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1、昆明医科大学第一附属医院重症医学科昆明医科大学第一附属医院重症医学科临临床床细细菌菌培培养养的的正正确确采采集集方方法法以以及及相相关关注注意意事事项项体液细菌培养的采集及注意事项体液细菌培养的采集及注意事项体液细菌培养的采集及注意事项体液细菌培养的采集及注意事项昆明医科大学第一附属医院重症医学科（昆明医科大学第一附属医院重症医学科（SICU）胡仁政胡仁政 细菌培养（细菌培养（BacterialCulture）血培养（血培养（BloodCulture）痰培养（痰培养（SputumCulture）尿培养（尿培养（UrineCulture）其他体液（脑脊液、胸腔积液等）其他体液（脑脊液、胸腔积液等
2、）4123细菌培养是指用人工方法使细菌生长繁殖的技术，即将细菌培养是指用人工方法使细菌生长繁殖的技术，即将其接种于培养基上，使其生长繁殖，用于研究、鉴定和应用。其接种于培养基上，使其生长繁殖，用于研究、鉴定和应用。一般细菌可在有氧条件下，一般细菌可在有氧条件下，37中放中放1824小时生长。厌氧小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放菌则需在无氧环境中放23天后生长。个别细菌如结核菌要天后生长。个别细菌如结核菌要培养培养1个月之久。个月之久。血培养血培养（BloodCulture）血培养的概念血培养的概念血培养采集的指征血培养采集的指征血培养采集的时机血培养采集的时机4123 血培养采集的套数及采血
3、量血培养采集的套数及采血量血培养血培养采集的操作步骤采集的操作步骤56血培养采集的部位血培养采集的部位血培养（血培养（BloodCulture）的概念）的概念 即采集患者的血液或无菌体液标本，送至微生物实验即采集患者的血液或无菌体液标本，送至微生物实验室培养检测。检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存室培养检测。检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存在。如有细菌，则极有可能为致病的细菌。以便进一步进在。如有细菌，则极有可能为致病的细菌。以便进一步进行鉴定行鉴定/ /药敏试验。药敏试验。 血培养的采集指征血培养的采集指征 1.寒战、发热（=38、低温10109/L ）3.粒细胞减少（1109/L
4、）4.血小板减少、皮肤、粘膜出血5. 低血压或高血压、呼吸频率加快6.心率异常加快、昏迷、多器官衰竭7.休克，寒颤，僵直8.严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎， 肾盂肾炎，腹部术后感染)9.当怀疑血流感染或脓毒症时血培养采集的时机血培养采集的时机 发热高峰前12-2.5小时发热高峰前2.5-0.5小时发热高峰期间发热高峰后1-12小时9% +14% +9% +11% +166 人105 人99 人258 人在患者接受抗生素治疗前采血如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养尽可能在患者寒战或开始发热时采血数据来源：Thomson et al. 1991. ASCP. May
5、o Clinic Study血培养的采集部位血培养的采集部位 1.尽量从静脉取血，不宜从静脉导管 或静脉留置口取血。2.若导管设施取血（不要弃去初段血 ，不用抗凝剂冲洗），必须同时静 脉取血，以求对比和解释。3.不推荐使用真空采血针（蝴蝶针） 将静脉血直接入瓶。4.不主张换针头入瓶5.培养瓶采集后不可以放入冰箱和冻 箱保存。保存在1525的室温即 可，温度过低会导致对温度敏感的 耐瑟氏菌等死亡。（ % False Positive ）3.8%1.7%（ 细菌易聚集官腔部位）血培养采集的套数及采血量血培养采集的套数及采血量 成人成人“一套一套”血培养血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶应该包括需氧瓶和厌
6、氧瓶各一个，也叫各一个，也叫“一份一份”。 注意注意 ：一次穿刺采：一次穿刺采血，算血，算“一套一套”，采集第，采集第二套应从另一个穿刺点获二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。厌氧培养。多个穿刺部位采血，因多部位多个穿刺部位采血，因多部位同时发生污染的几率较小，便同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断于对结果进判断初发患者，绝不能只采初发患者，绝不能只采1套标本套标本对于每位患者来说每次采血最对于每位患者来说每次采血最少少2套，套，3套更好套更好 血培养采集的套数及
7、采血量血培养采集的套数及采血量 2 23 3套血培养，有助于污染的判断套血培养，有助于污染的判断表皮葡萄球菌的临床意义表皮葡萄球菌的临床意义Tokars, JI. Clin Infect Dis 2004; 39:333Tokars, JI. Clin Infect Dis 2004; 39:333采集采集1 1套无法判断是病原菌还是污染菌。套无法判断是病原菌还是污染菌。Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many Blood Cultures Are Needed J Clin Microbi
8、ol. 2007; 45:3546-3548结结 论：论：1.1.绝对不能只用一瓶，寒颤绝对不能只用一瓶，寒颤- - 发热之间发热之间 2.2.每位患者每次采血最少每位患者每次采血最少2 2套，套， 采集采集3 3套更好套更好 3.3.初发患者，绝不能只采初发患者，绝不能只采1 1套套 血培养标本血培养标本 4.4.采集采集2 23 3套血培养，有助于套血培养，有助于 污染的判断污染的判断血培养采集的套数及采血量血培养采集的套数及采血量结论结论2结论结论1血液与肉汤最佳比例血液与肉汤最佳比例1:41:41:101:10采血量采血量 采血量采血量(ml)(ml)与检出率的关系与检出率的关系血培养
9、每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加3但并非越多越好，超过一定数量采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。血培养采集的套数及采血量血培养采集的套数及采血量 采血量是影响灵敏度最关键因素采血量是影响灵敏度最关键因素采血量是影响灵敏度最关键因素采血量是影响灵敏度最关键因素12儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1 1总血量下，一般为总血量下，一般为1 13ml3ml。采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床9090以以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染上的感染为需氧菌或兼性
10、需氧菌感染成人一份标本成人一份标本2 2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶个培养瓶（需氧厌氧），每瓶8 810ml10ml，共，共20ml20ml；要求至少采两份标本，即；要求至少采两份标本，即40ml40ml。血培养采集的操作步骤血培养采集的操作步骤 洗手（可手消）、戴口罩75%酒精消毒培养瓶的橡胶塞，待干60秒（无菌纱布或棉签清洁表面残余酒精） 75%酒精消毒穿刺部位，由内向外划圈，作用（待干）30s以碘酊或碘伏消毒穿刺部位（碘酊作用30s，碘伏作用1.5-2min）从穿刺点由内向外划圈，消毒范围为810cm用75%酒精消毒作用60s，待干持穿刺针按常规方法刺入静脉，另一头刺入相应血培养瓶内成人采
11、血量10-20ml，婴幼儿1-5ml（严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套）严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套）血液注入血培养瓶后颠倒轻摇瓶子混匀标本与肉汤，以避免血液凝集 用75%酒精重新消毒血培养瓶橡皮塞并盖好塑料盖立即送检（切忌将培养瓶冷藏或冷冻切忌将培养瓶冷藏或冷冻）洗手、摘口罩血液采集的注意事项血液采集的注意事项 1.理想的采集时间理想的采集时间采集血标本的时间是早晨700700800 800 。2. .禁止从输液三通管采血禁止从输液三通管采血，一般在输液结束30分钟以后再采 血。避免从正 在输液的肢体上采血，输液时采血应当遵从“
12、远端原则远端原则”：选择在输液的 对侧肢体或无输液的其他肢体（如足部）静脉采血。在四肢静脉都输液时， 可以选择在输液静脉的远心端（静脉血流的上游）采血。急诊、抢救过程 中在输液的同时采血，应在检验申请单上注明。 3.采血顺序采血顺序是：血培养、不含添加剂的采血管（血清标本管，红色、桔红色 或黄色）、凝血标本管（浅蓝色）、其他标本管。如果同时作厌氧培养和 需氧培养，应先将血标本接种厌氧培养瓶，然后再接种需氧培养瓶。4.采静脉血时止血带结扎不能过久止血带结扎不能过久，可引起误差。如以结扎1min的样品结果 为基数，则结3min，可使血浆总蛋白增加5，胆固醇增加5，铁增加6， 胆红素增加8，乳酸则不
13、能使用止血带。血液采集的注意事项血液采集的注意事项 5.禁止拍打手臂或反复握拳屈肘及反复穿刺等，否则会使血钾上升0.8mmol/L。 采血用针头过细会使血K+升高。6.采集标本时患者坐位或卧位对检验结果无较大差异，但以静坐510分钟后 坐位（从肘静脉）采血为最佳;站立时，血液中成分浓缩，蛋白、酶类、钙、 镁等结果偏高。7.标本的送检时间血标本采集后应尽快送检尽快送检，时间最好不超过2 h。血沉应于 2 h内测定完毕，否则血沉减慢。心肌损伤标志物检验要求总周转时间小于 1 h。血气分析、细菌培养标本等应该在30 min内测定。血糖测定应于半小 时内送检，采血后室温放置，由于糖酵解作用，每小时可降
14、解0.05mmol/L, 夏季采血后血糖将以每小时7%10%的速度分解，标本留置时间过久易影响 血糖的检验结果。痰培养（痰培养（ Sputum Culture Sputum Culture ） 气道吸痰采样气道吸痰采样经支气管镜采样经支气管镜采样其他其他咳痰标本的采集咳痰标本的采集经气管穿刺吸引（经气管穿刺吸引（transtrachealaspiration,TTA）经胸壁针刺吸引（经胸壁针刺吸引（transthoracicneedleaspiration,TNA经人工气道吸引分泌物（经人工气道吸引分泌物（endotrachealaspirates，ETA）支气管肺泡灌洗（支气管肺泡灌洗（br
15、onchoalveolarlavage,BAL）经支气管镜直接吸引经支气管镜直接吸引防污染样本毛刷（防污染样本毛刷（protectivespecimenbrush,PSB）自行咳痰采样自行咳痰采样痰液采集的方法痰液采集的方法咳痰标本的采集及注意事项咳痰标本的采集及注意事项 在抗生素应用前采集痰标本;应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口深咳。经气管吸痰时注意无菌。无痰可用35NaCl 5ml雾吸约5min导痰也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰4 41 12 23 3标本采集后12h内必须立即进行实验室处理，如不能及时送达，应将标本暂存于4冰箱内，但放置时间不可超过24h。厌氧培养标本的最佳
16、运送时间取决于标本量。被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养尿培养（尿培养（ Urine Culture Urine Culture ）清洁中段尿清洁中段尿导尿导管尿、留置尿管导尿导管尿、留置尿管经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液（一）、新鲜晨尿（这时的尿标本较浓缩和酸化，不受运动及进餐等影响。适用于尿蛋白、 尿沉渣、尿亚硝酸盐检验及细菌培养）和随机尿 （尿液可能被稀释或受进餐、药 物以及新陈代谢等影响，尿中成分检出情况不尽相同。餐后尿检测易出现糖尿）。（二）、尿胆原检测以14：0016：00时间段内留取的尿液为好。（三）、尿液定量检查需要留取12h或24h
17、的混合尿液，留取时应按规定时间内排出之尿液 装入含有合适防腐剂的洁净容器内，混匀后记录总量，取10ml送检。 SICU：尿路感染（15%）、创伤（10%） 肺炎（8%）、交叉感染（8%）MICU：尿路感染（10%）、肺炎（10%） 交叉感染（5%）导致院内感染的常见原因尿液采集的注意事项尿液采集的注意事项 尿液培养采集注意尿液培养采集注意1.1.尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道 内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能 导致错误的培养结果。导致错误的培养结果。2.2.诊断症状明显的病
18、人（如尿急、尿频、尿痛），一份诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份 标本就已足够，治疗标本就已足够，治疗48-7248-72小时后再采集第二份标本。小时后再采集第二份标本。 对于症状不明显的病人，需采集对于症状不明显的病人，需采集2-32-3份标本。怀疑肾结份标本。怀疑肾结 核时，应连续核时，应连续3 3天采集晨尿。天采集晨尿。标本以晨起第一次尿为佳。标本以晨起第一次尿为佳。3.3.多次收集或多次收集或2424小时尿不能用作培养。小时尿不能用作培养。4.4.申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培 养分析非常重要，尤其只有少量尿液标
19、本。养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。5.5.室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此如果室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此如果 30min30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，内不能及时培养尿液则必须冷藏，可暂存可暂存4冰冰箱，箱，但但保存保存也不能也不能超过超过8h。清洁中段尿液清洁中段尿液 尿标本采集尿标本采集操作步骤操作步骤一、女性病人收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗尿道区域分开阴唇，开始排尿，排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿。二、男性病人回缩包皮并清洗龟头，排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿。1.尽量取早晨第一次尿液尽量取早晨第一次尿液2.详细告知病
20、人操作步骤详细告知病人操作步骤3.弃去开始流出的尿液，弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病取能代表膀胱部位病原菌的中段尿原菌的中段尿导尿管尿液导尿管尿液 集尿袋内的尿集尿袋内的尿液不能用作培液不能用作培养；养；导尿管末端的导尿管末端的尿液也不能用尿液也不能用于培养，因为于培养，因为很难避免没有很难避免没有尿道菌群污染。尿道菌群污染。留置导管尿液标本留置导管尿液标本常通过专门的采样常通过专门的采样端口采集，不能把端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开导尿管与尿袋拔开后收集尿液。后收集尿液。采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管采样端口用酒精消毒；必要时，可
21、先夹住导尿管但不能超过但不能超过30分钟；将注射器针头插入采样端口，分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中。抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中。耻骨上穿刺吸取尿液耻骨上穿刺吸取尿液 可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。尿液的小儿难以实施。方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿刺点方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿刺点部位；在耻骨联合与脐连线上，高于耻骨联合部位；在耻骨联合与脐连线上，高于耻骨联合2cm处进针处进针刺入膀胱；取刺入膀胱；取20ml尿液；置于无菌容器中并送往实验室。尿液；置于
22、无菌容器中并送往实验室。可用于厌氧菌检测可用于厌氧菌检测常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。1234厌氧标本的采集及注意事项厌氧标本的采集及注意事项 临床厌氧菌感染的指正临床厌氧菌感染的指正厌氧标本采集注意事项厌氧标本采集注意事项1）肺分泌物和痰标本：在支气管镜 下或环甲膜穿刺术取材。2）脓胸或未溃破的脓肿：局部消毒 后用无菌注射器抽取，立即排 尽空气，将针头插入橡皮塞中 送检。3）尿：耻骨上缘行膀胱穿刺术下抽 取尿液。4）血液：直接抽取，尽量减少空气 进入培养瓶内。5）窦道，深部脓肿：可通特别采样 器采取。1）感染局部产生气体，肿胀，坏死， 皮下有捻发音。2）有恶臭，呈脓性并含有坏死组织 的分泌物应考虑厌氧菌感染，但 无恶臭的分泌物不能排除厌氧菌 感染。3）粘膜附近的感染(如口腔，鼻，咽 腔，肠道，外阴和阴道)易发生 厌氧菌感染。4）伴有黑色或黄色硫磺样颗粒，在 紫外灯下合并红色荧光的分泌物。5）长期使用氨基糖甙类抗生素治疗 无效如链霉素，庆大霉素，卡那 霉素等的患者。6）常规血培养阴性的细菌性心内膜 炎，并发脓毒性血栓静脉炎或伴 有黄疸的菌血症。昆明医科大学第一附属医院重症医学科（昆明医科大学第一附属医院重症医学科（SICU）胡仁政胡仁政
