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1、ABO血型、血型、Rh（D）抗原鉴定）抗原鉴定 遵医附院输血科遵医附院输血科 陈月宽陈月宽 13984268228 8608288ABO血型正、反定型血型正、反定型目的：用于ABO血型鉴定，确保鉴定结果正确适用范围：受血者、献血者ABO血型鉴定使用器材和材料：离心机、标准血清、标准红细胞、吸管、玻片等方法：正定型和反定型原理原理：正定型是检测红细胞表面的抗原，用标准抗A和抗B分型血清测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；反定型是检测血清（浆）中的抗体，用标准A型细胞和B型细胞测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B抗体。Rh(D)血型定型血型定型目的：鉴定红细胞表面是否含有目的：鉴定红细胞表
2、面是否含有D抗原。抗原。适用范围：受血者、献血者适用范围：受血者、献血者Rh(D)血型鉴定血型鉴定使用器材和材料：使用器材和材料：Rh抗抗(-D)标准血清、吸管、玻片标准血清、吸管、玻片等等方法：玻片法方法：玻片法原理原理：根据抗：根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分反应，区分Rh(D)阳性和阳性和Rh(D)阴性。阴性。ABO正定型及正定型及Rh（D）定型操作程序（玻片法）定型操作程序（玻片法） 取玻片1张，用红笔将其划分为左、中、右三段，首先左端加入A型（抗-B）血清1滴，中端加入B型（抗-A)血清1滴，右端加入抗（-D）血清1滴，然后在左、中、右三段同时加
3、入受检者35%红细胞悬液1滴，并分别混匀，放置一段时间后观察结果。注注:红细胞悬液的制备红细胞悬液的制备:悬液浓度(%)压积红细胞(d)盐水(d)212.0ml(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)A型标准血清型标准血清（抗（抗-B）B型标准血清型标准血清（抗（抗-A）左、中端红细胞凝左、中端红细胞凝集说明此红细胞上集说明此红细胞上含有含有A、B两种抗原，两种抗原，此血型为此血型为AB型型抗（抗（-D）血清与红）血清与红细胞发生凝集，细胞发生凝集，Rh（D）阳性，反）阳性，反之阴性。之阴性。抗（抗（-D）标准血清）标准血清受检者受检者35%红细胞悬液红细胞悬
4、液左端左端中端中端右端右端 抗(-A)、抗(-B)、抗(-D)标准血清与红细胞悬液分别混匀放置一段时间后，标准血清与红细胞表面是否含有相应的抗原而产生不同的凝集现象，将ABO血型分为四种（即A、B、O、AB型），Rh(D)血型分为阳性、阴性二种。血型凝集示意图血型凝集示意图抗抗-B抗抗-A抗（抗（-D）血型：血型：AB型型Rh(D)：阳性：阳性抗抗-B抗抗-A抗（抗（-D）血型：血型：B型型Rh(D)：阴性阴性抗抗-B抗抗-B抗抗-A抗抗-A抗（抗（-D）抗（抗（-D）血型：血型：A型型Rh(D)：阳性：阳性血型：血型：O型型Rh(D)：阳性：阳性反定法（试管法）反定法（试管法）取小试管2支，
5、分别标明A、B，并同时加入受检者血清各2滴，在A管加入3%5%A型红细胞悬液1滴；B管加入3%5%B红细胞悬液1滴，混匀，1000r/min离心1min或3000r/min，离心15秒，取出观察凝集情况。AcBc首先在首先在A、B管中加入受检者血清各管中加入受检者血清各2滴滴加入加入Ac1滴滴加入加入Bc1滴滴混匀后混匀后离心观离心观察结果察结果离心机离心机反定型反定型 （试管法）（试管法）AcBc无凝集凝集血型：血型：A型型ABO正反定型结果判断正反定型结果判断受检者红细胞与标受检者红细胞与标准血清（正定型）准血清（正定型）受检者血清（浆）受检者血清（浆）与标准红细胞（反与标准红细胞（反定型
6、）定型）受检者血型受检者血型抗抗-A抗抗-B AcBc+-+A-+-B-+O+-AB交叉配血试验盐水配血法盐水配血法目的目的：检测献血者与受血者之间血液是否相配，确保输血安全。适用范围：适用于血清完全抗体（血清完全抗体（IgM)的检测。使用仪器和材料：离心机、试管、试管架、生理盐水、显微镜等。原理原理：在电解质（生理盐水）溶液中，带正电荷的Na能降低红细胞表面的负电荷，减少了红细胞的排斥力而发生抗原抗体结合使红细胞凝集，从而发现配血不合。聚凝胺配血法聚凝胺配血法目的：与盐水法相同适用范围：适用于血清中不完全抗体血清中不完全抗体(IgG)的检测仪器与材料：离心机、试管、试管架、聚凝胺试剂、吸管等
7、。原理原理：聚凝胺是一种高价阳离子聚合物，溶解后能产生很多正电荷，能中和红细胞表面带有的负电荷，降低红细胞Zeta电位，并缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性凝集，这种凝集是可逆的。最后加入悬浮液，它具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果阴性；如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集不会散开，试验结果为阳性。盐水法操作程序盐水法操作程序：1、取小试管2支，标明主、次侧。主侧：受血者血清2滴加供血者35%生理盐水红细胞悬液1滴；次侧：供血者血清2滴加受血者35%生理盐水红细胞悬液1滴。2、混匀，以1000r/min，离心1min，取出，先目测上层液体
8、是否溶血，再轻轻摇动试管，检查红细胞是否凝集。3、结果判断：主、次两侧无凝集、无溶血，表示配血相合，可以输血；主、次侧有一侧凝集或溶血，表示配血不相合，不能输血。缺点：1、只能检测出完全抗体（抗-A、抗-B）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。2、本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。3、易受冷凝集素的干扰。聚凝胺配血法聚凝胺配血法1、在盐水配血法操作完后，主、次侧加入低离子强度溶液（LISS）0.6ml，混匀，置室温1min。2、主、次两侧加聚凝胺2d，混匀，置室温15s，3400r/min，离心10s
9、，弃上清液后留0.1ml液体,轻摇试管,目测红细胞是否凝集，如不凝集必须重做。如果凝集，再加重悬液2滴，轻摇试管，仔细观察有无凝集，如有怀疑应在显微镜下观察结果。结果判断：与盐水法相同。注意事项：1、用EDTA抗凝血浆代替血清配血，但不能用肝素抗凝血配血，因为肝素对聚凝胺有中和作用。2、病人使用肝素后要加双倍量聚凝胺。3、聚凝胺试剂使用前应恢复至室温。4、和试剂比例要恰当，增加血清（浆）和红细胞量时，LISS及聚凝胺、重悬液的量也要增加，否则，灵敏度会降低48倍。5、病人使用止血敏药物后干扰聚凝胺配血，该干扰是不能排出的。克服办法：不用酚磺乙胺后，重抽血液再配。6、血清蛋白、高球蛋白血症可降低
10、聚凝胺的灵敏度引起凝集不稳定。7、聚凝胺配血最适温度22,温度降低灵敏度下降。盐水配血法：主侧次侧主侧加患者血清2滴、次侧加供血者血清2滴主侧次侧主侧加供者红细胞1滴、次侧加患者红细胞1滴，再各加生理盐水1滴。混匀离心后观察结果主侧次侧溶血无凝集患者血清供者血清患者红细胞供者红细胞配血不合配血不合凝集聚凝胺配血法操作示意图聚凝胺配血法操作示意图:主侧次侧主侧加患主侧加患者血清者血清2滴、次侧滴、次侧加供血者加供血者血清血清2滴滴主侧次侧主侧加供主侧加供者红细胞者红细胞1滴、次滴、次侧加受血侧加受血者红细胞者红细胞1滴滴主侧次侧第一步第一步第二步第二步第三步第三步两侧同时两侧同时加入低离加入低离子悬液子悬液0.6ml，再，再加入聚凝加入聚凝胺各胺各2滴。滴。第四步第四步主侧次侧第五步第五步混匀，混匀，3400r/min，离心离心10S。倒掉上清倒掉上清液，两侧液，两侧各加重悬各加重悬液液2滴，滴，轻摇试管，轻摇试管，观察结果。观察结果。无无凝凝集集红红细细胞胞均均匀匀散散开开凝凝集集红红细细胞胞凝凝集集成成团团
