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1、实验实验4 4细菌革兰氏染色法细菌革兰氏染色法pptppt课件课件Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal University课前提问与目的要求课前提问与目的要求【课前提问课前提问】1.1.油镜的特点及使用范围是什么？油镜的特点及使用范围是什么？2.2.革兰氏染色的原理是什么？革兰氏染色的原理是什么？【目的要求目的要求】1. 1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法；学习并掌握油镜的原理和使用方法；2. 2. 了解革兰氏染色原理；了解革兰氏染色原理；3. 3. 学习并掌握革兰氏染色的方法。学习并掌握革兰
2、氏染色的方法。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hube
3、i Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal University【方法步骤方法步骤】4 4）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色）复染：将玻片上
4、残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min2min，水洗，吸去残水晾干（图，水洗，吸去残水晾干（图4-14-1）。）。3.3.镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。4.4.混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。菌混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。菌龄和脱色程度对染色结果影响较大。龄和脱色程度对染色结果影响较大。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei
5、 Normal University【方法步骤方法步骤】A. A. 初染初染B. B. 水洗水洗C. C. 媒染媒染D. D. 水洗水洗E. E. 脱色脱色F. F. 水洗水洗G. G. 复染复染H. H. 水洗水洗I. I. 吸干吸干图图4-1 4-1 革兰氏染色程序革兰氏染色程序Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal University【方法步骤方法步骤】获得本实验成功的关键：获得本实验成功的关键：1 1）选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染）选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏
6、阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。成红色而造成假阴性。2 2）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。3 3）脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，）脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。脱色过度造成假阴性。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal University【实验结果实验结果】图图4-2 4-2 大肠杆菌染色结果大肠杆菌染色结果 图图4-3 4-3 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合染色结果大肠杆菌和金黄色
7、葡萄球菌混合染色结果Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal University【注意事项注意事项】涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。过热（以玻片不烫手为宜）。加热时使用载玻片夹子及试管夹，以免烫伤。加热时使用载玻片夹子及试管夹，以免烫伤。使用染料时注意避免沾到衣物上。使用染料时注意避免沾到衣物上。使用乙醇脱色时勿靠近火焰。使用乙醇脱色时勿靠近火焰。实验后洗手。实验后洗手。Central Laborato
8、ry of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal University【实验报告实验报告】1. 1. 结果结果1 1）绘出油镜下观察的混合区菌体图像。）绘出油镜下观察的混合区菌体图像。2 2）填表）填表 菌名菌名菌体颜色菌体颜色细菌形态细菌形态结果（结果（G G+ +,G,G- -）大肠杆菌大肠杆菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表表4-1 4-1 结果记录表结果记录表Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal University2. 2. 思考题思考
9、题1 1）革兰氏染色是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？）革兰氏染色是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？2 2）现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，请你鉴定该）现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，请你鉴定该菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，如何确定你染色结果的正确菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，如何确定你染色结果的正确性？性？3 3）为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？）为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？4 4）你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略？在何种情况下）你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略？在何种情况下可以省略？可以省略？【实验报告实验报告】Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences, Hubei Normal UniversityCentral laboratory of Biology生物学实验教学中心Thanks for your attention!
