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1、2.7基因概念的多样性基因概念的多样性一、一、C C值矛盾值矛盾 （C-value paradox C-value paradox ）在每一种生物中其单倍体基因组的在每一种生物中其单倍体基因组的DNADNA总量是特总量是特异的，被称为异的，被称为C C值值 (C Value)(C Value)。 DNADNA的长度是根据碱基对的多少推算出来的。的长度是根据碱基对的多少推算出来的。各门生物存在着一个各门生物存在着一个C C值范围，在每一门中随着值范围，在每一门中随着生物复杂性的增加，其基因组大小的最低程度也生物复杂性的增加，其基因组大小的最低程度也随之增加。随之增加。 2.7基因概念的多样性基因
2、概念的多样性一、一、C C值矛盾值矛盾 （C-value paradox C-value paradox ）基因组的概念基因组的概念Genome（Winkler,1920）Genome=Gene+Chromosome一个生物物种单倍型的所有染色体数目总和一个生物物种单倍型的所有染色体数目总和一个生物物种所有基因的总和一个生物物种所有基因的总和2.7基因概念的多样性基因概念的多样性一、一、C C值矛盾值矛盾 （C-value paradox C-value paradox ）n 基因组基因组（genome）核基因组（核基因组（nucleic genome）核外基因组（核外基因组（extranuc
3、leic genome ）线粒体基因组（线粒体基因组（mitochondrial genome）叶绿体基因组（叶绿体基因组（chloroplast genome）2.7基因概念的多样性基因概念的多样性一、一、C C值矛盾值矛盾 （C-value paradox C-value paradox ）n 基因组基因组（genome）基因数目与物种的关系基因数目与物种的关系基因数目的多少大致上与物种进化基因数目的多少大致上与物种进化的复杂性相关；的复杂性相关；在高等动植物中，巨大的基因组在高等动植物中，巨大的基因组并不意味着有巨量的基因数目。并不意味着有巨量的基因数目。人类究竟有多少个基因？人类究竟有
4、多少个基因？理论上：根据基因组的大小，理论上：根据基因组的大小，可具有可具有10万个基因，万个基因，实际上：大约实际上：大约34万个。万个。“生物体的复杂性并不是简单地生物体的复杂性并不是简单地与基因数量相关联的。与基因数量相关联的。”(G.Rubin)人类基因组人类基因组线粒体基因组线粒体基因组(16.6kb)核基因组核基因组(3200Mb)基因外序列基因外序列基因和基因有关序列基因和基因有关序列专一或中等重复序列专一或中等重复序列Non-codingDNA假基因假基因内含子内含子基因片段基因片段专一的或低专一的或低拷贝数序列拷贝数序列中度至中度至高度重复序列高度重复序列分散重复序列分散重复
5、序列串联重复序列串联重复序列/成簇重复序列成簇重复序列蛋白编码蛋白编码基因基因rRNA基因基因tRNA基因基因CodingDNAC值的资料表明，在不同的门中值的资料表明，在不同的门中C值的变化是很大的。值的变化是很大的。相对比较简单的单细胞真核生物象啤酒酵母，其基相对比较简单的单细胞真核生物象啤酒酵母，其基因组就有因组就有1.75107bp大约是细菌（大约是细菌（E.Coli）基因组）基因组的的3-4倍。倍。最简单的多细胞生物秀丽隐杆线虫其基因组有最简单的多细胞生物秀丽隐杆线虫其基因组有8107bp，大约是酵母的，大约是酵母的4倍。倍。生物的复杂性和其生物的复杂性和其DNA含量之间有较好的相含
6、量之间有较好的相关性关性但在其它的一些门中，这种相关性有的并不存在但在其它的一些门中，这种相关性有的并不存在实际上一个门中的实际上一个门中的C值变化并没有一定的规律。值变化并没有一定的规律。例如在哺乳类、鸟类和爬行类的例如在哺乳类、鸟类和爬行类的C值变化范围都很小，值变化范围都很小，而在两栖类中这种变化范围增大，而植物的而在两栖类中这种变化范围增大，而植物的C值变化值变化范围更为宽广，常成倍成倍地增加。范围更为宽广，常成倍成倍地增加。C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象称为值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象称为C值矛盾值矛盾(C-valueparadox)。TheC-valuepara
7、doxdescribesthelackofrelationshipbetweentheDNAcontent(C-value)ofanorganismanditscodingpotential.目前还不能完全解释这种矛盾：目前还不能完全解释这种矛盾： 在一定意义上说，生物类群中在一定意义上说，生物类群中C C值变化范围宽值变化范围宽就意味着在某些生物中有些就意味着在某些生物中有些DNADNA是冗余的，不是冗余的，不能编码有功能的活性物质。能编码有功能的活性物质。DNADNA总量变化范围的产生至少有一个原因，即总量变化范围的产生至少有一个原因，即在染色体上存在着不同数目的重复顺序，这在染色体上存在
8、着不同数目的重复顺序，这些重复顺序是不表达的。些重复顺序是不表达的。 二、细菌的基因组及特点二、细菌的基因组及特点（一）组成：细菌染色体和质粒（一）组成：细菌染色体和质粒（二）细菌基因组的特征（二）细菌基因组的特征1.基基因因组组相相对对较较小小（如如Ecoli,4.6106bp，4000个个基因），只有一个复制启始位点。基因），只有一个复制启始位点。2.具具有有操操纵纵子子结结构构：功功能能上上相相关关的的几几个个基基因因往往往往在在一一起起组组成成操操纵纵子子结结构构，即即几几个个结结构构基基因因串串联联在在一一起起，受受它它们们上上游游的的共共同同调调控控区区控控制制。当当基基因因开开放
9、放时时，这这几几个个基基因因转转录录在在一一条条mRNA链链上上，然然后后分分别别翻翻译译合合成成各各自自的的蛋蛋白白肽肽链链。操操纵纵子子的的末末端端具具有特殊的终止序列。有特殊的终止序列。3. 3. 基因是连续的：结构基因中没有内含子（基因是连续的：结构基因中没有内含子（intronintron）成分，在转录后不需剪接加工，转录产物的寿命较短。成分，在转录后不需剪接加工，转录产物的寿命较短。4. 4. 大部分大部分DNADNA是用于编码蛋白质的，只有一小部分是不是用于编码蛋白质的，只有一小部分是不翻译的。不翻译区中含有间隔区（翻译的。不翻译区中含有间隔区（SpacerSpacer）和基因表
10、达）和基因表达的调控序列。的调控序列。 5. 5. 基因组中仅有少数基因存在基因重叠现象。基因组中仅有少数基因存在基因重叠现象。 6. 6. 结构基因是单拷贝，结构基因是单拷贝，rRNArRNA基因是多拷贝。基因是多拷贝。（三）质粒（三）质粒(plasmid)质粒质粒:是细菌染色体外能够进行自主复制的遗传单位是细菌染色体外能够进行自主复制的遗传单位，是环状闭合的双链是环状闭合的双链DNA。紧密控制型（紧密控制型（stringentcontrol）质粒）质粒:只在细胞周期只在细胞周期的一定阶段进行复制，通常每个细胞内只含有一个或的一定阶段进行复制，通常每个细胞内只含有一个或几个质粒分子几个质粒分
11、子松弛控制型（松弛控制型（relaxedcontrol）质粒）质粒:在整个细胞周期在整个细胞周期中随时可以复制，在每个细胞中有许多拷贝，一般在中随时可以复制，在每个细胞中有许多拷贝，一般在20个以上。在细胞培养过程中，加适当氯霉素可使松个以上。在细胞培养过程中，加适当氯霉素可使松弛型质粒的拷贝数由原来的弛型质粒的拷贝数由原来的20多个扩增至多个扩增至1000-3000个。个。（三）质粒（三）质粒(plasmid)质粒基因可编码多种重要的生物学性状：质粒基因可编码多种重要的生物学性状：1)致育质粒（致育质粒（F质粒）与有性生殖功能关联质粒）与有性生殖功能关联2)耐药性质粒耐药性质粒编码细菌对抗菌
12、药物或重金属盐类的耐编码细菌对抗菌药物或重金属盐类的耐药性。分两类，一是接合性耐药质粒（药性。分两类，一是接合性耐药质粒（R质粒），另质粒），另一是非接合耐药性质粒一是非接合耐药性质粒3)毒力质粒（毒力质粒（Vi质粒）质粒）编码与该菌致病性有关的毒力编码与该菌致病性有关的毒力因子因子4)细菌素质粒细菌素质粒编码细菌产生细菌素编码细菌产生细菌素5)代谢质粒代谢质粒编码产生相关的代谢酶。编码产生相关的代谢酶。质粒具有自我复制的能力质粒具有自我复制的能力质粒质粒DNA所编码的基因产物赋予细菌某些性状特征所编码的基因产物赋予细菌某些性状特征质粒可自行丢失与消除质粒可自行丢失与消除质粒的转移性质粒的转移
13、性质粒可分为相容性与不相容性两种质粒可分为相容性与不相容性两种质粒质粒DNA的特征的特征四、病毒基因组的特点四、病毒基因组的特点1 1每种病毒只有一种核酸，或者每种病毒只有一种核酸，或者DNADNA，或者，或者RNARNA2 2病毒核酸大小差别很大，病毒核酸大小差别很大，3X103X103 3一一3X103X106 6bpbp如：如： 最小的最小的3kb3kb（乙肝），仅编码（乙肝），仅编码4 4种蛋白质种蛋白质最最大大的的可可达达300kb300kb以以上上（痘痘病病毒毒 ），有有几几百百个个基基因因。一般一般DNADNA病毒较大，病毒较大，RNARNA病毒较小。病毒较小。3 3除了反转录病
14、毒以外，一切病毒基因组都是除了反转录病毒以外，一切病毒基因组都是单倍体，每个基因在病毒颗粒中只出现一次。单倍体，每个基因在病毒颗粒中只出现一次。反转录病毒基因组有两个拷贝。反转录病毒基因组有两个拷贝。 4 4大部份病毒核酸是由一条双链或单链分子大部份病毒核酸是由一条双链或单链分子(RNA(RNA或或DNA)DNA)，仅少数，仅少数RNARNA病毒由几个核酸片段组成病毒由几个核酸片段组成5 5噬菌体（细胞病毒）的基因是连续的；噬菌体（细胞病毒）的基因是连续的；而真核细胞病毒的基因是不连续的，具有内而真核细胞病毒的基因是不连续的，具有内含子，除了正链含子，除了正链RNA病毒之外，真核细胞病毒病毒之
15、外，真核细胞病毒的基因都是先转录成的基因都是先转录成mRNA前体，再经加工才前体，再经加工才能切除内含子成为成熟的能切除内含子成为成熟的mRNA。噬菌体基因组中无内含子，但感染真核细胞的病毒基噬菌体基因组中无内含子，但感染真核细胞的病毒基因组中具有内含子（因组中具有内含子（SV40SV40早期基因早期基因T T和和t t） 6 6有重叠基因有重叠基因 （同（同ORFORF重叠、异重叠、异ORFORF重叠和反重叠和反ORFORF重重叠）叠）7.大部分大部分DNA用于编码蛋白质，只有一小部分是不翻用于编码蛋白质，只有一小部分是不翻译的。不翻译区通常是基因表达的调控序列译的。不翻译区通常是基因表达的
16、调控序列8.调控序列可以被宿主细胞所识别，其遗传密码和基调控序列可以被宿主细胞所识别，其遗传密码和基因组的结构必须与宿主体系相匹配因组的结构必须与宿主体系相匹配五、真核生物基因组的特点五、真核生物基因组的特点1.基基因因组组含含有有更更大大的的DNA分分子子，以以染染色色体体形形式式储储存存于于细细胞胞核核内内，除除配配子子细细胞胞外外，体体细细胞胞内内的的基基因因的的基基因组是双份的。因组是双份的。但应注意：但应注意：（1）并并非非生生物物越越高高等等，基基因因组组越越大大。即即并并非非进进化化的的复复杂杂程程度度与与DNA含含量量成成正正比比。如如某某些些植植物物和和两两栖栖类类的的DNA
17、含含量量是是人的几十乃至上百倍。人的几十乃至上百倍。（2）同同一一类类复复杂杂性性差差不不多多，形形态态也也相相似似的的生生物物，理理论论上上其其基基因因组组也也应应比比较较接接近近，其其实实不不然然。如如同同是是两两栖栖类类可可相相差差十十倍倍以上。以上。（3）基因组中）基因组中DNA的量远大于编码蛋白质所需要的量。的量远大于编码蛋白质所需要的量。2.基基因因组组结结构构复复杂杂，有有多多个个复复制制启启始始位位点点，但但每个复制子的长度较小。每个复制子的长度较小。3.基因是不连续的。基因是不连续的。4.转转录录单单位位一一般般是是单单顺顺反反子子的的。即即一一个个基基因因一一种种mRNA一
18、一种种蛋蛋白白质质，但但蛋蛋白白质质的的最最终终产产物物可可因剪接方式的不同而有差异因剪接方式的不同而有差异6.存在多基因家族和超基因家族存在多基因家族和超基因家族7.基因类型多样基因类型多样8.DNA序列组织的可变性：序列组织的可变性：DNA序列从胚胎到成人序列从胚胎到成人并非一成不变。如并非一成不变。如B细胞成熟过程中细胞成熟过程中Ig基因结构的重基因结构的重排及排及TCR基因在分化过程中的重排基因在分化过程中的重排5.存在重复序列存在重复序列(repetitivesequence)五、真核生物基因组的特点五、真核生物基因组的特点Genetics与与 Genomics水生动物基因组水生动物
19、基因组: :对对16001600多种鱼类及其他少数水产动物研究表明多种鱼类及其他少数水产动物研究表明: :水生动物基因组大小差异很大水生动物基因组大小差异很大: : 多数鱼类多数鱼类/ /甲壳类单倍甲壳类单倍体染色体数为体染色体数为202025, 25, 相当于人类基因组大小的相当于人类基因组大小的50%-50%-70%70%鲤科和鲑科某些鱼类达鲤科和鲑科某些鱼类达100100条染色体条染色体( (四倍体化四倍体化) )斑马鱼的基因组研究中斑马鱼的基因组研究中, ,构建了多个基因图谱构建了多个基因图谱斑马鱼的基因组测序已经完成斑马鱼的基因组测序已经完成水生动物基因组水生动物基因组: :水生动物
20、基因组水生动物基因组: :ZebrafishTheZebrafishInformationNetworkWellconceived,easilynavigatedtroveofzebrafishinfoTheInteractiveAtlasofZebrafishVascularAnatomyExtraordinarydevelopmental-biologysite,featuredinSciencesNetWatchcolumn,offeringviewsofthecompletevascularanatomyofthedevelopingzebrafish.WashU-ZebrafishG
21、enomeResourcesProject水生动物基因组水生动物基因组: :美国农业部在上世纪美国农业部在上世纪 90 90 年代初已开始资助年代初已开始资助个别个别水产水产养殖动物的基因组研究养殖动物的基因组研究并在并在1997 1997 年年9 9 月正式启动了较为全面的水产养殖动物月正式启动了较为全面的水产养殖动物的基因组计划的基因组计划选选5 5 种水产养殖动物种水产养殖动物斑点叉尾斑点叉尾( ( IctalurusIctalurus punctatuspunctatus) ) 虹鳟虹鳟( ( OnchorhynchusOnchorhynchus mykissmykiss) ) 罗非鱼
22、罗非鱼( ( OreochromisOreochromis niloticusniloticus) ) 太平洋对虾太平洋对虾( ( PenaeusPenaeus vannameivannamei ) ) 牡蛎牡蛎( ( CrassostreaCrassostrea gigasgigas) )水生动物基因组水生动物基因组: :我国特有的养殖对象如我国特有的养殖对象如鲤、草鱼鲤、草鱼( Ctenopharyngodon idellus ) 鲢和鳙鲢和鳙( Aristichthysnobilis) 等的基因组要由中国自等的基因组要由中国自己来完成己来完成我国水产养殖动物的基因组研究对象多数将是我国特
23、有我国水产养殖动物的基因组研究对象多数将是我国特有的养殖种类的养殖种类,难以直接从发达国家的同类研究中获得可难以直接从发达国家的同类研究中获得可借鉴的资源借鉴的资源水生动物基因组水生动物基因组: :鲤鱼鲤鱼:100条染色体条染色体我国学者已经建立了我国学者已经建立了5050多个连锁群多个连锁群, ,覆盖覆盖5789cM 5789cM 基因组基因组水生动物基因组水生动物基因组: :对羽管状海洋生物佛罗里达文昌鱼对羽管状海洋生物佛罗里达文昌鱼（Branchiostomafloridae）基因组的最新分析表）基因组的最新分析表明，明，5.5亿年以来进化进程中脊椎动物比原始祖先亿年以来进化进程中脊椎动
24、物比原始祖先的基因组多出四倍的拷贝量，对文昌鱼的基因组分的基因组多出四倍的拷贝量，对文昌鱼的基因组分析为此结论提供了证据。析为此结论提供了证据。2008年年6月月19日日,Nature上上发表了表了文昌鱼的基因组序列文昌鱼的基因组序列线虫基因组线虫基因组果蝇基因组果蝇基因组小鼠基因组小鼠基因组大鼠基因组大鼠基因组人类基因组人类基因组牛基因组牛基因组猪基因组猪基因组绵羊基因组绵羊基因组家蚕基因组家蚕基因组家鸡基因组家鸡基因组狗基因组狗基因组http:/www.animalgenome.org/结构基因组学结构基因组学基因组研究的第一阶段工作，功能基因组学的基础基因组研究的第一阶段工作，功能基因组
25、学的基础；其主要目标是绘制生物的遗传图、物理图、转录图其主要目标是绘制生物的遗传图、物理图、转录图和序列图。和序列图。各基因或各基因或DNA标记之间标记之间精确距离的图谱；精确距离的图谱；反映的是反映的是DNA序列上两序列上两点之间的实际距离点之间的实际距离物理图谱（物理图谱（physical map）绘制绘制物理图谱方法物理图谱方法：原位杂交（原位杂交（In situ hybridization）原理：原理：DNA标记探针与染色体同源位置杂交结合，经同标记探针与染色体同源位置杂交结合，经同位素自显影或荧光显微镜可显示出相应杂交部位。位素自显影或荧光显微镜可显示出相应杂交部位。遗传图谱（遗传图
26、谱（genetic map）绘制绘制称连锁图谱（称连锁图谱（linkage map），），基因或基因或DNA标记之间连锁关系标记之间连锁关系和染色体定位图谱；和染色体定位图谱；利用两点的重组程度，反映利用两点的重组程度，反映两点之间连锁关系。两点之间连锁关系。猪猪12号染色体的物理图谱号染色体的物理图谱遗传图谱与物理图谱的区别遗传图谱与物理图谱的区别基因排列顺序一致基因排列顺序一致位置并不一一对应位置并不一一对应基因表达谱（基因表达谱（gene expression profile）处于某一特定状态下的细胞或组织处于某一特定状态下的细胞或组织cDNA文库，收集文库，收集cDNA序列片段，定性、
27、定量分析其序列片段，定性、定量分析其mRNA群体组成，描群体组成，描绘出该特定细胞或组织在特定状态下基因表达种类绘出该特定细胞或组织在特定状态下基因表达种类（ESTs）和丰度信息。由此编制成的数据表称为基因表）和丰度信息。由此编制成的数据表称为基因表达谱。达谱。从分子水平反映细胞或组织特异性表型和表达模式从分子水平反映细胞或组织特异性表型和表达模式序列图（序列图（Sequence map）通过基因组测序得到的碱基排列次序。通过基因组测序得到的碱基排列次序。基因组计划的最终目标。基因组计划的最终目标。六、基因类型的多样性六、基因类型的多样性(一一)重叠基因重叠基因(overlapping gen
28、e)Agenewhosesequenceoverlapsthatofanothergeneinthesameoradifferentreadingframe.指在同一段指在同一段DNADNA顺序上，由于阅读框架不同或终止早晚不顺序上，由于阅读框架不同或终止早晚不同，同时编码两个以上基因的现象同，同时编码两个以上基因的现象重叠基因的发现重叠基因的发现重叠基因是重叠基因是1977年年Sanger在研究在研究X174时发现的。时发现的。X174是一种单链是一种单链DNA病病毒，宿主为大肠杆菌，因毒，宿主为大肠杆菌，因此，又是噬菌体。此，又是噬菌体。X174感染大肠杆菌后共合成感染大肠杆菌后共合成11
29、个蛋白质分子，个蛋白质分子，总分子量为总分子量为25万左右，相当于万左右，相当于6078个核苷酸所个核苷酸所容纳的信息量。容纳的信息量。而该病毒而该病毒DNA本身只有本身只有5375个核苷酸，最多个核苷酸，最多能编码总分子量为能编码总分子量为20万的蛋白质分子，万的蛋白质分子，Sanger在弄清在弄清X174的的11个基因中有些是重个基因中有些是重叠的之前叠的之前,这样一个矛盾长时间无法解决。这样一个矛盾长时间无法解决。重叠重叠方式方式: : （1 1）一个基因完全在另一个基因里面。如基因和是）一个基因完全在另一个基因里面。如基因和是两个不同基因，而包含在基因内。同样，基因在两个不同基因，而包
30、含在基因内。同样，基因在基因内。基因内。（2 2）部分重叠。）部分重叠。这些重叠的基因具有不同的读码这些重叠的基因具有不同的读码框架框架 （3 3）两个基因只有一个碱基重叠。如基因的终止密码）两个基因只有一个碱基重叠。如基因的终止密码子的最后一个碱基是基因起始密码子的第一个碱基子的最后一个碱基是基因起始密码子的第一个碱基 ( (如如TAATG)TAATG)。Howoverlappinggenescanoperate:a.TranscriptaselooksforanyAUGstartcodons:b.Itbeginsreadingthereandintripletreadingframesfr
31、omthereafteruntilitreachesoneofthestopcodons.这些重叠基因尽管它们的这些重叠基因尽管它们的DNADNA大部分相同，大部分相同，但是由于将但是由于将mRNAmRNA翻译成蛋白质时的读框不一样翻译成蛋白质时的读框不一样产生的蛋白质分子往往并不相同产生的蛋白质分子往往并不相同。有些重叠基因读框相同，只是起始部位不同有些重叠基因读框相同，只是起始部位不同如如SV40DNASV40DNA基因组中，编码三个外壳蛋白基因组中，编码三个外壳蛋白VP1VP1、VP2VP2、VP3VP3基因之间有基因之间有122122个碱基的重叠个碱基的重叠但密码子的读框不一样但密码子
32、的读框不一样而小而小t t抗原完全在大抗原完全在大T T抗原基因里面，它们有共抗原基因里面，它们有共同的起始密码子同的起始密码子。同向重叠基因同向重叠基因:重叠基因分布在同一重叠基因分布在同一DNA区域的同区域的同一单链上一单链上AB重叠基因种类重叠基因种类反向重叠基因反向重叠基因:重叠基因分布在同一重叠基因分布在同一DNA区域区域的不同单链上的不同单链上 ABOverlappinggenestructureofhumanVLCADandDLG4GeneVol305,2,2003,Pages161-166DuringanalysisoftheVLCADpromoter,wediscovered
33、thatanothergene,discs-large-related4(DLG4),overlapsVLCADandistranscribedintheoppositedirection.AhighfrequencyofoverlappinggeneexpressionincompactedeukaryoticgenomesPNAS,August2,2005vol.102no.31:10936-41真核生物中的重叠基因真核生物中的重叠基因MakalowskaI,LinCF,HernandezK.Birthanddeathofgeneoverlapsinvertebrates.BMC Evol
34、 Biol.2007Oct16;7(1):193重叠基因的生物学意义重叠基因的生物学意义基因的重叠性使有限的基因的重叠性使有限的DNA序列包含了更多序列包含了更多的遗传信息，是生物对它的遗传物质经济而的遗传信息，是生物对它的遗传物质经济而合理的利用。合理的利用。丰富和发展了基因的概念丰富和发展了基因的概念重复基因重复基因即在基因组中有多个拷贝的基因即在基因组中有多个拷贝的基因在真核生物基因组中发现这种现象，真核生物中的在真核生物基因组中发现这种现象，真核生物中的重复基因可以达到重复基因可以达到30%30%重复基因主要是为了满足生物体快速发育的需要重复基因主要是为了满足生物体快速发育的需要。当基
35、因产物的需求量很大时，一个基因可以产生大当基因产物的需求量很大时，一个基因可以产生大量的串联重复量的串联重复 IfeukaryoticDNAismeltedandallowedtore-anneal,itdoessoin3distinctphasesTheexplanationisthatthereishighlyrepetitiveDNA(whichre-annealsquickly)moderatelyrepetitiveDNA(intermediate)anduniqueorsinglecopyDNA(re-annealsslowly)UniqueandrepeatedDNADNAmel
36、ting第一部分：快速复性部分，占基因组第一部分：快速复性部分，占基因组DNA摩尔分数摩尔分数的的25，在，在Cot值值10-4-210-2范围内复性范围内复性第二部分：中速复性部分，占基因组第二部分：中速复性部分，占基因组DNA摩尔分数摩尔分数的的30，在，在Cot值值0.2-102范围内复性范围内复性第三部分：慢速复性部分，占基因组第三部分：慢速复性部分，占基因组DNA摩尔分摩尔分数的数的45，在，在Cot值值80-104范围内复性范围内复性C0t1/2（任何基因组（任何基因组DNA）任何基因组任何基因组DNA的复杂性的复杂性-=-C0t1/2（大肠杆菌（大肠杆菌DNA）4.2X106bp
37、任何基因组任何基因组DNA的复杂性的复杂性4.2X106bpC0t1/2（任何基因组（任何基因组DNA）=-C0t1/2（大肠杆菌（大肠杆菌DNA）重复序列分类重复序列分类1 1）高度重复序列（）高度重复序列（10105 5次）次） （1 1）卫星）卫星DNADNA： 根据长度可将其分为根据长度可将其分为3 3类类 卫星（卫星（satellitesatellite）DNADNA： 重复长度重复长度5-10bp5-10bp，其在人群中多态性不强。其在人群中多态性不强。 重复序列分类重复序列分类卫星卫星DNA(Satellite)CsCl超高速离心超高速离心小卫星小卫星DNA(minisatell
38、ite)或不同数目的串联重复或不同数目的串联重复(VNTR,variablenumberoftandemrepeats)：重复长度重复长度15-70bp15-70bp，其在人群中有高度的特异性。，其在人群中有高度的特异性。DNA指纹指纹DNAfingerprintingAnapplicationofrepeatedDNAsequencesfoundinmammaliangenomesHighlyvariablebetweenindividualsNo2peoplearethesame,exceptidenticaltwins微卫星微卫星DNA（简单串联重复序列）：（简单串联重复序列）：（mic
39、rosatelliteDNA，又称为，又称为STRshorttandemrepeat短串联重复序列）短串联重复序列）Microsatellite DNA2-10bp /copy105-106copies /genomeC0t(1/2)0.001多为串联重复排列多为串联重复排列分布于着丝点分布于着丝点,端粒区端粒区,结构基因两侧结构基因两侧heterochromatin微卫星微卫星DNA由于核心序列重复数目的变化而在群体中呈现出遗传由于核心序列重复数目的变化而在群体中呈现出遗传多态性多态性但在同一家系内具有高度的遗传保守性，以孟德尔方但在同一家系内具有高度的遗传保守性，以孟德尔方式遗传式遗传散布
40、于整个基因组中。散布于整个基因组中。微卫星微卫星DNASequenceinsatelliteDNASeacrab2ATATAT.Drosophila5ATAATATAAT.Mouse9GAAAAATGAGAAAAATGAbpbp of repeat unit of repeat unit sequence sequence 高度重复顺序的功能高度重复顺序的功能:a.参与复制水平的调节。参与复制水平的调节。b.参与基因表达的调控参与基因表达的调控c.参与转位作用参与转位作用d.与进化有关与进化有关e.DNA指纹指纹f.卫卫星星DNA成成簇簇的的分分布布在在染染色色体体着着丝丝粒粒附附近近，可能与
41、染色体减数分裂时染色体配对有关可能与染色体减数分裂时染色体配对有关微卫星微卫星DNA的应用的应用遗传作图遗传作图:例如例如:鱼类微卫星鱼类微卫星DNA的分离在过去几年中进展很的分离在过去几年中进展很快快,在罗非鱼的人工雌核发育个体中在罗非鱼的人工雌核发育个体中,已用微卫星已用微卫星DNA标记检测到父本精子小片段遗传物质整合的影响标记检测到父本精子小片段遗传物质整合的影响应用微卫星和应用微卫星和AFLP指纹技术构建了尼罗罗非鱼包指纹技术构建了尼罗罗非鱼包含全部含全部22条染色体的遗传连锁图条染色体的遗传连锁图(Kocher等,1998)系谱确证系谱确证遗传多样性估计遗传多样性估计标记辅助选择标记
42、辅助选择2)中度重复序列中度重复序列(middle repetitive sequence middle repetitive sequence )0.1-1Kb /copy10-104copies /genomeC0t(1/2)0.001-0.1rDNA tDNAAlu family Histone gene cluster多基因家族（多基因家族（multigenefamily）：亦称基因家族。是）：亦称基因家族。是指一组具有类似功能，核苷酸序列又有同源性的基因。指一组具有类似功能，核苷酸序列又有同源性的基因。分类：分类：按基因的终产物分为两类：一类编码按基因的终产物分为两类：一类编码RNA
43、，另一，另一类编码蛋白质。类编码蛋白质。按在基因组中的分布分为两类：一类串联排列在按在基因组中的分布分为两类：一类串联排列在一起，形成基因簇，亦称串联重复基因。另一类家族成一起，形成基因簇，亦称串联重复基因。另一类家族成员则可以分散在不同的部位上。员则可以分散在不同的部位上。（2）超基因家族（）超基因家族（supergenefamily）：由多基因家）：由多基因家族及单基因组成的更大的基因家族。成员间有不同程度族及单基因组成的更大的基因家族。成员间有不同程度的同源，但它们的功能并不相似，这是与多基因家族的的同源，但它们的功能并不相似，这是与多基因家族的差别所在。如差别所在。如Ig超家族。超家族
44、。rDNArDNA gene family gene familySeaurchin450copiesTobacco750copiesDrosophila100copiesHistoneHistone gene family gene familyH1H4H2BH3H2AT18s T5.8s T28sNT18sT5.8sT20s20s32s32s28s5.8s45s45s41s41s18s18sAluAlu家族：平均每家族：平均每6kb6kb就有一个，就有一个，AluAlu家族是哺乳动物包括人基因组中含量最丰富的一种家族是哺乳动物包括人基因组中含量最丰富的一种中度重复顺序家族，在单倍体人基因组
45、中重复达中度重复顺序家族，在单倍体人基因组中重复达3030万万- -5050万次，约占人基因组的万次，约占人基因组的3-63-6。AluAlu家族每个成员的长度约家族每个成员的长度约300bp300bp，由于每个单位长度中，由于每个单位长度中有一个限制性内切酶有一个限制性内切酶AluAlu的切点（的切点（AGCTAGCT）从而将其切）从而将其切成长成长130130和和170bp170bp的两段，因而定名为的两段，因而定名为AluAlu序列（或序列（或AluAlu家家族）族） 真核生物的真核生物的Alu family30,0000 copies 广泛分布于非重复序列间广泛分布于非重复序列间300
46、bp300bp300bp6000bp6000bp6000bp6000bpAlu家族：家族：Alu顺序具有种的特异性，功能尚不清楚。顺序具有种的特异性，功能尚不清楚。可能在可能在hnRNA转录和加工中起作用转录和加工中起作用遗传重组及染色体不稳定性有关遗传重组及染色体不稳定性有关人类质粒（人类质粒（humanplasmid）:最近发现在人的组织细胞中最近发现在人的组织细胞中存在自然发生的染色体外双链环状存在自然发生的染色体外双链环状DAN，被称为人类质粒，而这，被称为人类质粒，而这些质粒又毫无例外地含有些质粒又毫无例外地含有Alu顺序顺序形成形成Z-DNAheterogeneous nuclea
47、r RNA,核内不均一核内不均一RNAhnRNA是是mRNA的未成熟前体的未成熟前体Kpn家家族族：人人类类和和灵灵长长类类DNA经经Kpn酶酶解解后后，产产生生4个个片片段段（1.2、1.5、1.8、1.9kb），这这些些就就被被命命名名为为Kpn家家族族。人人类类基基因因组组中中的的Kpn序序列列约约在在3-6%，也是散在分布的。功能尚不清楚。，也是散在分布的。功能尚不清楚。组蛋白基因组蛋白基因在各种生物体内重复的次数不一样，但都在中度重在各种生物体内重复的次数不一样，但都在中度重复的范围内复的范围内。通常每种组蛋白的基因在同一种生物中拷贝数是相通常每种组蛋白的基因在同一种生物中拷贝数是相
48、同的同的。鸡的基因组中组蛋白基因有鸡的基因组中组蛋白基因有1010个拷贝，在哺乳动物个拷贝，在哺乳动物中为中为2020拷贝，非洲爪蟾为拷贝，非洲爪蟾为4040拷贝，而海胆的每种组拷贝，而海胆的每种组蛋白的基因达蛋白的基因达300-600300-600拷贝。拷贝。 组蛋白基因组蛋白基因组蛋白基因组蛋白基因不同物种中，不同物种中，基因的排列次基因的排列次序、转录方向序、转录方向和间隔区都不和间隔区都不同。同。倒位（反向）重复序列倒位（反向）重复序列又又称称零零时时复复性性部部分分，重重复复单单位位约约长长300bp，两两个个单单位位之之间间有有一一平平均均1.6kb的的片片段段相相隔隔，多多数数散
49、散布布于于基基因组中。因组中。较复杂的重复单位组成的重复顺序较复杂的重复单位组成的重复顺序灵灵长长类类所所独独有有，用用Hind消消化化非非洲洲绿绿猴猴DNA，可可以以得得到到重重复复单单位位为为172bp的的高高度度重重复复顺顺序序，这这种种顺顺序序大大部部份份由由交交替替变变化化的的嘌嘌呤呤和和嘧嘧啶啶组组成成，又又称称为为卫星卫星DNA。Structure of repetitive sequence of DNADR direct repeatsIR Inverted repeatsATCGGCTATAGCCGATBilateral symmetryATCGNNNNNGCTATAGCN
50、NNNNCGATBilateral symmetryATCGATCGATCGTAGCTAGCTAGCTandem direct repeats ATCGNNNATCGNNNNNNATCGTAGCNNNTAGCNNNNNNTAGCDispersed direct repeatsATCGNNNNNCGATTAGCNNNNNGCTAStem-loop palindrome-AAGCTT-TTCGAA-HindIII RE重复序列形成的原因重复序列形成的原因1.1.不均等交换不均等交换(unequal crossover):(unequal crossover):考虑一个具有末端考虑一个具有末端“X”
51、和和“Y”的由重复单位的由重复单位“ab”组成的组成的序列。这两个序列。这两个“等位等位”序列之间的准确排列将是序列之间的准确排列将是:xababababababababababababababababyxababababababababababababababababy但是在一条染色体上的任何但是在一条染色体上的任何ab很可能会与另一条染色体上的很可能会与另一条染色体上的任何任何ab序列配对，从而产生错排，如：序列配对，从而产生错排，如：xababababababababababababababababyxababababababababababababababababy2.跳跃复制跳跃复制
52、saltatorysaltatory replication replication产生某些序列大量拷贝的偶然单向扩增产生某些序列大量拷贝的偶然单向扩增原理原理: : 在某一特定时刻可能由于某种原因使一个在某一特定时刻可能由于某种原因使一个DNADNA序列突然横向扩增序列突然横向扩增随后随后, ,由于突变的积累由于突变的积累, ,使个重复单位失去了同一性使个重复单位失去了同一性, , 然然后再经历一次后再经历一次跳跃复制跳跃复制,出现更长的重复单位出现更长的重复单位,.2.跳跃复制跳跃复制saltatorysaltatory replication replicationCAACMutatio
53、nin4siteInsertCInserttriplemutationSaltatoryreplication9bprepeat27bprepeat58bprepeat58bprepeat116bprepeat3)滚环扩增滚环扩增突变突变( Amplification-Mutation ( Amplification-Mutation ) )Mutation insertion Mutation insertion cycling amplificationcycling amplification5切离切离环化环化333滚滚环环复制复制4) 4) 反转座插入反转座插入3. 3. 不连续基因不
54、连续基因(interrupted or (interrupted or discontinousdiscontinous genes) genes)断裂基因断裂基因(Split gene)(Split gene)在基因编码蛋白质的序列中插入与蛋白质编码无关的在基因编码蛋白质的序列中插入与蛋白质编码无关的DNA间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。Richard J. Roberts Phillip A. Sharp Nobel Prize 199319771977年美国的年美国的SharpSharp和和RobertsRoberts两组两组科学家分别
55、同时发现了断裂基因科学家分别同时发现了断裂基因(split gene), (split gene), Crick称此为分子遗称此为分子遗传学上的一次微型革命，这项发现传学上的一次微型革命，这项发现与与1993年荣获了诺贝尔奖。年荣获了诺贝尔奖。 a) a) E.coliE.coli restriction alien DNA restriction alien DNA with restriction with restriction endonucleaseendonuclease (RE) (RE)b)b) Modification enzyme in hostModification e
56、nzyme in hostc)c) Alien DNA fate of be restricted or be Alien DNA fate of be restricted or be modifiedmodifiedd) There are different RE in different host d) There are different RE in different host of bacterialof bacterial Werner Arber Nobel Prize 1978限制性核酸内切酶的发现限制性核酸内切酶的发现1965限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶在在Shar
57、pSharp和和RobertsRoberts发现内含子之前发现内含子之前 法国的科学家法国的科学家 ChambonChambon 也率领一个小组进行了有关实也率领一个小组进行了有关实验验: : 鸡的输卵管分泌卵清蛋白、卵粘蛋白和伴清蛋白，鸡的输卵管分泌卵清蛋白、卵粘蛋白和伴清蛋白，而其红细胞（鸟类的红细胞上有核的）只合成血红蛋而其红细胞（鸟类的红细胞上有核的）只合成血红蛋白，那么两种组织之间白，那么两种组织之间DNADNA有什么不同呢？有什么不同呢？于是他们提取两种组织的于是他们提取两种组织的DNADNA，分别用酶（，分别用酶（EcoR1EcoR1和和HindIIIHindIII）切成几段，走
58、电泳，再用卵清蛋白）切成几段，走电泳，再用卵清蛋白mRNAmRNA来制来制备备cDNAcDNA探针和以上两片进行探针和以上两片进行southernsouthern杂交杂交结果两种组织中的结果两种组织中的DNADNA不论用哪一种酶来切，都出现了不论用哪一种酶来切，都出现了相同的多条阳性杂交带。相同的多条阳性杂交带。 cDNAcDNA顺序内并顺序内并没有没有EcoRIEcoRI和和HindHind = 3 * = 3 * ROMAN IIIROMAN III的的切点，为什么切点，为什么会出现多条阳会出现多条阳性带性带 BergetBerget，SharpSharp小组和小组和RobertsRobe
59、rts小组同时发现了腺病毒小组同时发现了腺病毒外壳蛋白六聚体基因（外壳蛋白六聚体基因（HexonHexon gene gene ） 前导区有断裂前导区有断裂现象。他们用限制性内切酶现象。他们用限制性内切酶EcoRIEcoRI和和HindHind = 3 * = 3 * ROMAN IIIROMAN III分别消解腺病毒的分别消解腺病毒的DNADNA得到了大小不同的很多片段得到了大小不同的很多片段分别选择两种酶切片段中的最大的分别选择两种酶切片段中的最大的A A片段片段DNADNA和和HexonHexon的的mRNAmRNA进行杂交进行杂交在电镜下可以观察到在电镜下可以观察到EcoRIEcoRI
60、酶切的酶切的A A片段的片段的33段可以和段可以和上述上述mRNAmRNA形成杂合双链形成杂合双链但在杂合双链的但在杂合双链的55端逸出端逸出3 3个单链个单链DNADNA环，说明它们不环，说明它们不能和能和mDNAmDNA完全互补完全互补 外显子（外显子（exon），），外元外元编码的编码的DNA序列，即被表达的序列，即被表达的DNA区段区段内含子（内含子（intron），），内元内元不编码的不编码的DNA序列序列Gilbert（1978年）提出内含子、外显子概念年）提出内含子、外显子概念BergetBerget在冷泉港作了有关发现断裂基因的学术报告，在冷泉港作了有关发现断裂基因的学术报告，
61、提出在提出在HexonHexon基因内近基因内近55端有不编码的部分端有不编码的部分ChambonChambon听了报告后便意识到，他们的实验结果也是可听了报告后便意识到，他们的实验结果也是可以用断裂基因来解释的以用断裂基因来解释的: : 即卵清蛋白的基因上可能有即卵清蛋白的基因上可能有多个断裂区（内含子）多个断裂区（内含子）在这些断裂区上有酶切位点的存在，可将卵清蛋白基在这些断裂区上有酶切位点的存在，可将卵清蛋白基因切成大小不同的片段，但它们都可以和因切成大小不同的片段，但它们都可以和mRNAmRNA进行杂进行杂交交事后事后Chambon(1977,1981)Chambon(1977,198
62、1)等用等用BergetBerget的实验方法进行的实验方法进行了分子杂交，果然出现了了分子杂交，果然出现了7 7个单链个单链DNADNA的环的环 断裂基因的结构断裂基因的结构成熟mRNA或cDNA与对应单链DNA杂交Total DNA of chicken cDNA7 DNA loopChambon was inspired by Bergets reportBerget, S. M., C. Moore, and P. Sharp. 1977. PNAS 74; 3171-3175用用S1核酶处理异源双链分子核酶处理异源双链分子核酸酶能专一降解未配核酸酶能专一降解未配对的单链核苷酸，在对的
63、单链核苷酸，在RNA-DNA异源双链分子中，外异源双链分子中，外显子形成双链而保留，内显子形成双链而保留，内含子仍为单链被降解含子仍为单链被降解.内含子是如何来的？内含子是如何来的？内含子的存在究竟有何意义？内含子的存在究竟有何意义？它担负着什么样的功能？它担负着什么样的功能？内含子又何以能在一些真核生物中非常广泛地分内含子又何以能在一些真核生物中非常广泛地分布呢？布呢？内含子的特点内含子的特点: :1.内含子和外显子的分布内含子和外显子的分布真核基因一般都含有内含子，也有少数基因不含内含真核基因一般都含有内含子，也有少数基因不含内含子，如组蛋白基因，干扰素基因，酵母的多数蛋白质子，如组蛋白基
64、因，干扰素基因，酵母的多数蛋白质基因基因1986年年ChuF.K等发现等发现T4噬菌体的胸苷合成酶基因也噬菌体的胸苷合成酶基因也含有内含子含有内含子此外猿猴病毒此外猿猴病毒SV40的的T和和t蛋白的基因中也含有长度不蛋白的基因中也含有长度不等的内含子等的内含子内含子的特点内含子的特点: :1.内含子和外显子的分布内含子和外显子的分布不同的基因其内含子的大小不相同不同的基因其内含子的大小不相同有的基因内含子少，如珠蛋白基因只有有的基因内含子少，如珠蛋白基因只有2个内含子，个内含子，有的基因内含子很多，如鸡的胶原蛋白（有的基因内含子很多，如鸡的胶原蛋白（1a2）蛋白）蛋白基因含有基因含有50个外显
65、子个外显子Exoncontentvs.length人类基因组计划人类基因组计划Exoncontentvs.lengthExoncontentvs.length内含子的特点内含子的特点: :2.内含子的相对性内含子的相对性内含子是相对的，一个基因的内含子可能是另一个内含子是相对的，一个基因的内含子可能是另一个基因的外显子基因的外显子 内含子内含子种类种类: :I: I: 内含子可自我剪接内含子可自我剪接, ,不需任何蛋白质参与不需任何蛋白质参与, ,需鸟苷参与需鸟苷参与II: II: 内含子的剪接需要蛋白酶的参与，如内含子的剪接需要蛋白酶的参与，如tRNAtRNA III: III: 内含子的剪
66、接需形成剪接体的形式，除各内含子的剪接需形成剪接体的形式，除各种蛋白因子外还需各种种蛋白因子外还需各种snRNPsnRNP的参与的参与如如: I: I类内含子包括四膜虫类内含子包括四膜虫rRNArRNA的内含子，几的内含子，几种酵母线粒体的内含子，噬菌体种酵母线粒体的内含子，噬菌体T4T4胸苷酸合成胸苷酸合成酶的内含子等。酶的内含子等。内含子自内含子自19771977年被发现以来，逐渐被明确地定年被发现以来，逐渐被明确地定义为：义为：基因中间插着的若干段序列，在基因中间插着的若干段序列，在RNARNA转录物水转录物水平上经剪接除去，不参与该基因在蛋白质水平平上经剪接除去，不参与该基因在蛋白质水
67、平上的表达。上的表达。 内含子起源的两种学说内含子起源的两种学说: :1.1.，“内含子存在内含子存在( (IntronsIntrons early) early)”模型模型: :内含子与它所在的基因一样古老，在装配第一个这样的内含子与它所在的基因一样古老，在装配第一个这样的基因时，内含子就已存在基因时，内含子就已存在早期的内含子具有自催化、自我复制等能力，因此，它早期的内含子具有自催化、自我复制等能力，因此，它们是原始基因和基因组的组织与复制必不可少的部分们是原始基因和基因组的组织与复制必不可少的部分而今天的原核生物和少数低等的真核生物，由于它们需而今天的原核生物和少数低等的真核生物，由于它
68、们需要进行快速的要进行快速的DNA复制从而进行快速的细胞分裂，因复制从而进行快速的细胞分裂，因而失去了内含子而失去了内含子现代的内含子是一类进化遗迹，它们之所以能继现代的内含子是一类进化遗迹，它们之所以能继续存在，是因为具有重新组合基因组中的外显续存在，是因为具有重新组合基因组中的外显子以形成新的基因的能力，即内含子能赋予其子以形成新的基因的能力，即内含子能赋予其携带者更大的进化潜力。携带者更大的进化潜力。内含子起源的两种学说内含子起源的两种学说: :2.2.“内含子滞后内含子滞后( (IntronsIntrons late) late)”模型模型: :认为原始蛋白质编码单位由非割裂的认为原始
69、蛋白质编码单位由非割裂的DNADNA序列组序列组成，内含子是随后插入进去的。成，内含子是随后插入进去的。 2.2.“内含子滞后内含子滞后( (IntronsIntrons late) late)”模型模型内含子不是基因原有的，而是在进化的某一过内含子不是基因原有的，而是在进化的某一过程中通过转座作用插入到连续基因中去的，内程中通过转座作用插入到连续基因中去的，内含子在较高级的功能基因或在真核生物出现之含子在较高级的功能基因或在真核生物出现之后才产生后才产生。这种假说必须面对一个难题，即内含子最初如这种假说必须面对一个难题，即内含子最初如何能插入到连续编码的基因中而保持基因的功何能插入到连续编码
70、的基因中而保持基因的功能不变能不变？ 2006年年3月月2日日Nature,440(7080):4145真核细胞的起源是生殖演化转变的一个标志。德国真核细胞的起源是生殖演化转变的一个标志。德国D D sseldorfsseldorf大学大学WilliamWilliam MartinMartin和美国国立卫生研究院和美国国立卫生研究院EugeneEugene V. V. KooninKoonin提出了一个假说将其与基因序列中的内提出了一个假说将其与基因序列中的内含子联系起来。基因序列中的内含子属于非编码含子联系起来。基因序列中的内含子属于非编码DNADNA，它，它在基因转录为信使在基因转录为信使
71、RNARNA过程中被剪切掉过程中被剪切掉, , 这个过程需要时这个过程需要时间间。因此，两个研究者认为，细胞核和细胞质之间核膜的形成，因此，两个研究者认为，细胞核和细胞质之间核膜的形成，就是为了给信使就是为了给信使RNARNA的拼接以足够的时间，并起到仅使完的拼接以足够的时间，并起到仅使完整的信使整的信使RNARNA透过的过滤功能，以使得完整的信使透过的过滤功能，以使得完整的信使RNARNA能够能够在细胞质中迅速翻译为蛋白质。他们同时认为，偶然扩散在细胞质中迅速翻译为蛋白质。他们同时认为，偶然扩散出去的内含子序列与随后演化形成的线粒体有关，并可以出去的内含子序列与随后演化形成的线粒体有关，并可
72、以作为细胞核和细胞质分化的一个证据。作为细胞核和细胞质分化的一个证据。NatGenet.2002Apr;30(4):426-9.PaganiF,BurattiE,.,DorkT,BaralleFE.AnewtypeofmutationcausesasplicingdefectinATM.wehaveidentifiedtheaberrantinclusionofacrypticexonof65bpinoneaffectedindividualwithadeletionoffournucleotides(GTAA)inintron20.Thedeletionislocated12bpdownst
73、reamand53bpupstreamfromthe5and3endsofthecrypticexon,respectively.Throughanalysisofthesplicingdefectusingahybridminigenesystem,weidentifiedanewintron-splicingprocessingelement(ISPE)complementarytoU1snRNA,theRNAcomponentoftheU1smallnuclearribonucleoprotein(snRNP).ThiselementmediatesaccurateintronprocessingandinteractsspecificallywithU1snRNPparticles.The4-ntdeletioncompletelyabolishedthisinteraction,causingactivationofthecrypticexon.
