《DNase I(RNase Free)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《DNase I(RNase Free)（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、DNase IDNase I（RNase FreeRNase Free）使 用 说 明 书使 用 说 明 书TaKaRa Code： D2215TaKaRa Code： D2215包 装：包 装：DNase I（RNase Free；5 U/DNase I（RNase Free；5 U/ l）l）10DNase I Buffer10DNase I Buffer1,0001,000UnitsUnits1 1mlml保 存：保 存：-20-20制品说明制品说明本酶是将单链或双链DNA同等程度的随机分解，生成具有本酶是将单链或双链DNA同等程度的随机分解，生成具有 5-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内
2、切酶。在5-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。在MgMg2+2+存在时，存在时， 能在双链DNA上随机地产生切口；能在双链DNA上随机地产生切口； 而在Mn而在Mn2+2+存在下能将双链DNA同时切断，存在下能将双链DNA同时切断， 使DNA片段化。使DNA片段化。由于由于 DNaseDNase I（RNaseI（RNase Free）酶几乎完全除去了Free）酶几乎完全除去了 ProteaseProtease 及及 RNase，从而提高了在RNase，从而提高了在 pHpH 中性区域的稳中性区域的稳定性，可以安全地用于定性，可以安全地用于 RNARNA 的制取。的制取。酶贮存溶液酶贮存溶液
3、Tris-HCl（pH7.5 at 4）Tris-HCl（pH7.5 at 4）NaClNaClCaClCaCl2 2GlycerolGlycerol202050500.10.15050mMmMmMmMmMmM%起 源：起 源：Bovine pancreas。Bovine pancreas。活性定义活性定义以小牛胸腺以小牛胸腺 DNADNA 为底物，为底物， 在在 25、25、 pH5.0pH5.0 的条件为下，的条件为下， 1 1 分钟内使反应液的分钟内使反应液的 260 nm260 nm 吸光度增加吸光度增加 0.0010.001所需要的酶量定义为所需要的酶量定义为 1 1 个活性单位（K
4、unitz Unit）个活性单位（Kunitz Unit） 。纯 度纯 度10 U10 U 的本酶和的本酶和 1 1 g g 的的 16S，23S rRNA16S，23S rRNA 在在 37、pH7.537、pH7.5 的条件下反应的条件下反应 4 4 小时，RNA小时，RNA 的电泳谱带不发的电泳谱带不发生变化。生变化。用 途用 途1）1） 用用 T7T7 或或 SP6 RNA PolymeraseSP6 RNA Polymerase 进行体外转录（进行体外转录（In vitroIn vitro transcription）时，合成 transcription）时，合成 RNARNA 后，
5、不必后，不必更换更换 Buffer，使用Buffer，使用 DNase I（RNase Free）即可将模板DNase I（RNase Free）即可将模板 DNADNA 降解。降解。2）2） 与与 DNA Polymerase IDNA Polymerase I 一起用于切口平移（Nick translation）一起用于切口平移（Nick translation） 。3）3） 在Mn在Mn2+2+存在的条件下，为鸟枪法测序（Shot gun sequencing）制作DNA文库。存在的条件下，为鸟枪法测序（Shot gun sequencing）制作DNA文库。4）4） 用于足迹法（Foo
6、t printing）分析用于足迹法（Foot printing）分析 DNA-蛋白质相互作用。DNA-蛋白质相互作用。添附添附 BufferBuffer 组成（保存：组成（保存：-20-20）10DNase I Buffer10DNase I BufferTrisHCl（pH7.5）TrisHCl（pH7.5）MgClMgCl2 2DTTDTT400400mMmM80805050mMmMmMmM使用例使用例除去除去 RNARNA 中的基因组中的基因组 DNADNA1.1.在微量离心管中配制下列反应液，全量在微量离心管中配制下列反应液，全量 5050 l。l。全全 RNARNA10DNase
7、I Buffer10DNase I BufferDNase I（RNase-free，5 U/DNase I（RNase-free，5 U/ l）l）RNase Inhibitor（40 U/RNase Inhibitor（40 U/ l）l）DEPC HDEPC H2 2OO2.2.37反应37反应 20302030 分钟。分钟。3.3.使用以下两种方法使使用以下两种方法使 DNase IDNase I 失活。失活。A热处理A热处理（1）加入（1）加入 2.52.5 l 0.5 M EDTA 80l 0.5 M EDTA 80 2 min。2 min。（2）用（2）用 RNase Free
8、dHRNase Free dH2 2O O 定容至定容至 100100 l。l。B苯酚/氯仿抽提B苯酚/氯仿抽提（1）用（1）用 5050 l RNase Free dHl RNase Free dH2 2O O 定容至定容至 100100 l l 后加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）后加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）混匀。混匀。（2）室温，13,500 rpm 5 min（2）室温，13,500 rpm 5 min 离心，取上清。离心，取上清。（3）加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1）混匀。（3）加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1）混匀。（4）室温，13,500
9、 rpm 5 min（4）室温，13,500 rpm 5 min 离心，取上清。离心，取上清。4.4.加入加入 1010 l 3 Ml 3 M 醋酸钠，250醋酸钠，250 l l 冷乙醇，冰上放置冷乙醇，冰上放置 10 min。10 min。5.5.4，13,500 rpm 15 min4，13,500 rpm 15 min 离心，弃上清。离心，弃上清。6.6.加入加入 70%冷乙醇洗净，4，13,500 rpm 5 min70%冷乙醇洗净，4，13,500 rpm 5 min 离心，弃上清。离心，弃上清。7.7.沉淀干燥。沉淀干燥。8.8.用适量的用适量的 RNase Free dHRNase Free dH2 2O O 溶解后，进行溶解后，进行 AgaroseAgarose 电泳确认是否除去基因组电泳确认是否除去基因组 DNA。DNA。20502050 g g5 5 l l2 2 l l0.50.5 l lup toup to 5050 l lV2010.05V2010.05
