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1、血糖的测定血糖的测定血糖的测定血糖的测定实验四实验四实验四实验四1;.血糖及血糖水平的概念：血糖及血糖水平的概念：血糖及血糖水平的概念：血糖及血糖水平的概念：血糖：指血液中的单糖：葡萄糖血糖：指血液中的单糖：葡萄糖血糖水平：血浆中葡萄糖浓度血糖水平：血浆中葡萄糖浓度血糖总维持在恒定水平：血糖总维持在恒定水平： 3.96.7mmol/L2v调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。v血糖水平异常：高血糖及糖尿病；低血糖3临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的
2、研究中，也涉及血糖的测定。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。测定血糖的意义测定血糖的意义测定血糖的意义测定血糖的意义4测定方法测定方法无机化学法：无机化学法： Folin-Wu法法有机化学法：邻甲苯胺法有机化学法：邻甲苯胺法酶法：酶法：葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法血糖测定的常用方法血糖测定的常用方法血糖测定的常用方法血糖测定的常用方法5葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -过氧化物酶法原理过氧化物酶法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（GO
3、DGOD）H2O 红色醌式物质红色醌式物质过氧化物酶过氧化物酶过氧化物酶过氧化物酶（PODPOD）TrinderTrinder反应反应反应反应505nm光吸收法测定光吸收法测定光吸收法测定光吸收法测定相对血糖浓度相对血糖浓度相对血糖浓度相对血糖浓度6分光光度计的工作原理分光光度计的工作原理7朗伯朗伯- -比尔定律比尔定律朗伯定律：朗伯定律：A=k1L 比尔定律：比尔定律：A=k2C朗伯朗伯-比尔定律：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光比尔定律：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。乘积成正比。 A=
4、KLC 8朗伯-比尔定律应用A标=KC标LA样=KC样L 标准品法测定未知样品含量标准品法测定未知样品含量C样=A样A标C标91. 接通电源，调整波长。接通电源，调整波长。2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯注意：加入样品量不超过比色杯体积的体积的2/3。3. 调模式为调模式为“透射比透射比”，对空白对照进行调，对空白对照进行调“0”（开盖）和调（开盖）和调“100”（闭盖）。（闭盖）。4. 调模式为调模式为“吸光度吸光度”，将空白对照调，将空白对照调“0”，测定待测样品的吸光度值。，测定待测样品的吸
5、光度值。分光光度计的使用分光光度计的使用分光光度计的使用分光光度计的使用101112葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- - - -过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响方方法法13（1）取取4支试管，按下表加入试剂支试管，按下表加入试剂: :试剂试剂标准管标准管(ml)测定管测定管1(ml)测定管测定管2(ml)空白管空白管(ml)血清样品血清样品0.020.02葡萄糖标准液葡萄糖标准液0.02蒸馏水蒸馏水0.02酶酚混合试剂酶酚混合试剂3.003.003.003.00实验
6、步骤：实验步骤：实验步骤：实验步骤：充分混匀，充分混匀，37 水浴中保温水浴中保温20min；冷却至室温后，冷却至室温后，505nm处比色处比色比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。14（2）计算：计算： 依据朗伯依据朗伯-比尔定律：比尔定律： A=KLC 标准管葡萄糖浓度：标准管葡萄糖浓度：5mmol/L 测定管测定管葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）测定管光密度测定管光密度 标准管光密度标准管光密度515正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。血糖测定应在取血后血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般现用现配。酶酚混合液一般现用现配。 注意事项注意事项注意事项注意事项16小结小结小结小结1 1、葡萄糖氧化酶、葡萄糖氧化酶- -过氧化物酶比色法测定血糖的原理。过氧化物酶比色法测定血糖的原理。2 2、分光光度计的正确使用。、分光光度计的正确使用。3 3、实验操作中存在的问题。、实验操作中存在的问题。17
