置中放置），预反（有条件时在恒温装置中放置），预反应后的药片表面必须保持应后的药片表面必须保持湿润湿润。（预反应）。（预反应） 将速测卡将速测卡对折对折，用手，
19、用手捏捏3min，使红色药片和白色药片使红色药片和白色药片叠合反应叠合反应。（速测卡反应）（速测卡反应） 每批测定应设一个缓冲液的每批测定应设一个缓冲液的空白对照空白对照。有条件时，将纸片插入有条件时，将纸片插入“农药残留速测仪农药残留速测仪”自动恒温、定时观察。自动恒温、定时观察。 4)、检测方法（整体测定法、表面测定法）表面测定法（粗筛法）表面测定法（粗筛法） 选取选取有代表性的蔬菜样品，有代表性的蔬菜样品，擦擦去蔬菜表面泥土去蔬菜表面泥土，滴滴2 23 3滴滴浸提液在蔬菜表面，用浸提液在蔬菜表面，用另一片蔬菜另一片蔬菜在在滴液滴液处轻轻摩擦处轻轻摩擦。 取取一片速测卡，将蔬菜上的一片速测
20、卡，将蔬菜上的液滴液滴滴在滴在白色药片白色药片上。上。 、 步骤同上。步骤同上。 36速测卡检测结果速测卡检测结果“-”阴性（蓝色）阴性（蓝色）“+”弱阳性（淡蓝）弱阳性（淡蓝）“+”强阳性（白色）强阳性（白色）干扰物质的排除干扰物质的排除葱、蒜、萝卜、芹菜及番茄汁液，含叶绿素较葱、蒜、萝卜、芹菜及番茄汁液，含叶绿素较高的蔬菜，不要剪得太碎。高的蔬菜，不要剪得太碎。测定番茄时，可将提取测定番茄时，可将提取液放在茄蒂处浸泡液放在茄蒂处浸泡2min2min，取浸泡液测定。测定韭菜，取浸泡液测定。测定韭菜或大蒜时，可整根或整粒放入容器中，加入提取液或大蒜时，可整根或整粒放入容器中，加入提取液后振摇提
21、取测定。后振摇提取测定。 6)、操作要点 空白对照卡不变色原因空白对照卡不变色原因：药片表面浸提液少、表：药片表面浸提液少、表面不够湿润，和面不够湿润，和/ /或是温度太低。或是温度太低。反应时间和温度的控制反应时间和温度的控制当当T T3737，酶反应的时间相对延长，酶反应的时间相对延长 。 样品放置时间应与空白对照卡放置时间一致样品放置时间应与空白对照卡放置时间一致（可比性）（可比性）叠合反应的时间叠合反应的时间 3min( 3min3min( 3min后的蓝色加深，后的蓝色加深，24h24h后退色）后退色）6)、操作要点 速测卡技术指标速测卡技术指标符合率符合率 据报道，在检出的据报道，
22、在检出的3030份以上阳性样品中，经气相份以上阳性样品中，经气相色谱验证，阳性结果的符合率在色谱验证，阳性结果的符合率在80%80%以上。以上。检出限检出限 速测卡法检测常见农药的检出限与国家允许蔬菜速测卡法检测常见农药的检出限与国家允许蔬菜中最大残留限量（中最大残留限量（mg/kgmg/kg）比较。（附表）比较。（附表）附：速测卡对几种常用农药的最低检出限附：速测卡对几种常用农药的最低检出限 与最大残与最大残留限量比较（留限量比较（mg/kgmg/kg） 农药名称农药名称检出限检出限（mg/kgmg/kg）残留限量残留限量（mg/kgmg/kg）农药名称农药名称检出限检出限（mg/kgmg/
23、kg）残留限量残留限量（mg/kgmg/kg）甲胺磷甲胺磷1.71.7不得检出不得检出敌敌畏敌敌畏0.30.30.20.2对硫磷对硫磷1.71.7不得检出不得检出敌百虫敌百虫0.50.50.10.1水胺硫磷水胺硫磷3.13.1不得检出不得检出乐果乐果1.31.31.01.0马拉硫磷马拉硫磷2.02.0不得检出不得检出西维因西维因2.52.52.02.0久效磷久效磷2.52.5不得检出不得检出好年冬好年冬1.01.0不得检出不得检出乙酰甲胺乙酰甲胺磷磷3.53.50.20.2呋喃丹呋喃丹0.50.5不得检出不得检出412、速测仪、速测仪原理原理:在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药在一定条件下
24、，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药抑制率与农药的浓度呈正相关的浓度呈正相关。酶催化酶催化乙酰胆碱水解，其水解产乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质物与显色剂反应，产生黄色物质。用分光光度计在用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变处测定吸光度随时间的变化，计算出抑制率，通过化，计算出抑制率，通过抑制率抑制率可以判断出样品中可以判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。42农药残留快速测试仪农药残留快速测试仪43速测仪检测结果速测仪检测结果 判定依据 说明抑制
25、率小于等于50 合格抑制率大于50超标，说明含有有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制率与农药残留量成正相关，抑制率越高说明残留量越高44免疫分析技术免疫分析技术免疫分析技术免疫分析技术是将免疫反应与现代测试手段相是将免疫反应与现代测试手段相结合而建立的超微量分析技术，是基于结合而建立的超微量分析技术，是基于抗原抗体抗原抗体特异性结合和反应特异性结合和反应为基础的分析方法。为基础的分析方法。目前应用于农残检测的是目前应用于农残检测的是酶免疫分析酶免疫分析(EIA)和和放射放射性免疫分析性免疫分析(RIA)。其中。其中酶联免疫分析酶联免疫分析技术应用最技术应用最为普遍。为普遍。453、酶联免疫技术、酶联免
26、疫技术ELISAELISA是一种以酶作为标记物的免疫分析方法，是一种以酶作为标记物的免疫分析方法，也是目前应用最广泛的免疫分析方法之一，它将也是目前应用最广泛的免疫分析方法之一，它将酶标记在抗体抗原分子上形成酶标抗体酶标酶标记在抗体抗原分子上形成酶标抗体酶标抗原，酶作用于能呈现出颜色的底物，通过仪器抗原，酶作用于能呈现出颜色的底物，通过仪器或肉眼进行辨别。或肉眼进行辨别。46ELISA法基本原理法基本原理是预先结合在固相载体上的抗是预先结合在固相载体上的抗体或抗原分子与样品中的抗原或抗体分子在一定体或抗原分子与样品中的抗原或抗体分子在一定条件下进行免疫学反应。条件下进行免疫学反应。该法因不需昂
27、贵仪器设备，对人体无害等优点而该法因不需昂贵仪器设备，对人体无害等优点而被广泛采用，具有灵敏、特异、快速、稳定以及被广泛采用，具有灵敏、特异、快速、稳定以及易于自动化操作等特点。易于自动化操作等特点。47 目前，目前，ELISAELISA方法常用的固相方法常用的固相载体是载体是9696孔聚苯乙烯酶标板孔聚苯乙烯酶标板，常用的酶是常用的酶是辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶，常用的底物是常用的底物是邻苯二胺邻苯二胺和和四甲四甲基联苯胺基联苯胺等。等。酶标板 u型 96孔484、发光菌检测法、发光菌检测法农药与细菌作用后可影响农药与细菌作用后可影响细菌的发光程度细菌的发光程度，通，通过细菌发光情况，可测
28、出农药残留量。过细菌发光情况，可测出农药残留量。此方法简便但是特异性差此方法简便但是特异性差495、敏感家蝇检测法、敏感家蝇检测法敏感家蝇对杀虫剂具有敏感性，记录家蝇存活情敏感家蝇对杀虫剂具有敏感性，记录家蝇存活情况，根据家蝇的况，根据家蝇的死亡率死亡率可知农药残留情况。可知农药残留情况。该技术方法直接、过程简单、容易掌握，但定性该技术方法直接、过程简单、容易掌握，但定性粗糙，只对少数农药有效，而且由于其他生物对粗糙，只对少数农药有效，而且由于其他生物对不同农药的毒性反应与人畜可能不同，因此影响不同农药的毒性反应与人畜可能不同，因此影响对农药残留量的判断。如家蝇对毒性较低的对农药残留量的判断。
29、如家蝇对毒性较低的除虫除虫菊酯类菊酯类敏感，远超过有机磷和氨基甲酸酯类中毒敏感，远超过有机磷和氨基甲酸酯类中毒或高毒的农药。或高毒的农药。目前常用的化学比色法包括各种目前常用的化学比色法包括各种检测试剂检测试剂和和试纸试纸，两者都是利用迅速，两者都是利用迅速产生明显颜色产生明显颜色的化学反应的化学反应检测待测物质，可通过与检测待测物质，可通过与标准标准比色卡比色卡比较进行目视定性或半定量分析。比较进行目视定性或半定量分析。6、化学比色法、化学比色法 51 化学比色分析法与一般的仪器分析方法相比，化学比色分析法与一般的仪器分析方法相比，具有价格低，操作相对简便，结果显示直观，一具有价格低，操作相
30、对简便，结果显示直观，一次性使用，不需检修维护，有一定的灵敏度和专次性使用，不需检修维护，有一定的灵敏度和专一性等优点。随着检测仪器的不断发展，与其相一性等优点。随着检测仪器的不断发展，与其相配套的微型检测仪器也相应出现。如与试剂检测配套的微型检测仪器也相应出现。如与试剂检测方法相配套的方法相配套的微型光电比色计微型光电比色计目前已发展得比较目前已发展得比较成熟。成熟。52三、农药残留快速检测技术展望三、农药残留快速检测技术展望一些快速速检测方法与国家标准方法和仪器法一些快速速检测方法与国家标准方法和仪器法相比具有操作简单、快速的优点，但由于大多数相比具有操作简单、快速的优点，但由于大多数快速
31、检测方法在食品样品前处理、操作规范性方快速检测方法在食品样品前处理、操作规范性方面还有许多待完善之处，目前还只能作为快速筛面还有许多待完善之处，目前还只能作为快速筛选的手段而不能作为最终诊断的依据，兼具快速选的手段而不能作为最终诊断的依据，兼具快速和准确两大优点是快速检测方法追求的目标。和准确两大优点是快速检测方法追求的目标。方法方法检测对象检测对象国内外对比国内外对比化学检测技术化学检测技术 有机磷有机磷灵敏度低灵敏度低酶抑制检测技酶抑制检测技术术 有机磷和氨基甲酸有机磷和氨基甲酸酯酯 国国内内假阳性、假阴性率高，二十余家生产厂商，多种假阳性、假阴性率高，二十余家生产厂商，多种速测卡、速测仪
32、，速测卡、速测仪，GB/T 5009.199-2003GB/T 5009.199-2003；NY/T NY/T 448-2001 448-2001 国国外外测测定定样样品品和和农农药药种种类类有有限限，欧欧美美作作为为普普查查农农药药残残留留和和田田间间实实地地检检测测的的基基本本手手段段 ；AOAC AOAC 官官方方方方法法 964.17964.17免疫分析法免疫分析法 有机磷类、氨基甲有机磷类、氨基甲酸酯类、硫代氨基酸酯类、硫代氨基甲酸酯类、有机氯甲酸酯类、有机氯类、三嗪类、拟除类、三嗪类、拟除虫菊酯类和酰胺类虫菊酯类和酰胺类等几十种农药等几十种农药 国国内内研究活跃，但未有真正推广使用
33、的商品化产品研究活跃，但未有真正推广使用的商品化产品 国国外外技技术术成成熟熟，灵灵敏敏度度高高，FAOFAO推推荐荐方方法法，美美国国USDA USDA 、EPAEPA、AOACAOAC制制定定了了评评定定标标准准，但但经经认认证证的的有有限限，经经EPAEPA认认证证的的免免疫疫试试剂剂盒盒约约有有4 4个个厂厂家家的的2626种种试试剂剂盒盒：EPAEPA方方法法40104010、EPAEPA方方法法4015 4015 EPAEPA方方法法4040 4040 等等生物传感器生物传感器有机磷、氨基甲酸有机磷、氨基甲酸酯酯国国内内处于研究阶段处于研究阶段国国外外电电导导型型生生物物传传感感器
34、器 、光光寻寻址址电电位位型型传传感感器器 、安安培培型型传传感感器器 ，处处于于研研究究和和应应用用阶阶段段，并并未未广广泛泛推广使用推广使用农药快速检测技术农药快速检测技术第二节第二节兽药残留快速检测技术兽药残留快速检测技术1、兽药的概念：兽药的概念：u兽药是用于预防、治疗、诊断动物疾病的药兽药是用于预防、治疗、诊断动物疾病的药物或者有目的地调节动物生理机能的物质物或者有目的地调节动物生理机能的物质（含动物保健品和动物饲料添加剂）。（含动物保健品和动物饲料添加剂）。u兽药的主要用途是防病治病、促进生长、提兽药的主要用途是防病治病、促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质等高生产性能、改
35、善动物性食品的品质等一、兽药残留与食品安全意义一、兽药残留与食品安全意义2、兽药的种类、兽药的种类种类种类用用 途途常常 见见 品品 种种残留危害残留危害抗生抗生素类素类防治传染防治传染性疾病、性疾病、抗菌消炎抗菌消炎青霉素类、氨基糖苷类、大环青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、螺旋霉素、内酯类、四环素类、螺旋霉素、链霉素、土霉素、金霉素等链霉素、土霉素、金霉素等增强细菌耐药性，人体肠道增强细菌耐药性，人体肠道菌群失调、超敏反应、损害菌群失调、超敏反应、损害听力及肾脏听力及肾脏磺胺磺胺类类抗菌消炎抗菌消炎磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺眯、菌得清、新诺明等胺眯、菌
36、得清、新诺明等呋喃呋喃类类抗菌消炎抗菌消炎呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等因等胃肠反应、超敏反应，长期胃肠反应、超敏反应，长期摄入引起不可逆性末端神经摄入引起不可逆性末端神经损害，有致癌、致突变作用损害，有致癌、致突变作用激素激素类类提高生长、提高生长、发育、繁发育、繁殖速度殖速度固醇或类固醇类：己烯雌酚、固醇或类固醇类：己烯雌酚、孕酮、皋酮、雌二醇孕酮、皋酮、雌二醇多肽或多肽衍生物等多肽或多肽衍生物等影响正常生理机能，有一定影响正常生理机能，有一定的致癌性；导致儿童性早熟、的致癌性；导致儿童性早熟、发育异常和异性趋向等发育异常和异性趋向等抗寄抗寄生虫生虫类类驱虫或杀驱
37、虫或杀虫虫苯并咪唑（丙硫咪唑、丙氧咪苯并咪唑（丙硫咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑和丁唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑和丁苯咪唑）苯咪唑）左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等持久残留于肝内，对动物有持久残留于肝内，对动物有致畸性与致突变性致畸性与致突变性 其其 它它血清制品、疫苗、诊断制品、中药材、生化药品、放射性药品等血清制品、疫苗、诊断制品、中药材、生化药品、放射性药品等以下6种兽药不能长期应用，否则易超过动物食品张兽药限量：呋喃唑酮（痢特灵）呋喃唑酮（痢特灵）磺胺类磺胺类喹乙醇喹乙醇氯霉素氯霉素土霉素土霉素硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素3、兽药残留、兽药残留兽药残留：兽药残留：根据联合
38、国粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO）食品中兽药残留联合立法委员会的定义，兽药残留是指动物性产品的任何可食部分兽药残留是指动物性产品的任何可食部分含有兽药母体化合物或其代谢物，以及与兽药有含有兽药母体化合物或其代谢物，以及与兽药有关的杂质的残留。关的杂质的残留。兽药残留形式：兽药残留形式：原药、药物在体内的代谢产物、共价结合物原药、药物在体内的代谢产物、共价结合物兽药残留主要是由于不合理使用药物治疗疾病和作为饲料添加剂而引起。在兽药品应用方面，用于饲料添加剂占46%，治疗药品占43%，疫苗等生物药品占11%。我国滥用和超标使用兽药尤其是抗生素和激素类药物的状况是十分严重的。3、兽药残留现状
39、、兽药残留现状肉蛋奶的安全成肉蛋奶的安全成问题问题我国兽药残留安全问题“瘦肉精”（盐酸克伦特罗）中毒事件鲜牛奶中抗生素残留 进出口贸易受挫全球禁止，不得检出全球禁止，不得检出1、“瘦肉精瘦肉精”中毒中毒在养殖业中常见在养殖业中常见使用的激素类，使用的激素类，也叫盐酸克伦特也叫盐酸克伦特罗罗 瘦肉精中毒的临床表现为心动过速，面颈、四肢肌肉颤抖，头晕、头疼、恶心、呕吐，特别是对患有高血压、心脏病的病人，可能会加重病情导致意外。因此，全球禁止将其作为饲料添加剂。 2、鲜牛奶中抗生素残留、鲜牛奶中抗生素残留 国家质检总局的一条消息频繁见诸媒体：一项对中国北方市场的检测调查结果显示，在近800份乳品采样
40、中，抗生素残留超标居不合格项目第一位，其次是汞和铅超标。奶粉、奶片、冰激凌等奶制品生产原则是一般不用好奶。温馨提示 思考：为什么酸思考：为什么酸奶都是无抗奶？奶都是无抗奶？购买伊利、光明等生产厂家推出的无抗奶。担心有抗奶，就喝酸奶。20022002年，外经贸部收到驻欧使团经商年，外经贸部收到驻欧使团经商处的处的特级报告：特级报告：欧盟委员会拟讨论通过全面禁止欧盟委员会拟讨论通过全面禁止从中国进口所有动物源性产品的决议。从中国进口所有动物源性产品的决议。 由于欧盟的禁令，美国、日本等由于欧盟的禁令，美国、日本等国已高度关注我国出口水产品的质量。国已高度关注我国出口水产品的质量。 3、进出口贸易受
41、挫、进出口贸易受挫谁来解决我放心吃鱼虾的问题进出口贸易受挫进出口贸易受挫 据悉，自从一九八六年欧盟严格执行肉类食品法规以来，中国的猪肉就基本上无法进入欧盟市场；日本则根据国际流行病疫情报告，把中国列入“三类地区”，从此中国的猪、羊、牛肉也基本上无法进入日本市场。 随着我国加入随着我国加入WTOWTO，我国畜产品在国际贸易中将面，我国畜产品在国际贸易中将面临更加激烈的竞争环境，药物残留往往是引发国际临更加激烈的竞争环境，药物残留往往是引发国际贸易中非贸易性技术壁垒障碍的导火线。贸易中非贸易性技术壁垒障碍的导火线。欧盟以氯霉素残留超标为由暂停中国蜂蜜进口案欧盟以氯霉素残留超标为由暂停中国蜂蜜进口案
42、我国年产蜂蜜约我国年产蜂蜜约20万吨、蜂王浆万吨、蜂王浆1000吨，吨，年创汇年创汇1亿多美元，蜂群数量和主要蜂产品亿多美元，蜂群数量和主要蜂产品出口均居世界第一，其中欧洲一直是我国出口均居世界第一，其中欧洲一直是我国蜂蜜出口的主要市场。由于蜂蜜出口的主要市场。由于“抗生素超标抗生素超标”，我国蜂蜜在国际市场上的价格和数量，我国蜂蜜在国际市场上的价格和数量优势丧失殆尽，大批已经出口至欧洲国家优势丧失殆尽，大批已经出口至欧洲国家的蜂蜜惨遭退货，我国蜂蜜出口由此受到的蜂蜜惨遭退货，我国蜂蜜出口由此受到严重影响。据天津口岸严重影响。据天津口岸2002年第一季度的年第一季度的数据显示，与数据显示，与2
43、001年年3月同期相比，蜂蜜月同期相比，蜂蜜的整体出口总量下降了的整体出口总量下降了70，出口总值下出口总值下降了降了65.4。因氯霉素结构中的硝基因氯霉素结构中的硝基苯根能抑制血细胞线粒苯根能抑制血细胞线粒体蛋白质的合成，导致体蛋白质的合成，导致线粒体的损坏。如果使线粒体的损坏。如果使用氯霉素不当，将会引用氯霉素不当，将会引起再生障碍性贫血起再生障碍性贫血。 饲用含兽药的饲料及饲料添加剂饲用含兽药的饲料及饲料添加剂不恰当用药不恰当用药随意加大药物用量随意加大药物用量用药错误或未做用药记录用药错误或未做用药记录没有按规定执行应有的没有按规定执行应有的休药期休药期使用未经批准的或禁用的兽药使用未
44、经批准的或禁用的兽药屠宰前使用兽药屠宰前使用兽药（通常（通常屠宰前屠宰前10天要禁药）天要禁药）食品加工过程受到污染（如食品保鲜）食品加工过程受到污染（如食品保鲜）4、兽药残留的来源、兽药残留的来源（以抗生素残留为代表以抗生素残留为代表）禽畜末次给药到允许屠禽畜末次给药到允许屠宰或它们的产品（乳宰或它们的产品（乳蛋蛋等）许可上市的间隔时等）许可上市的间隔时间，通常间，通常47天。天。5、兽药残留的危害、兽药残留的危害（以抗生素残留为代表以抗生素残留为代表）毒性作用毒性作用过敏反应和变态反应过敏反应和变态反应细菌耐药性细菌耐药性菌群失调菌群失调“三致三致”作用作用激素的副作用激素的副作用造成经济
45、损失造成经济损失6、兽药残留的控制、兽药残留的控制有效的监督管理和检测体系建设有效的监督管理和检测体系建设加强药物的合理使用规范加强药物的合理使用规范严厉查处违禁药物用作饲料添加剂严厉查处违禁药物用作饲料添加剂谨慎使用抗生素谨慎使用抗生素饲饲料料生生产产过过程程中中药药物物添添加加剂剂污污染染的的控控制制：药药物物添添加加剂剂型型选选择择、药药物物添添加加的的管管理理、加加工工和和设备清洗、标签设备清洗、标签严格规定休药期和指定动物性食品药物的最严格规定休药期和指定动物性食品药物的最高残留限量（高残留限量（MRL）在消费环节没有很好的办法去除残留在动物性食品在消费环节没有很好的办法去除残留在动
46、物性食品中的兽药中的兽药兽药最高残留限量兽药最高残留限量(MRL)(MRL)动物用药后产生的允许存在于食品表面或内部的改兽药残动物用药后产生的允许存在于食品表面或内部的改兽药残留的最高量。留的最高量。 ( (单位单位ggkgkg，以鲜重计，以鲜重计) )。二、食品二、食品中兽药残留控制及其分析中兽药残留控制及其分析为有效控制兽药残留，各国都制定了兽药使用的法律与法规及使用的有关标准。休药期：是指动物从停止给药到许可屠宰或它们的乳、蛋等产品许可上市的间隔时间。奶废弃期：即奶牛从停止给药到它们所产的奶许可上市的间隔时间。兽药残留分析技术的特点兽药残留分析技术的特点q待测物质浓度低待测物质浓度低q样
47、品基质复杂，干扰物质多样品基质复杂，干扰物质多q兽药残留代谢产物多样或不明兽药残留代谢产物多样或不明q动物种类多样，对药物代谢存在差异动物种类多样，对药物代谢存在差异对检测方法的要求对检测方法的要求q快速快速q高通量高通量(high throughput)q定量定量q准确度和精确度准确度和精确度(accuracy & precision)q确确证(unequinocal identification)q法定的和法定的和QC食品兽药残留的传统检测分析方法食品兽药残留的传统检测分析方法qGC-MSqLC-MS耗时长、设备昂贵、试剂消耗量大，不耗时长、设备昂贵、试剂消耗量大，不易推广。易推广。 高通
48、量高通量、低成本、快低成本、快速敏感性好、再现性好、操速敏感性好、再现性好、操作容易、不需昂贵的仪器。作容易、不需昂贵的仪器。p筛选方法：筛选方法：微生物法、免疫化学方法（ELISA）等p确证方法：确证方法：HPLC、GC、GC-MS、LC-MS、 LC-MS-MS理想的理想的仪器装器装备q样品品经简单处理即可上机理即可上机测定定q不需萃取和不需萃取和净化化q快速、准确的定量分析快速、准确的定量分析q自自动的的资料料处理理食品中食品中兽药残留快速残留快速筛选检测常用常用方法：方法：微生物法微生物法免疫法免疫法色色谱法法抗生素种类繁多，结构复杂，测定方法各不相同。因而给检测工作带来了许多困难。抗
49、生素的测定方法进展很快。三、三、食品中抗生素食品中抗生素残留快速检测残留快速检测方法方法微生物法、免疫法、理化仪器法微生物法、免疫法、理化仪器法是是食品中食品中抗生素残留检测常用的抗生素残留检测常用的3种方法种方法二、食品中抗生素残留检测方法二、食品中抗生素残留检测方法1.微生物法微生物法如如“TTC试验试验”基于抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用，基于抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用，来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留。以扩来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留。以扩散过程或浑浊度为基础。抗生素浓度越高，微生物散过程或浑浊度为基础。抗生素浓度越高，微生物的生长受抑制程度越大
50、，菌落越小。的生长受抑制程度越大，菌落越小。微生物法试剂盒：分析样品数量、操作便捷、灵敏微生物法试剂盒：分析样品数量、操作便捷、灵敏度高、条件要求低度高、条件要求低适合：养殖场、食品加工车间适合：养殖场、食品加工车间（1）平皿法以抑菌区域为检测指标动物源性食品抗生素类药物残留检测动物源性食品抗生素类药物残留检测用尺子测量从棉试子边缘用尺子测量从棉试子边缘到抑菌圈边缘的距离，样到抑菌圈边缘的距离，样品周围有大于品周围有大于2毫米的抑毫米的抑菌区域证明阳性（含有抗菌区域证明阳性（含有抗生素）；没有抑菌区域表生素）；没有抑菌区域表明样品为阴性。明样品为阴性。先枯草杆菌悬液放于培养皿先枯草杆菌悬液放于
51、培养皿中，再将样品接种到培养皿，中，再将样品接种到培养皿，在恒温箱中培养在恒温箱中培养1624h培养基培养基I培养基培养基II阴性阴性最低检测限最低检测限 阳性阳性其他药物残留其他药物残留（2）生化检测法牛乳等液体样品主要利用培养基pH等因素改变引起指示剂颜色变化的生物化学原理来指示检测结果.检测法/试剂盒：TTC、Delvotest、Charm Science等。鲜乳中抗生素残留量的测定（鲜乳中抗生素残留量的测定（TTC试验）试验） （一）原理（一）原理 当乳中含有抗生素时，标准菌株嗜热链球菌的生长受到抑制，不能将指示剂2,3,5氯化三苯基四氮唑（TTC）还原为无色。反之，当乳中抗生素不存在
52、时，加入的标准菌株，就会大量生长繁殖，而且将TTC还原为红色化合物红色化合物。其红色强度与细菌数量成正比。 本法对各种抗生素的最低检出量：青霉素为0.004IU/mL，链霉素为0.5IU/mL，庆大霉素为0.4IU/mLTTC法为鲜乳中抗菌药物残留检测的标准方法。法为鲜乳中抗菌药物残留检测的标准方法。2，3，5氯化氯化三苯四氮唑试验三苯四氮唑试验（TTC试验）试验）嗜热乳酸嗜热乳酸链球菌链球菌（二）注意事项（二）注意事项 1.本法的正确性与菌种的活力有密切关系。如菌种活力减弱时，应多次反复传代加强活力。 2.每次检验每个样品应一式二份，另外要作阴性、阳性对照各2管，阴性对照管作无抗生素乳9mL
53、，阳性对照管用无抗生素乳9mL加抗生素。 3.水浴培养要避光，保持37，水面高于被检样品，判断要迅速；检样经80水浴加热5min，要严格掌握。 4.制备培养基的乳要绝对无抗生素存在；操作所用试管、吸管均须经灭菌。89四环素类抗生素残留量的测定四环素类抗生素残留量的测定 食品中四环素类抗生素的测定多采用微生物法原理原理 样品经提取，用离子交换树脂分离，甲醇溶剂洗脱，经浓缩，残渣用Mcllvaine缓冲液溶解，经荧光鉴定，然后用微生物法进行定量测定。本方法的最低检出量为0.05mg/kg。90其它抗生素也可用此法进行测定，只是试验的菌其它抗生素也可用此法进行测定，只是试验的菌种不同或培养基不同。种
54、不同或培养基不同。 测定青霉素为金黄色葡萄球菌，链霉素或双氢链霉素为枯草杆菌（6633），氯霉素为卵黄色八叠球菌（9341），新生霉素为白色葡萄球菌。 2、免疫检验法免疫检验法通过检测食品中的抗抗生素抗体来确定抗生素含量。通过检测食品中的抗抗生素抗体来确定抗生素含量。基于抗生素（抗原）刺激动物产生相应的应急反应，基于抗生素（抗原）刺激动物产生相应的应急反应，从而形成抗体。从而形成抗体。优点：操作简单，速度快、取样量小，前处理简单、容量大，优点：操作简单，速度快、取样量小，前处理简单、容量大，仪器化程度低，灵敏度高，适用于现场监控和大量样品的筛仪器化程度低，灵敏度高，适用于现场监控和大量样品的筛
55、选，具有广阔的应用前景选，具有广阔的应用前景缺点：直接测定存在样本信息量太少，假阳性和理化分析技缺点：直接测定存在样本信息量太少，假阳性和理化分析技术选择性低，当样品中含有与某类抗生素结构相似的化合物术选择性低，当样品中含有与某类抗生素结构相似的化合物时，可能出现免疫交叉反应而呈现假阳性结果时，可能出现免疫交叉反应而呈现假阳性结果免疫学方法快速免疫学方法快速检测放射免疫分析酶联免疫分析免疫分析荧光免疫分析发光免疫分析胶体金免疫分析胶体金免疫分析兽药残留免疫学快速检测方法的建立重要包括：检测对象的象的选择检测对象结构分析免疫半抗原的合成免疫半抗原的合成人工人工结合抗原的制合抗原的制备与与鉴定定抗
56、体的制备检测方法的确立与方法评价等。1、药物物结构分析和半抗原的合成构分析和半抗原的合成兽药多为小分子化合物（分子量小于5000Da），不具备免疫原性，需先和大分子载体偶联后方可用于抗体的生产。多数情况下，检测对象的结构不适合用于直接和蛋白质等载体直接偶联，需要进行抗原改造。半抗原改造的原则：和载体偶联后可以最大限度地暴露原药物的结构特征。2 2、人工结合抗原的制备、人工结合抗原的制备通过选择小分子半抗原中的活性基团或者改造后加入的活性基团，选择适当的偶联试剂、载体蛋白和连接条件进行人工结合抗原的制备。3、抗体的制、抗体的制备多克隆抗体多克隆抗体动物免疫、抗体纯化、鉴定高度异质性，不同个体产生
57、的抗体成分不同单克隆抗体克隆抗体动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞株的建立、抗体的生产及鉴定永续性、高度均一性4、检测方法的建立方法的建立胶体金免疫层析法（速测卡、胶体金试纸条、速测试纸条）酶联免疫吸附测定法放射免疫及荧光免疫测定法生物感应器主要由两个元件组成：生物学识别元件（通常是一个抗体）；信号转换元件连接着数据采集和处理系统的精密接触元件。分析靶标与生物受体(抗体）结合产生信号，该信号被不同原理的传感器转换成电子信号，然后被计算机等处理成最后的结果。3、理化仪器分析方法理化仪器分析方法常用高效液相色谱（常用高效液相色谱（HPLC）和质谱（）和质谱（MS）对抗生）对抗生素进行定量、定性的测定，
58、主要是基于它们测定痕素进行定量、定性的测定，主要是基于它们测定痕量物质的优越性。量物质的优越性。优点：分离速度快、优点：分离速度快、效率高和操作可自动效率高和操作可自动化，已成为大多数抗化，已成为大多数抗生素残留的常规分析生素残留的常规分析方法。目前，方法。目前，HPLC方法已用于红霉素、方法已用于红霉素、庆大霉素、羧苄青霉庆大霉素、羧苄青霉素和吩羧青霉素残留素和吩羧青霉素残留的测定。的测定。央视央视每周质量报告每周质量报告播出播出315特别节目特别节目“健美猪健美猪”真相真相盐酸克伦特罗检测卡盐酸克伦特罗检测卡克伦特罗为白色结晶粉末，易溶于水、醇类、微溶于克伦特罗为白色结晶粉末，易溶于水、醇
59、类、微溶于氯仿。氯仿。作用机理：作用机理：克伦特罗克伦特罗选择性作用于动物选择性作用于动物-肾上腺素能肾上腺素能受体，激活腺甘酸环化酶，使环磷酸苷受体，激活腺甘酸环化酶，使环磷酸苷(cAMP)增加，增加，加强脂肪分解，促进蛋白质合成，实现动物营养再分加强脂肪分解，促进蛋白质合成，实现动物营养再分配，可提高动物的瘦肉率。配，可提高动物的瘦肉率。 克伦特罗克伦特罗-受体受体酶酶ATPcAMP脂肪分解脂肪分解蛋白合成蛋白合成营养再分配营养再分配提高瘦肉率提高瘦肉率在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善种生长促进剂添加到动物饲
60、料中，用以改善胴体的品质；胴体的品质；同时也造成动物性食品中盐酸克伦特罗（瘦同时也造成动物性食品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）的残留。肉精）的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗（瘦肉精）残当人们食用含有盐酸克伦特罗（瘦肉精）残留的产品后会产生一定的中毒症状。留的产品后会产生一定的中毒症状。克伦特罗的毒性克伦特罗的毒性心血管系统：心血管系统：心悸、心慌、头晕头痛等临床症状心悸、心慌、头晕头痛等临床症状神经系统神经系统恶心、呕吐、肌肉疼痛、肌肉颤抖、兴奋、不自主恶心、呕吐、肌肉疼痛、肌肉颤抖、兴奋、不自主地颤抖、运动障碍地颤抖、运动障碍禁忌症禁忌症心脏病、糖尿病、高血压、青光眼、甲亢心脏病、糖尿病、高血压
61、、青光眼、甲亢中中毒毒剂剂量量人医用药量：人医用药量：0.020.5g/kg中毒一般含量：中毒一般含量：肝脏肝脏100500g/kg中毒极端含量：中毒极端含量：肝脏肝脏195395g/kg以克以克伦特特罗快速快速检测 金标（胶体金）快速检测试纸金标（胶体金）快速检测试纸 金标（胶体金）快速检测卡金标（胶体金）快速检测卡金标试纸金标试纸金标检测卡金标检测卡金金标检测技技术的的基本原理基本原理金标免疫检测试纸条系统使用一种特殊的多孔膜（金标免疫检测试纸条系统使用一种特殊的多孔膜（NCNC膜）作为固相载体。膜）作为固相载体。该膜具有很强的蛋白吸附功能，抗体抗原吸附于该膜具有很强的蛋白吸附功能，抗体抗
62、原吸附于NCNC膜并经干燥处理后即作膜并经干燥处理后即作为固相，可与液相中的相应标记了胶体金的抗原抗体快速结合。为固相，可与液相中的相应标记了胶体金的抗原抗体快速结合。 在湿润状态下，液相中的抗原抗体免疫金可因在湿润状态下，液相中的抗原抗体免疫金可因“灯芯引流现象灯芯引流现象”作快作快速定向泳动并与固相另一抗原决定簇单抗结合，形成特异的金标记抗体速定向泳动并与固相另一抗原决定簇单抗结合，形成特异的金标记抗体抗原抗体红色沉积线，表现出抗原抗体的特征反应。抗原抗体红色沉积线，表现出抗原抗体的特征反应。BSABSA偶联的克伦特罗分子与胶体偶联的克伦特罗分子与胶体金颗粒结合，包被在玻金颗粒结合，包被在
63、玻纤纤上上标记抗原的金抗原的金颗粒粒在纤维素膜上分别将克伦特罗抗体和在纤维素膜上分别将克伦特罗抗体和BSABSA抗体分别包被在检测区（抗体分别包被在检测区（T T）和质）和质控区（控区（C C）抗体抗体试剂条组装试剂条组装被标记的金颗粒被标记的金颗粒样品垫样品垫滤纸滤纸抗体抗体加入样品加入样品样品流动样品流动试剂条检测试剂条检测样品中没有克品中没有克伦特特罗时： 金颗粒上的金颗粒上的克伦特罗克伦特罗抗抗原和纤维素膜上抗体的原和纤维素膜上抗体的结合，检测区结合，检测区T线显示红线显示红色。色。样品中有高浓度的克伦特罗（样品中有高浓度的克伦特罗（3ppb ）时：）时： 由于样品中由于样品中克伦特罗
64、克伦特罗的分的分子与金颗粒上子与金颗粒上克伦特罗抗原竞争克伦特罗抗原竞争与与纤维素膜上的抗体结合，当样纤维素膜上的抗体结合，当样本中本中克伦特罗浓度较高，克伦特罗浓度较高，胶体金胶体金偶联物不能与克伦特罗抗体结合，偶联物不能与克伦特罗抗体结合，T T线不显色；当样本中线不显色；当样本中克伦特罗克伦特罗低于一定值，低于一定值，T T线紫红色线条。线紫红色线条。T线线C线线 这样，在高浓度的情况下，即使这样，在高浓度的情况下，即使T线不出现，只要线不出现，只要C 线线出现，就知道试剂没有问题。而如果连出现，就知道试剂没有问题。而如果连C线都没有，则可线都没有，则可知道是试剂有问题，该包装的试剂应该
65、弃用。这样就避免知道是试剂有问题，该包装的试剂应该弃用。这样就避免了假阳性的结果。了假阳性的结果。3ppb1ppb0.5ppb0ppb阳性阳性阴性阴性金标卡金标卡检测操作与注意事项检测操作与注意事项1）.检测准备检测准备（1）准备：）准备：试剂盒试剂盒尿尿样样记录本记录本记号笔记号笔计时器计时器操作步骤操作步骤（2）打开试剂盒）打开试剂盒（3）阅读说明书）阅读说明书（1）取出检测卡：根据）取出检测卡：根据检测样品数量确定需要检测样品数量确定需要的检测卡数量的检测卡数量2）.操作操作（2）检测卡放置：在平）检测卡放置：在平坦的台面上坦的台面上（3）检测卡标记（必要）检测卡标记（必要时）：标记上尿
66、样编号时）：标记上尿样编号2）.操作操作（4）吸取尿样：用试剂）吸取尿样：用试剂盒带的滴管吸取尿样盒带的滴管吸取尿样（5）滴加尿样：滴管）滴加尿样：滴管垂垂直直滴加滴加2滴滴尿样于加样尿样于加样孔（孔（S）中）中（6）观察结果：肉眼观察紫红条带的出现，测试结果应在）观察结果：肉眼观察紫红条带的出现，测试结果应在5min时读取时读取2）.操作操作3）.结果判定结果判定阳性（阳性（+）：仅质控区（）：仅质控区（C）出现一条紫红色带，在测试区（）出现一条紫红色带，在测试区（T）内无紫）内无紫红色条带出现。表明尿液中的克伦特罗残留物大于红色条带出现。表明尿液中的克伦特罗残留物大于3ppb。阴性（阴性（
67、-）：两条紫红色条出现。一条位于测试区（：两条紫红色条出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于）内，另一条位于质控区内（质控区内（C）。表明尿液中不含克伦特罗残留物或小于）。表明尿液中不含克伦特罗残留物或小于3ppb。无效：质控区（无效：质控区（C）未出现紫红色条带，）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或检测卡已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 未加样前未加样前阴性阴性阳性阳性无效无效2.2.注意事项注意事项1）.存储与使用存储与使用（1）储存：室温（储存：室温（2-40）阴凉）阴凉干燥处，
68、忌冷冻。干燥处，忌冷冻。（2 2）使用：）使用：室温（室温（2-40）使用，）使用，检测卡取出检测卡取出20min内使用，避免受内使用，避免受潮失效。潮失效。（3）反应：检测卡避免阳光直射、）反应：检测卡避免阳光直射、空调或风扇直吹。空调或风扇直吹。注意事项注意事项2）.操作过程操作过程（1）检测卡放置：放置于水平的台检测卡放置：放置于水平的台面上面上，忌倾斜。，忌倾斜。（2 2）加样：）加样：尿样加入加样孔中，不要加入检测尿样加入加样孔中，不要加入检测区；区；垂直滴加垂直滴加2 2滴尿样，不要整管加入滴尿样，不要整管加入（3）结果判读：）结果判读：测试结果在测试结果在5min时判读时判读注意
69、事项注意事项3）.样品准备样品准备一般澄清尿样可直接用于检测，一般澄清尿样可直接用于检测，较为浑浊尿样建议离心或过滤后较为浑浊尿样建议离心或过滤后用于检测用于检测4）.包装袋使用包装袋使用未用完检测卡的包装袋要确认封口密未用完检测卡的包装袋要确认封口密封，以免产品受潮封，以免产品受潮无效结果与可能原因无效结果与可能原因无效结果无效结果正常结果正常结果阳性阳性阴性阴性白板白板无无C线线出线淡出线淡不跑板不跑板可能原因可能原因1.包装袋密封不好，产品受潮包装袋密封不好，产品受潮2.检测卡未水平放置检测卡未水平放置3.尿样加入检测区尿样加入检测区4.尿样加样量太多或太少尿样加样量太多或太少5.不洁净
70、尿样，如含有漂白粉、不洁净尿样，如含有漂白粉、明矾，或浑浊尿样明矾，或浑浊尿样6.检测环境温度过低检测环境温度过低7.产品过期产品过期8.其他原因其他原因盐酸克酸克伦特特罗检测卡适用于猪肉、内卡适用于猪肉、内脏、猪尿液中国、猪尿液中国盐酸酸克克伦特特罗含量的含量的检测；灵敏度（灵敏度（阈值）：不同）：不同规格格3ng/ml(kg)、5ng/ml(kg)、6ng/ml(kg)等等针对猪组织和尿液采样不同类型的检测卡，使用时应区别使用；肉及内脏中脂肪会导致假阳性结果，取样时需剔除肉眼可见的脂肪；检测卡应在在常温下使用，不用对刚屠宰或冷冻猪肉直接进行检测；自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照，可
71、用阈值接近的几个浓度阶梯来校验检测卡的灵敏度。莱克多巴胺检测卡莱克多巴胺检测卡莱克多巴胺检测卡莱克多巴胺检测卡氯霉素检测卡氯霉素检测卡氯霉素检测卡氯霉素检测卡牛乳中青霉素牛乳中青霉素酶活活检测试剂盒盒适用范围：检测牛乳中残留的青霉素酶检测原理：采用间接竞争法，利用青霉素酶可分解牛奶样品中的-内酰胺类抗生素的原理，通过配体-受体识别法快速测定与青霉素酶反应后残留的青霉素G的含量，从而检测牛奶样品中残留的青霉素酶。本试剂盒一个小时内便可检测到牛奶样品中残留的青霉素酶，在403温育45分钟后，极低浓度的青霉素酶便可以催化水解4ppb的青霉素G。试剂盒组成：试剂盒组成：青霉素酶活性检测试剂盒所含有的试
72、剂： 含有特定浓度青霉素G的玻璃试剂瓶； 试剂筒（包括8孔微孔试剂和8条测试条） 微量移液器配套吸头96支 阴性质控（不含抗生素和酶的原奶干粉），浅绿色操作要点：操作要点：吸取400l牛奶样品加到含有一定浓度青霉素G的玻璃试剂瓶中，混合均匀403温育45分钟吸取200l温育后牛奶样品加到装有冻干试剂的微孔中，混合均匀403温育3分钟测试条插入到微孔中403下继续温育3分钟判读结果整个检测过程分为三个步骤，需下面三个要素：1. 将待测牛奶样品加入到含有一定浓度青霉素G的玻璃试剂瓶中于403温育45分钟。2. 在第二个403温育3分钟过程中，未被分解的青霉素G会与金颗粒标记的青霉素受体结合。3.
73、在第三个403温育3分钟过程中，在测试条的检测线（T线）处可以检测到剩余的青霉素受体。结果判定：结果判定：阳性（+）:如果牛奶样品中含青霉素酶，不能抑制青霉素受体与俘获带的结合，所以在测试条上检测线（T线)会出现红色条带，而控制线（C线）区会出现浅红色条带。阴性（-）：如果牛奶样品中没有掺杂青霉素酶，或者青霉素酶含量少于可检测到的范围，玻璃瓶中的青霉素G会与青霉素受体结合，从而将会抑制青霉素受体与俘获带的结合，所以在测试条上只有控制线（C线）区一个条带显色。126三、食品中激素的测定三、食品中激素的测定 由于动物性食品中性激素的含量极微，所以一般的测定方法受到了限制，较常用的方法有薄层色谱法、
74、荧光分析法、气相色谱法和高效液相色谱法等。其中高效液相色谱法具有更大的优越性，并有取代其它方法之势。 （一）、性激素总量的测定（薄层色谱法）一）、性激素总量的测定（薄层色谱法） 1、原理、原理 样品中的性激素经有机溶剂提取、浓缩，在硅胶G薄层板上点样、展开后，以硫酸显色，与标准斑点进行比较，从而达到定性和半定量的目的。1272、注意事项、注意事项1）.薄层色谱法可用于性激素的鉴别、半定量测薄层色谱法可用于性激素的鉴别、半定量测定以及含量测定前的分离。定以及含量测定前的分离。2）.由于性激素的种类多，故所用的溶剂系统、由于性激素的种类多，故所用的溶剂系统、吸附剂、展开剂和显色剂不能一概而论。可根
75、据吸附剂、展开剂和显色剂不能一概而论。可根据具体情况，挑选效果最佳者使用。具体情况，挑选效果最佳者使用。128 （二）、雌激素残留量的测定（包括己烯二）、雌激素残留量的测定（包括己烯雌酚的测定）（荧光分光光度法雌酚的测定）（荧光分光光度法) )1、荧光分光光度法、荧光分光光度法 1）. 原理原理 样品中雌激素经盐酸水解为甾体缀合样品中雌激素经盐酸水解为甾体缀合物，用有机溶剂提取后，再经硫酸处理，在紫外物，用有机溶剂提取后，再经硫酸处理，在紫外光照射下，产生光照射下，产生蓝色蓝色蓝色蓝色荧光；其激发波长荧光；其激发波长542nm542nm，发，发射波长射波长560nm560nm，根据荧光强度，可
76、测定雌激素的含，根据荧光强度，可测定雌激素的含量。量。129 2）. 注意事项注意事项 (1)本法测定的是雌激素的总量，包括雌酮、雌二醇和雌三醇。 (2)操作过程中加入氢醌，可防止荧光产物氧化，增进荧光的稳定性；二氯甲烷溶剂中加入对硝基苯酚也起增进荧光稳定性的作用。 (3)因为雌激素有酚羟基存在而呈弱酸性，用碳酸氢钠缓冲液（pH 10.5）洗涤，可将那些强酸性物质洗掉。 130 (4)测定中用NaOH振摇，可使雌激素转入NaOH 液层，而中性甾体仍留在有机相中，起到清除杂质的作用。 (5)在作乙醚提取之前，加入固体碳酸氢钠调节pH至10，是乙醚定量提出雌激素的关键。1312 2、液相色谱法、液
77、相色谱法 1）.原理原理 试样匀浆后，以甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，以紫外检测器鉴定。于波长230nm处测定吸光度，同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，试样与工作曲线比较定量。本法适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留量的测定。132 2 2）. .分析步骤分析步骤 （1 1）提取及净化：甲醇）提取及净化：甲醇 （2 2）色谱条件）色谱条件 （3 3）绘制标准曲线）绘制标准曲线 （4 4）测定）测定133 3.注意事项注意事项（1）对主要影响因素甲醇、磷酸二氢钠、）对主要影响因素甲醇、磷酸二氢钠、pH采用正交试验选择最佳实验条件。采用正交试验选择最佳实验条件。（2）本法采用两次提取（甲醇），离心、）本法采用两次提取（甲醇），离心、过滤，回收率高，但灵敏度不太高。过滤，回收率高，但灵敏度不太高。（3）使用流动相时，预先进行超声波脱气，）使用流动相时，预先进行超声波脱气，以防气泡堵塞色谱柱。以防气泡堵塞色谱柱。134THEEND！
