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1、实验二实验二 血涂片制备染色及白细胞分类计数血涂片制备染色及白细胞分类计数临床检验基础实验临床检验基础实验实验二血涂片制备白细胞分类计数 涂涂片片技技术术是是制制备备血血液液样样品品最最常常用用的的技技术术。将将血血液液样样品品制制成成单单层层细细胞胞的的涂涂片片标标本本，染染色色后后可可对对血血液液中中各各种种细细胞胞形形态态进进行行形形态态观观察察、细细胞胞计计数数、细细胞大小测量等工作。胞大小测量等工作。实验二血涂片制备白细胞分类计数血涂片制备血涂片制备推片载玻片血液一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B 1 2 3实验二血涂片制备白
2、细胞分类计数方法与步骤方法与步骤推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧实验二血涂片制备白细胞分类计数再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。成线状。实验二血涂片制备白细胞分类计数实验二血涂片制备白细胞分类计数3045两玻片的角度以两玻片的角度以30-4530-45为宜，轻轻将双凹片向为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。前匀速推进，即涂成血液薄膜。实验二血涂片制备白细胞分类计数血涂片血涂片实验二血涂片制备白细
3、胞分类计数不不良良血血涂涂片片实验二血涂片制备白细胞分类计数实验用品实验用品器材器材: 医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片净的载玻片 、双凹片（推片）、双凹片（推片） 。试剂试剂: Wrights（瑞氏）染液：（瑞氏）染液：Wrights色素粉色素粉末末0.1g，溶于，溶于60 ml甲醇。甲醇。 实验二血涂片制备白细胞分类计数瑞氏染色原理瑞氏染色原理 瑞氏粉瑞氏粉是由是由伊红伊红和和美蓝美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是混合后组成的一种中性盐染料。伊红是一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色
4、部分为阴离子；美蓝是一种碱性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝，以代表美蓝，以E-代表伊红。将适量的代表伊红。将适量的ME溶解在溶解在甲醇甲醇中，即成为中，即成为瑞氏染液瑞氏染液。 实验二血涂片制备白细胞分类计数 甲醇的作用甲醇的作用可使可使ME溶解，解离为溶解，解离为M+和和E，这两种有色离，这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。 各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以
5、见到不同的着色。料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以见到不同的着色。细细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色 ；细胞中的酸性物质；细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色 ；当细胞含酸、碱性物；当细胞含酸、碱性物质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成淡质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成淡紫红色。紫红色。 瑞氏染色原理瑞氏染色原理实验二血涂片制备白细胞分类计数血涂片染色血涂片染色勿冲洗再加勿冲洗再加瑞氏染色瑞氏染色液液5-85-8滴后将滴后将液和液和液充分混匀静置液充分混
6、匀静置1010分钟分钟直接流水冲洗3-5分钟（切勿先倒掉染液）涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞李李四四1 12 23 3涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-85-8滴滴覆盖整个血膜覆盖整个血膜1 1分钟分钟实验二血涂片制备白细胞分类计数染色浓染：待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wrights染液盖满血膜为止，染色35 min。淡染：然后滴加等量缓冲液，使其与染液均匀混合，静置1015 min。用流水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。 实验二血涂片制备白细胞分类计数血涂片的观察血涂片的观察低倍镜观察低倍镜观察1.1.染色情况染色情况( (满意、偏酸、偏碱）满意、偏酸、偏碱）2
7、.2.细胞分布情况细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计数数100100个白细胞）个白细胞）李李四四1 12 23 3实验二血涂片制备白细胞分类计数体尾交界处体尾交界处理想区理想区域域 细胞重叠细胞重叠 细胞太稀细胞太稀理想区域理想区域实验二血涂片制备白细胞分类计数各类成熟白细胞的形态学：各类成熟白细胞的形态学： q中中性性粒粒细细胞胞（Ne）：在在瑞瑞氏氏染染色色血血涂涂片片上上呈呈圆圆形形，直直径径1013m，胞胞浆浆染染粉粉红红色色，核核形形一一叶叶（杆杆状状核核）至至五
8、五叶叶不不等等，以以三三叶叶者者多多见见，染染成成深深紫红色紫红色，胞浆胞浆中有许多中有许多细小均匀紫红色颗粒细小均匀紫红色颗粒。实验二血涂片制备白细胞分类计数q嗜酸性粒细胞（嗜酸性粒细胞（EoEo）：）：较中性粒细胞稍大较中性粒细胞稍大，胞胞核核多为两叶，呈眼镜、八字形多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质核染色质粗糙粗糙染深紫红色染深紫红色，胞浆胞浆内充满内充满粗大均匀的嗜酸性颗粗大均匀的嗜酸性颗粒粒，瑞氏染色时呈，瑞氏染色时呈桔红色桔红色，有折光性。，有折光性。 实验二血涂片制备白细胞分类计数q嗜碱性粒细胞（嗜碱性粒细胞（Ba）：）：胞浆胞浆中含有大小不等的中含有大小不等的嗜碱性颗粒嗜碱性颗
9、粒，瑞氏染色时呈，瑞氏染色时呈兰黑色兰黑色。于光学显微。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；于水或因功能活动而脱颗粒所致；核核呈呈淡紫红色淡紫红色常看不清常看不清，呈杆状或分叶状。，呈杆状或分叶状。 实验二血涂片制备白细胞分类计数q淋巴细胞（淋巴细胞（Ly）：）：胞体胞体呈圆形，直径介于呈圆形，直径介于615m之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径见，直径69m，核核大呈深紫色致密而浓染大呈深紫色致密而浓染，胞浆胞浆量极少量极少；大淋巴细胞；大淋巴细胞胞浆胞浆量较多
10、，呈量较多，呈清澈清澈的淡蓝色的淡蓝色，可见，可见少量嗜苯胺蓝颗粒少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核胞核圆或圆或椭圆椭圆，常偏向细胞一侧常偏向细胞一侧，染色较深。，染色较深。 实验二血涂片制备白细胞分类计数q单核细胞（单核细胞（Mo）：）：在瑞氏染色涂片上为在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体胞体圆形、椭圆形或不规则形圆形、椭圆形或不规则形；核形核形多种多种多样，最重要的特点是多样，最重要的特点是染色质染色质较细致疏松，呈丝较细致疏松，呈丝网状或条缕状网状或条缕状，着色较淡着色较淡胞浆胞浆较多，淡兰色较多，淡兰色，含，含大量大量细小尘土样颗粒细小尘土样颗粒。实验二血涂片制备白细胞分类计数中性粒细胞中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞（右）嗜碱性粒细胞（右）单核细胞单核细胞血小板血小板实验二血涂片制备白细胞分类计数涂片制备的注意事项涂片制备的注意事项染色操作注意事项染色操作注意事项染色质量的控制染色质量的控制实验二血涂片制备白细胞分类计数实验二血涂片制备白细胞分类计数
