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1、胶乳凝集试验胶乳凝集试验RFRF测定测定实验原理以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验间接凝集试验： 聚苯乙烯颗粒具有很强的吸附蛋白质的能力，借此将抗原（变性IgG）与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与待测标本中的抗体（RF）发生凝集反应。 RF为抗变性IgG的抗体，因此本实验使用的是人IgG致敏的聚苯乙烯颗粒。试剂和器材RF检测试剂（商品化试剂）RF阴性血清和阳性血清（试剂盒自带）黑色反应板、滴管、搅拌棒等操作方法1.在黑色反应板上取3格，用滴管分别加待测血清、阳性血清和阴性血清各1滴，然后每格加入1滴致敏胶乳颗粒试剂。2.用搅拌棒充分混匀后，连续摇动23min后与对照比较，观察结果。结果判断胶
2、乳颗粒凝集且液体澄清者为阳性， 胶乳颗粒不凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性；首先观察阳性血清和阴性血清的反应结果，若前者为阳性反应后者为阴性反应，说明试剂有效；然后再观察待测样品的反应情况，并判断阴阳性。方法学评价该试验方法简单、快速、特异性强、结果清晰易观察判断。观察时应注意排除非特异性凝集反应。如何进行半定量分析？ CICCIC测定测定实验原理： PEG沉淀法 聚乙二醇（PEG），分子量6000，具有较强的脱水作用，可引起蛋白质沉淀，沉淀具有选择性且对蛋白质生物活性无影响。是免疫浊度测定技术中常用的增浊剂。PEG沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关：沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关：2%PEG只能沉淀
3、大分子， 4%PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物 大于5%PEG，选择性沉淀特性消失。在在PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的越大，用以沉淀的PEG浓度越小。浓度越小。分离血清免疫复合物一般采用最终浓度为3%4%PEG。血清中加入最终浓度约为3.5%的的PEG后，其浊度与血清中免疫复合物含量相关，用分光光度计测定其A值，代表免疫复合物相对含量。试剂和器材试剂1：0.1mol/L PH8.6硼酸缓冲液 试剂2：3.75%PEG-硼酸缓冲液 （已备好）（已备好）仪器：721分光光度计 操作方法1.加样：对每一份标本，取两试管按下表操作 加入物（单位：mL）对照管测定管待测血清0.10.1试剂1（硼酸缓冲液 ）3试剂2（PEG-硼酸缓冲液 ）3操作方法2.将以上反应管充分混匀，置室温1小时。3.用721分光光度计在460nm波长下混匀测定OD值。4.关机，清洁仪器，盖上布罩。 正常参考值：OD0.15结果易受多种大分子蛋白质的干扰，特异性差。CIC的检出可以为多种与自身免疫相关疾病提供辅助诊断诊断指标，但由于方法上的问题，其测定结果尚不能作为诊断疾病的敏感可靠的指标。 要 求1.实验结束后安排同学打扫卫生。2.实验报告与单扩实验分开写，下周上课交报告。
