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1、专题专题1 基因工程基因工程1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序比比比比较较DNADNA复制复制复制复制PCRPCR技技技技术术区区区区别别解旋解旋解旋解旋方式方式方式方式解旋解旋解旋解旋酶酶酶酶催化催化催化催化DNADNA在高温作用下在高温作用下在高温作用下在高温作用下变变性解旋性解旋性解旋性解旋场场所所所所细细胞内胞内胞内胞内( (主要在主要在主要在主要在细细胞核内胞核内胞核内胞核内) )细细胞外胞外胞外胞外( (主要在主要在主要在主要在PCRPCR扩扩增增增增仪仪内内内内) )区区区区别别酶酶酶酶DNADNA解旋解旋解旋解旋酶酶酶酶、普通、普通、普通、普通的的的的DNAD
2、NA聚合聚合聚合聚合酶酶酶酶等等等等耐耐耐耐热热的的的的DNADNA聚合聚合聚合聚合酶酶酶酶(Taq(Taq聚合聚合聚合聚合酶酶酶酶) )温度温度温度温度条件条件条件条件细细胞内温和条件胞内温和条件胞内温和条件胞内温和条件需控制温度，在需控制温度，在需控制温度，在需控制温度，在较较高高高高温度下温度下温度下温度下进进行行行行合成的合成的合成的合成的对对象象象象DNADNA分子分子分子分子DNADNA片段或基因片段或基因片段或基因片段或基因联联系系系系模板：均需要脱氧核苷酸模板：均需要脱氧核苷酸模板：均需要脱氧核苷酸模板：均需要脱氧核苷酸链链作作作作为为模板模板模板模板进进行行行行物物物物质质合
3、成合成合成合成原料：均原料：均原料：均原料：均为为四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸酶酶酶酶：均需要：均需要：均需要：均需要DNADNA聚合聚合聚合聚合酶酶酶酶进进行催化行催化行催化行催化引物：均需要引物，使引物：均需要引物，使引物：均需要引物，使引物：均需要引物，使DNADNA聚合聚合聚合聚合酶酶酶酶从引物从引物从引物从引物的的的的33端开始端开始端开始端开始连连接脱氧核苷酸接脱氧核苷酸接脱氧核苷酸接脱氧核苷酸受体受体受体受体细细胞胞胞胞方法方法方法方法植物植物植物植物细细胞胞胞胞( (体体体体细细胞胞胞胞) )农农杆菌杆菌杆菌杆菌转转化法：目的基因插入化法：目的基因插
4、入化法：目的基因插入化法：目的基因插入TiTi质质粒的粒的粒的粒的T-DNAT-DNA农农杆菌杆菌杆菌杆菌导导入植物入植物入植物入植物细细胞胞胞胞稳稳定定定定维维持和表达持和表达持和表达持和表达基因基因基因基因枪枪法：是法：是法：是法：是单单子叶植物中常用的一种子叶植物中常用的一种子叶植物中常用的一种子叶植物中常用的一种基因基因基因基因转转化方法，但是成本化方法，但是成本化方法，但是成本化方法，但是成本较较高高高高花粉管通道法：花粉管通道法：花粉管通道法：花粉管通道法：这这是我国科学家独是我国科学家独是我国科学家独是我国科学家独创创的的的的一种方法，是一种十分一种方法，是一种十分一种方法，是一
5、种十分一种方法，是一种十分简简便便便便经济经济的方法的方法的方法的方法动动物物物物细细胞胞胞胞( (受精卵受精卵受精卵受精卵) )显显微注射法：含有目的基因微注射法：含有目的基因微注射法：含有目的基因微注射法：含有目的基因的表达的表达的表达的表达载载体提体提体提体提纯纯取卵取卵取卵取卵( (受精受精受精受精卵卵卵卵) )显显微注射微注射微注射微注射受精卵受精卵受精卵受精卵发发育育育育获获得具有新性状的得具有新性状的得具有新性状的得具有新性状的动动物物物物微生物微生物微生物微生物细细胞胞胞胞( (原核原核原核原核细细胞胞胞胞) )CaCa2 2处处理理理理细细胞胞胞胞感受感受感受感受态细态细胞胞
6、胞胞表达表达表达表达载载体与感受体与感受体与感受体与感受态细态细胞混胞混胞混胞混合合合合感受感受感受感受态细态细胞吸收胞吸收胞吸收胞吸收DNADNA分分分分子子子子目的基因随受体目的基因随受体目的基因随受体目的基因随受体细细胞的胞的胞的胞的繁殖而复制繁殖而复制繁殖而复制繁殖而复制比比比比较较起始起始起始起始( (终终止止止止) )密密密密码码子子子子启启启启动动( (终终止止止止) )子子子子本本本本质质三个相三个相三个相三个相邻邻碱基碱基碱基碱基DNADNA片段片段片段片段位置位置位置位置位于位于位于位于mRNAmRNA上上上上位于位于位于位于DNADNA上上上上作用作用作用作用启启启启动动
7、( (终终止止止止) )翻翻翻翻译译启启启启动动( (终终止止止止) )转录转录类类型型型型步步步步骤骤检测检测内容内容内容内容方法方法方法方法结结果果果果显显示示示示分子分子分子分子水平水平水平水平检测检测第一步第一步第一步第一步目的基因是目的基因是目的基因是目的基因是否否否否进进入受体入受体入受体入受体细细胞胞胞胞DNADNA分子分子分子分子杂杂交交交交(DNA(DNA和和和和DNADNA之之之之间间) )是否成功是否成功是否成功是否成功显显示出示出示出示出杂杂交交交交带带第二步第二步第二步第二步目的基因是目的基因是目的基因是目的基因是否否否否转录转录出出出出mRNAmRNA分子分子分子分
8、子杂杂交交交交技技技技术术(DNA(DNA和和和和mRNAmRNA之之之之间间) )是否成功是否成功是否成功是否成功显显示出示出示出示出杂杂交交交交带带第三步第三步第三步第三步目的基因是目的基因是目的基因是目的基因是否翻否翻否翻否翻译译出蛋出蛋出蛋出蛋白白白白质质抗原抗原抗原抗原抗抗抗抗体体体体杂杂交交交交是否成功是否成功是否成功是否成功显显示出示出示出示出杂杂交交交交带带个体个体个体个体水平水平水平水平鉴鉴定定定定需要做抗虫、抗病的接种需要做抗虫、抗病的接种需要做抗虫、抗病的接种需要做抗虫、抗病的接种实验实验，以确定是，以确定是，以确定是，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程否有抗性以及抗性的程度；基因工程否有抗性以及抗性的程度；基因工程否有抗性以及抗性的程度；基因工程产产品品品品与天然与天然与天然与天然产产品的功能品的功能品的功能品的功能进进行活性比行活性比行活性比行活性比较较，以确定，以确定，以确定，以确定二者的功能活性是否相同等二者的功能活性是否相同等二者的功能活性是否相同等二者的功能活性是否相同等
