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1、JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*药品检验工作的基本程序药品检验工作的基本程序取样取样鉴别鉴别检查检查含量测定含量测定写出检验报告写出检验报告1第三章 药物的杂质检查第一节 杂质和杂质限量检查JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、药物的纯度一、药物的纯度药物的纯度是指药物的纯净程度。杂质是在生产和贮藏过程中引入的，有的杂质没有治疗作用，有的影响疗效和稳定性，有的甚至危害人体健康。检查药物中的杂质控制其纯度是确保用药安全有效保证药品质量的一个重要方面。杂质检查收载在药物的“检查”项下，包括检查方法。评价药
2、物的纯度包括性状、理化常数、杂质检查和含量测定等。3JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*药物的纯度要求药物的纯度 指药物的纯净程度杂质检查 也称纯度检查杂质（impurity） 无治疗作用，影响药物稳定性和疗效，对人体健康有害的物质。 注意注意药物纯度与化学纯度的区别4JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、药物中的杂质来源二、药物中的杂质来源1.在生产过程中引入：反映物、中间体、副产物、有机溶剂、试剂等。例如盐酸普鲁卡因、在高温灭菌过程中可产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇。2.在贮藏过程中产生：水解、氧化、
3、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解、发霉等 药物中的杂质按来源可分为一般杂质和特殊杂质。按其性质可分为信号杂质和有害杂质5JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*种类：按来源分：按结构分：按性质分：无机杂质有机杂质一般杂质特殊杂质信号杂质有害杂质6JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、杂质的限量检查三、杂质的限量检查杂质限量（ L ） = 式中：杂质最大允许量=(浓度C 体积V)标所以：L = C V / S 100%杂质最大允许量供试品量（ S ） 100%7例例1 1 对乙酰氨基酚中检查氯化物。取对乙酰对
4、乙酰氨基酚中检查氯化物。取对乙酰氨基酚氨基酚2.02.0g,g,加水加水100100ml,ml,加热溶解后冷却，滤加热溶解后冷却，滤过，取滤液过，取滤液2525mlml，依法检查氯化物，发生的依法检查氯化物，发生的浑浊与标准氯化钠溶液浑浊与标准氯化钠溶液5.05.0ml ml （每每1 1ml ml 相当相当于于1010ugug 的的ClCl）制成的对照液比较，不得更制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少？浓。问氯化物的限量是多少？C VL= 100% S10 52 25100 1000000100% =0.01%8例例2 2 葡萄糖中检查重金属。取葡萄糖葡萄糖中检查重金属。取葡萄糖
5、4.04.0g g，加水加水2323mlml溶解后，加醋酸盐缓冲液溶解后，加醋酸盐缓冲液( (pH3.5)2mlpH3.5)2ml，依法检查重金属，含重金属依法检查重金属，含重金属不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少少mlml（每每1 1ml ml 相当于相当于1010ugug的的PbPb）? ?L SV=C4 5 /1000000 10 1/1000000=2(ml)9例例3 3 溴化钠中砷盐检查，规定含砷量不得溴化钠中砷盐检查，规定含砷量不得过过0.0004%0.0004%，药典规定，取标准砷液，药典规定，取标准砷液2.02.0mlml（1ugAs/m
6、l1ugAs/ml）。）。应取供试品多少克？应取供试品多少克？ C VS=L2 1 /1000000 0.0004%=0.5 (g)10例例4 4 磷酸可待因中检查吗啡。取本品磷酸可待因中检查吗啡。取本品0.100.10g g，加盐酸溶液（加盐酸溶液（9100091000）使溶解成）使溶解成5 5mlml，加亚硝加亚硝酸钠试液酸钠试液2 2mlml，放置放置1515分钟，加氨试液分钟，加氨试液3 3mlml，所所显颜色与吗啡溶液显颜色与吗啡溶液 取无水吗啡取无水吗啡2.02.0mgmg，加盐酸加盐酸溶液（溶液（ 9 1000 9 1000 ）使溶解成）使溶解成100100ml5.0mlml5.
7、0ml用用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量为多少？量为多少？C VL= 100% S2.0 /100 5.00.10 1000100% =0.1%11第三章 药物的杂质检查 第二节 一般杂质的检查方法JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、氯化物检查法供试液：取规定量供试品，加水溶解成供试液：取规定量供试品，加水溶解成25ml25ml，加，加稀硝酸稀硝酸10ml10ml；如不澄清，应过滤，如不澄清，应过滤，置置50ml50ml纳氏比色官中，加水成纳氏比色官中，加水成40ml40ml标准液：规定量标准氯
8、化钠溶液，加稀硝标准液：规定量标准氯化钠溶液，加稀硝酸酸10ml10ml，置置50ml50ml纳氏比色官中，加水成纳氏比色官中，加水成40ml40ml于供试液、标准液中，分别加入硝酸银于供试液、标准液中，分别加入硝酸银1.0ml1.0ml，用水稀释到用水稀释到50ml50ml，在暗处放在暗处放5min5min，在黑色背景下从上到下比较。在黑色背景下从上到下比较。13JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、硫酸盐检查法供试液：取规定量供试品，加水溶解成供试液：取规定量供试品，加水溶解成40ml40ml，如不澄清，应过滤，置如不澄清，应过滤，置50ml5
9、0ml纳氏比纳氏比色官中，加稀盐酸色官中，加稀盐酸2ml2ml，摇匀。摇匀。标准液：规定量标准硫酸钾溶液，置标准液：规定量标准硫酸钾溶液，置50ml50ml纳氏比色官中，加水成纳氏比色官中，加水成40ml40ml，加稀盐酸加稀盐酸2ml2ml，摇匀。摇匀。于供试液、标准液中，分别加入于供试液、标准液中，分别加入25%25%氯化氯化钡钡5ml5ml，用水稀释到用水稀释到50ml50ml，在暗处放在暗处放10min10min，在黑色背景下从上到下比较。在黑色背景下从上到下比较。14JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、铁盐检查法OHSCNNOHSCNH
10、NO22+- -+ + + + + + +2 24 44 42 24 43 38 82 22 24 42 2) )( (2 2) )( (2 2SOSOSOSONHNHFeFeO OS SNHNHFeFeH HFe3+6SCN-H+Fe(SCN)63-15JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*供试液：取规定量供试品，加水溶解成供试液：取规定量供试品，加水溶解成25ml25ml，置置50ml50ml纳氏比色官中，加稀盐酸纳氏比色官中，加稀盐酸4ml4ml与过硫酸铵与过硫酸铵50mg50mg，加水稀释成加水稀释成35ml35ml后，加后，加30%30%硫氰
11、酸铵硫氰酸铵3ml3ml，再加水至再加水至50ml50ml，摇匀。摇匀。标准液：取规定量硫酸铁按，加水溶解成标准液：取规定量硫酸铁按，加水溶解成25ml25ml，置置50ml50ml纳氏比色官中，加稀盐酸纳氏比色官中，加稀盐酸4ml4ml与过硫酸铵与过硫酸铵50mg50mg，加水稀释成加水稀释成35ml35ml后，加后，加30%30%硫氰酸铵硫氰酸铵3ml3ml，再加水至再加水至50ml50ml，摇匀。摇匀。16JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*四、重金属检查法重金属是指在实验条件下能与重金属是指在实验条件下能与S S2-2-作用显作用显色的金属杂
12、质，如银、铅、贡、铜等。主色的金属杂质，如银、铅、贡、铜等。主要以铅为主。要以铅为主。17硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法取取各各药药品品项项下下规规定定量量的的供供试试品品 , ,加加醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液 ( (p pH H 3 3. . 5 5) )2 2m m l l 与与水水适适量量使使成成 2 25 5m m l l, , 加加硫硫代代乙乙酰酰胺胺 2 2m m l l, , 放放 置置 2 2m m i i n n后后, ,与与标标准准铅铅溶溶液液一一定定量量按按同同法法制制成成的的对对照照液液所所形形成成的的棕棕色色 进进 行行 比比 较较 。 . . CH CH3 3CSNHCSN
13、H2 2+ H+ H2 2O CHO CH3 3CONHCONH2 2 + H + H2 2S S H H2 2S + PbS + Pb2+2+ PbSPbS + + 2H2H+ +18JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二种方法将将供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查检查用于在水、乙醇中难溶或能与重金属形成配位化合物而干扰用于在水、乙醇中难溶或能与重金属形成配位化合物而干扰检查的有机药物。检查的有机药物。温度影响较大，温度影响较大，500600500600度为宜。度为宜。必须蒸干
14、除尽氧化氮。否则形成亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，必须蒸干除尽氧化氮。否则形成亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。影响比色。蒸干后加盐酸使成盐酸盐，再蒸干残留的盐酸，加水溶解，蒸干后加盐酸使成盐酸盐，再蒸干残留的盐酸，加水溶解，以氨调以氨调pHpH至中性，加醋酸盐缓冲液至中性，加醋酸盐缓冲液(Ph3.5)(Ph3.5)微热溶解，依法微热溶解，依法测量。测量。对照液按同法处理，保持平行对照液按同法处理，保持平行19JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第三法 在碱性条件下，以硫化钠为试液，适合于不溶于稀酸而溶于碱的药物。 取供试品适量+NaOH+H2O溶解+
15、Na2S试液，与一定量标准铅液同法处理后的颜色比较。第四法 微孔滤膜过滤法，适合于重金属含量低的药物（原理与一法同）。 显色后用 50ml注射器转移至滤器中进行压滤，取下滤膜，干燥，比较生成的斑点颜色。20上盖上盖垫圈滤膜辅助 滤板连接头滤器下部支撑器滤器下部支撑器21JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*w注意v供试品溶液有色：在对照管中加少量稀焦糖溶液，（也可加其他无干扰的指示剂等）使两管色调一致。如果外消色法不能消除干扰，可采用内消色法。v供试品含有微量Fe3+ ：会氧化H2S析出S，可加VitC 0.5-1.0g，使Fe3+ Fe2+ ，同时在
16、对照管中加等量的VitC，再依法测定。22JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*五、砷盐检查法砷盐是有毒的物质砷盐是有毒的物质中国药典（中国药典（20002000年版）采用古蔡法和二年版）采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDCAg-DDC）检检查药物中的砷盐。查药物中的砷盐。23JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第一法第一法 古蔡法古蔡法原理原理: :As3+ 3Zn +3H+ AsH3+3Zn2+AsO33+ 3Zn +9H+ AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+ 3
17、HgBr2 3HBr+As(HBr)3（试纸） 砷斑与2ml标准砷溶液同法操作。 砷斑： As(HgBr)3 (黄色)； AsH(HgBr)2(棕色)； As2Hg3 (棕黑色)24JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二法 二乙基二硫代氨基甲酸银法 简称 Ag(DDC)法AsH3+ 6Ag(DDC) +3吡啶 As (DDC) 3 + 6Ag （红色胶态银） +3吡啶 HDDC于510nm波长处测定吸收度，以Ag(DDC) 溶液为空白。25古蔡法测砷瓶测砷管Hg(Br)试纸Pb(Ac)2棉花反应液玻璃试管Ag(DDC)Ag(DDC)法(KI, (K
18、I, SnCl2)SnCl2)26JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 六、炽灼残渣（Residue on ignition） 炽灼残渣也称硫酸盐灰分-有机药物经炽灼炭化，加硫酸湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，于高温（700800）炽灼灰化逸出，残留下非挥发性无机杂质（金属氧化物或无机盐类）成为硫酸盐。 限量一般控制在0.1-0.2%, 取样量为1-2g27JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*注意遗留的炽灼残渣需留作重金属检查时， 炽灼温度应控制在500-600C炽灼至恒重的第二次称重应在规定温度继续炽灼3
19、0分钟以上。恒重连续二次称重重量差0.3mg。含氟药物对磁坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。28JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 七、干燥失重（Loss on drying） 是指药物在规定的条件下经干燥后所减失的重量。主要指水分，也包括其他挥发性杂质。测定方法有：1 1 常压恒温干燥法（105 ） 适用于受热较稳定的药物。 将样品（研细）平铺于扁称量瓶中，厚度5mm。干燥时间一般在达到指定温度后干燥2-4h，称重，再干燥，直至恒重。292 2 干燥剂干燥法本法适用于受热易分解或易挥发的药物。 将样品置干燥器内干燥至恒重。常用干燥剂有：硅胶、硫酸、无水氯
20、化钙、五氧化二磷等。其中五氧化二磷吸水效力最强，但P2O5吸水后产生H3PO4，若样品对酸不稳定，可能会受影响。303 3 减压干燥法适用于mp低，受热不稳定及难除去水分的药物。减压干燥时可用减压干燥器或恒温干燥箱，一般压力2.67KPa20mmHg。N通常分析一个药物时，干燥失重与含量测定应同时进行，然后根据干燥失重%，将样品折算成干燥品，再计算含量。31JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*4 4 热分析法（Thermal analysis）热分析是指在程序控制温度下，测量物质的物理、化学变化与温度关系的一类技术。物质在加热（冷却）过程中，往往会脱
21、水、挥发或发生相变（熔化、冷凝、升华、沸腾）及发生分解、氧化、还原等化学变化，热分析就是将这些变化作为温度的函数来进行研究和测定。 常用方法有：32JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*八、水分测定法八、水分测定法I2 +SO2+H2O=2HI+SO3(A-B)F供试品中水分含量= *100%W33JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 九、有机溶剂残留量测定法用以检查药物在合成过程中引入的有害有机溶剂。ChP规定：二氧六环 0.038 % 吡啶 0.02 %苯 0.0002 %甲苯 0.089 %氯仿 0.0
22、06 %二氯甲烷 0.06 %环氧乙烷 0.001 %34Ch.P 对残留有机溶剂采用GC法测定第一法-直接进样法内标法RSD5 %（n=5）外标法- RSD10 %（n=5）第二法-顶空进样法可免去样品萃取、浓集等步骤，并可避免非挥发性组分对色谱柱的污染，但要求待测物有足够的挥发性。3510-20ml玻璃瓶（具有硅橡胶隔垫片盖）1-2g固体或1-5ml液体（平衡30-60min）恒温水浴样品顶空分析法（head space chromatography）也称液上气相色谱分析，是指用气相色谱法来分析封闭系统中与液体或固体样品相平衡的气体的一种方法。36JILIN UNIVERSITYCOLLE
23、GE OF LIFE SCIENCE*第三节 特殊杂质检查方法色谱法（ TLC、HPLC、GC）光谱法化学分析法物理分析法37JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*TLC法杂质对照品法（A）供试品自身对照法（高低浓度法）（B）对照物质法（C）不允许有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量） 样样 对对 样样 对对 样样 对对A B C38JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*vHPLC（GC）法峰面积归一化法A杂总/A总100%=杂% A总=A杂1A杂2A样 杂1 杂2 样39内标法校正因子测定液=对照品内标样品测
24、定液=样品同样量内标 分别进样，记录色谱图。校正因子F=A内/A对m对/m内m杂=FA杂/ A内m内杂质限量%= m杂/W样100%40F=(A内/A对)(m对/m内)m杂=F(A杂/ A内) m内对照样品杂质限量%= m杂/W样100%41外标法m杂= A杂/ A对m对杂质限量%= m杂/W样100%杂质对照品样品42JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*不加校正因子的主成分自身对照法A杂总/A自C自/取样100%=杂质%样品测定液 1 2 3A杂总杂总=A1A2A3自身对照液（1%）43JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE
25、 SCIENCE*第三章 药物的杂质检查药物的纯度概念药物的纯度概念 杂质的来源杂质的来源( (生产和贮藏生产和贮藏) )杂质的种类杂质的种类( (一般和特殊一般和特殊) )杂质的限量检查杂质的限量检查(L = C (L = C V / S V / S 100%)100%)一般杂质检查一般杂质检查(Cl,SO4,Fe,(Cl,SO4,Fe,重金属重金属, ,砷等砷等) )特殊杂质检查特殊杂质检查(TLC,HPLC,UV(TLC,HPLC,UV等等) )44AsO杂质杂质原理原理反应条件反应条件适宜浓度范围适宜浓度范围标准溶液标准溶液氯化物氯化物 Cl+ Ag AgCl(白)稀硝酸5080g/5
26、0ml(标准液58ml)氯化钠(10g Cl/ml)硫酸盐硫酸盐 SO42 + Ba2+ BaSO4(白)稀盐酸100500g/50ml(标准液15ml)硫酸钾(100g SO4/ml)铁铁Fe3+ + 6SCN Fe(SCN)63(红)盐酸1050g/50ml(标准液15ml)硫酸铁铵(10g Fe/ml)重金属重金属Pb2+ + S2 PbS （黄-黑）均匀混悬液醋酸盐缓冲液(pH3.5)1020/27ml(标准液12ml)硝酸铅(10g Pb /ml)砷盐砷盐AsO33-+ 3Zn +9H+ AsH3+Zn2+AsH3+ 2HgBr2(试纸) 砷斑盐酸2g/反应液中(标准砷液2ml)三氧
27、化二砷(1gAs/ml)45杂质杂质加酸的作用加酸的作用供试品不澄明供试品不澄明供试品有色供试品有色氯化物氯化物加速AgCl，产生好的乳浊，避免Ag2CO3, Ag2O, Ag3PO4的形成用含硝酸的水洗净滤纸中Cl后过滤供试液内消色法或外消色法硫酸盐硫酸盐防止BaCO3,Ba3(PO4)2 形成 用含盐酸的水洗净滤纸中(SO4)2 后过滤供试液内消色法或外消色法铁铁防止Fe3+水解。Fe2+无反应，加过硫酸铵氧化Fe2+Fe3+标准液与样品液色调不一致，用正丁醇或异戊醇提取红色产物重金属重金属PbS完全。若酸度增大，呈色变浅，甚至不呈色。加稀焦糖液或用内消色法46TLC法杂质对照品法供试品自身对照法（高低浓度法）对照药物法不允许有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量）HPLC（GC）法峰面积归一化法不加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法内标法外标法47
